Применение экстракта из туники асцидии пурпурной для восстановления липидного обмена печени при стрессе

Лесникова Лариса Николаевна; Кушнерова Наталья Федоровна; Фоменко Светлана Евгеньевна; Спрыгин Владимир Геннадьевич; Мерзляков Валерий Юрьевич

of extract from of the honeysuckle appeared more effective in restoration of the studied fiziologo-biochemical parameters of erythrocytes, than at reference a stress protector «Extract eleutherococcus».

Keywords: stress, erythrocytes, honeysuckle, eleutherococcus.

Citation: Momot T.V. Prevention of stressful violations of physiology-biochemistries of characteristics of erythrocytes by the polyphenolic complex from the honeysuckle. Health. Medical ecology. Science. 2014; 2(56): 41-44. URL: http://yadi. sk/d/R-5B6DFJSaPwQ.

Сведения об авторе

Момот Татьяна Викторовна - доцент кафедры фундаментальной медицины, к.м.н., Школа биомедицины Дальневосточного федерального университета; научный сотрудник лаборатории фармакологии, Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского ДВО РАН. 690065, Владивосток, ул. Крыгина, д. 16, кв. 1, тел: (423) 291-90-10; е-mail: kushnerova83@mail.ru

Л.Н. Лесникова, Н.Ф. Кушнерова, С.Е. Фоменко, В.Г. Спрыгин, В.Ю. Мерзляков

применение экстракта из туники асцидии пурпурной для восстановления липидного обмена печени при стрессе

Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН, г. Владивосток.

Исследовано влияние экстракта из туники морского гидробионта Halocynthia aurantium на липидный обмен печени при остром стрессе у мышей. Острый стресс моделировали путем вертикальной фиксации животных за дорзальную шейную складку на 22 часа. Экстракт из туники асцидии превосходит известный гепатопротектор Эссенциале® по эффективности восстановления состава липидных фракций (триацилглицерины, холестерин, свободные жирные кислоты, лизофосфолипиды), нарушенного стресс-воздействием, нормализует этерифицирующую функцию печени. Выраженный эффект экстракта обусловлен сочетанным действием входящих в его состав «морских» фосфолипидов, обладающих репаративными свойствами.

Ключевые слова: стресс, печень, липидный обмен, экстракт из туники асцидии пурпурной. Цитировать: Лесникова Л.Н., Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Спрыгин В.Г., Мерзляков В.Ю. Применение экстракта из туники асцидии пурпурной для восстановления липидного обмена печени при стрессе // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2014. №2(56). С. 44-47. URL: http://yadi.sk/d/COdW_tpMSaPrM.

Сегодня особое внимание ученых направлено на изучение гидробионтов морского происхождения, богатых биологически активными веществами, для разработки новых лекарственных средств. Показано, что при интоксикации этиловым спиртом экстракт из туники асцидии пурпурной (На1осуШЫа ашаШтт), проявляет выраженный гепатопротек-торный эффект [1], а при экспериментальной ги-перхолестеринемии способствует восстановлению размерных характеристик эритроцитов и соотношения отдельных фракций липидной составляющей их мембран [4]. Представляется актуальным изучение экстракта из туники асцидии пурпурной, как потенциального стресс-протектора.

Цель настоящего исследования состояла в анализе изменений липидного обмена пе-чени экспериментальных животных в условиях острого стресса и возможного защитного эффекта водно-спиртового экстракта из туники асцидии пурпурной.

