CC BY
22Половые различия в эндотелий-зависимых реакциях артерий кроликов на увеличение скорости потока
Филатова О.В. fkon-filatov@yandex.ru)
Алтайский государственный университет
В острых опытах на анестезированных кроликах сравнивали половые различия дилататорных ответов, вызванных увеличением скорости потока, сонных артерий в широком диапазоне скоростей. Сосуды самцов демонстрируют более высокую реактивность к изменению скорости кровотока. Выявленные половые различия в реакциях сонных артерий на увеличение скорости потока только на 30% определяются отличиями в вязкости крови, ведущим фактором является более высокий тонус сосудов самцов.
Введение
Последнее три десятилетия пристальное внимание физиологов, изучающих сердечно-сосудистую систему привлекает феномен эндотелий-зависимой поток-индуцируемой регуляции диаметра артериальных сосудов [1, 9, 10, 16]. После открытия феномена эндотелий-зависимой поток-индуцируемой (ЭЗПИ) реактивности артериальных сосудов [16] активно исследовались реакции артерий при турбулентном [37], не пульсирующем потоке [23]. Была показана независимость ЭЗПИ реакции от нервной системы, гуморальных факторов крови [1]. Работы А. М. Мелькумянц с соавт. [9, 10, 11, 12] убедительно показали, что триггером ЭЗПИ реакции является изменение напряжение сдвига. ЭЗПИ регуляция артерий исследована при различных физиологических и патологических состояниях [6, 7, 8, 20, 38]. Изучен эффект эндотелия в ослаблении констрикторных реакций сосудистого русла [13, 14].
После установления роли эндотелия в ЭЗПИ реактивности артерий [22, 37] большое количество исследований было посвящено изучению молекулярно-клеточных механизмов этого явления [5, 25, 33, 34].
Интерес к половым различиям в проявлении ЭЗПИ реакции обусловлен тем, что наблюдаются половые различия в развитии сердечно-сосудистых заболеваний у мужчин и женщин. Известно, что окклюзионными болезнями артерий [2] и ишемической болезнью сердца чаще страдают мужчины [15]. Исследование половых различий в эндотелийзависимой регуляции артерий касалось влияния половых гормонов на
индуцируемую ацетилхолином выработку NO [32], изучения поток-зависимой дилатации в различные периоды менструального цикла у женщин [26, 29, 41].
Особенно актуальными сейчас являются исследования, посвященные изучению развития атеросклероза у женщин в постменопаузальном периоде. S. Taddei и соавт. [39] показали, что функция эндотелия у женщин до 49 лет «ухудшается» соответственно возрасту (расширение периферических артерий в ответ на АХ снижается на 0,5% за год), после 49 лет наблюдается резкое снижение вазодилатации на АХ (2,1% за год), после 60 лет эти показатели у мужчин и женщин достоверно не различаются. У женщин после менопаузы на фоне интраартериального введения эстрадиола с созданием физиологических концентраций репродуктивного периода или после сублингвального приема 17Р-эстрадиола АХ-индуцированная вазодилатация восстанавливается [24, 39].
Целью данного исследования было изучение половых различий в эндотелий-зависимых реакциях сонных артерий кроликов на увеличение скорости кровотока с использованием комплекса критериев данного вида сосудистой реактивности.
Методика
Острые опыты проводились на кроликах массой 3,5 - 4 кг, наркотизированных кетамином (13 мг/кг внутривенно, премедикация аминазином). Сонная артерия выделялась на протяжении 4 см, артерию щитовидной железы перевязывали, исследуемый сосуд надрезали, канюлировали, сохраняя длину равной in situ.
Схема экспериментальной установки представлена на рисунке 1. Перфузия осуществлялась насосом 372. С. Перфузионный насос забирает кровь из крупной артерии нагнетает ее в исследуемую артерию, которая мягкой пластиковой трубкой -гидравлическим дросселем соединена с одной из крупных вен.
Пластиковая трубка соединена с помощью катетера с электроманометром, обеспечивающим аналоговый выход (0-3В) в диапазоне измерений от 0 до 300 мм рт.ст. Стабилизация давления осуществлялась по способу, предложенному Хаютиным В.М. [18]. Контроль давления осуществлялся ртутным манометром. Наружный диаметр артерии измеряли контактным циркульным датчиком с высоколинейным дифференциальным преобразователем емкостного типа.
