CC BY
3
6.Singh M. Invited review recent advances in veterinary vaccine adjuvants / M. Singh, D.T. O'Hagan // Int J Parasitol. - 2003. - Vol.33. № 5-6. -P. 469-478.
УДК 619:578.834.11
Дубовой А.С.
с.н.с. отдел вирусологии и опухолевых болезней птиц
Самусева Г.Н.
с.н.с. отдел вирусологии и опухолевых болезней птиц ВНИВИП филиал ФНЦ «ВНИТИП» РАН Россия, г. Санкт-Петербург ПОВЫШЕНИЕ АНТИГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ИНАКТИВИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ИЗ ВАРИАНТНОГО ИЗОЛЯТА
Цель работы - изучение антигенных свойств инактивированной эмульгированной вакцины против инфекционного бронхита кур (ИБК) из вариантного изолята, в водную фракцию которой добавлена гидроокись алюминия (ГОА), как дополнительного адъюванта. Проведенное сравнительное изучение антигенных свойств вакцины против ИБК инактивированной эмульгированной, изготовленной на базе масляного адъюванта (МА), и аналогичной, но содержащей ГОА в составе водной фракции, показало увеличение иммунного ответа, индуцируемое МА и ГОА при их сочетанном применении.
Ключевые слова: инфекционный бронхит, изолят, вариантный штамм, инактивированная вакцина, гидроокись алюминия.
The main purpose was to study the antigenic properties of inactivated emulsified vaccine against avian infectious bronchitis (IB) based on variant isolate with introduced aluminium hydroxide in the aqueous fraction as an additional adjuvant. A comparative study of the antigenic properties of the inactivated emulsified vaccine against IB and the same vaccine, but containing aluminium hydroxide in the aqueous fraction showed an increase in immune response induced by an oil adjuvant and aluminium hydroxide in their combined use.
Key words: avian infectious bronchitis, isolate, variant strain, adjuvant, inactivated vaccine, aluminium hydroxide.
Инфекционный бронхит кур (ИБК) - высококонтагиозная болезнь, проявляющаяся поражением респираторного тракта, а также мочеполовой системы птиц [2,8]. Экономический ущерб, причиняемый ИБК, складывается из убытков от гибели и вынужденной выбраковки птицы, длительного снижения яйценоскости у кур, снижения качества инкубационных и пищевых яиц, затрат на препараты, а также за счет снижения качества мясной продукции. Возбудитель ИБК - РНК-содержащий вирус, принадлежащий к семейству Coronaviridae. К вирусу ИБК восприимчивы
куры всех возрастных групп. В настоящее время заболевание широко распространено практически во всех странах с развитым птицеводством [8,11].
Вирусу ИБК свойственна высокая генетическая изменчивость в результате накопления точечных мутаций, инсерций и делеций и рекомбинации [10,12]. Возникающие вариантные штаммы вируса ИБК зачастую становятся причиной поражения птицепоголовья, вакцинированного классическими вакцинными штаммами, принадлежащими к серотипу Массачусетс, которые обеспечивают лишь частичную защиту от заражения вариантными вирусами ИБК [1,9,12] Исследования показали, что во многих странах циркулируют различные вариантные штаммы вируса ИБК [11]. Вакцинация птиц одним серотипом не гарантирует полной защиты от гетерологичных штаммов вируса ИБК, однако было показано, что использование вакцин из комбинаций классического и вариантного штаммов дает возможность обеспечить высокую защиту [6,13,18]. Многие исследователи считают наиболее эффективным применение комбинации вакцинных штаммов, относящихся к генотипам Массачусетс и 793В. Для профилактики ИБК в России и за рубежом получили распространение живые и инактивированные вакцины.
При изготовлении инактивированных вакцин широко применяются адъюванты, позволяющие значительно повышать иммуногенную и антигенную активность препаратов, а также увеличивать продолжительность иммунного ответа. Адъюванты - вещества различного происхождения и различной химической природы, оказывающие неспецифическое стимулирующее действие на иммунный ответ при совместном их применении со специфическими антигенами. Известно большое количество веществ, имеющих различный химический состав и происхождение, которые способны оказывать адъювантное действие [5, 16]. Механизм адъювантного действия во многом еще остается невыясненным. В настоящее время установлено, что адъюванты взаимодействуют с наиболее важными антигенпрезентирующими клетками (макрофагами, клетками Лангерганса, дендритными клетками) и эффекторными клетками (плазматическими клетками, естественными киллерами), Т-хелперами и клетками воспаления (полиморфно-ядерными базофилами, эозинофилами) [10, 15, 16, 17]. Анализ литературных данных показывает, что в настоящее время интенсивно проводятся исследования, направленные на разработку новых и улучшение существующих адъювантных систем.