Материалы и методы. Экстракт из сухой туники получали методом реперколяции на 40%-ном этиловом спирте при соотношении сырья к экстрагенту 1:1 (по объему). Способ получения запатентован

(патент № 1522487). ЛД50 экстракта в условиях однократного введе-ния в брюшную полость составила для мышей 49 мл/кг (3,43 г сухого остатка на кг массы). В эксперименте использовали 40 беспородных белых мышей-самцов массой 20-22 г. Для моделирования острого стресса животных подвергали вертикальной фиксации за дорзальную шейную складку на 22 часа. Контрольные животные содержались в стандартных условиях вивария. Препараты вводили в желудок через зонд дважды: непосредственно перед вертикальной фиксацией и через 6 часов после первого введения. Предварительно освобожденный от спирта (путем упаривания в вакууме) экстракт из туники асцидии, вводили животным в виде водного раствора в объеме 2,5 мл на 100 г массы тела, что соответствовало дозе 8 мг общих липидов. В качестве препарата сравнения использовали известный гепатопротектор Эссенциале® производства компании «Rhone-Poulenc Яогег» (Германия), изготовленный на основе полиненасыщенного фосфатидилхолина соевых бобов, который вводили животным в аналогичном объеме (доза введения составляла 80 мг/кг в водном растворе) [3].

Животные были разделены на 4 группы по 10 мышей в каждой: 1-я - контроль (интактные); 2-я группа - вертикальная фиксация (чистый стресс); 3-я - вертикальная фиксация + экстракт из туники асцидии; 4-я группа - вертикальная фиксация + эс-сенциале. По окончании эксперимента животных декапитировали под легким эфирным наркозом с соблюдением правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (Страсбург, 1986). Экстракты общих липидов из ткани печени готовили по методу J. Folch et al. (1957) [6]. Фракционное разделение фосфолипидов (ФЛ) и нейтральных липидов (НЛ) осуществляли методом микротонкослойной хроматографии на силикагеле [5, 7, 8]. Полученные данные обрабатывали с помощью параметрического критерия Стьюдента (t), используя статистическую программу Instat (Graph Pad Software Inc.USA, 2005).

Полученные результаты. Влияние стресса (вертикальная фиксация) сопровождалось выраженными изменениями липидного обмена в ткани печени животных. Среди фракций НЛ в печени стрессиро-ванных животных (2-группа) по сравнению с контрольными (1-я группа) на 20% (р<0,001) увеличилось содержание триацилглицеринов (ТАГ), на 29% (p<0,001) свободных жирных кислот (СЖК) и на 26% (p<0,001) холестерина. В то же время в печени мышей этой группы отмечено достоверное снижение содержания эфиров жирных кислот (ЭЖК) и эфиров холестерина (ЭХС), соответственно на 20 и 17% (p<0,001), что характеризует нарушение этерифицирующей функции печени. Полученные данные свидетельствуют о мобилизации липидов как главных источников энергии, которые транспортируются из жировой ткани в виде СЖК. Поступая в печень, жирные кислоты в результате нарушения процессов митохондриального окисления, накапливаются в гепатоцитах и ресинтезируются в ТАГ, что обусловливает развитие жировой инфильтрации печени. При этом роль липидов в энергетике организма в условиях острого стресса значительно возрастает. Энергетический обмен переключается с «углеводного» типа на «липидный», что характерно для стадии резистентности стресса [2].

При анализе фосфолипидного состава ткани печени мышей при стресс-воздействии отмечалось значительное повышение содержания лизофракций по сравнению с аналогичны-ми показателями животных контрольной группы при одновременном снижении содержания фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатиди-лэтаноламина (ФЭ). Так, количество лизофосфати-дил-холина (ЛФХ) во 2-й группе увеличилось на 42% (p<0,01), лизофосфатидилэтаноламина (ЛФЭ) - на 87% (p<0,001), а количество ФХ и ФЭ снизилось на 13% (p<0,01) и 10% (p<0,05), соответственно. Извест-

но, что при стрессе активируется фосфолипаза А2, обусловливая на-копление продуктов гидролиза фосфолипидов. В связи с этим, отмечалось увеличение отно-шения ЛФХ/ФХ с 0,09 до 0,15 и ЛФЭ/ФЭ с 0,17 до 0,34. Кроме того, на 35% (р<0,001) снизи-лось содержание основного структурного компонента мембран митохондрий - дифосфатидилглицерина (ДФГ), колебания которого служат индикатором состояния энергообразовательных процессов в клетке. Повысилось содержание фосфатидилсерина (ФС) на 46,5% (р<0,001) и сфингомиелина (СМ) на 29% (р<0,01), что является компенсаторной реакцией на повышение проницаемости мембран.

