CC BY
43
УДК 615.2/.3.015:616.352-006.55:591.2
L.M. Borisova,
V.I. Ponomarkov,
Z.S. Smirnova
PRECLINICAL STUDY OF EFFICIENCY OF ESTRAZIN ON ADENOMA OF PERIANAL GLANDS IN DOGS
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow
ABSTRACT
In this investigation we have estimated an efficiency of Estrazin on spontaneous androgen-dependent arlpnrvmag of perianal glands (APG) in dogs in comporison with Sinoestrolum. High therapeutic effect was revealed 4-7 weeks after treatment. Administration of Estrazin at a dose of 10 mg/kg daily for 10 days exerts therapeutic effect in 100% cases and at a dose of 20 mg/kg daily for 5 days - in 93,7% cases. Administration of Sinoestrolum at doses of 0,2 - 0,8 mg/ kg caused therapeutic effect at dogs with APG in 86,2% cases 8-13 weeks after treatment. Morphological investigation of APG of dogs during treatment with Estrazin has revealed signs of damage of tumor cells 14 days after beginning of treatment in all animals. Total regression of adenomas on 50 day after beginning of treatment was revealed in 48,5 % dogs.
Key words: Estrazin, adenoma of perianal glands, therapeutic efficiency
JI.M. Борисова, В.И. Пономарьков, З.С. Смирнова
ПРЕДКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА ЭСТРАЗИН НА СПОНТАННЫХ АДЕНОМАХ ПЕРИАНАЛЬНЫХ ЖЕЛЕЗ СОБАК
ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
РЕЗЮМЕ
В настоящем исследовании проведена оценка эффективности нового препарата Эстразин на спонтанных авдроген-зависимых аденомах перианальных желез (АПЖ) собак в сравнении с синэстролом. Высокий терапевтический эффект при лечении АПЖ Эстразином выявляется через 4-7 нед после начала лечения. Эстразин в дозе 10 мг/кг при введении его в течение 10 дней вызывает терапевтический эффект в 100 % случаев, в дозе 20 мг/кг при введении в течение 5 дней - в 93,7 % случаев. Синэстрол в дозах 0,2 - 0,8 мг/кг вызывает терапевтический эффект в 86,2 % случаев, который выявляется через 8-13 нед после начала лечения АПЖ. Морфологическое изучение АПЖ у собак в процессе применения препарата Эстразин показало, что признаки повреждения опухолевых клеток начинают появляться у всех животных на 14-й день после начала лечения, а к 50-му дню у
48,5 % животных выявляется полная регрессия опухоли.
Ключевые слова: Эстразин, аденома перианальных желез, терапевтическая эффективность
ВВЕДЕНИЕ
Одной из актуальных проблем современной онкологии и урологии является лечение рака предстательной железы (РПЖ). Во всех странах мира наблюдается тенденция роста заболеваемости этой патологией. РПЖ выявляется в основном у мужчин пожилого и старческого возраста. Средний возраст больных РПЖ
- 65-75 лет [4; 11; 12]. В связи с особенностями клинического течения и несовершенством ранней диагностики 60-80 % больных РПЖ при первичном обраще-
нии имеют распространенный процесс с метастазами в лимфоузлы, кости и отдаленные органы - Б стадия [6]. Основным методом лечения РПЖ в О стадии является паллиативная гормональная терапия.
За последние годы разработаны новые гормональные препараты, среди которых широкое применение в клинике находят антиандрогены и ЛГРГ агонисты, а также их комбинация, получившая название «максимальная андрогенная блокада» (МАБ), рекомендуемая в качестве первой линии гормонального лечения [15;
18; 19]. Наличие первичной и вторичной гормоноре-зистентности РПЖ к известным эстрогенам и выраженных осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта, свертывающей системы крови и др., а также относительной безопасности лечения МАБ привело к ограничению эстро-генотерапии [1-3].
