CC BY
105
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
1
УДК 619:614.48
ПРИМЕНЕНИЕ ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИ АКТИВИРОВАННЫХ РАСТВОРОВ ХЛОРИДА НАТРИЯ ДЛЯ ДЕЗИФЕКЦИИ ОБЪЕКТОВ, КОНТАМИНИРОВАННЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕМ ГРИППА ПТИЦ
Ваннер Наталья Эдуардовна к.вет.н.
ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, Москва, Россия
В статье представлены результаты испытания эффективности электрохимически активированных растворов хлорида натрия для дезинфекции объектов, контаминированных высокопатогенным вирусом гриппа птиц
Ключевые слова: ДЕЗИНФЕКЦИЯ, ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИ АКТИВИРОВАННЫЕ РАСТВОРЫ, ВИРУС ГРИППА ПТИЦ
UDC 619:614.48
APPLICATION OF ELECTROCHEMICALLY-ACTIVATED SOLUTIONS OF SODIUM CHLORIDE FOR DISINFECTION OF THE FACILITIES, CONTAMINATED WITH AVIAN INFLUENZA AGENT
Vanner Natalia Eduardovna Cand.Vet.Sci
SSI All-Russian Research Institute of veterinary sanitation, hygiene and ecology, Moscow, Russia
This article presents the results of testing the effectiveness of electrochemically-activated solutions of sodium chloride for disinfection of the facilities contaminated with highly pathogenic avian influenza
Key words: DISINFECTION, ELECTROCHEMICALLY-ACTIVATED SOLUTIONS, AVIAN INFLUENZA VIRUS
Введение
Ветеринарная практика постоянно нуждается в высокоэффективных и экологически безопасных средствах защиты от инфекционных болезней. В настоящее время наметился определенный дефицит в таких средствах защиты, обусловленный значительным сокращением производства традиционных отечественных препаратов и средств их применения. Импортные препараты не могут в полной мере решить проблему дефицита в связи с их высокой стоимостью и не всегда удовлетворительной эффективностью. Создавшееся положение с успехом решается путем использования новейших разработок отечественных ученых в этом направлении. Одна из них - промышленное производство хлора, гипохлорита натрия, водорода, каустической соды при помощи электролиза концентрированных растворов хлорида натрия (поваренной соли). Процесс электрохимической активации жидкости (ЭХА) открыл в 1987 г. В.М. Бахир. Дальнейшие фундаментальные и прикладные исследования ЭХА жидкостей под руководством П.А. Кирпичникова, Б.И. Леонова и В.М. Бахира показали, что электрическая энергия неравновесного
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
2
электрохимического воздействия может накапливаться и сохраняться в жидкости в форме внутренней потенциальной энергии, которая в период релаксации рационально реализуется в окислительно-восстановительных реакциях [1,2].
Изучение возможности использования ЭХА воды и растворов хлоридов в ветеринарной практике было начато в 1982-1983 гг. во ВНИИВСГЭ и ВНИТИП в тесном контакте с химиками и инженерами КХТИ и ВНИИМТ. На основании исследований реакторов различных типов специалисты ВНИИВСГЭ и ВНИИ медицинской техники установили, что наиболее полно требованиям ветеринарной науки и практики отвечают электрохимические проточные реакторы-модули ПЭМ-3 и созданные на их основе устройства грех типов: установки СТЭЛ для синтеза стерилизующих, дезинфицирующих и моющих растворов, установки «Аквахлор» для синтеза газообразной активированной смеси оксидантов и гипохлорита натрия и установки «Изумруд» для электрохимического кондиционирования и очистки питьевой воды. Установки СТЭЛ (производительностью до 1000 л/ч) позволяют получать растворы трех типов: щелочной католит (моющее средство), кислый анолит (дезинфицирующее средство) и нейтральный анолит моющедезинфицирующее средство). Опытами ряда исследователей показано, что анолиты с определенными физико-химическими показателями
обеспечивают бактерицидный, спороцидный и вирулицидный эффект [3].
В связи с изложенным целью наших исследований было определить эффективность нейтрального анолита (АНК) и кислого анолита (АК) при дезинфекции объектов ветнадзора, контаминированных вирусом H5N1 гриппа А птиц.
