Преконцепционный молекулярно-генетический скрининг молодых здоровых женщин на предикцию осложнений беременности

Фролова Наталия Ивановна; Белокриницкая Татьяна Евгеньевна; Страмбовская Наталья Николаевна

УДК 612.60575.2:613.99-07:618.3-06

ПРЕКОНЦЕПЦИОННЫЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ СКРИНИНГ МОЛОДЫХ ЗДОРОВЫХ ЖЕНЩИН НА ПРЕДИКЦИЮ ОСЛОЖНЕНИЙ БЕРЕМЕННОСТИ

Читинская государственная медицинская академия

Поступила в редакцию 15.11.2014

Изучены частотные характеристики полиморфизмов генов (FVL-169G>A, FII-20210G>A, AGTR1-1166A>C, NO3-894G>C), ассоциированных с риском тромбофилии, гипертензии и осложнениями гес-тации, у 130 молодых здоровых женщин, планирующих беременность. В ходе исследования FVL-1691АА и FII-20210AA не выявлены, а частота FVL-1691GA (0,8%), FII-20210GA (1,5%), NO3-894CC (10,0%) была ниже (р<0,05) или равна AGTR1-1166CC (7,7%) общепопуляционной. Вывод: преконцеп-ционное исследование молекулярно-генетических предикторов тромбофилии и артериальной гипер-тензии должно проводиться избирательно, при наличии отягощенного индивидуального и/или семейного анамнеза.

Ключевые слова: генетический полиморфизм, FVL-1691G>A, FII-20210G>A, AGTR1-1166A>C, NO3-894G>C, преконцепционная подготовка

Выявление молекулярно-генетических предикторов заболеваний служит базисом для развития персонализированной (индивидуальной) медицины. В этом аспекте большой научно-практический интерес представляют исследования генетического полиморфизма. Метаанализ проспективных когортных исследований свидетельствует о наличии взаимосвязи между полиморфными вариантами генов FVL-1691G>A и F//-20210G>A матери и такими осложнениями беременности, как невынашивание, задержка роста плода, преэклампсия/эклампсия и преждевременная отслойка плаценты [6-8, 12-15]. Обнаружена взаимосвязь между мутантными аллелями полиморфизма генов ангиотензиногена AGTR1 -1166A>C, и эндотелиальной синтазы окиси азота NO3-894G>C с возникновением пре-эклампсии [3-5, 11].

Цель работы: изучение распространенности молекулярно-генетических предикторов тромбофилии и артериальной гипертензии у молодых здоровых женщин, планирующих беременность.

Фролова Наталия Ивановна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры акушерства и гинекологии факультета повышения квалификации. E-mail: taasyaа@mail. ru

Белокриницкая Татьяна Евгеньевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой акушерства и гинекологии факультета повышения квалификации. E-mail: [email protected]

Страмбовская Наталья Николаевна, кандидат медицинских наук, доцент, заведующая лабораторией молекулярной генетики НИИ молекулярной медицины. Email: [email protected]

Материалы и методы. На этапе прекон-цепционной подготовки было проведено геноти-пирование 130 здоровых женщин жительниц Забайкальского края в возрасте от 19 до 29 лет (средний возраст составил 24,6±3,8 года), которые не имели в прошлом беременностей, семейного или индивидуального анамнеза артериальной гипертензии, тромбозов и/или тромбоэмбо-лий. Все пациентки дали добровольное информированное согласие на проведение генетического картирования и обработку полученных результатов.

Исследование генетического полиморфизма фактора V Лейдена ^^-16910>К), протромбина (F//-20210G>A), эндотелиальной синтазы оксида азота (NO3-894G>C), рецептора 1-го типа ангиотензиногена-2 (AGTR1 -1166A>C) проведено на ДНК, полученной из лейкоцитов периферической крови («Проба-РАПИД генетика», ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Москва). В качестве метода использована полимеразная цепная реакция с детекцией продукта амплификации в режиме реального времени (Амплифи-катор «ДТ-96») с использованием комплектов реагентов «КардиоГенетика тромбофилия», «КардиоГенетика Гипертония» (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Москва) [9]. Качественные данные представлены в виде числа п и % (число пациенток - носителей данного аллеля и процент от их количества в группе исследуемых) или десятичной доли единицы (Р). Выявленные генотипы проверяли на соответствие закону Хар-ди-Вайнберга. Межгрупповые различия по

Известия Самарского научного центра Российской академии наук, том 16, №5(4), 2014

качественным бинарным признакам оценивали по критерию X с помощью программы Statistica 6.0 («StatSoft»). Значения считали статистически значимыми при р<0,05, при величине х2>3,84.