В последнее время вновь возрос интерес к эстроге-нотерапии РПЖ в связи с наличием осложнений при терапии антиандрогенами и аналогами ЛГРГ, а также отсутствием убедительных клинических и экспериментальных данных о преимуществе противоопухолевого действия других видов гормонотерапии перед эстрогенами - вероятно, из-за их прямого цитотоксичес-кого действия на опухоль [14; 17]. В более поздних исследованиях показано, что частота сердечно-сосудистых осложнений при эстрогенотерапии носит дозозависимый характер [8].
Целесообразность создания нового эстрогенного препарата, обладающего противоопухолевым действием, продиктована следующими факторами: первичной нечувствительностью ряда больных РПЖ к известным эстрогенным препаратам; различиями в степени проявления побочных эффектов у разных эстрогенов; возникновением лекарственной устойчивости при длительном применении одного и того же эстрогенного препарата; отсутствием среди известных эстрогенов препаратов пролонгированного действия [1-3; 5; 9]. Кроме того, с экономической точки зрения лечение РПЖ эстрогенами гораздо дешевле, чем агонистами ЛГРГ и антиандрогенами.
В Уральском Государствениом техническом университете (г. Екатеринбург) совместно с институтом проблем эндокринной патологии им. В.Я. Данилевского АМН Украины (г. Харьков) и ГУ Российским онкологическим научным центром им. Н. Н. Блохина РАМН (г. Москва) разработан препарат Эстразин (З-окси-экстра-1,3,5-триен-17-гидразон). Основанием для синтеза Эстразина послужило предположение, что простейшие гидразоны стероидных кетонов в организме способны окисляться с образованием реакционноспособных диазостероидов, более прочно связывающихся с рецепторами соответствующих гормонов и тем самым оказывающих более длительное гормональное и противоопухолевое действие.
Лекарственная форма Эстразина - свечи на водорастворимой полиэтиленоксидной основе для ректального введения с содержанием препарата 100; 200 и 300 мг. Ректальный способ введения эстрогенного препарата имеет ряд преимуществ. Во-первых, лекарственное вещество попадает в ток кровообращения, минуя печень, где происходит метаболизм эстрогенов, и, во- . вторых, часть препарата через систему коллатералей непосредственно поступает в предстательную железу.
Данные о высокой противоопухолевой активности на перевиваемых и индуцированных опухолях мышей и крыс, а также низкой токсичности Эстразина, полученные при предклиническом изучении препарата, послужили основанием оценить его эффективность на спонтанных андроген-зависимых аденомах периа-нальных желез (АПЖ) собак [7; 10].
Спонтанная аденома перианальных желез собак является гормоно-зависимой доброкачественной опу-
холью и возникает у старых самцов в условиях повышенного уровня андрогенов в организме. В аденоме перианальных желез обнаружены рецепторы андрогенов и эстрогенов [13; 16]. При орхиэктомии и лечении эстрогенами спонтанная аденома перианальных желез собак подвергается регрессии.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Работа выполнена в онкологической клинике животных ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. В исследование были включены 62 собаки-самца в возрасте от 6 до15 лет со спонтанной аденомой перианальных желез с морфологически верифицированным диагнозом. Препарат Эстразин вводили 33 животным ректально в суппозиториях ежедневно 1 -2 раза в день (в зависимости от массы тела собаки), из них 11 собак получали Эстразин в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней (суммарная доза 100 мг/кг); 16 собак - в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней (суммарная доза 100 мг/кг) и 6 собак - в дозе 30 мг/кг в течение 5 дней (суммарная доза 150 мг/кг).
Препаратом сравнения выбран синэстрол, который применяется в ветеринарной практике при лечении АПЖ собак. Синэстрол получали 29 животных внутрь в таблетках в дозах 0,2 мг/кг; 0,5 мг/кг и 0,8 мг/кг массы тела (в суммарных дозах 12; 15 и 24 мг/кг соответственно) ежедневно в течение 1-2 мес (30-60 дней). Во всех случаях после лечения синэстролом делали орхиэктомию.
