CC BY
83
УДК 612.1 (470.621) ББК 28.91 (2Рос.Ады) П 50
Тугуз А.Р.
Доктор биологических наук, профессор кафедры ботаники факультета естествознания, зав. им-муногенетической лабораторией НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Татаркова Е.А.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, Майкоп, e-mail: lab_genetic@mail.ru Руденко К. А.
Кандидат биологических наук, иммуногенетическая лаборатория НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Смольков И.В.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Шумилов Д.С.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Муженя Д.В.
Кандидат биологических наук, инженер-генетик иммуногенетической лаборатории НИИ комплексных проблем Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, email: lab_genetic@mail.ru
Анохина Е.Н.
Аспирант кафедры ботаники факультета естествознания Адыгейского государственного университета, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Ашканова Т.М.
Врач высшей категории Адыгейской республиканской клинической больницы, Майкоп, тел. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru
Полиморфизмы генов ITG и SEL, ассоциированные с бронхиальной астмой, осложнениями периферического и коронарного атеросклероза, аденокарциномой молочной железы у жителей Республики Адыгея
(Рецензирована)
Аннотация. В структуре причин смертности населения Республики Адыгея (РА) на протяжении многих лет ведущие места традиционно занимают сердечно-сосудистые (ССЗ) и онкологические заболевания. Актуальность исследования обусловлена поиском ранних молекулярно-генетических маркеров мультифакторных заболеваний. Распределение единичных нуклеотидных замен (SNP - Single nucleotide polymorphisms) генов молекул адгезии интегринов ITG (ITGA2 С807Т, rsll26643, ITGB3 Leu33Pro, rs5918), селектинов SEL (SELE Leu554Phe, rs5355; Ser128Arg, rs5361, SELP Thr715Pro, rs6136) у жителей РА исследована SNP-методом в 44 образцах ДНК доноров (n=10) и больных (n=34) с ССЗ (n=17), злокачественными новообразованиями (ЗНО) (аденокарцинома молочной железы, n=8) и хроническими воспалительными заболеваниями легких (бронхиальная астма (БА), n=9). С системными патологическими процессами статистически значимо ассоциированы 128Arg полиморфизм гена SELE - эндотели-ального Е-селектина (/=6,66; Р=0,01; OR=15) и тромбоцитарного Р-селектина SELP Thr715Pro (/=4,55; Р=0,03; OR=7). Носительство патологического гомозиготного Arg128Arg генотипа и «му-тантного» 128Arg аллеля SELE ассоциировано главным образом с периферическим (соответственно /=12,31; Р=0,002; OR=39; /=21,96; Р=0,000003; 0R=100) и в меньшей степени с коронарным атеросклерозом (/=4,09, Р=0,04; 0R=10). Молекулярно-генетическим предиктором ишемического и геморрагического инсульта является носительство 715Pro аллели гена SELP (/=7,54, Р=0,006; 0R=17).
Ключевые слова: молекулы адгезии, интегрины (ITGA2, ITGB3), селектины (SELE, SELР), SNP генов, ассоциации с ССЗ, ЗНО и БА.
*Работа выполнена в рамках аналитической ведомственной целевой программы, проводимой по заданию Минобрнауки РФ в 2012-2014 гг. (ЕЗН, код ГРНТИ 34.2341, 34.23.53, 34.13.37, № проекта 4.1334.2011, № гос. контракта 01201276009) на базе иммуногенетической лаборатории Адыгейского государственного университета
Tuguz A.R.
Doctor of Biology, Professor of Botany Department of Natural Science Faculty, Head of Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 5938-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Tatarkova E.A.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe StateUniversity, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Rudenko K.A.
Candidate of Biology, Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Smolkov I.V.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, email: lab_genetic@mail.ru
Shumilov D.S.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Muzhenya D.V.
Candidate of Biology, Engineer-Geneticist of Immunogenetic Laboratory of Research Institute of Complex Problems, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Anokhina E.N.
