CC BY
22
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунологические проблемы в педиатрии Immunological problems in pediatrics
Материалы и методы. Исследование выполнено на 32 новорожденных в Клинике ФГБОУ ВО ЮУГМУ Министерства здравоохранения РФ, разделенных на 2 группы: группа 1 (n = 12) — НН с очень низкой массой тела (ОНМТ) (ГВ от 29 недель до 31 недели и 6 дней включительно); группа 2 (n = 10) — НН с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) (ГВ от 27 недель до 28 недель и 6 дней включительно). К 100 мкл суспензии лимфоцитов (5 х 106/л), выделенных из пуповинной крови, добавляли 100 мкл физиологического раствора (контроль) или ЭПО («Эпокрин», Россия), разведенного в физиологическом растворе в концентрациях 30 МЕ/л; 15 МЕ/л; 7,5 МЕ/л; 3,75 МЕ/л, что соответствует 200%, 100%, 50%, 25% от его нормальной концентрации в крови здоровых взрослых людей. Инкубировали 30 мин при 37 оС. На проточном цитофлуориметре Navios (BeckmanCoulter, США) с использованием тест систем из набора «Annexin5-FITC/7-AAD kit» (BeckmanCoulter, США) дифференцировали клетки: интактные (Annexin-5-FITC-/7-AAD-), с ранними признаками апоптоза (Annexin-5-FITC+/7-AAD-), с поздними признаками апоптоза и частично некротические (Annexin-5-FITC+/7-AAD+).
Результаты. Установлено, что добавление ЭПО в дозах 15 МЕ/л и 30 МЕ/л к лимфоцитам, выделенным из пуповинной крови НН с ОНМТ не изменяет экспрессию маркеров апоптоза и некроза на клетках, а также представительство интактных лимфоцитов (р > 0,05). Применение ЭПО в дозах 7,5 МЕ/л и 3,75 МЕ/л приводит к увеличению количества лимфоцитов с ранними признаками апоптоза (р < 0,05) и увеличению представительства интактных лимфоцитов (р < 0,05). Результаты оценки влияния ЭПО на экспрессию маркеров гибели лимфоцитов у НН с ЭНМТ представлены в таблице. ЭПО во всех используемых дозах снижает представительство клеток с ранними маркерами апоптоза, а также клеток с поздними маркерами апоптоза и некротических клеток. Наиболее выраженный эффект зафиксирован при использовании ЭПО в дозе 7,5 МЕ/л.
Заключение. Таким образом, эффект ЭПО на экспрессию маркеров апоптоза и некроза в лимфоцитах, выделенных из пуповинной крови НН, зависит от степени недоношенности (т.е. структурно-функциональных изменений лимфоцитов) и дозы ЭПО. У НН с ОНМТ ЭПО в средних и малых дозах, не превышающих его 50% уровень в крови, увеличивает количество лимфоцитов с признаками апоптоза, т.е. ЭПО выступает в роли инициатора гибели клеток. В данном случае, по всей видимости, наблюдается феномен негативной селекции дисфункциональных клеток. В отношении лимфоцитов, выделенных из крови НН с ЭНМТ ЭПО с максимальным эффектом в дозе 7,5 МЕ/л выступает в роли протекторного фактора, ограничивающего гибель клеток путем апоптоза/некроза.
ПОЯВЛЕНИЕ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ С ФЕНОТИПОМ CD64+CD32+CD11 b+ - РАННИЙ ДИАГНОСТИЧЕСКИЙ БИОМАРКЕР ВРОЖДЕННОЙ ПНЕВМОНИИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЭТИОЛОГИИ У ДОНОШЕННЫХ НОВОРОЖДЕННЫХ
Смерчинская Т.В.1, Нестерова И.В.2, Чудилова Г.А.1, Ломтатидзе Л.В.1, Ковалева С.В.1
1ФГОУ ВО «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Краснодар, Россия
2 ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» Министерства образования и науки РФ, Москва, Россия
Дыхательные нарушения различной этиологии — наиболее часто встречающаяся патология в периоде
новорожденности, не всегда не имеют инфекционно-воспалительную этиологию. При этом под маской дыхательных расстройств может протекать врожденная пневмония бактериальной или вирусной этиологии. Иммунная система новорожденных находится в состоянии физиологической супрессии, в связи с чем, при врожденной пневмонии бактериальной этиологии очень важным является своевременное назначение антибактериальной терапии. Используемые в практике неонатолога методы лабораторной диагностики, подтверждающие врожденную пневмонию и другие бактериальные инфекции (ускоренное СОЭ, СРБ, прокальцитонин), не во всех случаях оказываются информативными, что требует поиска новых биомаркеров. Следовательно, разработка новых высокоинформативных методов ранней диагностики врожденной пневмонии у новорожденных с использованием иммунологических биомаркеров является актуальной задачей. Многочисленными исследованиями показано неадекватное функционирование нейтрофиль-ных гранулоцитов (НГ) при инфекционно-воспалитель-ных процессах у новорожденных, описано повышение экспрессии поверхностной мембранной НГ молекулы CD64+ в период развития острого бактериального воспаления. В то же время исследований, посвященных изучению фенотипа НГ, с одномоментной оценкой экспрессии нескольких рецепторов на их мембране, у здоровых новорожденных и у новорожденных с врожденной пневмонией, практически, не проводилось.