Таким образом, острый стресс вызвал целую серию изменений метаболизма липидов в ткани печени и, соответственно нарушений обменных процессов в организме экспериментальных животных.

Введение на фоне острого стресса как экстракта из туники асцидии (3-я группа), так и эссенциале (4-я группа) существенно приблизило к контролю значения практически всех исследуемых параметров липидного обмена печени, однако степень выраженности при этом была различна. Так, у мышей, получавших эссенциале, уровень ТАГ превышал таковой в контрольной группе на 10% (р<0,001), в то время как у мышей, получавших экстракт из туники асцидии, достоверных различий не наблюдалось. При сравнении со 2-й группой (чистый стресс) количество ХС в печени мышей, получавших эссенциале, было ниже в среднем на 7% (р<0,001). При введении животным экстракта из асцидии это снижение составило 17% (р<0,01). Что касается изменений во фракции ЭХС, то при введении эссенциале ее содержание было выше такового при стрессе на 8% (р<0,001), тогда как при введении экстракта - на 18% (р<0,001).

Изменения фосфолипидного состава печени мышей в 4-й группе также носили анало-гичную направленность, что и в 3-й группе, но были менее выражены. Так, введение эссенциале животным привело к снижению содержания ЛФЭ на 36% (р<0,001) и повышению со-держания ДФГ на 31% (р<0,001) по сравнению со 2-й группой. Одновременно с этим под влиянием экстракта из асцидии уровень ЛФЭ снизился на 52% (р<0,001), а количества ДФГ повысилось на 44% (р<0,001). При введении животным эссенциале и экстракта из асцидии в обеих группах мышей отмечалось равнозначное повышение количества ФХ на 13-14% (р<0,001) и снижение ФС на 37-38% (р<0,001).

Выводы. Таким образом, введение исследуемых препаратов способствовало коррекции нарушений липидного обмена печени, вызванных стресс-воздействием. В то же время восстанавливающее действие экстракта из асцидии пурпурной оказалось более эффективным по сравнению с таковым у препарата сравнения «Эссенциале»™. Большая

эффективность экстракта, по нашему мнению, обусловлена наличием в его составе практически всех известных классов фосфолипидов морского происхождения, обладающих репаративными свойствами. При этом жирнокислотный состав их отличается высокой степенью ненасыщенности и содержит в своем составе ПНЖК семейства п-3, необходимые для преобразования лизофосфолипидов в основные структурные компоненты мембран - ФХ и ФЭ, а также метаболически активные фракции - ДФГ и ФС.

На основании вышеизложенного можно заключить, что применение экстракта из туники асцидии пурпурной открывает возможность для использования его в качестве мембранопротектора при нарушении обменных процессов в организме в условиях действия повреждающих факторов.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кушнерова Н.Ф., Рахманин Ю.А., Гордейчук Т.Н., Фоменко С.Е., Добряков Ю.И., Лесникова Л.Н., Добряков Е.Ю. Применение биологически активных веществ морских гидробионтов для коррекции липидного обмена при алкогольной интоксикации // Гигиена и санитария. 2000. № 3. С. 70-73.

2. Кушнерова Н.Ф., Спрыгин В.Г., Фоменко С.Е., Рахманин Ю.А. Влияние стресса на состояние ли-

пидного и углеводного обмена печени, профилактика // Гигиена и санитария. 2005. № 5. С. 17-21.

3. Саратиков А.С., Ратькин А.В., Фролов В.Н., Чучалин В.С. Влияние гепатопротекторов фосфо-липидной природы на токсичность циклофосфана // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2004. № 2. С. 43-47.

4. Фоменко С.Е., Кушнерова Н.Ф., Лесникова Л.Н. Влияние экстракта из туники асцидии пурпурной на физиологические и биохимические параметры эритроцитов при экспериментальной гиперхолестери-немии // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2011. Вып. 39. С. 65-69.

