CC BY
23
СЬ5о, СЕ50, Хст для данного момента времени.
Следует отметить, что в связи с возможной нелинейностью дозовых зависимостей величина ожидаемого биологического эффекта для концентраций, значительно отличающихся от изо-эффективных, сугубо ориентировочно. Несомненно, что по мере накопления соответствующих экспериментальных данных о зависимостях доза— эффект, время—эффект, доза—время, могут быть разработаны более точные и надежные методы прогнозирования вероятных биологических эффектов.
Таким образом, применение математических методов позволяет проводить вероятностную оценку токсикометрических показателей, получаемых с помощью зависимости концентрация— время, сравнивать токсичность и опасность различных веществ, а также более строго унифици-
ровать условия выявления указанной зависимости в токсикологических исследованиях.
ЛИТЕРАТУРА
1. Авалиани С. Л. Прогнозирование степени вероятности токсических эффектов по параметрам зависимости «концентрация— время» при гигиеническом регламентировании атмосферных загрязнений. Автореф. дис. канд. М., 1980.
2. Бессметрный Б. С. Математическая статистика в клинической, профилактической и экспериментальной медицине. М., 1967.
3. Киселев А. В. — Гиг. и сан., 1983, № 7, с. 40—41.
4. Пинигин М. А. — В кн.: Гигиенические аспекты охраны окружающей среды. М., 1977, вып. 5, с. 8—11.
5. Прозоровский В. Б.— Фармакол. и токсикол., 1962,
№ 1, с. 115.
6. Химмельблау Д. Анализ процессов статистическими методами. М, 1973.
7. Штабский Б. М.. Красовский Г. И., Кудрина В. Н. и др. — Гнг. и сан., 1979, № 9, с. 41—45.
8. Finney D. J. Probit Analysis, Cambridge, 1971.
Поступила 11.04 si
УДК 616.471.03:612.126: |546.32 + 546.33|-088.1:543.257.1
Б. А. Добролюбова
ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКИИ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ КАЛИЯ И НАТРИЯ В ПЛАЗМЕ И СЫВОРОТКЕ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ИОН-СЕЛЕКТИВНЫХ
ЭЛЕКТРОДОВ
Для определения коцентрации ионов калия и натрия в сыворотке и плазме крови в основном в биохимических и токсикологических лабораториях используются пламенные фотометры различных систем. Использование этих приборов связано с установкой газового оборудования. Сам прибор, поскольку он газовый и пламя у него открытого типа, должен устанавливаться под тягой, занимая при этом значительную часть рабочей площади в вытяжном шкафу, что вызывает дополнительные неудобства в работе. Поэтому наше внимание привлек относительно простой и вполне результативный метод определения концентрации ионов калия и натрия с помощью ион-селективных электродов [2—6].
Ион-селективные электроды характеризуются высокой чувствительностью, быстротой реакции и высокой степенью селективности по отношению к ионам калия и натрия на фоне других ионов.
В основе определения концентрации ионов лежит так называемый метод добавок, суть которого заключается в добавлении к исследуемому материалу стандартных растворов с известной концентрацией ионов калия и натрия с последующим определением электродвижущей силы (ЭДС).
В данной работе описан вариант метода и результаты сравнительного определения содержания ионов калия и натрия, полученные с помощью ион-селективных электродов и пламенного фотометра марки ФПФ-58.
Блок-схема включает калий- и натрийселектив-ные электроды и каломельный электрод (электрод сравнения). Для измерения ЭДС использовали прибор Гомельского завода «Иономер универсальный ЭВ-74» в комплекте с магнитной мешалкой. Стандартный раствор добавляли с помощью пипетки объемом 1 мл, носик которой должен быть вытянут в капилляр.
Каломельный электрод — электрод сравнения с двойным солевым мостиком. Внутренний солевой мостик заполняется насыщенным раствором хлористого калия, а наружный — электролитом, который подбирается таким образом, чтобы жи;Л( костный потенциал между пробой и электролитом был незначительным. В нашем случае в качестве электролита использован насыщенный раствор нитрата аммония. В состав реактивов входят насыщенный раствор хлористого калия, насыщенный раствор нитрата аммония, 1М раствор хлористого натрия и хлористого калия (соли перед приготовлением растворов должны быть обезвожены путем прокаливания) для построения калибровочных кривых (от 10-1 до 10~6М) и приготовления стандартных растворов, стандартный раствор хлористого натрия, содержащий 200 мэкв/л-1 ионов натрия (готовят путем разведения 10 мл 1М раствора хлористого натрия дистиллированной водой в колбе на 50 мл до метки), стандартный раствор хлористого калия, содержащий 100 мэкв/л-1 ионов калия (готовят путем разведения 10 мл 1М раствора хлористого
Содержание ионов калия и натрия (в мэкв/л) в плазме крови человека и крыс
* Группа ПламснчыЛ фотометр Ион-селективные электроды
Na* К* Na+
Доноры станции переливания крови Крысы 3,2—5,6 (4.5) 4,8—5,4 (5,1) 137—160 (142) 143—156 (151) 3,5—6,0 (4.6) 4,4—6,0 (5.2) 135—160 (143) 145—160 (152)
Примечание. Приведены крайние и средние (в скобках) величины.