Результаты исследования и их обсуждение. В ходе работы обнаружены все искомые аллельные варианты в гомо- и гетерозиготном состоянии, распределение генотипов которых соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (HWE, p>0,05). В когорте здоровых молодых женщин нами не обнаружено гомозиготное состояние генотипа по мутантному аллелю FVL-1691G>A и F//-20210G>A (популяционные показатели для женщин в Забайкалье - 2,7% и 2,2%, соответственно [2]). Частота FVL-1691GG и FVL-1691GA составила: 99,2% (129/130) и 0,8% (1/130) соответственно. Распространенность аллелей 1691А и 1691G полиморфизма FVL-1691G>A была 0,996 и 0,004, соответственно. Среди исследуемых 98,5% (128/130) были гомозиготными (20210GG), а 1,5% (2/130) гетерозиготными (20210GA) носителями полиморфизма F//-20210G>A. Показатели частоты аллелей 20210А и 20210G полиморфизма FII-20210G>A составили 0,992 и 0,008, соответственно (табл. 1). Таким образом, частота гетерозиготного носительства варианта FVL-1691GA 0,8% и FII-20210GA 1,5%, ассоциированных с риском тромбозов, в обследованной когорте пациенток была в 3 раза меньше, чем популяционные показатели в Забайкалье - 2,5% и 4,5%, соответственно (р<0,05) [2].

1166A-аллель гена рецептора 1-го типа ан-гиотензиногена-2 в гомо- либо гетерозиготном состоянии идентифицирован у 120 из 130 (92,3%) пациенток. Частота встречаемости

нормального генотипа ЛОТШ-1166АА составила 71,5% (93/130), гетерозиготного генотипа ЛGTR1-1166AC - 20,8% (27/130). Гомозиготных носительниц по мутантному аллелю ЛGTR1-1166СC, ассоциированному с артериальной ги-пертензией [2, 6], выявлено лишь 7,7% (10/130), что статистически значимо отличается от показателя в европейских популяциях 21,5% (р<0,05) [10].

Активное участие окиси азота (NO) в регуляции сосудистого тонуса, кровотока и артериального давления позволяет рассматривать функционально-значимые полиморфизмы гена еШОБ как возможные маркеры риска развития артериальной гипертензии, тяжелой преэклам-псии, эклампсии [1, 4, 5]. Преконцепционный скрининг на носительство полиморфизма гена NO3-894G>C показал, что 90% (117/130) молодых здоровых женщин имели нормальный гомозиготный (894GG) или гетерозиготный (894вС) генотип заявленного полиморфизма эндотели-альной синтазы окиси азота. Распространенность нормального генотипа 894GG составила 57,7% (75/130), гетерозиготного генотипа 894GС -32,3% (42/130). Гомозиготных носительниц по мутантному аллелю 894СС, связанного с риском артериальной гипертензии, идентифицировано значительно меньше 10,0% (13/130). В целом в исследуемой когорте частота встречаемости ал-леля C полиморфизма N03-894G>C была в 2,8 раза меньше, чем аллеля G (0,261 и 0,739, соответственно), а мутантные гомозиготы с генотипом NOS3-894СС идентифицировались кратно реже (10%), чем в европеоидных популяциях (30-40%, p<0,05) [1, 10].

Таблица 1. Частота аллелей и генотипов изучаемого генетического полиморфизма у молодых женщин, планирующих беременность (п=130)

Исследуемые полиморфизмы Частота генотипов, абс (%) Частота аллелей, Р

FVL- 1691G>A GG GA AA G A

129 (99,2) 1 (0,8) 0 0,996 0,004

FII-20210G>A GG GA AA G A

128 (98,5) 2 (1,5) 0 0,992 0,008

AGTR1-1166 A>C АА АС СС А С

93 (71,5) 27 (20,8) 10 (7,7) 0,819 0,181

N03-894G>C GG GC СС G С

75 (57,7) 42 (32,3) 13 (10,0) 0,739 0,261

Выводы: отсутствие мутантных гомозиготных генотипов ЕУЬ G1691A и FП G20210A, меньшие, чем в популяции, показатели встречаемости гетерозиготных генотипов РУЬ-1691GA (0,8%) и П1-202ЖА (1,5%), ассоциированных с осложнениями беременности; мутантных генотипов ЛGTR1-1166СC (7,7%) и N03-894^ (10,0%), связанных с риском артери-

альной гипертензии, позволяют заключить, что преконцепционное обследование пациенток на молекулярно-генетические предикторы тромбо-филии и артериальной гипертензии должны проводиться избирательно - при наличии индивидуального и/или семейного анамнеза артериальной гипертензии, преэклампсии, эклампсии и/или венозных тромбозов/тромбоэмболий.

8. Helgadottir, L.B. The association of inherited thrombophilia and intrauterine fetal death: a case-control study / L.B. Helgadottir, F.E. Skjeldestad, A.F. Jacob-sen et al. // Blood Coagul. Fibrinolysis. 2011. V. 22(8). P. 651-656.

9. http://dna-technology.ru/instr-equ/instr_reagents/ (Дата доступа 30 октября 2014).

10. http://www.snpedia.com/index.php/SNPedia (Дата доступа 30 октября 2014).

11. Kusmierska-Urban, K. Selected polymorphisms of renin-angiotensin system in the pathology of hypertensive disorders of pregnancy / K. Kusmierska-Urban, K. Rytlewski, A. Reron // Ginekol. Pol. 2013. V. 84 (3). P. 214-218.

