CC BY
20
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Иммунология туберкулеза Immunology of tuberculosis
ПАТОГЕНЕЗ, ДИАГНОСТИКА И ИММУНОТЕРАПИЯ ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ
ИММУНОЛОГИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕЧЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТУБЕРКУЛОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПЕРЛОЗОНА У ПАЦИЕНТОВ С МЛУ/ШЛУ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ
Беляева Е.Н., Старшинова А.А., Маничева О.А., Догонадзе М.З., Зубрий О.Н., Соловьева Н.С., Сапожникова Н.В., Вишневский Б.И.
ФГБУ«Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
СПб ГБУЗ «Городская туберкулезная больница № 2», Санкт-Петербург, Россия
Введение. Рост числа случаев заболевания туберкулёза с МЛУ/ШЛУ возбудителя требует персонифицированного подхода к его терапии. Туберкулостатическая проба или бактериостатическая активность крови (ТСП/БАК) — это оценка ex vivo активности комплекса вводимых пациенту препаратов (на пике их концентрации в крови) в отношении выделяемого пациентом штамма МБТ (аутоштамма). Ранее было показано, что высокие значения ТСП/БАК (полученные пробирочным методом) соотносятся с клиническими параметрами эффективного лечения.
Цель и задачи. Определить эффективность перхлозо-на в отношении выделяемого пациентом штамма МБТ Разработка объективного приборного способа регистрации результатов ТСП для лабораторного обоснования персонифицированной химиотерапии у пациентов с МЛУ/ШЛУ и ее коррекции.
Материалы и методы. На базе СПб НИИФ и ГБУЗ «ГТБ № 2» в 2016 г было обследовано 20 пациентов с МЛУ/ШЛУ МБТ Мужчины - 55,0% (11), женщины - 45,0% (9). Возраст 26-45 лет 65,0% (13); от 18-25 лет 25,0% (5); 46-60 лет 10,0% (2). Структура клинических форм: фиброзно-кавернозный 70,0% (14); инфильтратив-ный у 20,0% (4), диссеминированный в 10,0% (2). Пробирочный метод определения ТСП/БАК перевели в формат метода микроразведений в 96-луночном планшете FLUOstarOptima. Кровь собирали на пике концентраций каждого из вводимых препаратов, подбор проводили в соответствии со спектром устойчивости аутоштамма, через неделю к терапии добавляли перхлозон и повторно проводили ТСП. Результат регистрировали визуально и в ридере, определяя точку задержки роста графически после статобработки с помощью программы MS Excel.
Результаты. На фоне проводимого лечения с включением перхлозона абациллирование к 2-м месяцам лечения наступило у 25,0 (5)%; к 4 месяцам у 50,0% (10,0); к 6-ти месяцам у 60,5% (12), к 8 — месяцам у 66,0 (13)% пациентов. Закрытие полости распада к 4 месяцам у 5,0% (1);
к 6-ти месяцам — у 10,0% (2), к 8 — месяцам у 15,0% (3). В 40,0% (8) случаев имеющиеся деструктивные изменения уменьшились в размерах в 2 раза, также отмечена значительная динамика рассасывания инфильтративных изменений в легочной ткани. Визуальная и графическая оценка ТСП отличались, отмечали расхождения параметров как в большую, так и в меньшую стороны. Равные или большие 5 значения ТСП, которые по полученным ранее данным соотносятся с клиническими показателями эффективности лечения, были зарегистрированы с помощью флуоресцентного ридера в 36,8+21,3% случаев, добавление перхлозона выявило тенденцию к увеличению этого показателя до 56,3+23,9%, при визуальной оценке теста — соответственно, 53,3+24,9% и 60,0+24,4 %. У 11 из 16 пациентов (68,7%) выявлена потенцирующая активность перхло-зона, который усиливал действие противотуберкулезных препаратов в 2-64 раза, при визуальной оценке — у 46,7%. В среднем величина ТСП до и после введения перхлозо-на составила 4,4+0,9 и 6,4+1,4 (р = 0,001), при визуальной оценке — соответственно, 5,2+1,4 и 6,0+1,4 (р = 0,324).