Материалы и методы
Для проведения исследований использовали следующие материалы:
- вирус гриппа А птиц подтип H5N1 с биологической активностью
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
3
9,75 lg ЭИД50/мл и 8,75 lg ЛД50 для цыплят и гемагглютинирующей активностью 1:32. Вирус представляет собой вируссодержащую жидкость куриных эмбрионов (КЭ);
- куриные эмбрионы 8-дневного возраста;
- забуференный физиологический раствор с рН 7,2-7,4;
- эритроциты петуха, 1%-ная суспензия;
- соль поваренная пищевая, ГОСТ Р 51574 от 2000 г., 0,3%-ный раствор;
- вода водопроводная нехлорированная из артезианской скважины;
- спирт-ректификат;
- парафин;
- 5%-ный раствор йода;
- бактериальные среды: МПА, МПБ, среда Сабуро;
- нейтральный анолит (АНК) с рН 7,0 ± 0,5 и концентрацией активного хлора (к.а.х.) 200 и 500 мг/л, полученный из 0,3%-ного раствора пищевой поваренной соли на установке СТЭЛ-60-03;
- кислый анолит (АК) с рН 3,0-4,0 и концентрацией активного хлора 500 мг/л, полученный на установке СТЭЛ-1 OAK;
- щелочной католит с рН 11,0, полученный на установке УДЕЖ;
- пшеница;
- тест-объекты: элементы продукции птицеводства, корм, вода, эмитаторы поверхностей помещений и оборудования объектов ветеринарного надзора (скорлупа куриных яиц, перо и кожа кур, зерно, пластинки черного металла, керамика, дерево, керамическая плитка, кирпич).
Эффективность нейтрального анолита (АНК) в отношении обеззараживания объектов ветеринарного надзора, контаминированных вирусом гриппа А птиц, осуществляли следующим образом. На тестобъекты наносили суспензию вируса и обрабатывали их испытуемым
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
4
дезинфектантом, а затем выделяли вирус на куриных эмбрионах через различные сроки контакта дезинфектанта с испытуемым объектом.
Для обнаружения вируса гриппа А кур в испытуемых пробах проводили реакцию гемагглютинации (РГА) с аллантоисной жидкостью зараженных куриных эмбрионов. В РГА использовали 1%-ную суспензию эритроцитов петуха.
Для оценки эффективности обеззараживающего действия
нейтрального анолита (АНК) на вирус гриппа А птиц к 9 мл этого дезинфектанта с концентрацией активного хлора 200 и 500 мг/л добавляли по 1 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости, суспензию тщательно перемешивали и выдерживали при комнатной температуре. Пробы для исследования отбирали через 30 и 60 мин. Чтобы обнаружить вирус гриппа, пробами заражали куриные эмбрионы в аллантоисную полость в дозе по 0,1 мл. Наличие вируса выявляли в реакции гемагглютинации (РГА) с эритроцитами петуха.
При оценке эффективности обеззараживающего действия
нейтрального анолита (АНК) на вирус гриппа А птиц, которым контаминировали объекты ветеринарного надзора (дерево, металл, кирпичи, керамику, перо кур, скорлупу куриных яиц, кожу кур), на указанные объекты пипеткой наносили вирус гриппа А птиц из расчета 1 мл/5 см2 площади и равномерно распределяли по поверхности тестобъекта. После нанесения вируса тест-объекты подсушивали на воздухе: кожу кур 1 ч; скорлупу куриных яиц 20 мин; куриное перо 20 мин; дерево, кирпич, металл и керамику 1,5 ч. По окончании подсушивания на тестобъекты наносили анолит в виде крупнокапельного аэрозоля из расчета 60 мл/м2 площади и оставляли на контакт. Пробы отбирали через 10, 15, 20, 30, 60, 90, 120 и 180 мин. После окончания экспозиции тест-объекты помещали в чашки Петри со стерильным физиологическим раствором (20 мл) для элюирования вируса с поверхности тест-объектов. Полученными
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
5
элюатами заражали куриные эмбрионы для установления присутствия вируса. Наличие гемагглютинации свидетельствовало о присутствии вируса в курином эмбрионе, а отсутствие гемагглютинации
свидетельствовало об отсутствии соответствующего вируса.
Эффективность обеззараживания зерна проверяли, погружая его пробы в раствор анолита на глубину не менее 5 см от поверхности и при экспозиции от 30 мин до 3 ч. Для выявления вируса материалом проб заражали куриные эмбрионы и через 72 ч инкубации с аллантоисной жидкостью куриных эмбрионов ставили реакцию гемагглютинации. давания .
Чтобы оценить эффективность обеззараживания вируса гриппа А птиц в воде, к 980 мл воды добавляли 20 мл анолита АНК с концентрацией активного хлора 500 мг/л, тщательно перемешивали и вносили 1 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости. Все содержимое тщательно перемешивали и ставили на контакт при комнатной температуре. Пробы отбирали через 10 и 45 мин и через 2 ч. Материалами проб заражали куриные эмбрионы для обнаружения вируса гриппа; РГА ставили по общепринятой методике с использованием эритроцитов кур.
Во второй серии опытов с водой к 540 мл воды добавляли 60 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости. Контаминированную воду распределяли в шесть проб по 100 мл в стерильные флаконы, а затем в пять флаконов внесли анолит АНК в количестве соответственно 5, 10, 20, 40 и 80 мл. Проба № 6 служила контролем вируса; экспозиция составила 1 ч.
