CC BY
17
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2020; ТОМ 65; №1 |
39 эпизодов тромботических событий: у 26 (81,3%) — однократный эпизод тромбоза; у 5 (15,6%) — один случай ретромбоза; в одном наблюдении (3,1%) — два случая ретромбоза. В 66,7% наблюдений тромбозы имели венозную локализацию. Артериальные тромбозы в виде острого инфаркта миокарда и ишемического инсульта диагностированы в 33,3% случаев. На фоне приема комбинированных гормональных контрацептивов (КГК) возникли 13 эпизодов острого тромбоза ^13,9; 95% С1: 1,8-105,1; р<0,0106], на фоне беременности и послеродового периода зарегистрировано 10 тромботических событий (25,6% от 39 эпизодов тромбоза). В 13 наблюдениях (33,3% от 39 эпизодов тромбоза) причину тромбоза установить не удалось. У 4 пациенток с идиопатическим острым тромбозом в течение первого года случился эпизод ретромбоза на фоне приема КГК (п=2) и во время беременности (п=2). У нормозиготных пациенток медиана активности протромбина определена как 108,0% [95% С1: 103,0111,2], что в 1,4 раза меньше, чем у носительниц мутации F2 (20210)
GA, — 148,5% [95% С1: 145,3-156,9%] без эпизода тромбоза в личном анамнезе. При развитии ВТЭО (п=26) медиана активности протромбина составила 178,2% [95% С1: 151,5-190,3%], а при реализации артериальных тромбозов (п=13) — 180,1% [95% С1: 172,4-201,3%]. Медиана активности протромбина сопоставима при тромбозах в венозном и артериальном сосудистых бассейнах (р=0,1469), и ее показатели значимо отличаются от аналогичных у носительниц мутации гена протромбина F2(20210)GA без эпизода тромботического события (р < 0,0001). С помощью ROC-анализа определен порог критической активности протромбина (178,2%), позволяющий на доказательной основе прогнозировать риск развития тромботических событий
с точностью 90,4%, АиС = 0,904 (95% С1: 0,825-0,955), р<0,0001.
Заключение. Клиническая реализация генотипа F2(20210)GA в виде тромботических событий у женщин репродуктивного возраста происходит при выраженном повышении активности протромбина в сочетании с временно действующими факторами риска.
Николаева М. Г., Момот А. П., Терехина В. Ю., Щеклеина К. В., Корчагина А. В.
ОСОБЕННОСТИ АКТИВАЦИИ СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ ПРИ РАЗВИТИИ ПРЕЭКЛАМПСИИ
Алтайский филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии»; ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет»
Цель работы. Определить особенности активации свертывания крови при развитии преэклампсии.
Материалы и методы. Проведено проспективное когортное исследование с участием 109 беременных. Основную группу составили 59 пациенток, беременность которых осложнилась развитием умеренной или тяжелой преэклампсии (ПЭ), контрольную — 50 женщин с благоприятным течением беременности. Критерии включения в исследование: возраст 18-45 лет; информированное согласие на проведение дополнительных методов исследования. Критерии исключения: многоплодная беременность; аномалии развития внутренних половых органов; экстрагенитальные заболевания в стадии декомпенсации; ан-тифосфолипидный синдром; наличие хромосомных аберраций у супругов. Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета статистического программного обеспечения MedCalcVersion 17.9.7 (лицензия BU556-P12YT-BBS55-YAH5M-UBE51).