12. Rodger, M.A. The association of factor V Leiden and prothrombin gene mutation and placenta-mediated pregnancy complications: a systematic review and me-ta-analysis of prospective cohort studies / M.A. Rodger, M. T. Betancourt, P. Clark et al. // PLoS Med. 2010. V. 7 (6). e1000292. Режим доступа: http://www. plosmedicine.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fj ournal.pmed. 1000292 (30 октября 2014).

13. Slezak, R. The role of 1691G>A (Leiden) mutation in Factor V gene, 20210G>A in prothrombin gene and 677C>T in MTHFR gene in etiology of early pregnancy loss / R. Slezak, L. Laczmanski, P. Karpinski, D. Reszczynska-Slezak // Ginekol. Pol. 2011 Jun. V. 82(6). P. 446-450. [Article in Polish].

14. Pasinska, M. Molecular diagnostic tests for thrombo-philia in patients referred to genetic counseling clinic because due to recurrent pregnancy failure. One center's experience / M. Pasinska, K. Soszynska, A. Runge et al. // Ginekol. Pol. 2012. V. 83 (3). P. 178-182.

15. Vavrinkova, B. Thrombophilic mutation by women with serious pregnancy complications / B. Vavrinkova, T. Binder, I. Hadacova et al. / Ceska Gynekol. 2012 Apr. V. 77(2). P. 171-174. [Article in Czech].

PRECONCEPTIONAL MOLECULAR AND GENETIC SCREENING OF YOUNG HEALTHY WOMEN ON PREDICTION OF PREGNANCY COMPLICATIONS

Frequency characteristics of genes polymorphisms (FVL-169G>A, FII-20210G>A, AGTR1-1166A>C, NO3-894G>C, associated with risk of thrombophilia, hypertensia and gestation complications, at 130 young healthy women planning pregnancy are studied. During the research FVL-1691AA и FII-20210AA aren't revealed, and frequency FVL-1691GA (0,8%), FII-20210GA (1,5%), NO3-894CC (10,0%) was lower (р<0,05) or AGTR1-1166CC (7,7%) of the all-population is equal. Conclusion: preconseptional research of molecular and genetic predictors of a thrombophilia and arterial hypertension has to be carried out selectively, in the presence of the burdened individual and/or family anamnesis.

Key words: genetic polymorphism, FVL-1691G>A, FII-20210G>A, AGTR1-1166A>C, NO3-894G>C, preconseptional care

Nataliya Frolova, Candidate of Medicine, Assistant at the Department of Obstetrics and Gynecology at the Professional Development Faculty. E-mail: [email protected]; Tatiana Belokrinitskaya, Doctor of Medicine, Professor, Head of the Department of Obstetrics and Gynecology at the Professional Development Faculty. E-mail: [email protected]; Natalia Strambovskaya, Candidate of Medicine, Associate Professor, Chief of the Molecular Genetics Laboratory at the Molecular Medicine Scientific Research Institute. E-mail: [email protected]

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Баранов, В.С. Генетический паспорт - основа индивидуальной и предикативной медицины. - СПб.: Н-Л, 2009. 528 c.

2. Богданов, И.Г. Распространенность мутации FVL (Лейден) на территории Забайкалья // И.Г. Богданов, А.С. Богданова, НА. Мироманова и др. / Дальневосточный медицинский вестник. 2007. № 1. С. 33-34.

3. Глотов, А.С. Полиморфизм генов ренин-ангиотензиновой системы и риск развития сосудистой патологии у беременных женщин с гестозом //

A.С. Глотов, Е.С. Вашукова, М.Д. Канаева и др. / Журнал акушерства и женских болезней. 2012. № 3. С. 61-68.

4. Долгушина, В. Ф. Акушерские осложнения при различных формах артериальной гипертензии у беременных / В.Ф. Долгушина, В.С. Чулков, Н.К. Вереи-на, С.П. Синицын // Акушерство и гинекология. 2013. №10. С. 33-39.

5. Benedetto, C. Synergistic effect of renin-angiotensin system and nitric oxide synthase genes polymorphisms in pre-eclampsia / C. Benedetto, L. Marozio, G. Ciccone et al. // Acta Obstet. Gynecol. Scand. 2007. Vol. 86 (6). P. 678-682.

6. Bradley, L.A. Can Factor V Leiden and prothrombin G20210A testing in women with recurrent pregnancy loss result in improved pregnancy outcomes?: Results from a targeted evidence-based review / L.A. Bradley, G.E. Palomaki, J. Bienstock et al. // Genet Med. 2012 Jan. V. 14(1). P. 39-50.

7. Habibovic, Z. Effects of inherited thrombophilia in women with recurrent pregnancy loss / Z. Habibovic,

B. Zeybek, C. Sanhal et al. // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 2011. V. 38(4). P. 347-350.

PRECONCEPTIONAL MOLECULAR AND GENETIC SCREENING OF YOUNG HEALTHY WOMEN ON PREDICTION OF PREGNANCY COMPLICATIONS

Текст научной работы на тему «Преконцепционный молекулярно-генетический скрининг молодых здоровых женщин на предикцию осложнений беременности»