Post-graduate student of Botany Department of Natural Science Faculty, Adyghe State University, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, e-mail: lab_genetic@mail.ru Ashkanova T.M.
Doctor of Higher Category of Adyghe Republican Clinical Hospital, Maikop, ph. (8772) 59-38-02, email: lab_genetic@mail.ru
The polymorphisms of ITG and SEL genes associated with the bronchial
asthma, complications of peripheral and coronary atherosclerosis and mammary gland adenocarcinomas at inhabitants of the Adyghea Republic
Abstract. For many years, the leading places in structure of the reasons for the population mortality in the Adyghea Republic are taken by cardiovascular (CV) and oncological diseases. Relevance of this research is caused by searches for early molecular and genetic markers of multifactorial diseases. Distribution of single nucleotide replacements (SNP - single nucleotide polymorphisms)of genes of integrin adhesion molecules ITG (ITGA2 C807T, rsll26643, ITGB3 Leu33Pro, rs5918) and SEL selectins (SELE Leu554Phe, rs5355; Ser128Arg, rs5361, SELP Thr715Pro, rs6136) at inhabitants of Adyghea Republic is investigated by SNP method in 44 samples of DNA of donors (n=10) and sick people (n=34) with CV (n=17), malignant new tu-mors(MNT) (mammary gland adenocarcinoma, n=8) and chronic inflammatory diseases of lungs (the bronchial asthma (BA), n=9). As a result of research it has been obtained that 128Arg polymorphism of SELE gene - endothelial E-selectin (x2=6,66; P=0,01; OR=15) and platelet P-selectin SELP Thr715Pro (x2=4,55; P=0,03; OR=7) are statistically significantly associated with system pathological processes. The carriage of pathological homozygous Arg128Arg of a genotype and «mutant» 128Arg SELE allele is associated mainly with peripheral (respectively /=12,31; P=0,002; OR=39; x2=21,96; P=0,000003; 0R=100) and to a lesser extent coronary atherosclerosis (x2=4,09, P=0,04; 0R=10). A molecular and genetic predictor of an ischemic and hemorrhagic stroke is the carriage of 715Pro SELP gene allele (x2=7,54, P=0,006; 0R=17).
Keywords: adhesion molecules, integrins (ITGA2, ITGB3), selectins (SELE, SELR), SNP of genes, associations with CV, MNT and BA.
1. Введение
Молекулы адгезии ITG и SEL, способствующие реализации иммунных, гемоста-тических и других физиологических реакций организма посредством межклеточных и клеточно-субстратных контактов, могут запускать патофизиологические процессы ате-рогенеза с последующими мозговыми инсультами, инфарктами миокарда (ИМ), тром-боэмболиями и другими осложнениями. Триггерные механизмы критических состояний обусловлены SNP в генах интегринов и селектинов, регулирующих уровень экспрессии или структурные изменения молекул адгезии. Повышенный риск развития ССЗ, ЗНО и других патологических состояний в мировых популяциях зачастую связы-
вают с полиморфными вариантами генов ITG (ITGA2 С807Т, rs1126643; ITGB3 Leu33Pro, rs5918) и SEL (SELE Leu554Phe, rs5355; SELE Ser128Arg, rs536i; SELP Thr7Í5Pro, rs6136) [i]. Однако в международных базах HuGen, Ensemble, PubMed (2GÍG-2GÍ4 гг.) приводятся весьма противоречивые сведения об ассоциации некоторых SNP адгезивных молекул с системными патологическими процессами для определенных этнических групп населения.