калия дистиллированной водой в колбе на 100 мл до метки).
Для определения ионов натрия берут 0,1 мл плазмы или сыворотки крови и доводят до объема 10 мл дистиллированной водой (разведение в 100 раз). Для определения ионов калия берут мл плазмы или сыворотки крови и также доводят дистиллированной водой до 10 мл (разведение в 20 раз) - Исследуемый раствор помещают в стаканчик, в котором находится магнитная мешалка, изготовленная по нашему образцу с таким расчетом, чтобы ее размеры не мешали электродам и перемешивали раствор с достаточной скоростью. Стаканчик устанавливают на механическую мешалку, опускают в него электрод сравнения и в зависимости от определяемых ионов — калиевый или натриевый электрод. Измеряют £лга, или (в милливольтах). Опускают кончик пипетки со стандартным раствором в стаканчик и приливают раствор до тех пор, пока ЭДС не изменится не менее чем на 30 мВ. Это и будет значением ЕКа2 или ЕК2• Записывают объем стандартного раствора, израсходованного на титрование (К„).
Расчет проводится по следующим формулам:
для ИОНОВ натрия — £лга2— .Елго , =
^экв^/л-1 [100мэкв„а/л-а'нд К^-.)-'],
для ионов калия — £Л2— £к,= А£ь мэквя/Л-1 = [20 мэквк/л-а'нд
где £л?о, и £„,—ЭДС исследуемого раствора (в мВ), Ена2 и £Л2 — ЭДС после добавления стандартного раствора (в мВ); 100 и 20 — степень разведения пробы; У»— объем стандартного раствора, израсходованного на титрование (в мл); 10 — объем титруемой пробы (в мл); 5 — ЭДС на порядок концентрации. Определяется по
калибровочной кривой для каждого измерительного электрода. Она должна быть в интервале 50—57 м В.
Исходя из основного 1М раствора хлористого натрия или хлористого калия, готовят ряд стандартных растворов от 10-1 до 10-6М. Применяя эти растворы для каждого измерительного электрода в паре с электродом сравнения, снимают концентрационные калибровочные кривые. При этом для каждого электрода устанавливают характеристическую область чувствительности, т. е. линейный участок калибровочной кривой, и определяют крутизну электродной функции по изменению ЭДС в нижней линейной области. Экспериментально крутизна функции для обоих типов электродов должна быть не ниже 50 мВ на порядок концентрации. Это значение и используют в расчетной формуле. Калибровочную кривую необходимо проверять перед каждым опытом На данную операцию не требуется много времени, но именно с ее помощью мы определяем рабочее состояние электродов.
В качестве исследуемого материала служила плазма крови доноров станции переливания крови и плазмы крови крыс.
Содержание ионов калия и натрия в исследуемых биологических субстратах определяли параллельно с помощью ион-селективных электродов и на пламенном фотометре типа ФПФ-58. Результаты исследования приведены в таблице. Сыворотку крови декапитированных крыс сравнивали с показателями, приведенными В. С. Асатиани
Таким образом, исходя из приведенных данных, мы не обнаружили различий между количеством ионов калия п натрия, полученным двумя методами измерения. Гепарин, применявшийся для стабилизации крови при получении плазмы, не оказывал влияния на показания ион-селектив-ных электродов. Следовательно, метод определения количества ионов калия и натрия в биологических субстратах с помощью ион-селективных электродов можно использовать в практике биохимических и токсикологических лабораторий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Асатиани В. С. Ферментные методы анализа. М., 1969.
2.Диманте А. И.. Веверис А. Я. — Хим.-фарм. ж., 1982, № 1. с. 116—118.
3. Диманте А. И.. Веверис А. Я■ — Там же, № 4, с. 501 — 503.
4. Леванович В. В. — Лаб. дело, 1975, № 5, с. 301—303.
5. Камман К. Работа с ионселективными электродами. М., 1980.
6. Rodo J. Р. — J. Endocr., 1981, v. 78, p. 244—252.
Поступила 14.02 Л