Результаты и обсуждение. Клинико-анамнестический анализ показал, что пациентки основной группы значимо чаще страдали хронической гипертензией [OR2,3; р=0,0043], избыточной массой тела [OR1,7; р=0,001] и хроническими заболеваниями почек [OR2,2; р=0,0054], что сопоставимо с данными метаанализов, проведенных ранее. Исследование отдельных параметров системы гемостаза, свидетельствующих о повышении активации свертывания крови, показало, что за 2-3 дня до развития клинической картины ПЭ отмечается достоверно значимое
повышение уровня D-димеров: в основной группе медиана показателя
определена как 570 95% Cl: 400-655 нг/мл против 365 95% Cl: 309-410 нг/ мл в контрольной группе (р=0,0035). При исследовании уровня тканевого фактора (TF) и его ингибитора (TFIP) определено, что в эти же сроки уровень TF увеличивается в 8 раз: 54,4 95%Cl:51,1-60,7 пмоль/мл против 7,5 95% Cl: 4,5-8,5 пмоль/мл в группе контроля (р<0,0001). Отношение уровня тканевого фактора к его ингибитору (TF/TFIP), возрастало в 13 раз: 41,0 95% Cl: 35,5-46,7 против 3,2 95% Cl: 2,8-4,6 соответственно (р<0,0001). Также в группе женщин, течение беременности которых осложнилось развитием ПЭ, характерно снижение активности физиологического антикоагулятнта AT III. Медиана активности АТ Шсоставила 96,5% 95% Cl: 79,48-113,15 в случае развития ПЭ и 107% 95% Cl: 88,6-124,0 при физиологическом течении беременности (р=0,0015). По данным интегрального теста тромбографии установлено, что развитие ПЭ сопровождается усилением тромбинообразования с 18 недель гестации. За 2-3 дня до развития клинической картины ПЭ медианы показателя Peak thrombin достигали достоверных отличий: 2530 95% Cl: 2324-2678 нмоль/мл в основной группе против 1735 95% Cl: 1619-1960 нмоль/мл (р<0,0001) в группе контроля.
Заключение. Проанализированные в работе лабораторные параметры являются объективными предикторами развития ПЭ, что позволяет рассматривать активацию свертывания крови в качестве обоснованной предпосылки для проведения гепаринопрофилактики.
Никулина Е. Е., Сидорова Ю. В., Глинщикова О. А., Рисинская Н. В., Смирнова С. Ю., Рыжикова Н. В., Судариков А. Б.
ПРИМЕНЕНИЕ ДОП-ПЦР ПРИ НИЗКИХ КОНЦЕНТРАЦИЯХ ДНК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В диагностике ряда гематологических патологий, в том числе лимфопролиферативных заболеваний (ЛПЗ), большое значение имеют молекулярные исследования, для которых критичны качество и количество выделенной ДНК. Известно, что свободно циркулирующая ДНК в биологических жидкостях (плазма крови, ликвор, содержимое серозных полостей) находится в низкой концентрации и фрагментированном состоянии. Помимо этого, при необходимости исследования некоторых типов образцов, в частности кожи, ногтей, волос, биоптата кости, стекловидного тела, срезов парафиновых блоков и др., имеются проблемы с экстракцией генетического материала. Количество и качество ДНК, выделенной из этих тканей, зачастую оказываются недостаточными. Для работы с низкими концентрациями ДНК разработан метод ДОП-ПЦР (ПЦР с дегенеративным олигонуклеотидным праймером). Это двухэтапная реакция с особым температурным режимом и праймером, содержащим гексамерную последовательность со случайным нуклеотидным составом, обеспечивающая неспецифическую амплификацию фрагментов ДНК. Полученные фрагменты затем используются для проведения молеку-лярно-генетических исследований. Однако вопрос о том, насколько
данный метод искажает конечный результат теста, нуждается в дополнительном изучении.
Цель работы. Определить целесообразность использования ДНК, амплифицированной при помощи ДОП ПЦР, для диагностики ЛПЗ.
Материалы и методы. В работе использовали геномную ДНК, полученную от здорового донора и от пациента с выявленной точечной мутацией гена MYD88 L265P и В-клеточной моноклональ-ностью. Серийные разведения ДНК (1,25; 0,6; 0,3; 0,15 и 0,075 нг) с ДОП-ПЦР и без ДОП-ПЦР были исследованы различными мо-лекулярно-генетическими методами: аллель-специфичная ПЦР (АС-ПЦР) в реальном времени для определения мутации MYD88, анализ STR профилей с использованием набора COrDIS PLUS (Россия) и метод фрагментного анализа реаранжировок генов IgH по протоколу BIOMED 2.