Полиморфизмы генов ITGA2 и ITGВ3 в генезе ССЗ связывают со свертывающей системой крови, предохраняющей организм от кровопотери [2]. Замена цитозина (С) на тимин (Т) в 8G7 позиции ^8G7^ c.759C>T) промоторного региона гена ITGA2 (5q11.2), кодирующего рецепторный гликопротеин интегрин альфа-2 (GPIa, или гликобелок IIa) на мембранах мегакариоцитов, фибробластов, тромбоцитов и других клетках, нарушает первичную структуру (Phe224Phe), свойства и синтез гликобелка IIa, ответственного за тромбоэмболические осложнения. Тромбоцитарный рецептор фибриногена (гликопро-теин-3а или GPIIIa), кодируемый геном ITGB3 (17q21.32), участвует в межклеточной адгезии и сигнализации, обеспечивая взаимодействие тромбоцитов и фибриногена плазмы крови для купирования поврежденного эндотелия сосудов. В некоторых случаях GPIIIa инициирует процессы атерогенеза и ССЗ [3, 4].
С болезнями сердечного континуума (БСК), развивающимися в молодом возрасте, ассоциируют SNP генов SELE и SELР, участвующих в клеточной миграции. Ген селек-тина-Е, ответственный за белок, экспрессирующийся на стимулированных клетках эпителия, обеспечивает доставку лейкоцитов в зону воспаления и участвует в трансформации базовой воспалительной реакции организма. Тромбоцитарный Р-селектин взаимодействует с иммунными клетками, несущими гликопротеиновый лиганд-1 (P-Selectin Glycoprotein Ligand-i или PSGL-1), опосредует адгезию пластинок к моноцитам, ней-трофилам и лимфоцитам, формируя тромбоцитарно-лейкоцитарный комплекс [2, 5-7]. SELP влияет на транзиторную, обратимую агрегацию тромбоцитов с эндотелиальными клетками и лейкоцитами, а оверэкспрессия Р-селектина способствует ускорению свертывания крови, развитию ранних ИМ, ишемического инсульта (ИИ), артериальной ги-пертензии (АГ), острой коронарной недостаточности (ОКН) и других клинических проявлений ССЗ [4-9].
Результаты ряда зарубежных работ (2GÍG-2G15 гг.) не позволяют сделать однозначные выводы об ассоциации SNP генов ITG и SEL с мультифакторными ССЗ, БА, ЗНО и другими заболеваниями [1G-29]. Весьма противоречивые данные получены и в немногочисленных отечественных исследованиях для территориально удаленных регионов России (Чита, Новосибирск, Красноярск, Москва и Санкт-Петербург), не охватывающих многонациональный Южный Федеральный Округ (ЮФО) [3G-35]. В РА роль полиморфных вариантов молекул адгезии как предикторов ССЗ и других системных патологических процессов также не изучена.
Цель работы: SNP-типирование генов ITG (ITGA2 С807Т, rs1126643; ITGB3 Leu33Pro, rs5918) и SEL (SELE Leu554Phe, rs5355; SELE Seri28Arg, rs536i; SELP Thr715Pro, rs6i36), ассоциированных у жителей РА с риском развития периферического (ПА) и коронарного атеросклероза (КА), ЗНО женских репродуктивных органов и хронических воспалительных заболеваний легких.
2. Материалы и методы
Полиморфные варианты генов молекул адгезии исследованы SNP-методом с аллель-специфичными праймерами (НПФ «Литех», Москва) в образцах ДНК 44 жителей РА (г. Майкоп). Больные (n=34) - пациенты отделений кардиологии, пульмонологии Адыгейской республиканской клинической больницы (АРКБ) и лучевой терапии Адыгейского республиканского клинического онкологического диспансера (АРКОД) с ве-
рифицированными диагнозами БА (n=9), аденокарциномы молочной железы (n=8) и ССЗ (n=17), развившимися на фоне ПА (n=9) и КА (n=8): ИМ, ишемической болезни сердца (ИБС), гипертонической болезни (ГБ), инсультом, тромбофлебозом и другими осложнениями атеросклероза.
