CC BY
78
УДК 619:615.371
ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩЕЙ БОТУЛИНИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ЭКСПРЕСС -ДИАГНОСТИКИ И ИНДИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ БОТУЛИЗМА МЕТОДОМ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ АНТИТЕЛ (МФА)
Мустафин Т.Р. - м.н.с.
Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных,
г.Казань, e-mail: [email protected]
Ключевые слова: ботулизм, поливалентная сыворотка,
гипериммунизация, антитела, люминисценция.
Keywords: Cl. botulinum, polyserum, hyperimmunization, antibodies, luminescence.
Ботулизм - остропротекающая кормовая токсикоинфекция, вызываемая токсином анаэробного спорообразующего микроба ВасШш botulinus. Эпидемиология ботулизма исключительно специфична и не укладывается в классические представления об эпидемиологии инфекционных болезней. Источником заболевания может служить только больной человек или больное животное, представляющих серьезную угрозу для здоровья человека, птиц и животных. Тяжелая интоксикация возникает в результате употребления в пищу продуктов, содержащих токсины Clostridium botulinum, характеризующаяся преимущественно поражением центральной и вегетативной нервной системы. В настоящее время известно 7 типов возбудителя ботулизма (А, В, С, D, Е, F, G), которые отличаются между собой по антигенным свойствам вырабатываемых ими токсинов и некоторыми другими признаками. Высокая патогенность возбудителя ботулизма для человека и животных обуславливает необходимость изучения его действия на организм и разработку высокоэффективных методов диагностики и индикации [4, 2].
В последние годы в лабораторную практику для диагностики инфекционных болезней животных и людей внедряют новые тест -системы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), метод флуоресцирующих антител (МФА), радиоиммунный анализ (РИА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие. Основным достоинством данных методов является высокая чувствительность, экспрессность в постановке и возможность быстрого подтверждения о наличие инфекции.
В микробиологической диагностике значительное распространение получил люминесцентный анализ с применением флюоресцирующих антител [1]. Одно из главных преимуществ метода по сравнению с обычными серологическими реакциями состоит в том, что при применении
этого метода значительно сокращается время, затрачиваемое на обнаружение микробов, и не требуется накопления большой массы антигена или выделения чистых культур.
В связи с этим целью наших исследований было получение полиспецифической флуоресцирующей ботулинической сыворотки.
Материалы и методы. Полученная нами поливалентная ботулиническая сыворотка, состоящая из 4х культур Cl. botulinum тип А -штамм А-98; тип В - 16-Я; тип С - № 91; тип D - SHU, наработанная по схеме (гипериммунизация кроликов внутривенно, внутривенно, внутривенно) с конечным титром АТ в сыворотке крови 1:64 в РНГА. Поливалентную сыворотку использовали для получения полиспецифической флуоресцирующей ботулинической сыворотки, по общепринятой методике в нашей модификации. Принцип метода МФА заключается в том, что антитела, соединенные с флуорохромом, сохраняют способность вступать в специфические реакции с соответствующими антигенами. Этот комплекс благодаря присутствию в нем флуорохрома обнаруживается при люминесцентной микроскопии.
Активность и специфичность полученной полиспецифической флуоресцирующей ботулинической сыворотки изучали при люминесцентной микроскопии. Для этого готовили мазки из штаммов Clostridium botulinum, имеющих различные типы (А,В,С, D^,F,G), а также мазки от других видов возбудителей: Bacillus anthracis штамм 55, E.coli, Cl.perfingens. Мазки фиксировали метанолом и дальнейшее действие проводились по методике постановки МФА.
Результаты исследований показали высокую активность полиспецифической сыворотки. При люминесцентной микроскопии мазков Cl. botulinum наблюдалось свечение микробных клеток со всеми типами А,В,С, D,B,F,G, при рабочем разведении сыворотки 1:128 в 4 -креста и не вступала в перекрестную реакцию с гетерогенными культурами B.anthracis шт. 55, E.coli, Cl.perfingens.
Заключение. На основании проведенных исследований нами разработан способ получения полиспецифической флуоресцирующей ботулиновой сыворотки состоящая из смеси типов А,В,С, D возбудителя Cl. botulinum для экспресс - индикации его в объектах внешней среды и патологическом материале.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Бусыгин К.Ф., Люминесцентная диагностика
инфекционных болезней животных. - М., «Колос», 1975. - С.129. 2. Колычев Н.М., Госманов Р.Г. Ветеринарная микробиология и иммунология. - Омск: Изд. ОмГАУ, 1996. - С. 314 - 319. 3. Матвеев К.И. Ботулизм. - М.: Медицина, 1959. - С. 5-48, 275-283. 4. Никифоров В.Н., Никифоров В.В. Кн.: Ботулизм. - Л.: Медицина, 1985. - С 200.
ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩЕЙ БОТУЛИНИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ЭКСПРЕСС - ДИАГНОСТИКИ И ИНДИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ БОТУЛИЗМА МЕТОДОМ ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИХ
АНТИТЕЛ (МФА)»
Мустафин Т.Р.
Резюме
Полученная нами поливалентная ботулиническая сыворотка, состоящая из из 4х культур Cl. botulinum тип А, тип В, тип С, тип D использовали для получения полиспецифической флуоресцирующей ботулинической сыворотки.
PRODUCTION OF POLYSPECIFIC FLUORESCENT BOTULINIC SERA FOR RAPID DETECTION AND INDICATION OF BOTULINIC AGENT USING FLUORESCENT
ANTIBODIES METHOS
Mustafin T.R.
Summary
The obtained polyvalent botulinic sera consisting of 4-fold cultures of Cl. botulinum type А, type В, type С, type D were used to produce polyspecific fluorescent botulinic sera.
УДК 619:615.371
РАЗРАБОТКА ПОЛИСПЕЦИФИЧЕСКОГО ЭРИТРОЦИТАРНОГО БОТУЛИНИЧЕСКОГО АНТИГЕННОГО ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ РЕАКЦИИ НЕПРЯМОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ
Мустафин Т.Р. - м.н.с.; Иванов А. В. - д.б.н., профессор, чл.-корр. РАСХН РФ;
Мустафина Э. Н. - к.в.н., с.н.с.; Садыков Н.С. - зав. лаб., д.в.н., профессор Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных,
г.Казань, e-mail: [email protected]
Ключевые слова: антиген, ботулизм, реакция непрямой
гемагглютинации, гамма-облучение, формалинизация.
Keywords: antigen, Cl. botulism, indirect hemagglutination test, hamma-irradiation, formalinization.
В конце XIX века профессор медицины Ван Эрменгем изучал причины пищевых отравлений. Используя методы микробиологических исследований, он выделил из кишечника людей, скончавшихся после