Результаты и обсуждение. При концентрации ДНК 0,15 и 0,075 нг после ДОП-ПЦР в STR-профиле пациента выявлялись стохастические изменения, которые выражались в потере локусов и пиковом дисбалансе. При всех разведениях (1,25; 0,6; 0,3; 0,15 и 0,075 нг) после
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
ДОП-ПЦР изменялся профиль определения В-клеточной клонально-сти, что проявлялось потерей гауссовского распределения и появлением ложных олиго- или моноклональных пиков. После применения ДОП-ПЦР эффективность амплификации с праймерами на мутацию MYD88 возрастала в 3 4 раза, а результаты АС-ПЦР не изменялись как в случае наличия, так и при отсутствии мутации при любых первичных концентрациях ДНК, включая самые низкие — 150 пг (0,15 нг) и 75 пг (0,075 нг), что соответствовало 20 и 10 геномам.
Заключение. Применение ДОП-ПЦР при первичных концентрациях ДНК ниже 0,3 нг приводит к неравномерной амплификации фрагментов ДНК, что значительно искажает результат STR-анализа и профиль реаражировок генов 1§Н, но не влияет на конечный результат определения точечных мутаций методом АС-ПЦР. Для более точной оценки места ДОП-ПЦР в молекулярной диагностике клинических образцов с фрагментированной ДНК целесообразны дальнейшие исследования.
Новикова А. А., Клясова Г. А., Грибанова Е. О., Рыжко В. В., Савченко В. Г.
ЧАСТОТА ИНФЕКЦИОННЫХ ОСЛОЖНЕНИИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ СРОКОВ РЕГИСТРАЦИИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ОТВЕТА
НА ЛЕЧЕНИЕ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Современные программы терапии позволили повысить общую выживаемость больных множественной миеломой (ММ), тем не менее у большинства из них развиваются рецидивы, что требует последовательной смены линий противоопухолевого лечения.
Цель работы. Изучить частоту инфекционных осложнений в зависимости от сроков регистрации противоопухолевого ответа на лечение у больных ММ.
Материалы и методы. В исследование включали больных de novo ММ, которым проводилось лечение с января 2013 по июль 2018 г. в НМИЦ гематологии. Всем больным проводили противоопухолевую терапию и оценивали противоопухолевый ответ на лечение согласно Национальным клиническим рекомендациям. Частота инфекционных осложнений была оценена после 4-х курсов противоопухолевой терапии у больных, достигших и не достигших очень хорошего частичного ответа (ОХЧО) и частичного ответа (ЧО).
Результаты и обсуждение. В исследование было включено 160 боль -ных de novo ММ (76 мужчин, 84 женщины) в возрасте от 23 до 82 лет (медиана возраста 61 год). Среди 160 больных ММ у 121 (75,6%) ОХЧО и ЧО были достигнуты после 4-х курсов терапии. Частота инфекционных осложнений в зависимости от противоопухолевого ответа представлена в таблице. Частота инфекций была статистически значимо выше у больных, не достигших ОХЧО и ЧО, чем у больных с ОХЧО и ЧО после 4-х курсов терапии (79,5% против 59,5%, р=0,05). У больных, не достигших ОХЧО и ЧО после 4-х курсов терапии, статистически значимо чаще возникали бактериемия (р=0,03), инфекция мо-чевыводящих путей (р=0,047) и другие тяжелые инфекции (р=0,002), включавшие инвазивный аспергиллез легких, листериозный менингит,
пневмоцистную пневмонию, диарею, ассоциированную с аол^сдЫдел дс/АеНг, мукозит III—IV степени. Статистически значимо чаще у больных с ОХЧО и ЧО после 4-х курсов противоопухолевой терапии в сравнении с больными, не достигшими ОХЧО и ЧО, была зарегистрирована герпесвирусная инфекция (30,6% против 18%, р=0,05).