Заключение. Препарат перхлозон обладает способностью у 68,7% пациентов с МЛУ/ШЛУ туберкулезом усиливать действие противотуберкулезных препаратов в 2-64 раза. Использование планшетного флуоресцентного ридера для регистрации интенсивности роста МБТ с помощью индикатора роста резазурина, позволяет избежать субъективности при проведении теста ТСП визуальным пробирочным или планшетным способом, объективно оценить ex vivo: активность комплекса вводимых препаратов, необходимость усиления химиотерапии.
ПОПУЛЯЦИЯ убТ-КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
Бердюгина О.В., Ершова А.В.
ФГБУ «Уральский НИИ фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Екатеринбург, Россия
Введение. Изучение убТ-клеток началось сравнительно недавно, их роль в иммунных процессах остается до конца не выясненной, однако многие исследователи отводят этим клеткам весьма существенную роль в обеспечении резистентности организма к микроорганизмам, в частности, к M. tuberculosis. Это обусловлено тем, что клетки имеют Т-клеточный рецептор, представленный гамма- и дельта-цепями, распознающий микробный фосфолипидный антиген (3-формил-1-бутил пирофосфат), расположенный на М. tuberculosis, в результате чего клетки могут напрямую связываться с патогеном. Целью данного исследования стало изучение популяции убТ-клеток периферической крови при разных формах туберкулеза легких.
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
Материалы и методы. Исследованы иммунологические показатели крови больных, имевших один из трех вариантов туберкулезного воспалительного процесса: туберкулез легких с формированием ограничения специфического процесса — туберкулемы (31 человек, из них: 16 пациентов с туберкулемой в активной фазе, 15 больных — в фазе стихающей и умеренной активности), инфильтративный туберкулез легких (44 человека, из них: 29 обследованных с распространенностью процесса в пределах 1-3 сегментов доли легкого, 15 пациентов с распространенностью процесса более 3 сегментов, возбудитель имел множественную лекарственную устойчивость — МЛУ), фиброзно-кавер-нозный туберкулез легких (24 больных, возбудитель имел МЛУ), контрольная группа (25 практически здоровых людей). Больные инфильтративным туберкулезом распространенностью процесса 1-3 сегмента легкого были представлены 12 пациентами, у которых туберкулез был вызван лекарственночувствительными M. tubercubsis и 17 больными, у которых туберкулез вызван M. tuberculösis с МЛУ. Все обследованные не имели клинико-лабораторных данных наличия вирусных гепатитов В, С и ВИЧ 1, 2 типа. Исследования выполнены методом проточной цитофлюори-метрии на приборе COULTER Epics XL (Beckman Coulter, USA), с использованием реагентов того же производителя. Определены количество Т-лимфоцитов (CD45+CD3+) и убТ-лимфоцитов (CD3blightCD4-). Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием программ Microsoft Office Excel 2007» и «Statistica for Windows v. 6.1.
Результаты. Установлено, что в изученных группах пациентов изменения в количестве этих клеток были различны и весьма существенны. Разброс значений был очень большим даже в контрольной группе и составлял от 0,008 до 0,203 х 109/литр (0,4-9,4%). При отграниченных формах туберкулеза (туберкулемы) абсолютное количество этих клеток увеличивалось почти в полтора раза (на 45,5%), относительное — на 36,4%. При двух других формах заболевания этот показатель заметно снижался: абсолютное число клеток в обеих группах снижалось более чем в 1,5 раза, относительное — на 27,3% при инфильтративном туберкулезе и на 39,4% при фиброзно-кавернозном туберкулезе в сравнении с группой здоровых лиц. Установлено также, что абсолютное количество этих клеток при туберкулемах в 2,3 раза превышало этот показатель при инфильтратив-ном туберкулезе и в 2,5 раза — при фиброзно-кавернозном туберкулезе. У больных с лекарственночувствительным возбудителем снижение было наименьшим и составляло 18,2% в сравнении с контрольной группой. Наличие возбудителя с МЛУ сопровождалось понижением числа убТ-клеток в 1,9 раза в сравнении с группой здоровых добровольцев. Также выявлено, что туберкулез 1-3 сегментов легкого сопровождался снижением числа клеток на 57,1%, а 4 и более сегментов — уже на 69,2%. Изучение количества клеток у больных с туберкулемами в разных фазах активности показало следующее. При активных туберкулемах количество этих клеток незначительно снижалось — на 12,1% — в сравнении с контрольными показателями. В подгруппе больных с туберкулемами в фазе стихающей активности число убТ-клеток возрастало: в 2 раза в сравнении с группой доноров и в 2,3 раза в сравнении с подгруппой больных, имеющими туберкулемы в активной фазе.