Цель данной работы - изучение антигенных свойств инактивированной вакцины против инфекционного бронхита кур (ИБК) из вариантного изолята, изготовленной на основе комбинации масляного адъюванта (МА) и гидроокиси алюминия (ГОА).
В работе были использованы СПФ-эмбрионы кур 9 суточного срока инкубации, выделенный ранее нами изолят вариантного вируса ИБК, по
анализу последовательности фрагмента гена S1 имеющий 98% гомологии со штаммами и изолятами серотипа 793/В. Эмбрионы заражали инокуляцией вирусного материала в аллантоисную полость объемом 0,2 см3. Инкубацию инфицированных эмбрионов проводили при 37°C и относительной влажности 60-70% в течение 72 часов. Биологическую активность собранного вируссодержащего материала определяли титрованием на развивающихся СПФ-эмбрионах кур. Титр вируса рассчитывали методом Кербера в модификации Ашмарина. Титр вирусного материала составил 10745 ЭИД50/см3.
Инактивацию вируссодержащего материала проводили теотропином (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) - конечная концентрация препарата 0,15%, время инкубации 36 часов, температура инкубации (37,0±0,5)0С. Контроль полноты инактивации осуществляли методом трех последовательных пассажей на развивающихся эмбрионах кур. Из полученного инактивированного материала изготовили два образца инактивированной эмульгированной вакцины, которые отличались между собой тем, что в водную фракцию первой вакцины добавили ГОА в конечной концентрации 0,2%, а в водную фракцию второй - объем стерильного физиологического раствора, равный объему ГОА первого образца (референс-препарат). При изготовлении образцов инактивированных вакцин эмульсию получали методом гомогенизации водного и масляного компонентов в соотношении 30:70 с помощью гомогенизатора Ultraturrax T-25. В качестве масляной фазы использовали адъювант АБ-4М отечественного производства.
Антигенную активность оценивали по титрам поствакцинальных антител к вирусу ИБК в ИФА в соответствии с инструкцией по применению набора. Для этого цыплята в количестве 60 голов были разделены на 3 группы по 20 голов в каждой. Цыплят каждой группы иммунизировали соответствующим образцом инактивированной вакцины. Дополнительно 10 голов цыплят оставили в качестве чистого контроля. Через 28 дней после вакцинации от всех цыплят брали кровь, получали сыворотки и исследовали их в ИФА на наличие антител к вирусу ИБК.
Вакцину считали антигенно активной, если титры поствакцинальных антител в ИФА к вирусу ИБК не менее, чем в 2 раза превышали минимальный положительный титр, указанный в инструкции набора BioChek (1:834) при отрицательном иммунном фоне (уровень титров антител к вирусу ИБК у цыплят контрольной группы) или не менее, чем в 2 раза превышали уровень иммунного фона. Результаты исследований образцов вакцин на антигенную активность представлены на рис.1.
12000
0
ИБК+МА+ГОА
ИБК+МА
Контроль
Рис. 1 Антигенная активность двух образцов инактивированной вакцины против ИБК: 1 - содержит в своем составе антиген вируса ИБК, ГОА и масляный адъювант (ИБК+МА+ГОА); 2 - содержит в своем составе антиген вируса ИБК и масляный адъювант (ИБК+МА)
Как видно из представленных данных, уровень иммунного ответа, оцениваемый по титрам антител к вирусу ИБК в ИФА, у препарата, содержащего в своем составе ГОА, выше, чем у референс-препарата -стандартной инактивированной эмульгированной вакцины против ИБК.
Таким образом, проведенные предварительные исследования показывают, что введение в водную фазу ГОА может увеличивать антигенную активность инактивированной вакцины.
1.Бочков, Ю.А. Диагностика инфекционного бронхита кур / Ю. А. Бочков, А. В. Борисов, С.В. Фролов и др. // Ветеринария. - 2003. - №4. - С. 21-24.
