CC BY
29
УДК: 615.371:578.832.1
ПОТЕНЦІЙОВАНИЙ ІМУНОМОДУЛЮЮЧИЙ ВПЛИВ ЧАСТКОВО АЦИЛЬОВАНОГО ІНТЕРЛЕЙКІНУ-2 В ЕКСПЕРИМЕНТІ
О.А. Романова, А.В. Мартинов, Н.І. Ігумнова, Т.А. Сидоренко, В.І. Чернявський,
М.В. Смілянська, С.Д. Перемот
Шститут мікробіології та імунології імені Ы.Мечникова АМН України, Харків РЕЗЮМЕ
Проведені дослідження імуномодулюючої здатності нової форми Ш-2, отриманої шляхом часткового ацилювання, продемонстрували, що в експериментах in vivo та in vitro препарат суттєво потенціює спонтанну бласттрансформуючу активність лімфоцитів. Більш виражений ефект посилення мітотичної активності клітин було відмічено за введення ацШ-2 в культуру in vitro.
КЛЮЧОВІ СЛОВА: бласттрансформація, лімфоцит, імуностимуляція, інтерлейкін-2
Незважаючи на вагомі досягнення фармакології у галузі боротьби з патогенами, вакцинація зостається основним способом захисту організму від мікробної інфекції. Проте, на результат вакцинації справляє вплив не тільки застосований препарат, але і стан макроорганізму. Широко розповсюджена дисфункція імунної системи, наслідком якої стають часті респіраторні інфекції, дисбак-теріози, алергічні реакції, створює фон до зниження реальної ефективності щеплення. В той же час існують препарати, здатні посилювати імунну відповідь, корегуючи кількісні та функціональні зміни імунокомпетен-тних клітин. Одним з таких сучасних імуно-коректорів є ронколейкін - рекомбінантна форма Ш-2 людини [1]. Дія Ы-2 на В-лімфоцити проявляється у стимуляції їх проліферації та диференціювання у плазматичні клітини. Окрім цього, цитокін виступає як фактор проліферації Т-клітин і визначає Т-клітинну імунну відповідь [2].
В лабораторії імунореабілітології !М! ім.
I. I. Мечникова АМН України шляхом часткового ацилювання було отримано нову форму Ы-2, що, як припускається, має потенційно вищі імуномоделюючі властивості порівняно з ронколейкіном.
Метою даної роботи було дослідження ізольованого (без вакцини) впливу частково ацильованого Ш-2 (ацШ-2) на реакцію блас-ттрансформації лімфоцитів (РБТЛ) - показника загальної імунореактивності організму.
Дослідження проведено в рамках науково-дослідної роботи Ыституту «Ацильовані похідні білків та полісахаридів антигену си-ньогнійної палички, розробка на їх основі вакцини» (№ держреєстрації 0106U003265).
МАТЕРІАЛИ ТА МЕТОДИ
Частково ацильований Ы-2 було синтезовано за методикою, наведеною у [3].
Вплив препарату на РБТЛ було досліджено на мишах BALBc in vivo та in vitro.
В першій серії експериментів ац- ІЛ-2 вводили тваринам в/м в дозі 285 МО на мишу. На 3-ю добу тварин морталізували дека-пітацією під ефірним наркозом, готували в стерильних умовах суспензію клітин селезінки для дослідження спонтанної РБТЛ. Для цього орган гомогенізували, фільтрували скрізь капроновий фільтр, отриману суміш клітин тричі відмивали центрифугуванням у поживному середовищі Ігла з глютаміном, антибіотиками, 5% ембріональної телячої сироватки і буферним розчином HEPES (5 ммоль/л) при 1500 об/хв протягом 10 хв. Отриману суспензію розводили поживним середовищем Ігла з глютаміном таким чином, щоб 5х106 клітин містилось в 1 мл середовища і розливали по 1 мл на флакон для культивування, далі додавали ембріональну телячу сироватку ^егуа) (10%), HEPES ^егуа) (10 ммоль/л), пеніцилін (100 Од/мл) та стрептоміцин (100 мкг/мл). В дослідах з бласттрансформації флакони з культурами клітин інкубували у вологій камері, в атмосфері, збагаченій СО2, протягом 72 годин. Після закінчення інкубації вміст проб відмивали центрифугуванням при 1500 об/хв - 10 хв, з отриманого осаду готували препарати -мазки для морфологічного дослідження, фіксували етиловим спиртом та фарбували за Романовським-Гімза. У препаратах враховували відсоток лімфобластів по відношенню до загальної кількості лімфоїдних клітин, підраховуючи не менше 250 лімфоїдних клітин на препарат.
В другій серії експериментів ац ІЛ-2 вводили безпосередньо в культуру клітин під час постановки РБТЛ, у кількості 200 МО/мл.
Паралельними групами проб у першій серії експериментів були: культура клітин мишей, що отримали ронколейкін, та культура спленоцитів інтактних тварин; у другій серії - культура, до якої вводився ронколейкін та культура спленоцитів інтактних мишей.
Кожна група проб у першій чи другій серії експериментів складалась з 3-5 аналогічних зразків культуральних суспензій, кожна серія експериментів нараховувала 4 повтори. Для статистичного аналізу результатів використовували параметричні критерії з визначенням середнього значення (М) і його стандартного відхилення (±m). Оцінку достовірності різниці між порівнюваними показниками здійснювали за допомогою критерію Ст’юдента. Відмінність між порівнюваними величинами вважали вірогідною при p<0,05.
