CC BY
59
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ ♦ Иммунология/паразитология ♦
УДК 619:616-085.37
Получение высокоактивных и высокоспецифических противобабезийных сывороток крупного рогатого скота
Х. Георгиу, доктор биологических наук ([email protected])
Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко (ВИЭВ) (Москва).
Приведены результаты получения бабезийныхположительных и отрицательных сывороток крови для серологических реакций РДСК, РНГА и ИФА. Кровь от паразитоносителей можно использовать для приготовления положительной сыворотки для диагностических исследований. При этом титр антител должен быть не ниже 1:20 в РДСК, 1:200 в РНГА и 1:200 в ИФА. Для приготовления отрицательных сывороток можно использовать только кровь от здоровых животных, отрицательно реагирующих в серологических реакциях с бабезийнным антигеном.
Ключевые слова: бабезиоз, инвазия, ИФА, РДСК, РНГА, серология
Сокращения: ИФА — иммуноферментный анализ, МТ — масса тела, РДСК — реакция длительного связывания комплемента, РНГА — реакция непрямой гемагглютинации
Введение
Пироплазмидозы (бабезиоз, тейлериоз) — протозойные болезни животных, вызываемые представителями отряда Piroplasmida. Возбудители пироплазмидозов характеризуются видовой специфичностью: у крупного рогатого скота этиологическим агентом являются P. bigeminum (B. bigemina), Babesia bovis (Francaiella colchica), В. divergens; у овец и коз — P. ovis (В. motasi), В. оvis.
Заболевания протекают остро, подостро, хронически и сопровождаются лихорадкой, анемией, желтуш-ностью и кровоизлияниями на слизистых оболочках, гемоглобинурией (при пироплазмозе — бабезиозе), увеличением лимфатических узлов (при тейлериозе) и заканчиваются нередко гибелью животных.
Диагноз на пироплазмидозы ставят на основании эпи-зоотологических, клинических, патолого-анатомичес-ких данных и результатов лабораторных исследований (микроскопического, серологического).
Лабораторные исследования на пироплазмидозы включают в себя микроскопию мазков крови, внутренних органов, головного мозга, пунктатов лимфатических узлов; морфологическую дифференциацию возбудителей; постановку и учет РДСК, РНГА и ИФА с бабезий-ным антигеном для диагностики пироплазмидозов крупного рогатого скота и овец.
Для постановки серологических реакций, таких как РДСК, РНГА и ИФА, необходимы положительные и отрицательные контрольные сыворотки.
Цель исследования
Выявить возможность получения сывороток от крупного рогатого скота: положительных — от животных-паразитоносителей и отрицательных — от животных, отрицательно реагирующих на бабезиоз.
Материалы и методы
Использовали приготовленные нами бабезийные антигены (Х. Георгиу 1980).
Положительную сыворотку получили от крупного рогатого скота, положительно реагировавшего в РДСК на бабезийный антиген, отрицательную сыворотку — от отрицательно реагирующих животных.
РДСК ставили согласно «Временному наставлению по применению набора компонентов для диагностики анаплазмоза рогатого скота в реакции длительного связывания комплемента», утвержденного ГУВ Го-сагропрома СССР 6 мая 1988 года.
РНГА ставили согласно «Методическим наставлениям по диагнстике бабезиоза рогатого скота с применением экзоантигенов в РНГА» (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 30.06.2010 г.).
ИФА проводили согласно «Временному наставлению по применению набора компонентов для диагностики нутталлиоза лошадей в ИФА», одобренному Главным управлением ветеринарии 01.12.1989 г.
Сублимационное высушивание приготовленных серий позитивных и негативных сывороток проводили на базе ВГНКИ без защитной среды.
Лиофилизированные позитивные и негативные сыворотки хранили в бытовом холодильнике (при 4 °С).
Результаты
Для приготовления позитивной сыворотки крови брали кровь от 30 коров-паразитоносителей из разных районов Российской Федерации. Как видно из табл. 1, позитивные серии сывороток были активными и не антикомплементарными.
1. Результаты титрования позитивных и негативных сывороток крови коров с бабезийнным антигеном
Титры сывороток
№ серий позитивных негативных
РДСК РНГА ИФА РДСК РНГА ИФА
1 1:20 1:200 1:400 - - -
2 1:40 1:800 1:800 - - -
Для приготовления отрицательной сыворотки брали кровь от 30 коров, отрицательно реагирующих на бабе-зийный антиген в серологических реакциях из разных районов России. Негативные сыворотки были отрицательными и не антикомплементарными в использованных для исследования реакциях (см. табл. 1).