В основе работы датчика лежит емкостный преобразователь с изменяющимся перекрытием площади обкладок. Используемый прецизионный датчик отличается высокой чувствительностью, линейностью, стабильностью. Высыханию артерии препятствовала суперфузия раствором Тироде.
После 60 минутного периода стабилизации артерию перфузировали цельной кровью с добавлением гепарина, непульсирующим потоком с объемной скоростью 7,5
мл/мин при трансмуральном давлении 100 мм рт. ст. Объемную скорость потока жидкости увеличивали с шагом 7,5 мл/мин.
8
Рис. 1. Схема установки для перфузии гемодинамически изолированного участка кровеносного сосуда (1 - перфузионный насос; 2 - крупная артерия; 3 -исследуемая артерия; 4 - гидродинамический дроссель; 5 - вена; 6 - катетер; 7 -электроманометр; 8 - задатчик давления; 9 - электродинамическая система; 10 -датчик диаметра; 11 - потенциометр КСП 4; 12 - цифровой вольтметр Щ-1413; 13, 14 - краны, позволяющие заменить перфузию кровью на перфузию РТ; 15 -ртутный манометр).
Поток-зависимую вазодилатацию изучали до момента прекращения увеличения диаметра артерии в ответ на увеличение скорости потока (рис. 2), оценивали по следующим показателям поток-зависимой реактивности: приросту диаметра, выраженному в процентах (АЭ%); пороговой величине скорости кровотока; величине объемной скорости потока, при которой изученные сосуды практически исчерпывают возможность к поток-зависимой дилатации (Уд100); приросту диаметра в зависимости от линейной скорости ^ЭМУь); линейной скорости, при которой достигается полная релаксация (Уь100); исходному диаметру артерий (Э0) при "нулевой" скорости потока;
диаметру, соответствующему уровню максимальной релаксации (0100). Реакции артерий на увеличение скорости потока изучались в широком диапазоне изменения скорости потока жидкости.
й с СУП "
ШвЗЯШшНШЯШщтА
Рис. 2. Типичный дилататорный ответ на повышение скорости потока сонной
артерии.
Контроль наличия поток-индуцируемой релаксации артерий проводился деэндотелизацией сосуда в течение 60 секунд дистилированной водой.
Регистрация результатов осуществлялась на самописце КСП-4 с дополнительным контролем цифровым четырехразрядным вольтметром Щ1413. Вязкость крови определяли вискозиметром ВК-4.
Данные представлены в виде среднего ± ошибка среднего. Достоверность различий средних величин оценивали по t критерию Стьюдента.
Результаты исследования
Типичный дилататорный ответ на повышение скорости потока сонной артерий показан на рис. 2. Повышение скорости потока вызывает увеличение диаметра артерии. После восстановления начальной скорости потока диаметр артерии возвращается к исходному значению.
На рисунке 3 А изображена зависимость диаметра от объемной скорости кровотока. Зависимость имеет типичную Б-образную форму. При увеличении скорости кровотока до 15 мл/мин диаметр артерий увеличивается незначительно. Пороговые значения объемной скорости кровотока и у самцов и у самок составляли 15 мл/мин; различий пороговых величин при использовании данного критерия потоковой реактивности не представилось возможным обнаружить.
А
Объемная скорость, мл/мин
Самки —■— Самцы
—•— Самки--Самцы
Рис. 3. Зависимость изменения диаметра артериальных сосудов от скорости потока.