РЕЗУЛЬТАТИ ТА ОБГОВОРЕННЯ
Введення ацІЛ-2 in vivo викликало посилення проліферативної активності лімфоцитів в 1,7 рази у порівнянні з клітинами інтак-
тних тварин (табл.). При цьому достовірне підвищення (на 27%) спонтанної бласттран-сформуючої здатності у тварин, що отримали препарат, спостерігалось також і у порівнянні з групою мишей, яким було зроблено ін’єкцію ронколейкіну.
В серії експериментів з додаванням ацІЛ-2 безпосередньо до культури клітин селезінки було отримано більш показові результати (табл.). Так, при короткочасному культивуванні спленоцитів з ацІЛ-2 спонтанна пролі-феративна активність лімфоцитів виростала у 3,2 рази і значно (в 1,4 рази) превалювала над бласттрансформуючою здатністю клітин, культивованих в присутності ронколейкіну.
Таблиця
Проліферативна активність лімфоцитів селезінки мишей за уведення ацІЛ-2
in vivo та in vitro (M±m)
Умови експерименту Інтактні клітини (%) Після введення ронколейкіну (%) Після введення ацІЛ-2 (%)
In vivo 17,0+1,0 23,5+2,1 30,3+1,9*"**
In vitro 16,5+0,9 36,0+2,7 52,3+3,7*"**
* - достовірність відмінностей показників проб з введенням ац ІЛ-2 від показників проб інтактних клітин;
** - достовірність відмінностей показників проб з введенням ацІЛ-2 від показників проб з введенням ронколейкіну.
Зі вступом лімфоцитів у мітотичний цикл у більшості з них посилюється секреторна активність. При цьому Т-клітини продукують різноманітні лімфокіни, в тому числі Ы-2, а В-лімфоцити - імуноглобуліни.
1-2 години після контакту зі стимулятором мітогенезу, а через 24 години клітина вступає в мітоз. Саме цим, очевидно, пояснюються більш виражені результати дії ацШ-2 на рівень проліферації лімфоцитів за безпосереднього введення препарату в культура-льне середовище. При умовах, коли ацШ-2 надходить до організму in vivo (1 серія експерименту), вірогідно, спрацьовує ефект відстрочення дії цитокіну, і стимуляція мітоге-незу дещо згасає протягом 5,5 діб, що передують детекції результатів РБТЛ.
Проте, як перша, так і друга серії проведених експериментів свідчать про більш високу здатність до стимуляції проліфератив-ної активності імунних клітин препарату Ы-2, отриманого шляхом часткового ацилю-
ЛІТЕРАТУРА
В культурі in vitro на ранніх стадіях активації лімфоцитів посилення процесів ацети-лювання ядерних гістонів, що у кінцевому підсумку приводить до синтезу РНК, білка та утворення бластів, починається вже через
вання у порівнянні з ронколейкіном.
ВИСНОВКИ
1. Частково ацильований Ы-2 достовірно посилює проліферативну активність лімфоцитів порівняно з ронколейкіном.
2. Вплив ацШ-2 на здатніть лімфоцитів до бласттрансформації є більш вираженим при застосуванні препарату в умовах in vitro порівняно з попереднім уведенням його інтактним тваринам.
Перспективним для подальшого вивчення імуномодуляторних можливостей створеного препарату з метою застосування його за вакцинації, на нашу думку, є дослідження його впливу на антитілогенез.
1. Попов Н.Н., Савченко В.Н., Моджекву Ч.Ч., Куринная Е.Г. Виды и средства иммунотерапии. -Харьков: Гриф. - 2002. - С. 59.
2. Попов Н.Н., Лавров В.Ф., Солошенко Э.Н. Клиническая иммунология и алергология. -М.: Реин-фор. - 2004. - С. 56-81.
3. Martynov A.V., Smelyanskaya M.V. // J. of Interf. & Cytokine res. - 2005.- Vol. 25. - № 7. - P. 414-417.
ПОТЕНЦИРОВАННОЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ЧАСТИЧНО АЦИЛИРОВАННОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Е.А. Романова, А.В. Мартынов, Н.И. Игумнова, Т.А. Сидоренко, В.И. Чернявский, М.В. Смелян-
ская, С.Д. Перемот
Институт микробиологии и иммунологии имени И.И.Мечникова АМН Украины, Харьков РЕЗЮМЕ
Проведенные исследования иммуномодулирующей способности новой формы ИЛ-2, полученной путем частичного ацилирования, показали, что в экспериментах in vivo и in vitro препарат существенно потенцирует спонтанную бласттрансформирующую активность лимфоцитов. Более выраженный эффект повышения митотической активности клеток отмечался при введении ацИЛ-2 в культуру in vitro.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: бласттрансформация, лимфоцит, иммуностимуляция, интерлейкин-2
POTENTIAL IMMUNOMODULATION ACTION OF PARTIAL ACYLATED INTERLEUKIN-2 IN EXPERIMENTS
E.A, Romanova, A. V. Martyno, N.I. Igumnova, T.A. Sidorenko, V.I. Chernyavsky, M. V. Smelyanskaya,
S.D. Peremot
Mechnicov Institute of microbiology and immunology of AMSU, Kharkov SUMMARY
In the article were presented results about studied of immunopotential activity of new IL-2 - acylated derivatives. It was show, that preparation much increased spontaneous blasttransformation of lymphocytes in mice as in vitro and in vivo. Added of acIL-2 to lymphhocete’s cells culture resulted to more increasing of mitotic activity of lymphocytes than in control with native Roncoleukin.
KEY WORDS: blasttransformation, lymphocytes, immunostimulation, interleukin-2