Эффективность гормонотерапии опухолей оценивали по следующим критериям: полная ремиссия (ПР)
- полная регрессия опухоли; частичная ремиссия (ЧР)
- регрессия опухоли более, чем на 50 %, стабилизация опухолевого процесса - регрессия опухоли менее, чем на 50 %, или рост опухоли не более, чем на 25 %, и прогрессирование роста опухоли. Терапевтический эффект гормонотерапии оценивали как сумму положительных эффектов - ПР+ЧР+стабилизация опухолевого процесса.
У всех животных в процессе лечения измеряли объем опухоли в 1-й день и на 7-е, 14-е, 21-е, 28-е сут от начала лечения.
У 16 собак после лечения препаратом эстразин были изучены морфологические изменения в ткани аденомы на 7-е, 14-е, 21-е, 30-е, 50-е и 60-е сут от начала лечения. При этом у животных для гистологического исследования брали инцизионно-биопсийный материал - кусочки опухоли, а также операционный материал, полученный при хирургическом удалении остатков опухолевых узлов (от 5 собак).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Эффективность Эстразина при лечении спонтанной АПЖ собак в зависимости от дозы и режима введения препарата представлена в табл. 1. Через 4-7 нед после начала лечения Эстразином из 11 животных, получавших препарат в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней, полная регрессия АПЖ была достигнута у 5 собак (в
45,5 % случаев), частичная регрессия - также у 5 собак (в 45,5 % случаев) и у 1-го животного (в 9 % случаев) отмечалась стабилизация опухолевого процесса.
В группе из 16 животных, которым вводили Эстразин в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней, полная ремис-
сия заболевания наблюдалась у 9 собак (в 56,2 % случаев), частичная ремиссия - у 5 собак (31,2 % случаев). Эффект отмечали через 4—7 нед от начала лечения. Стабилизация опухолевого процесса выявлена у 1 собаки (в 6,3 % случаев), и у 1 собаки (в 6,3 % случаев) наблюдалось прогрессирование роста опухоли.
Из 6 животных, получавших Эстразин в дозе 30 мг/кг в течение 5 дней, у 2 собак (33,3 % случаев) была выявлена полная ремиссия заболевания через 4-6 нед от начала лечения, В эти же сроки наблюдения у 2 собак (33,3 % случаев) наблюдалась частичная ремиссия и у 2 животных (33,3 % случаев) - прогрессирование роста опухоли.
При лечении АПЖ собак синэстролом в суммарных дозах 12-24 мг/кг полная регрессия опухоли была достигнута у 9 животных (31 % случаев), частичная регрессия - у 7 (24,2 % случаев), стабилизация опухолевого процесса - у 9 животных (31 % случаев), прогрессирование роста опухоли - у 4 животных (13,8 % случаев) через 8-13 нед от начала лечения.
При оценке эффективности лечения АПЖ Эстрази-ном в зависимости от объема опухоли было выявлено, что высокий терапевтический эффект был достигнут у животных с объемом опухоли не более 30см3 (табл. 2). Так, у животных с объемом опухолевого узла до 10 см3 полная ремиссия заболевания достигалась в 83 % случаев, с объемом 10-30 см3 - в 42 % случаев, а с объемом опухоли более 30 см3 - только в 11 % случаев. Частичная ремиссия наблюдалась у животных с объемом опухолевого узла до 10 см3 в 17 % случаев, с объемом 10-
30 см3 - в 50 % случаев. У животных с объемом опухоли более 30 см5 был выявлен невысокий терапевтический эффект: частичная ремиссия в 45 % случаев, стабилизация опухолевого процесса в 22 % случаев и в 22 % прогрессирование роста опухоли.