Целью исследования явилось изучение особенностей одномоментной экспрессии молекул CD64, CD32, CD11b, с оценкой их возможной диагностической значимости, в субпопуляции НГ с фенотипом CD64+CD32+CD11b+ у здоровых новорожденных, а также у новорожденных, страдающих врожденной пневмонией бактериальной этиологии.
В исследование были включены 32 новорожденных (19 мальчиков, 13 девочек) поступивших в отделение реанимации и интенсивной терапии Краснодарской Детской краевой клинической больницы в возрасте 3-15 суток, массой тела — 2880-4370 г, с гестационным возрастом — 38-40 недель с диагнозом: врожденная пневмония (ВП). Проведение клинических, функциональных, рентгенологических и лабораторных, в том числе иммунологических и микробиологических, исследований осуществлялось в первые сутки поступления новорожденных в стационар. При этом только через 7-10 суток имело место подтверждение бактериальной этиологии врожденной пневмонии. Контрольную группу составили 22 практически здоровых доношенных новорожденных (10девочек и 12 мальчиков) с гестационным возрастом — 38-40 недель, весом — 2880-4370 г на 3-6 сутки жизни. Забор периферической крови для иммунологических исследований производился из периферической венозной сети (подкожные вены тыла кисти). Исследовались маркеры поверхностной цитоплазматической мембраны НГ: проведена одномоментная оценка экспрессии молекул CD64, CD32, CD11b методом проточной цитофлуорометрии на CYTOMICS FC500 (Beckman Coulter, США) с использованием панели моноклональных антител: CD64-FITC, CD32-PE, CD11b-PC5 (фирма Beckman Coulter, США). Оценивался процент НГ (%НГ), одномоментно экспрес-сирующих CD64, CD32, CD11b. Статистическая обработка полученных данных производилась с использованием программы для IBM PC "BIOSTAT". Проведение сравнительного анализа продемонстрировало, что у здоровых доношенных новорожденный контрольной группы коли-
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
чество НГ с фенотипом CD64+CD32+CD11b+ составляет лишь 1,63±0,68%, при этом у доношенных новорожденных с врожденной пневмонией бактериальной этиологии имеет место значительное, — в 12,9 раза повышение количества НГ с фенотипом CD64+CD32+CD11b+ — до 21,07±0,88% (р < 0,001). Использование многоцветного цитофлуорометрического исследования позволило получить информацию об особенностях одномоментной экспрессии нескольких мембранных рецепторов НГ (FcyRI, FcyRII, C3b), имеющих большое значение для реализации фагоцитарной функции НГ, у здоровых доношенных новорожденных и у новорожденных с врожденной пневмонией бактериальной этиологии. Установлено, что у доношенных новорожденных с врожденной пневмонией имеет место значительное повышение количества НГ периферической крови с фенотипом CD64+CD32+CD11b+ — в 12,9 раза достоверно превышающее количество НГ с подобным фенотипом у здоровых доношенных новорожденных. Исследование количества НГ периферической крови с фенотипом CD64+CD32+CD11b+ может быть использовано с диагностической целью: в качестве раннего биомаркера врожденной пневмонии бактериальной этиологии, что позволит своевременно оптимизировать лечебную тактику и подтвердить необходимость проведения антибактериальной терапии.
АКТИВНОСТЬ СИСТЕМЫ КОМПЛЕМЕНТА У ДЕТЕЙ С ОСТРЫМ ГЕМАТОГЕННЫМ ОСТЕОМИЕЛИТОМ
Трофимов В.В., Гаврилюк В.П., Костин С.В., Конопля А.И., Ефременков А.М.