Результаты исследований
Результаты исследований представлены в таблицах 1 -6
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
6
Таблица 1
Эффективность электрохимически актировированных растворов хлорида натрия при обеззараживании вируса гриппа птиц (H5N1)
Дезинфектант Объект дезинфек- Экспо- Эффективность Результа
ции зиция, культивирования на КЭ через определенное т РГА
время, ч
мин 24 48 72
АНК Суспензия 10 0/3 0/3 0/3 0
(к.а.х.200 вируса ГП 30 1/3 0/2 0/2 0
мг/л) 60 0/3 0/3 0/3 0
АНК Суспензия 10 0/3 0/3 0/3 0
(к.а.х.500 вируса ГП 30 0/6 0/6 0/6 0
мг/л) 60 0/6 0/6 0/6 0
АК Суспензия 10 1/3 0/2 0/2 0
(к.а.х.500 вируса ГП 30 0/3 0/3 0/3 0
мг/л) 60 0/3 0/3 0/3 0
Католит Суспензия вируса ГП 10 1/3 0/2 0/2 0
30 0/3 0/3 0 0
60 0/3 0/3 0/3 0
Контроль Без дезинфек- 30 0/3 0/3 - 1:32
вируса танта 60 0/6 6/6 - 1:32
Контроль АНК Без вируса 30 1/3 0/2 0/2 0
Примечание:
числитель - число КЭ, в которых выявлен вирус; знаменатель - число зараженных КЭ.
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
7
Таблица 2
Эффективность дезинфекции эмитаторов поверхностей помещений и оборудования объектов ветеринарного надзора, контаминированных вирусом гриппа птиц (H5N1) с помощью АНК
Дезинфекта нт Объект дезинфекции Экспо- зиция Мин. Эффективность культивирования на КЭ через определенное время, ч Результат РГА
24 48 72
АНК (к.а.х. 500 мг/л) Вирус ГП на керамике 30 0/3 0/3 0/3 0
120 0/3 0/3 0/3 0
Контроль вируса Вирус ГП на Керамике (без дезинфектанта) 120 0/3 3/3 1:32
АНК (к.а.х. 500 мг/л) Вирус ГП на дереве 30 0/3 0/3 0/3 0
120 0/3 0/3 0/3 0
Контроль вируса Вирус ГП на дереве (без дезинфектанта) 120 0/3 3/3 1:32
АНК (к.а.х. 500 мг/л) Вирус ГП на металле 30 0/3 0/3 0/3 0
120 0/3 0/3 0/3 0
Контроль вируса Вирус ГП на металле (без дезинфектанта) 120 0/3 3/3 1:32
Примечание:
числитель - число КЭ, в которых выявлен вирус; знаменатель - число зараженных КЭ.
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
8
Таблица 3
Эффективность дезинфекции эмитаторов поверхностей объектов ветеринарного надзора, контаминированных вирусом гриппа птиц (H5N1) , смешанного с пометом
Дезинфектант Объект дезинфекции Экспо- зиция Мин. Эффективность культивирования на КЭ через определенное время, ч Результ ат РГА
24 48 72
АНК, к.а.х.: 200 мг/л на дереве 90 1/4 0/7 0/7 0
АНК, к.а.х 500 мг/л на дереве 90 1/4 0/3 0/3 0
АНК, к.а.х 200 мг/л на металле 90 0/4 0/4 0/4 0
АНК, к.а.х 500 мг/л на металле 90 0/4 0/4 0/4 0
АНК, к.а.х 200 мг/л на кирпиче 90 1/4 0/3 0/3 0
АНК, к.а.х 200 мг/л на керамике 90 0/4 0/4 0/4 0
АНК, к.а.х 500 мг/л 90 0/4 0/4 0/4 0
Контроль вируса * 90 0/4 4/4 " 1:32
Примечание:
числитель - число КЭ, в которых выявлен вирус; знаменатель - число зараженных КЭ.
* Контроль вируса на всех исследуемых объектах соответствовал приведенным данным
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
9
Таблица 4
Эффективность дезинфекции элементов продукции птицеводства, контаминированных вирусом гриппа птиц (H5N1) с помощью АНК
Дезинфектант Объект дезинфекции Экспо- зиция Мин. Эффективность культивирования на КЭ через определенное время, ч Результат РГА
24 48 72
АНК Вирус ГП на 10 2/4 0/2 0/2 0
(к.а.х. 500 коже кур 20 0/4 0/4 0/4 0
мг/л)
Контроль 90 0/4 4/4 - 1:16
вируса 180 0/4 4/4 - 1:32
АНК Вирус ГП на 15 2/4 0/2 0/2 0
(к.а.х. 500 скорлупе 30 0/4 0/4 0/4 0
мг/л) яиц
90 0/4 0/4 0/4 0
180 0/4 0/4 0/4 0
Контроль 90 0/4 4/4 - 1:16
вируса 180 0/4 4/4 - 1:32
АНК Вирус ГП на 30 1/4 0/3 0/3 0
( ^a.x. 500 перьях птиц 60 0/4 0/4 0/4 0
Контроль 60 0/4 4/4 - 1:16
вируса
Примечание:
числитель - число КЭ, в которых выявлен вирус; знаменатель - число зараженных КЭ.