При лечении собак со спонтанной АПЖ препаратом синэсгрол было выявлено, что высокий терапевтический эффект наблюдался у животных с объемом опухоли до 10 см3 и 10-30 см3, из которых полная регрессия опухоли была достигнута у 4 собак (66,7 % случаев) и у
3 собак (60 % случаев) соответственно. Более слабый терапевтический эффект отмечался у животных с объемом опухоли больше 30 см3, у которых не выявлено полной регрессии спонтанных аденом ПЖ ни в одном случае, а частичная ремиссия заболевания была достигнута только у 3 животных (33,3 % случаев).
Животным с досгигаутой ранее частичной регрессией АПЖ (8 собак) и лечившимся без эффекта (2 собаки) через 4-6 нед после проведенного курса лечения Эстразином была проведена орхиэктомия, в результате чего у 6 собак с АПЖ (60 % случаев) наблюдалась полная ремиссия заболевания, у 2 животных (20 % случаев) - частичная, у 2 животных (20 % случаев) - стабилизация опухолевого роста. 3 животным с достигнутой частичной регрессией АПЖ и 2 со стабилизацией роста опухоли через 6-7 нед после начала лечения Эстразином были хирургически удалены опухолевые узлы.
Собакам с ЧР заболевания и стабилизацией опухолевого процесса после лечения синэстролом также проводилась орхиэктомия и резекция опухолевого узла.
Таблица 1
Терапевтическая эффективность эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез собак в сравнении с синэстролом
Препарат Доза, мг/кг Количество собак Количество собак / % случаев
Разовая Суммарная ПР ЧР Стабилизация роста Без эффекта
10 100 11 5/45,5 5/45,5 1/9 0
20 100 16 9/56,2 5/31,2 1/6,3 1/6,3
Эстразин 30 150 6 2/33,3 2/33,3 0 2/33,3
33 16/48,5 12/36,5 2/6 3/9
Синэсгрол 0,2-0,8 12-24 • 29 9/31 7/24,2 9/31 4/13,8
Таблица 2
Терапевтическая эффективность Эстразина на спонтанных аденомах перианальных желез собак в зависимости от размера опухоли и в сравнении с синэстролом
Препарат Объем опухоли, см3 Количество собак Количество собак / % случаев
ПР ЧР Стабилизация роста Без эффекта
<10 12 10/83 2/17 0 0
Эстразин 10-30 12 5/42 6/50 0 1/8
>30 9 1/11 4/45 2/22 2/22
<10 6 4/66,7 1/16,7 1/16,7 0
Синэсгрол 10-30 5 3/60 1/20 1/20 0
>30 9 0 3/33,3 3/33,3 3/33,3
При наблюдении в течение 1 года за собаками со спонтанной АПЖ после лечения препаратами Эстра-зин и синэстрол у части из них в различные сроки отмечали рецидивы (табл. 3).
После лечения Эстразином у 6 животных (46,1 % случаев) с достигнутой ранее полной ремиссией заболевания возобновление роста опухоли наблюдалось через 9-12 мес, у 5 животных (38,5 % случаев) - через 5-8 мес и только у 2 животных (15,4 % случаев) - через 1-4 мес, тогда как у животных, лечившихся синэстро-лом, рецидивы спонтанных АПЖ возникли у 14 собак (77,8 % случаев) через 1-4 мес после окончания лечения и только у 4 собак (22,2 % случаев) - в более отдаленные сроки, через 5-8 мес после окончания лечения.
При лечении собак с АПЖ препаратом Эстразин уже через 3 нед после начала лечения наблюдался клинический эффект: размягчение консистенции опухоли, закрытие свищевых ходов и эпителизация язвенных дефектов. Также установлено, что препарат не вызывает осложнений и побочных эффектов, кроме местно-раздражающего действия, которое было выражено умеренно и носило обратимый характер. В то же время в процессе лечения синэстролом у 15 из 29 животных наблю-
дались побочные явления: анорексия, рвота и вялость.