Поставленные нами опыты по получению позитивной сыворотки от животных-паразитоносителей показали, что кровь для ее приготовления можно брать,
Получение высокоактивных и высокоспецифических противобабезийных сывороток
крупного рогатого скота
когда титры антител в РДСК достигают 1:20 и выше; в РНГА и ИФА — 1:200 до 1:800; негативной — когда сыворотка крови крупного рогатого скота отрицательно реагирует в РДСК, РНГА и ИФА.
Чтобы выявить общность антител в сыворотках крови, полученных от крупного рогатого скота, положительно реагирующих с бабезийным антигеном, была поставлена перекрестная реакция. Сыворотки исследовали с антигенами B. bigemina и B. bovis в РДСК, РНГА и ИФА (табл. 2).
Таким образом, поставленные нами опыты показали возможность получения сывороток от крупного рогатого скота: положительных — от паразитоносителей и отрицательных — от животных, отрицательно реагирующих на бабезиоз. Кроме того, мы получили идентичные результаты при испытании указанных сывороток с приготовленными нами антигенами B. bigemina и B. bovis.
Полученные нами положительные сыворотки смешали и приготовили пул положительной сыворотки; аналогичным образом приготовили пул отрицательной сыворотки. Позитивные и негативные серии сывороток крови титровали в РДСК, РНГА и ИФА (табл. 3).
Как видно из табл. 3, положительные сыворотки крови крупного рогатого скота были высокоактивными и не антикомплементарными, отрицательные сыворотки также не обладали антикомплементарными свойствами.
В дальнейшем позитивные и негативные сыворотки крови крупного рогатого скота с целью длительного хранения высушивали в объеме 2,0 мл (в ВИГИС), но без защитной среды. После лиофилизации сыворотку разводили в 2 мл физиологического раствора и вновь титровали (в сравнении с нативными). Из данных, приведен-
SUMMARY Ch.Georgiou
All-Russian Research Institute for Expermental Veterinary Medicine (VIEV).
Producing of Highly Active and Highly Specific Antibabesiosis Sera. Results of producing of negative and positive antibabesiosis cattle sera for IHAT, ICFT, ELISA have been discribed in article. Blood from babesia-carries can be used for producing of positive serum when lebel of antibodies against Babesia spp. is more than 1:20 in ICFT, 1:200 in IHAT and 1:200 in ELISA only. For producing negative serum blood from health cattle can be used only.
2. Результаты титрования позитивных и негативных серий сывороток крови рогатого скота с антигенами B. bigemina и B. bovis
Титры сывороток
№ серий позитивных негативных
РДСК РНГА ИФА РДСК РНГА ИФА
1 1:20 1:200 1:400
2 1:40 1:800 1:800 1-1 - 1 - 1
3. Титры антител в нативных сыворотках (позитивных и негативных) крови рогатого скота в РДСК, РНГА и ИФА
Рабочий титр
№ серии Ист°чник сыворотки рДСК рНГД ифд
Источник сыворотки
1 Паразитоносители 1:40 1:800 1:800
2 Здоровые животные - - -
4. Титры антител в высушенных сыворотках (позитивных и негативных) крови рогатого скота в РДСК, РНГА и ИФА
№ серии Источник сыворотки Рабочий титр
РДСК РНГА ИФА
1 Паразитоносители 1:40 1:800 1:800
2 Здоровые животные - - -
ных в табл. 4, видно, что высушенные сыворотки крови от животных-паразитоносителей сохранили свою активность и не были антикомплементарными. Негативные сыворотки тоже не были антикомплементарными.
Выводы
Полученные нами результаты показывают, что кровь от паразитоносителей можно использовать для приготовления положительной сыворотки для диагностических исследований. При этом титр антител должен быть не ниже 1:20 в РДСК, 1:200 в РНГА и 1:200 в ИФА. Для приготовления отрицательных сывороток можно использовать только кровь от здоровых животных, отрицательно реагирующих в серологических реакциях с бабезийным антигеном.
«Journal of Small Animal Practice/Российское издание» —
первое переводное научно-практическое издание для ветеринарных врачей, освещающее проблемы лечения и профилактики заболеваний мелких домашних животных.
Оригинальное издание «Journal of Small Animal Practice» —
официальный печатный орган Всемирной ассоциации ветеринарии мелких домашних животных (WSAVA) и Британской ассоциации ветеринарии мелких домашних животных (BSAVA)
Подписка на журнал осуществляется через редакцию и каталог Почта России.
Издательский дом «Логос Пресс», 127055, Москва, а/я 9.
Http://logospress.ru/, e-mail: [email protected].
Тел/факс: +7 (495) 220-48-16