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
10
Таблица 5
Эффективность дезинфекции корма, контаминированного вирусом гриппа птиц (H5N1) с помощью АНК ___________________________
Дезинфектант Объект дезинфекции Экспо- зиция Мин. Эффективность культивирования на КЭ через определенное время, ч Результат РГА
24 48 72
АНК Вирус ГП на 30 2/8 0/6 0/6 0
(к.а.х. 500 зерне 60 0/4 0/4 0/4 0
мг/л)
90 1/4 0/3 0/3 0
120 0/4 0/4 0/4 0
180 0/4 0/4 0/4 0
Контроль 60 0/4 4/4 - 1:16
вируса
Примечание:
числитель - число КЭ, в которых выявлен вирус; знаменатель - число зараженных КЭ.
Таблица 6
Эффективность АНК при обеззараживании воды, контаминированной вирусом H5N1 гриппа А птиц_________________________________
№ Время инкубации, ч РГА Стериль- ность
проб 24 48 72 96 120 144
1 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 - Стериль но
2 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 - Стериль но
3 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 - Стериль но
4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 - Стериль но
5 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 0/4 - Стериль но
(контроль вируса) 0/4 3/4 1/4 - - - 1:64
Примечание:
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
11
числитель - число КЭ, в которых выявлен вирус; знаменатель - число зараженных КЭ.
Испытания показали, что нейтральный анолит (АНК) с
концентрацией активного хлора 500 мг/л обезвреживает вирус гриппа А птиц в суспензии и на объектах ветеринарного надзора за 30 мин, а в концентрации 10 мг/л в воде убивает вирус гриппа за 45 мин.
В концентрациях от 0,25 до 0,4 мг/л в воде убивает вирус гриппа за 1
ч.
АНК с концентрацией активного хлора 200 и 500 мг/л обезвреживает вирус гриппа А птиц на объектах ветеринарного надзора, контаминированных птичьим пометом и вирусом, за 90 мин.
Кислый анолит (АК) с концентрацией активного хлора 500 мг/л обезвреживает вирус гриппа А птиц в суспензии через 10 мин.
Нейтральный анолит (АНК) безвреден для куриных эмбрионов в дозе 0,1 мл.
Католит обезвредил суспензию вируса гриппа птиц через 10 мин.
В контроле вирусы КЭ погибли, гемаглютинирующий титр вируса в аллантоисной жидкости погибших КЭ составил от 1:32 до 1:128, препараты не контаминированы грибной и бактериальной флорой.
Заключение
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о высокой дезинфицирующей активности испытанных хлорсодержащих препаратов в отношении различных объектов ветеринарного надзора,
контпминированных высоко патогенным вирусом гриппа А птиц (подтип H5N1).
Список литературы
1. Бахир В.М. Электрохимическая активация. М., ВНИИ мед. Техники, 1992.
2. Бахир В.М. Экономические предпосылки применения в лечебнопрофилактических учреждениях электрохимических установок СТЭЛ для синтеза
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
Научный журнал КубГАУ, №102(08), 2014 года
12
дезинфицирующих и стерилизующих растворов. М., Мед. Алфавит, 2003, № 11, с. 2425.
З.Закомырдин А.А., Ваннер Н.Э,/Дезинфекция объектов, контаминированных возбудителем высоко патогенного гриппа птиц, электрохимически активированными растворами хлорида натрия// Научно-производственный журнал «Ветеринарный врач» 2012, №5 с. 7-10.
References
1. Bahir V.M. Jelektrohimicheskaja aktivacija. M., VNII med. Tehniki, 1992.
2. Bahir V.M. Jekonomicheskie predposylki primenenija v lechebno-profilakticheskih uchrezhdenijah jelektrohimicheskih ustanovok STJeL dlja sinteza dezinficirujushhih i sterilizujushhih rastvorov. M., Med. Alfavit, 2003, № 11, s. 24-25.
3. Zakomyrdin A.A., Vanner N.Je,/Dezinfekcija ob#ektov, kontaminirovannyh vozbuditelem vysoko patogennogo grippa ptic, jelektrohimicheski aktivirovannymi rastvorami hlorida natrija// Nauchno-proizvodstvennyj zhurnal «Veterinarnyj vrach» 2012, №5 s. 7-10.
http://ej.kubagro.ru/2014/08/pdf/014.pdf