Контрольная группа (доноры, n=10) представлена неродственными здоровыми жителями без клинических проявлений и наследственной отягощенности по исследуемым нозологиям. Соответствие распределений генотипов ожидаемым значениям при равновесии Харди-Вайнберга и сравнении частот аллельных вариантов/генотипов проводили с использованием критерия х (хи - квадрата с поправкой Йетеса), OR (odds-ration) - отношения шансов, 95% доверительного интервала (95% С1) при уровне значимости P<0,05.
3. Результаты и обсуждения
Спектр типированных SNP генов адгезивных молекул у жителей РА определяется их триггерной ролью в развитии социально-значимых мультифакторных заболеваний с неуклонной многолетней тенденцией повышения уровня смертности среди молодого трудоспособного контингента населения. По данным Медицинского информационно-аналитического центра Министерства здравоохранения РА, в структуре причин смертности населения РА в 2013 г. преобладают сосудистые поражения головного мозга (33,8%), ИБС (23,6%) и атеросклеротический кардиосклероз (16,9%). Летальность от ЗНО ежегодно возрастает более чем на 6%. Высокая смертность и социально-экономический ущерб от ССЗ, ЗНО, БА обуславливает поиск ранних молекулярно-генетических предикторов ЗНО женских репродуктивных органов, ПА и КА. Заболеваемость БА за последние три года возросла на 12%.
На первом этапе исследования нами проанализировано распределение частот полиморфных вариантов генов интегринов ITGA2 (С807Т), ITGB3 (Leu33Pro), селектинов SELЕ (Leu554Phe, Ser128Arg), SELP (Thr715Pro) в обследованных группах доноров и больных (табл. 1).
Частоты SNP генов ITG, связанных с нарушением синтеза белка ITGA2 (С807Т), свертываемости крови ITGB3 (Leu33Pro), а также гена SELЕ Leu554Phe, участвующего в последней стадии воспаления, достоверно не отличаются у доноров и в общей группе больных (табл. 1). Полученные данные не согласуется с выводами Андреенко Е.Ю
(2010), Сироткиной О.В. (2011) и Аксютиной Н.В. (2014) об ассоциации С807Т (rs1126643) с риском развития ранних ССЗ: ИБС, ИМ, ИИ и онкопатологии [10, 30-32]. У больных сахарным диабетом 2 типа наличие аллеля 807T увеличивает риск развития КА [11]. Несмотря на утверждения о том, что у носителей мутантной Т аллели в гетеро-(С/Т) или гомозиготном (Т/Т) состоянии повышается скорость агрегации тромбоцитов, приводя к тромбоэмболии, ИБС, ИИ, ИМ в молодом возрасте, по данным Pereboom I.T.
(2011), Севостьяновой К С. (2012), Жаркова П.А. (2013), SNP гена ITGA2 С807Т не связан с артериальными и венозными тромбозами, ишемией головного мозга, ИИ, ИМ, ИБС и другими ССЗ [2, 7, 12-17, 33, 34].
Точечная 176T>C мутация в гене ITGB3 с заменами аминокислот Leu59/59Pro или Leu33/33Pro в GPIIIa ускоряет агрегацию тромбоцитов, усугубляет действие других полиморфизмов (например, мутации Лейден). Pro аллель в гетеро- (Leu/Pro) или гомозиготном (Pro/Pro) состоянии повышает риск развития артериальных тромбозов, ИМ, ИБС и других тяжелых состояний. Носительство 176T>C полиморфизма гена ITGB3 имеет прогностическое значение при атеросклерозе коронарных артерий, ИИ, ССЗ, ИБС и ОКН, раке молочной железы (РМЖ) и раке яичников (РЯ), а также в патогенезе астмы и сенсибилизации к плесени [14-17, 31, 35]. Стоит отметить, что в более поздних работах Jakubowska A. (2010) утверждает, что Leu33Pro полиморфизм ITGB3 не повышает риск развития РМЖ или РЯ у носителей BRCA1 или BRCA2 мутации среди поль-
ского населения [18]. Результаты Уегёо1а М. (2014; 2015) показывают отсутствие связи между миссенс мутацией Ьеи554РЬе и риском ИБС или атеросклероза сонных артерий у больных, перенесших коронарную ангиопластику [19, 20].