Заключение. Полученные данные позволяют предположить, что: во-первых, убТ-клетки играют существенную роль в развитии туберкулезного процесса, их повышенное количество способствует усилению сопротивляемости ор-
ганизма пациента инфекции и отграничению туберкулезного процесса, а недостаточное количество — содействует активации патологического процесса; во-вторых, при противостоянии лекарственночувствительным M. tuberculosis небольшое снижение количества убТ-клеток не является критичным, а значимое понижение числа этих клеток у больного является одним из прогностических критериев заболевания его туберкулезом, вызванным возбудителем с МЛУ; в-третьих, появление убТ-клеток снижает вероятность развития распространенного (с поражением 4 и более сегментов легкого) патологического процесса.
РАЗРАБОТКА ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ КРИТЕРИЕВ АКТИВНОСТИ ТУБЕРКУЛЕМЫ
Бердюгина О.В., Ершова А.В.
ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения РФ, Екатеринбург, Россия
Введение. Известны сложности определения фазы активности туберкулемы на этапе ее предполагаемой резекции. Лабораторные показатели периферической крови, отражающие реакцию иммунной системы на динамику туберкулезного процесса, являются перспективным инструментом для решения этой задачи. Целью исследования стало изучение иммунологических показателей периферической крови у больных с туберкулемами в активной фазе и фазе стихающей и умеренной активности для определения иммунологических критериев оценки активности туберкулемы.
Материалы и методы. Выполнено однократное исследование лабораторных показателей периферической крови, отражающих состояние основных звеньев иммунной системы 92 человек обоего пола в возрасте от 18 до 55 лет. Три группы обследованы: контрольная — 25 практически здоровых людей, опытная — 31 больной туберкулезом легких с формированием ограничения специфического процесса — туберкулемы, тестовая, для проверки статистических гипотез — 36 человек, сопоставимая с контрольной и опытной по полу и возрасту. Все тестируемые не имели клинико-лабораторных признаков наличия вирусных гепатитов В, С и ВИЧ 1 и 2 типа. Больные с туберкулемами были дифференцированы на две подгруппы в зависимости от фазы активности процесса: с туберкулемой в активной фазе (1 подгруппа, 16 человек), с туберкулемой в фазе стихающей и умеренной активности (2 подгруппа, 15 человек). Поглотительные и функционально-метаболические особенности фагоцитов оценивали методом проточной ци-тофлюориметрии на приборе COULTER Epics XL (Beckman Coulter, USA), использовали наборы Phagotest и Bursttest (Glycotope Biotechnology, Germany). На фагоцитах определяли экспрессию маркеров CD11b, CD11c, HLA-DR. Выполняли подсчет количества Т-лимфоцитов (CD45+CD3+), В-лимфоцитов (CD45+CD19+) и NK-клеток (CD45+CD3-CD16+56+), Т-хелперов (CD3+CD4+), Т-цитотоксических клеток (CD3+CD8+), убТ-лимфоцитов (CD3brightCD4-), NKr-клеток (CD3+CD16+56+), Т-регуляторных клеток (CD3+CD4+CD127-CD25+), клеток, экспрессирующих CD25, HLA-DR и CD95+. Концентрацию IL-1ß, IL-2, IL-4, IFNy, TNFa, MIF определяли методом твердофазного ИФА (реагенты eBioscience, Austria и RayBiotech Inc., USA). Статистическая обработка полученных данных проведена с использованием программ Microsoft Office Excel 2007 и Statistica for Windows v. 6.1.