5. Amenta J.S. A rapid chemical method for quantification of lipids separated by thin-layer chromatography. J. Lipid. Res., 1964; 5(2): 270-272.

6. Folch J., Less M., Sloane-Stanley G.H. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissue. Biol. Chem., 1957; 226(1): 497-509.

7. Rouser G., Kritchevsky G., Yamamoto A. Column chromatographic and associated procedures for separation and determination of phosphatides and glicolipids. Lipid Сhromatogr. Anal., N.Y. Dekker, 1967; 1: P. 99-162.

8. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Vasendin I.M. An universal reagent for phospholipid analysis. Chromatogr., 1975; 114(1): 129-141.

Lesnikova L.N., Kushnerova N.F., Fomenko s.E., sprygin v.G., Merzlyakov v.Yu.

USE OF THE ExTRACT FROM THE PURPLE ASCIDIUM TUNIC FOR THE REPARATION

OF THE LIVER LIPID METABOLISM AT STRESS

v.i. il'ichev pacific Oceanological institute far East Branch of Russian Academy sciences, vladivostok.

Influence of the extract from tunic of the sea hydrobionts purple ascidium (Halocynthia aurantium) on the lipid metabolism of the liver is investigated at acute stress at mice. Acute stress modeled by fixing of animals for dorsal neck fold at 22 hours. The extract from the purple ascidium tunic surpasses well-known hepatoprotector «Essentiale®» in efficacy of restoration lipid fraction content (tryglycerides, cholesterol, free fat acids, lysophospholipids), disturbed by stress-induced, is normalised esterification function of a liver. The expressed effect of the extract is caused general action of the «sea» phospholipids, entering into its structure, possessing of reparation properties.

Keywords: stress, a liver, a lipid metabolism, the extract from the purple ascidium tunic.

Citation: Lesnikova L.N., Kushnerova N.F., Fomenko S.E., Sprygin VG., Merzlyakov V.Yu. Use of the extract from the purple ascidium tunic for the reparation of the liver lipid metabolism at stress. Health. Medical ecology. Science. 2014; 2(56): 44-47. URL: http://yadi.sk/d/COdW_tpMSaPrM.

Сведения об авторах

Лесникова Лариса Николаевна - научный сотрудник лаборатории биохимии, кандидат биологических наук. Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН. 690041, г. Владивосток, ул. Балтийская, 43. ТОИ ДВО РАН; тел.: (4232) 31-30-61; факс:(4232) 31-25-73; E-mail: lesnikova@poi.dvo.ru;

Кушнерова Наталья Федоровна - заведующая отделом биохимических технологий, доктор биологических наук, профессор. Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН. 690041, г. Владивосток, ул. Балтийская, 43. ТОИ ДВО РАН; тел.: (4232) 31-30-61; факс: (4232) 31-25-73; e-mail: natasha50@mail.ru;

Фоменко Светлана Евгеньевна - ведущий научный сотрудник лаборатории биохимии, кандидат биологических наук. Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН. 690041, г. Владивосток, ул. Балтийская, 43. ТОИ ДВО РАН; тел.: (4232) 31-30-61; факс:(4232) 31-25-73; e-mail: sfomenko@mail.ru;

Спрыгин Владимир Геннадьевич - ведущий научный сотрудник лаборатории биохимии, кандидат биологических наук. Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН. 690041, г. Владивосток, ул. Балтийская, 43. ТОИ ДВО РАН; тел.: (4232) 31-30-61; факс: (4232) 31-25-73; e-mail: sprygin@poi.dvo.ru;

Мерзляков Валерий Юрьевич - младший научный сотрудник лаборатории биохимии. Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева ДВО РАН.690041, г. Владивосток, ул. Балтийская, 43. ТОИ ДВО РАН; тел.: (4232) 31-30-61; факс: (4232) 31-25-73; e-mail: vum77@mail.ru.