2. Вирусные болезни животных / В.Н. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев и др. - М.: ВНИТИБП, 1998. - 928 с., ил.
3. Овчинникова, Е.В. Генетическая характеристика полевых изолятов вируса инфекционного бронхита кур, выявленных в России в 2004-2005 гг. / Е.В. Овчинникова, Г.В. Батченко, О.А. Чупина и др. // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2006. - Т. 4. - С. 362-369.
4. Фролов, С.В. Обоснование использования российских вариантных штаммов инфекционного бронхита кур для изготовления инактивированной вакцины / С.В. Фролов, Ю.А. Бочков, Г.В. Батченко и др.// Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2005. - Т. 1. - С. 343-357
5.Aguilar J. C. Vaccine adjuvants revisited / J.C. Aguilar, E. G. Rodriguez // Vaccine. - 2007. - № 25.- Р. 3752-3762
Использованные источники
6. Alvarado, I. R. Evaluation of the protection conferred by commercial vaccines against the California 99 isolate of infectious bronchitis virus / I. R. Alvarado, P. Villegas, J. El-Attrache et al. // Avian Diseases. - 2003. -Vol. 47, No. 4. -P. 12981304
7.Bochkov, Y.A. Molecular epizootiology of avian infectious bronchitis in Russia / Y.A. Bochkov, G.V. Batchenko, L.O. Shcherbakova et al. // Avian Pathology. -2006.-Vol. 3 5 . - P . 379-393.
8. Calnek, B.W. Infectious bronchitis / B.W. Calnek, H.J. Barnes, C.W. Beard et al. // Diseases of Poultry,Tenth Edn. Iowa State University Press Ames, Iowa, USA -1997. - P . 510-526.
9. Cavanagh, D., Naqi S. Infectious bronchitis // Diseases of Poultry. - 11th ed. -Ames, Iowa, 2003. -P. 101-119.
10. Cox J.C., Coulter A.R. Adjuvants - a classification and review of their modes of action // Vaccine. -1997. - Vol.15. - №3. - P. 248-256
11. de Wit, J. J. Infectious bronchitis virus variants: a review of the history, current situation and control measures./ J. J. de Wit, J. K. A. Cook, H. M. J. F. Van Der Heijden //Avian Pathology. - 2011. -Vol. 40, No. 3. - P. 223-235.
12. Ignjatovic, J. Isolation of a variant infectious bronchitis virus in Australia that further illustrates diversity among emerging strain / J. Ignjatovic, G. Gould, S. Sapats et al. // Arc. Virol. - 2006. -Vol. 151, -P. 1567-1585.
13. Martin M. P. Evaluation of the effectiveness of two infectious bronchitis virus vaccine programs for preventing disease caused by a California IBV field isolate./ M. P. Martin, P. S. Wakenell, P. Woolcock et al. // Avian Diseases. - 2007. -Vol. 51, No. 2. - P. 584-589.
14.Ovchlnnikova, E. Molecular characterization of infectious bronchitis virus isolates from Russia and neighbouring countries: identification of intertypic recombination in the SI gene / E. Ovchlnnikova, Y. Bochkov, L. Shcherbakova, Z. Nikonova et al. // Avian Pathology. - 2011. - Vol. 40, No. 5. - P. 507-514.
15.Petrovsky N. Vaccine adjuvants: current state and future trends / N. Petrovsky, J. C. Aguilar // Immunology and Cell Biology. - 2004. Vol. 82. - № 5. -P. 488496.
16.Rajput Z.I. Adjuvant effects of saponins on animal immune responses / Z. I. Rajput, Song-hua Hu, Chen-wen Xiao et al // Zhejiang Univ Sci B. - 2007. - Vol. 8. - № 3. - P. 153-161
17. Shakya A.K. Polymers as immunological adjuvants: An update on recent developments / A. K. Shakya, K. S. Nandakumar // J. BioSci. Biotech. - 2012. -Vol.1 - № 3. - P. 199-210
18. Terregino, C. Pathogenicity of a QX strain of infectious bronchitis virus in specific pathogen free and commercial broiler chickens, and evaluation of protection induced by a vaccination programme based on the Ma5 and 4/91 serotypes. / C. Terregino, A. Toffan, M. Serena Beato et al. //Avian Pathology. -2008. - Vol. 37, No.5 - P. 487-493.