Курский государственный медицинский университет, Курск, Россия
Курская областная детская больница № 2, Курск, Россия Детская областная клиническая больница, Белгород, Россия
Введение. Среди нозологических форм острой хирургической инфекции у детей по тяжести течения, трудностям диагностики и неблагоприятным исходам доминирующее место принадлежит острому гематогенному остеомиелиту. Частое поражение суставов, деформации и патологические переломы, метастазы гнойной инфекции, значительная частота множественных поражений скелета, наличие фатальных осложнений дополняют характеристику тяжести и создают предпосылки к разнообразию клинических проявлений остеомиелитов. Важная роль в патогенезе острого гематогенного остеомиелита отводится факторам иммунной защиты, для этого необходимо определение изменений в иммунной системе, для разработки схем их коррекции и методов поддержки иммунной системы.
Цель и задачи. Установить уровень в плазме крови компонентов системы комплемента при остром гематогенном остеомиелите у детей.
Материалы и методы. Под постоянным наблюдением на базе ОБУЗ «Курская областная детская больница № 2» находилось 16 детей в возрасте от 8 до 15 лет (средний возраст 9,6±0,7 лет) с острым гематогенным остеомиелитом, местно-очаговой формы, которым выполнялось экстренное оперативное вмешательство. Лабораторные методы исследования крови проводились на 1 и 30 сутки с момента поступления в стационар по общепринятым методикам. Количественная оценка уровней С3, С4, С3а, С5, С5а-компонентов системы комплемента, фактора Н и С1-ингибитора проводилась с помощью тест-систем (ООО «Цитокин», Санкт-Петербург) методом твердо-
фазного иммуноферментного анализа. Группа контроля состояла из 12 здоровых доноров-добровольцев того же возраста.
Результаты. У детей с острым гематогенным остеомиелитом в плазме крови выявлено повышение уровня компонентов системы комплемента — С3, С3а, С4, С5, С5а и регуляторов — фактора Н и С1-инг. Сразу после оперативного лечения (остеоперфорации) в плазме крови выявлено еще большее повышение концентрации С3а и С5а, фактора Н и С1-инг. К моменту выписки из стационара после стандартного комплексного лечения нормализуется концентрация С3 и С5а-компонента комплемента и фактора Н, тогда как концентрация С3а и С4 остается на прежнем уровне, а уровень С1-инг. повышается больше, чем до лечения.
Заключение. Из вышесказанного можно сделать вывод, что при остром гематогенном остеомиелите у детей система комплемента находится в активном состоянии (происходит повышение общей активности комплемента, об этом можно судить по концентрации С3а, С5 и С5а). Мощная стимуляция системы комплемента, реализуется как по классическому пути, так и по альтернативному путям (об этом свидетельствует повышение С4—компонента и СЗ-компонента соответственно). Несмотря на активное состояние системы комплемента, компенсаторно происходит повышение концентрации ингибиторов классического и альтернативного путей активации (повышение концентрации С1-инг. и фактора Н).
ИЗМЕНЕНИЯ В ИММУННОЙ СИСТЕМЕ ДЕТЕЙ, БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ БРОНХИТОМ, В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ЭТИОЛОГИЧЕСКОГО ФАКТОРА
Файзуллаева Н.Я., Азизова З.Ш., Джумаева Д.Н.
Республиканский научный центр иммунологии Министерства здравоохранения РУз, Ташкент, Узбекистан
Несмотря на сложную организацию и совершенство защитных механизмов слизистых оболочек, бактериальные и вирусные патогены нередко успешно преодолевают все барьеры, проникают во внутреннюю среду организма и вызывают заболевание. Целью исследования явилось изучение состояния иммунной системы детей с хроническим бронхитом. Были обследованы 53 ребенка в возрасте от 4 до 7 лет, находившиеся в отделении пульмонологии научно-практического медицинского центра педиатрии МЗ РУз с диагнозом хронический бронхит. В зависимости от этиологического фактора дети были разделены на 4 группы: 9 детей с острым бронхитом, 16 — с хроническим обструктивным бронхитом легких, 15 — с хроническим бронхитом на фоне паразитарной инвазии и 9 детей с ас-моидным бронхитом. 35 практически здоровых детей того же возраста составили контрольную группу. Был применен комплекс тестов, включающий: иммунофенотипиро-вание ^3, CD4, CD8, CD16, CD20), определение уровня цитокинов (ГЬ-1, ^-8), иммуноглобулинов IgА, ^М, IgG, СЗ компонента комплемента и лактоферрин.
Результаты исследования показали, что при ОБ и ХОБ наблюдаются изменения, сопровождающиеся лей-ко- и лимфоцитозом (Р < 0,05), снижением общего пула Т-лимфоцитов и Т-хелперов (Р < 0,05). И как результат дисбаланса субпопуляционного состава Т-лимфоцитов у детей с острым бронхитом, иммунорегуляторный индекс (CD4+/ CD8+) смещен в сторону подавления хелперной активности. При ОБ и ХОБ резко снижен уровень CD25+ (Р < 0,05)