Дальнейшее повышение скорости кровотока выше пороговой величины сопровождается увеличением диаметра пропорционально росту объемной скорости с последующим выходом на «плато» при величинах потока 52,5 мл/мин без различий для самок и самцов (Р>0,05). Существенных различий по величине объемной скорости потока, при которой изученные сосуды практически исчерпывают возможность к поток-зависимой стопроцентной релаксации (Уф00) у сонной артерии самок и самцов не обнаружено. Среднее значение диаметра сонной артерии самцов (2,1±0,013 мм) в условиях перфузии с допороговой скоростью потока оказалось ниже, чем у самок (2,3±0,006 мм, Р<0,05) (рис. 3 А). В то время как величины диаметра артерий в условиях максимальной поток-зависимой дилатации не имеют статистически значимых различий у животных обоего пола. Однако интерпретация этих данных требует определенной
осмотрительности. Во-первых, исходные диаметры сосудов при «нулевой» скорости кровотока существенно вариировали. Во-вторых, при увеличении объемной скорости расширение артерий приводило к снижению линейной скорости, поэтому использование показателя объемной скорости для сравнительных исследований представляется некорректным. Эндотелий артерий реагирует не на изменение объемной скорости кровотока как таковой, пусковым стимулом является возникающее на поверхности эндотелия напряжение сдвига, которое в соотношении с формулой (см. ниже) определяется вязкостью и линейной скоростью [4]. Исходя из этого точнее оценивать эндотелий-зависимую поток-индуцируемую реакцию через линейную скорость потока, что и представлено на рисунке 3 Б. Использование линейной скорости потока позволило выявить различия в величине порога дилататорного ответа, который составил 5,77±0,5 см/сек у самок и 6,9±0,16 см/сек у самцов (Р<0,05). По критерию линейной скорости (Уь), при которой достигается стопроцентная релаксация (Уь100) - 21,2±0,69 см/сек у самок и 23,25±1,62 см/сек у самцов, наблюдающиеся различия не существенны (Р>0,05). Выявлены различия по критерию относительного прироста диаметра (АБ%). В ответ на увеличение скорости потока крови до величины максимальной релаксации (Уь100) прирост диаметра сосудов самцов составил 11,58±1,23% против 7,05±1,72% у самок (Р <0,001) (рис. 3 Б). Обращает на себя внимание различный наклон кривых зависимости диаметра от линейной скорости артерий самок и самцов. Наклон кривых диаметр-поток сосудов самцов больше чем у сосудов самок. Дальнейший анализ данных лучше выполнить нормализовав кривые по уровню максимальной релаксации (Б100) и по максимальной линейной скорости (Уь100), что и представлено на рис. 4. Из рисунка видно, что диаметр сонных артерий самок и самцов существенно различается в отсутствие потокового стимула (Р<0,01). В области максимальных значений потока диаметры сосудов у животных разного пола демонстрируют близкие значения (рис. 3 А). Кривые зависимости диаметра от линейной скорости не отличаются по своему виду. Кривую зависимости диаметра от линейной скорости артерий самцов характеризует больший угол наклона. Каковы же физиологические корреляты различного вида кривых зависимости диаметра от линейной скорости, связанные с полом? Различия в реактивности артерий на увеличение скорости потока могут быть связаны с отличающимся потоковым стимулом, возникающим на эндотелии вследствие различной вязкости крови у самок и самцов, с отличиями в механочувствительности эндотелия, с количеством выделяемого эндотелиального релаксирующего фактора и различиями в сократимости гладкой мускулатуры сосудов самок и самцов.
Рис. 4. Нормализованные кривые зависимости диаметра (0100) от линейной скорости потока (Уь100), соответствующий полной релаксации артерии.
Пусковым стимулом эндотелий-зависимой поток-индуцируемой реакции в артериях является напряжение сдвига - сила, действующая на единицу боковой поверхности трубки со стороны движущейся в ней жидкости, прямо пропорциональная скорости движения и вязкости жидкости [4]:
от = ^¿юМп
где от - напряжение сдвига, п - вязкость жидкости, dю - скорость движения жидкости, dn - градиент скорости в направлении нормали движения жидкости. Из формулы следует, что при одинаковом увеличении скорости потока большее напряжение сдвига возникнет в тех сосудах, где выше значения вязкости крови. В подопытных группах выявлены различия (Р<0,05) в вязкости крови, которые составили: 3,4±0,21 спз у самок, 4±0,28 спз у самцов кроликов. Очевидно, что потоковый стимул, возникающий в сосудах самцов выше потокового стимула возникающего в сосудах самок. Поток-индуцируемый прирост диаметра артерий самцов выше на 64% прироста диаметра самок. Вязкость крови самок и самцов отличается на 17%. Таким образом, отличия в вязкости крови не более чем на 30% (в таком соотношении находятся проценты прироста диаметра и разности вязкости крови) объясняют связанные с полом различия в приросте диаметра, вызванном увеличением скорости потока. Оставшиеся 70% различий в реактивности обусловлены прочими вышеперечисленными факторами последовательности звеньев потоковой реактивности.