Морфологическое изучение АПЖ собак в процессе применения Эстразина показало, что признаки повреждения опухолевых клеток начинали появляться у всех животных на 14-й день после начала лечения, при этом в тканях опухолей отмечались пикноз ядер и мелкоочаговая вакуольная дистрофия цитоплазмы, у части клеток наблюдался лизис ядер. С 21-го-30-го дня после начала лечения в опухолях выявлялись выраженные дистрофические изменения: резкий пикноз и лизис ядер клеток, вакуолизация цитоплазмы, появление мелких очагов некроза (рис. 1). В эти же сроки у животных, которые впоследствии имели полную регрессию опухоли, отмечались тотально выраженная вакуольная дистрофия опухолевых клеток и образование небольших участков некроза.
К 30-му-50-му дню после начала лечения Эстразином в опухолях развивались некротические изменения, появлялись инфильтраты из лимфоидных и плазматических клеток, разрасталась соединительная ткань (рис. 2).
К 50-му дню у 48,5 % животных выявляется полная регрессия опухоли. Собаки с ЧР в эти же сроки направлялись на хирургическое лечение. При морфо-
Таблица 3
Сравнение частоты и сроков возникновения рецидивов спонтанных аденом перианальных желез собак после лечения Эстразином и синэстролом
Препарат Доза, мг/кг Количество собак Частота возникновения рецидивов: количество собак / % случаев
Разовая Суммарная 1-4 мес 5-8 мес 9-12 мес
Эстразин 10-30 100-150 13 2/15,4 5/38,5 6/46,1
Синэстрол 0,2-0,8 12-24 18 14/77,8 4/22,2 0
Рис. 1. Аденома перианальных желез собаки. 21-й день от начала лечения:
гематоксилин-эозин. *200
Рис. 2. Аденома перианальных желез собаки. 50-й день от начала лечения:
гематоксилин-эозин. *200
логическом исследовании полученного биопсийного материала в тканях опухоли наблюдались признаки лекарственного патоморфоза.
ВЫВОДЫ
1 .Новый противоопухолевый препарат Эстразин вызывает высокий терапевтический эффект у 94-100 % собак со спонтанными аденомами перианальных желез. Равная эффективность препарата выявлена при 2 режимах введения: в дозе 10 мг/кг в течение 10 дней и в дозе 20 мг/кг в течение 5 дней. При этом полная регрессия опухолей наблюдается у 45-56 % животных, частичная ремиссия -у 31-45%.
2.Выявлены преимущества терапевтической эффективности Эстразина по сравнению с синэстролом: по числу полных и частичных ремиссий: синэст-рол в суммарной дозе 12-24 мг/кг вызывает терапевтический эффект у 86 % собак, из них полную ремиссию - у 31 %, частичную - у 24 % животных;
по терапевтической эффективности при лечении аденом объемом до 10 см3: после введения Эстразина терапевтический эффект наблюдаетсяу 100 % собак (ПР - в 83 % и ЧР - в 17 % случаев), а после приема синэстрола внутрь - у 83 % собак (ПР - в 67 % и ЧР - в 17 % случаев);
по длительности курса лечения: продолжительность лечения собак Эстразином составляет 5-10 дней, синэстролом - 30-60 дней;
по срокам проявления терапевтического эффекта: после введения Эстразина - через 4-7 нед, после приема синэстрола - через 8-13 нед;
по срокам и частоте возникновения рецидивов: после лечения Эстразином рецидивы опухоли возникают у 15 % собак через 1-4 мес, у 38 % - через
5-8 мес, у 46 % собак - через 9-12 мес. При лечении синэстролом рецидивы опухоли возникают у 78 % собак через 1-4 мес, у остальных 22% собак
- через 5-8 мес.
3 Эффективность препарата подтверждена морфологическими исследованиями. Выраженные дистрофические изменения в опухолевой ткани на-ступаютс21-го-30-годней от начала лечения. К 30-му-50-му дням возникают некротические изменения, появляются инфильтраты из лимфоидных и плазматических клеток, разрастается соединительная ткань.