О.В. Горчакова2, В.Н. Горчаков12

особенности морфофункционального ответа паховых и брыжеечных лимфоузлов на фитотерапию на этапе позднего онтогенеза

1ФГБОУ ВПО Новосибирский национальный исследовательский государственный университет, г. Новосибирск; 2ФГБУ «НИИ клинической и экспериментальной лимфологии» СО РАМН, г. Новосибирск.

В работе представлена экспериментальные данные по морфофункциональной характеристике паховых и брыжеечных лимфатических узлов при проведении фитотерапии беспородным белым крысам самцам на позднем этапе онтогенеза. С возрастом усиливаются признаки старения лимфоидной ткани - склероз, уменьшение пролиферации клеток. Это обусловливает конструктивные особенности лимфоузлов, которые зависят от их локализации. После фитотерапии модулируется структурно-иммунный ответ зон лимфатического узла при усилении лимфопролиферации и лимфоаденогенеза. Эффект фитотерапии имеет значение для эндоэкологической реабилитации в пожилом и старческом возрасте.

Ключевые слова: морфология, лимфатические узлы, геронтология, фитотерапия.

Цитировать: Горчакова О.В. , Горчаков В.Н. Особенности морфофункционального ответа паховых и брыжеечных лимфоузлов на фитотерапию на этапе позднего онтогенеза // Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2014. №2(56). С. 47-50. URL: http://yadi.sk/d/pdIxKsXpSaPWh.

В последние годы происходит развитие лимфоло-гии в интеграции с другими науками, что закономерно вызывает кардинальные изменения в содержании теоретико-методологических подходов к восстановительной медицине и реабилитации. Перспективу такой интеграции определяют концепции лимфатического региона [3, 5], протективной системы [5] и научное направление - фитолимфонутрициология [4]. При этом понимание роли и патогенетическая значимость лимфатической системы в пожилом и старческом возрасте диктует необходимость разработки и обоснования лимфотропных технологий коррекции. Наибольший интерес вызывает фитотерапия, как средство воздействия на структуру и функцию лимфатических узлов разной локализации, при своем позитивном действии на организм [4, 6].

цель исследования - выявить особенности структурно-функциональной организации соматического и висцерального лимфатического узла при формировании ответной реакции на фитотерапию на позднем этапе онтогенеза.

Материалы и методы. Эксперимент проведен на 160 беспородных белых крысах-самцах разного возраста: 3-5 месяцев (молодые) и 1,5-2 года (старые) в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и в соот-

ветствии с приказом МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г. Животные получали при свободном доступе к воде стандартную диету. Фитосбор использовали в суточной дозе 0,1-0,2 г/кг в течение одного месяца у животных разного возраста, и в его составе были бадан, родиола розовая, копеечник сибирский, лист черники, брусники, смородины, шиповник майский, чабрец, пищевые волокна.

Выбор конкретных лекарственных растений основан на принципах фитотерапии с учетом их лимфо-тропных свойств [4, 6]. Изучали паховые (соматические) и брыжеечные (висцеральные) лимфатические узлы в соответствии с требованиями к гистологическому исследованию [1, 2]. Забранные лимфатические узлы фиксировали в 10% нейтральном формалине. Далее следовала классическая схема проводки и заливки материала в парафин с последующим приготовлением гистологических срезов. Гистологические срезы лимфоузлов окрашивали гематоксилин-эозином и азур-эозином. Морфометрический анализ структурных компонентов лимфатического узла осуществляли с помощью морфометрической сетки случайного шага [1], которая накладывалась на срез лимфатического узла. Подсчитывалось количество узлов или пересечений сетки, приходящихся на весь срез в целом и раздельно на каждый из структурных компонентов с перерасчетом в проценты. Статистическая обработка получен-

Use of the extract from the purple ascidium tunic for the reparation of the liver lipid metabolism at stress

Текст научной работы на тему «Применение экстракта из туники асцидии пурпурной для восстановления липидного обмена печени при стрессе»