Из рисунка 3 А и 4 видно, что в зоне допороговой скорости потока диаметр артерий самцов ниже диаметра артерий самок. Особенностью эндотелий-зависимой поток-индуцируемой регуляции артерий является то, что в области Уь100 имеет место полная релаксация сосудов. Ранее нами в исследовании биомеханических свойств артерий
показано, что диаметр дилатированного максимальным потоком сосуда оказывается равным диаметру этого же сосуда обработанного высокими дозами папаверина [17]. Поскольку механизм поток-зависимой регуляции способен полностью исчерпывать возможности сосуда к релаксации [17], величина потоковой реакции (АБ%) 11,58% у самцов и 7,05 % у самок отражает степень релаксации сосудов от исходного диаметра в отсутствие потокового стимула (Б0). В диапазоне скоростей от У0 до Уь100 различия хода кривых зависимости диаметра от линейной скорости определяются эндотелий-зависимым поток-индуцируемым механизмом релаксации гладких мышц, поэтому меньшие значения диаметра артерий самцов в зоне допороговой скорости свидетельствуют о том, что в сосудах самцов имеет место более высокое напряжение гладкой мускулатуры, или другими словами этим сосудам свойственен более высокий тонус. Эту величину мы обозначили как Т0 - тонус в отсутствие потокового стимула, Т0 сосудов самцов выше нулевого тонуса сосудов самок.
Обсуждение результатов
Определенные суждения о причине половых различий в тонусе сонных артерий можно вынести на основании данных, полученных на коронарных артериях [15]. Экспериментальные, инструментальные, клинико-биохимические исследования свидетельствуют о способности эстрогенов при различных путях введения вызывать снижение тонуса как интактных, так и предварительно спазмированных вазоконстрикторами коронарных артерий [28]. Эстрогены могут быстро оказывать влияние на тонус сосудов путем прямого воздействия на электрические свойства биомембран и трансмембранную ионную проницаемость [3]. Снижение тонуса коронарных сосудов в ответ на стероидные и нестероидные эстрогены не зависит от адренэргических, холинэргических, гистаминэргических механизмов, а связано с блокадой трансмембранного транспорта ионов Са2+ [35]. В настоящее время обнаружены две изоформы рецепторов эстрогенов (БЯ« и БЯр) [19, 27], причем ЕЯ« участвует в реализации большинства физиологических эффектов, оказываемых эстрадиолом. Функции БЯр остаются пока невыясненными [19]. Согласно многим данным, 170-эстрадиол значительно повышает уровень секреции КО клетками эндотелия сосудов [40], что служит еще одним фактором вышеописанного вазодилатирующего эффекта эстрадиола.
Эти факты экстраполированные на сонные артерии могут объяснить почему сосуды самок имеют более низкий тонус и меньший угол наклона кривых зависимости диаметра
от линейной скорости несмотря на более низкий порог чувствительности к изменению скорости потока.
Как показано в работе Maddox с соавт. [30] эндотелий самок и самцов аорты крыс отличается по чувствительности к простагаландину Б2а. Эндотелий аорты самцов имеет более высокую чувствительность к Р§Б2а, в этой же работе не было обнаружено различий в сократимости сосудистых гладких мышц. Обработка тестостероном повышала чувствительность эндотелия сосудов самок крыс к Р§Б2а, но не влияла на сократимость гладкой мускулатуры.
Таким образом эстрогены могут выступать в роли модулятора состояния гладких мышц и быть ответственны за различия в исходном тонусе (Т0), поток-зависимом приросте диаметра на единицу скорости ^БМУь) в целом у самок и самцов кроликов.
Выявленные половые различия в реакциях сонных артерий на увеличение скорости потока только на 30% определяются отличиями в вязкости крови, и как следствием, различным потоковым стимулом в сосудах самок и самцов кроликов, ведущим фактором является отличающийся тонус исследованных сосудов, что может быть обусловлено половыми особенностями гормонального статуса экспериментальных животных.
Литература
1. Балашов С. А., Мелькумянц А. М. Изменение тонуса сонных артерий кошек в ответ на изменение скорости кровотока // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1984. - N 11. - С. 515-517.
2. Захарова Г. Н. Облитерирующий эндартериит конечностей. - Саратов: Изд-во Саратовского ун-та, 1973. - 252 с.
3. Кобрин В. И., Маноах М., Варон Д. и др. Влияние 17-Р эстрадиолсульфата на трансмембранные потенциалы кардиомиоцитов сердца морской свинки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996. - № 4. - С. 370 - 373.