Заключение. Частота инфекционных осложнений была значимо выше у больных ММ, не достигших ОХЧО и ЧО после 4-х курсов противоопухолевой терапии, в сравнении с больными, имевшими этот ответ. В то же время среди больных с ОХЧО и ЧО после 4-х курсов терапии было констатировано значимое преобладание герпе-свирусных инфекций.
Таблица. Частота инфекционных осложнений у больных ММ в зависимости от противоопухолевого ответа после 4-х курсов терапии
Показатель ОХЧО и ЧО после 4 курсов терапии п
Достигнут Всего больных 121 П (%) Не достигнут Всего больных 39 П (%)
Число больных с инфекцией 75 (59,5) 31 (79,5) 0,05
Пневмония 39 (32,2) 17 (43,6) 0,2
Герпесвирусная инфекция 37 (30,6) 7 (18) 0,05
Инфекция мочевыводящих путей 11 (9,1) 9 (23,1) 0,047
Синусит 11 (9,1) 6 (15,4) 0,37
Бактериемия 2 (1,7) 4 (10,3) 0,03
Инфекция промежности 3 (2,4) 2 (5,1) 0,59
Лихорадка неясной этиологии 3 (2,4) 4 (10,3) 0,06
Инфекция мягких тканей 2 (1,7) 3 (7,7) 0,09
Другие 3 (2,4) 7 (18) 0,002
Новикова А. А., Клясова Г. А., Грибанова Е. О., Зубарева Ю. А., Рыжко В. В., Савченко В.Г.
ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛОНИЗАЦИИ ПОЛИРЕЗИСТЕНТНЫМИ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ КИШЕЧНИКА БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ ДО И В ПРОЦЕССЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. В последние годы в этиологии инфекционных осложнений у больных опухолями системы крови отмечается увеличение доли полирезистентных бактерий. Неопределено значение колонизации полирезистентными грамотрицательными бактериями (ГОБ) слизистой оболочки кишечника у больных множественной миеломой (ММ) в возникновении инфекции.
Цель работы. Исследовать колонизацию полирезистентными ГОБ слизистой оболочки кишечника больных ММ до и в процессе противоопухолевой терапии.
Материалы и методы. В исследование включали больных die novo ММ, которым проводилось лечение с ноября 2016 по июль 2018 г. в НМИЦ гематологии. Мазки со слизистой оболочки прямой кишки для выявления ГОБ исследовали у больных ММ перед каждым курсом противоопухолевой терапии, при назначении антибиотиков и при модификации противомикробной терапии.
Результаты обсуждения. В исследование было включено 68 боль -ных de novo ММ (30 мужчин, 38 женщин) в возрасте от 32 до 82 лет (медиана 61,5 лет). Мониторинг колонизации ГОБ слизистой оболочки кишечника был проведен в период 473 курсов терапии (медиана 6 мес.). Лейкопения (лейкоцитов <1,0х109/л) была определена у 9 больных на 16 (3,4%) курсах терапии, медиана длительности — 4 дня
(2—17 дней). Колонизация слизистой оболочки кишечника ГОБ была выявлена у 25 (36,8%) из 68 больных при поступлении в НМИЦ гематологии. У 24 (96%) из 25 больных были выделены Enterobacteraíes с продукцией БЛРС (Escherichia cotí n=22, KíebsUíía pneumoniae n=4), у 1-го больного было сочетание E. cotí с продукцией БЛРС и Pseudomonas aeruglnoda. В процессе противоопухолевой терапии колонизация
_р = 0,045_
р = 0.046
54,8
1 45,6 47-4
Mill
прп
2 курс
3 курс
4 курс 5 курс
6 курс
62 61 57 47 38
N больных, имевших колонизацию слизистой оболочки кишечника Enterobacterales БЛРС 25 21 32 26 19 18
7 курс 31
8 курс 28
17 10
Рисунок. Динамика детекции Enterobacterales с продукцией БЛРС при курсах противоопухолевой терапии