4 .Выявленная гормональная чувствительность аденомы перианальных желез к орхиэктомии, эстро-генотерапии и наличие цитоплазматических рецепторов андрогенов и эстрогенов соответствуют характеристикам гормоночувствительности рака предстательной железы человека. Это дает основание рекомендовать Эстразин для лечения рака предстательной железы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Геришнович М.Л. Осложнения при химио- и гормонотерапии злокачественных опухолей. - М.: Медицина, 1982.-223 с.
2. Гончар М.А., Попов А.И. Сердечно-сосудистые осложнения при эстрогенотерапии больных // Урол. и не-фрол. -1985. - № 2. - С. 31-32.
3. Дунаевский Л.И. О резистентности к эстрогенам при лечении рака предстательной железы II Урол. и нефрол. -1962.-№1,-С. 63-68.
4. Заридзе Д. Г. Эпидемиология рака простаты // Материалы Европейской школы онкологов “ Рак предстательной железы”. - Москва, 1997.
5. Лейзеруков Е.М. Эстрогенотерапия как причина пиелонефрита в эксперименте и клинике // Эксп. хирургия и анестезия. -1976. - № 4. - С. 47-50.
6. Матвеев Б.П. и др. Рак предстательной железы. - М.: ИЧП Фирма “Рича”, 1999. -153 с.
7. Михайлова Л.М., Пильщиков С.Н., Ермакова Н.П., Сыр-кин А.Б. Предклиническая токсикология нового отечественного противоопухолевого препарата - Эстрази-на. И Вестник ОНЦ АМН России. -1996.-№ 3. - С. 28-32.
8. Портной А. С., Бегунов А.Б. Оценка состояния липидного спектра крови, гемостаза, гормонального гомеостаза и гемодинамики в ранней диагностике и медикаментозной коррекции сердечно-сосудистых изменений у больных раком предстательной железы при эстроге-нотерагага // Урол. и нефрол. -1992. - № 1. - С. 6-11.
9. Пытель Ю.А., Золотарев И.И., Цомык В.Г. О возможном побочном действии эстрогенов на уродинамику верхних мочевых путей при лечении рака простаты // Урол. и нефрол. -1974. - № 3. - С.51-53.
10. Смирнова 3. С., Лагова Н.Д., Киселев В.И. и соавт. Эст-разин - новый противоопухолевый препарат адресованного действия // Вестник ОНЦ АМН России. -1996. -№3,-С. 24-28.
11. Степанов В.Н., ГориловскийЛ.М. Рак предстательной железы //Сборник материалов Пленума всероссийского общества урологов. - 1999. - С. 5-27.
12. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них
населения стран СНГ в 1997 году. - Москва, 1999.
13. Chastain С., Ganjam V. Chemical endocrinology of companion animals. - Lea and Febiger: Philadelphia, 1986.-P. 498-499.
14. Cox R.L., Grawford E.D. Estrogens in the treatment of prostate cancer//J. Urol.- 1995,-Vol, 154.-P, 1991-1998.
15. Denis L. Commentary on maximal androgen blockade in prostae cancer: A theory to put into practice? // Prostate. -1995. - Vol. 27. - P. 233-240.
16. Elling H., Ungemach F.R. Steroidhormonrezeptoren in perianaltumoren des hundes // Berliner und Munchener Tierarztliche Wochenschrift. - 1981. - Vol. 94. - № 2. - P. 33-35.
17. Johansson J-E, Anderson S-O, Holmberg L., Bergstom R. Primary orchiectomy versus estrogen therapy in advanced prostatic cancer - a randomized study: result after 7 to 10 years of followup//J. Urol. -1991. - Vol.145. -P. 519-523,
18. Labrie F.,Dupont A., Belanger A. et al. New hormonal therapy in prostatic carcinoma: combined treatment with an LH-RH and an antiandrogen // Clin, Invest. Med. -1982.-P. 267-275.
19. Larsen J.F., Walter S., Krarup T. Complete Androgen Blockade as Primary Treatment for Advanced Metastatic Cancer of the Prostate // Intern. Urology and Nephrology, -1990. - Vol. 333. - P. 249-255.