4. Коган В. Б. Теоретические основы типовых процессов химической технологии. -Л., 1977.
5. Корж А. Н. Современные представления о структуре, функции и биологической роли сосудистого эндотелия // Междунар. мед. ж. (Харьков). - 2003. - Т. 9, № 1. -С. 130—134.
6. Манухина Е. А, Малышев И. В., Микоян Н. Н. Увеличение продукции оксида азота в органах крысы при тепловом шоке // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996, №5. - С.520-524.
7. Манухина Е. А., Азаматов И. П., Малышев И. В. Влияние теплового шока на эндотелий-опосредованные реакции изолированной аорты крысы // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1996. - N8 - С. 148-152.
8. Манухина Е. А., Лапшин К. К. Влияние адаптации к физической нагрузке на эндотелий-опосредованные реакции изолированных сосудов и продукцию N0 у крыс //Физиологический журнал им. Сеченова. - 1996. - Т. 82, N 7. - С.29-32.
9. Мелькумянц А. М., Веселова Б.С. Чувствительность артерий к скорости тока и вязкости крови // Тр. первого всесоюзного биофизического съезда. - М., 1982. - С. 56-60.
10. Мелькумянц А. М., Балашов С. А. Скорость кровотока постоянно действующий фактор дилатации артерий // Бюл. экспериментальной биологии и медицины. -1985, М 1, С.7-9.
11. Мелькумянц А. М., Балашов С. А. Вязкость крови - фактор регуляции тонуса артерий // Тезисы доклада международной конференции "Достижения биомеханики в медицине". (Рига 12-15 сентября, 1986). - Рига, 1986. - Т. 2. - С. 72-77.
12. Мелькумянц А. М., Балашов С. А. Обусловленная эндотелием регуляция артерий соответственно напряжению сдвига // Роль эндотелия в физиологии и патологии сосудов. - М., 1989. - Т. 38. - С. 27-60.
13. Мелькумянц А. М., Балашов С. А., Картамышев С. П. Антиконстрикторный эффект чувствительности эндотелия к напряжению сдвига // Физиологический журнал им. Сеченова. - 1992. - Т. 82, № 4. - С. 93-101.
14. Мелькумянц А. М., Балашов С. А., Картамышев С. П. Роль механочувствительности эндотелия в ослаблении констрикторных реакций сосудистого русла // Российский физиологический журнал им. Сеченова. - 2004. -Т. 90, № 6. - С. 693-704.
15. Сергеев П. В., Караченцев А. Н., Матюшин А. И. Эстрогены и сердце // Кардиология. - 1996, № 3. - С. 75-78.
16. Смешко В., Хаютин В. М., Герова М., Геро Я., Рогоза А. Н. Чувствительность малой артерии мышечного типа к скорости кровотока - реакции самоприспособления просвета артерии // Физиологический журнал СССР. - 1979. -Т. 65, № 2. - С. 291-298.
17. Филатова О. В. Реакции активных и пассивных элементов стенки артериальных кровеносных сосудов в зависимости от давления и потока // Актуальные вопросы
возрастной, прикладной и экологической физиологии, Барнаул, АГУ, 1991, с. 102— 107.
18. Хаютин В. М. Регуляция просвета артерий, определяемая чувствительностью эндотелия к скорости течения и вязкости крови // Вестник АМН СССР. - 1987. - N 6. - С. 89-95.
19. Arnal J.-F., Bayard F. Alteration in endothelial estrogen receptor expression // Circ. Res. — 2002. - V. 91, № 9. - P. 759-760.
20. Bruce I. N., Harris C. M., Nugget A., McDermott B. J., Johnston G. D., Bell A. L. Enhanced endothelium-dependent vasodilator responses in patients with systemic vasculitis // Scand. J. Rheumatol. - 1997. - V. 26, № 4. - Р. 318-324.
21. Dorup I., Skajaa K., Sorensen K. E. Normal pregnancy is associated with enhanced endothelium - dependent flow-mediated vasodilatation // American Journal of Physiology. - 1999. - V. 276. - Р. H821-H825.
22. Furchgott R.F. The role of endothelium in the responsis of vascular smootz muscle to drugs // Annu Rev-Pharmacol. Toxicol, 1984, V 24- P. 175 - 197.
23. Gerova H., Smiesko V., Gero J., Batza E. Dilatation of conduit coronary artery induced by high wlood flow // Physiol. Bohemoslov. - 1983. - V. 32, N 1. - P. 55-63.
24. Gilligan D. M., Badar D. M., Panw J. A. el al. Acute vascular effects of estrogen in postmenopausal women // Circulation. - 1994. - V. 90. - P. 786 — 791.
25. Griffith. M. Aminoguanimne selectively inhibits inducible nitric oxide synthase // Br. J. Pharmacology, 1993, V. 110- P. 226-230.
26. Hashimoto M., Akishita M., Eto M. et al. Modulation of endothelium-dependent flow-mediated dilatation of the brachial artery by sex and menstrual cycle. // Circulation. -1995. - V. 92. - 3431 — 3435.
27. Ihionkhan Christopher E., Chambliss Ken L., Gibson Linda L., Hahner Lisa D., Mendelsohn Michael E, Shaul PhUip W. Estrogen causes dynamic alterations in endothelial estrogen receptor expression // Circ. Res. - 2002. - V. 91, № 9. - P. 814-820.
28. Jiang С., Poole-Wilson P., Sarrel P. et al. Effect of 17b-estradiol on contraction, Ca2+ current and intracellular free Ca2+ in guinea-pig isolated cardiac myocytes // Br J Pharmacol. - 1992. - V. 106. - P. 739-745.
29. Kawano H., Moloyama T., Kugiyama K. el al. Menstrual cyclic variation of endothelium-dependent vasodilation of the brachial artery possible role of estrogen and nitric oxide. // Proc. Assoc. Am. Physicians. - 1996. V. 108. - P.473 - 480
30. Maddox Y. T., Faleon J. G., Ridinger Ню, Cunard C. M., Ramwel P. W. Endothelium-dependent gender differences in the response of the rat aorta // J. Pharmacol. and Exp. Ther. - 1987. - V. 240, N 2. - P. 392-395.
31. Mochizuki S., Miyasaka T., Goto M., Ogasawara Y., Yada T., Akiyama M., Neishi Y., Toyoda T., Tomita J., Koyama Y. Measurement of acetylcholine-induced endothelium-derived nitric oxide in aorta a newly developed catheter-type nitric oxide sensor // Biochem and Biophys. Res. Cornrnun. - 2003. - V. 306, № 2. - P. 505-508.
32. Miller V., Muesing R. A., LaRosa J. C. et al. Effects of two doses of estrogen without a progesterone on circulating lipoproteins // Arterioscler. Thromb. - 1991. - Vol 11. - P. 1436a.
33. Moncada S., Herman A.G., Vanhoute P. Endothelium-derived relaxing factor is identified as nitric oxide // Trends Pharmaeol. Sci. - 1987. - V. 8, № 10. - P. 365-368.
34. Palmer R. M. J., Ferrige A. G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endothelium-derived relaxing factor // Nature. - 1987. - V. 327. -P. 524-526.
35. Raddino R., Poll E., Pela G., Manca С. Action of sex steroid hormones on the isolated rabbit heart // Pharmacology. -1989. -V. 38. - P. 185-190.
36. Sausbier M., Schubert R., Voigt V., Hirneiss C., Pfcifcr A., Korth M., Kleppisch T., Ruth P., Hofmann F. Mechanisms of NO/cGMP-dependent vasorelaxation. // Circ Res. - 2000. - V. 87, № 9. - C. 825-830.
37. Smiesko V., Kozik J., Dolezel S. Role of endothelium in the control of arterial diameter by blood flow // Bitood Vessels. - 1985. - V. 22. - P. 247-251.
38. Sugawara M., Tohse N., Nagashima M., Yabu H., Kudo R. Vascular reactivity to endothelium-derived relaxing factor in human umbilical artery at term pregnancy // Can J Physiol Pharmacol. - 1997, Jul;75(7): P. 818-824.
39. Taddei S., Wrdis A., Ghiadoni L. el at. Menopause is associated with endothelial dysfunction in women // Hypertension. - 1996; 28:576-582.
40. Teede H., van der Zypp A., Majewski H. Gender differences in protein kinase G-mediated vasorelaxation of rat aorta // Clin. Sci. — 2001. — V. 100, № 5. - P. 473-479.
41. Votlerrani M., Rowno G., Coals A. el al. Estrogen acutely increases peripheral blood flow in postmenopausal women // Am J. Med. - 1995. - V. 99. - P. 119-122.