Таблица 1
Частоты БОТ генов 1ША2, 1ШВ3, БЕЬЕ и БЕЬР у доноров и в общих выборках больных
Гены/ аллели Генотипы/ аллели Больные (w=34) Доноры (w=10) x2 Р OR
Знач. 95% CI
ITGA2 С807Т С807С 0,118 0,300 1,93 0,38 0,31 0,06 - 1,72
С807Т 0,647 0,500 1,83 0,44 - 7,62
Т807Т 0,235 0,200 1,23 0,22 - 7,01
С807 0,441 0,550 0,74 0,39 0,65 0,24 - 1,76
807Т 0,559 0,450 1,55 0,57 - 4,22
ITGB3 Leu33Pro Leu33Leu 0,733 0,700 0,12 0,94 1,18 0,24 - 5,70
Leu33Pro 0,200 0,200 1,00 0,17 - 5,98
Pro33Pro 0,067 0,100 0,64 0,05 - 7,95
Leu33 0,833 0,800 0,12 0,73 1,25 0,34 - 4,54
33Pro 0,167 0,200 0,80 0,22 - 2,90
SELE Leu554Phe Leu554Leu 0,909 0,900 0,01 1 1,11 0,10 - 12,04
Leu554Phe 0,091 0,100 0,90 0,08 - 9,75
Phe554Phe 0,000 0,000 0,31 0,01 - 16,79
Leu554 0,955 0,950 0,01 0,93 1,11 0,11 - 11,25
554Phe 0,045 0,050 0,90 0,09 - 9,21
SELE Ser128Arg Ser128Ser 0,676 1,000 4,31 0,12 0,10 0,01 - 1,81
Ser128Arg 0,118 0,000 3,10 0,15 - 62,53
Arg128Arg 0,206 0,000 5,73 0,30 - 109,40
Ser128 0,735 1,000 6,66 0,01* 0,07 0,00 - 1,16
128 Arg 0,265 0,000 15,02 0,86 - 261,11
SELP Thr715Pro Thr715Thr 0,536 0,889 3,77 0,15 0,14 0,02 - 1,31
Thr715Pro 0,321 0,111 3,79 0,41 - 35,07
Pro715Pro 0,143 0,000 3,49 0,17 - 71,25
Thr715 0,696 0,944 4,55 0,03* 0,13 0,02 - 1,10
715Pro 0,304 0,056 7,41 0,91 - 60,26
Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05;x2>3,6
В наших исследованиях статистически значимые различия по частотам аллелей и генотипов между донорами и группой больных выявлены только по двум полиморфизмам генов селектинов - БЕЬЕ Бег128Аг§ и БЕЬР ТЬг715Рго. БОТ, кодирующие замену, Бег128Аг§ практически не типированы в контрольной группе, но у обследованных больных независимо от ведущего диагноза значительно чаще выявляется «мутантный» 128Аг§ аллельный вариант гена БЕЬЕ (/2=6,66; Р=0,01), повышающий риск развития системных патологических процессов более чем в 15 раз. Аллель 715Рго гена БЕЬР (х2=4,55; Р=0,03; ОЯ=7) в общей группе больных также является прогностически неблагоприятным фактором (табл. 1). Результаты поиска ассоциации БИР генов БЕЬЕ Бег128Аг§ и БЕЬР ТЬг715Рго у жителей РА с верифицированными диагнозами БА, аденокарциномой молочной железы, осложнениями ПА и КА представлены в таблицах 2 и 3.
Различия по частотам полиморфизмов генов БЕЬЕ Бег128Аг§ и БЕЬР ТЬг715Рго, отмеченные в общих группах больных, значимы (Р<0,05) прежде всего у больных с ИИ, ИБС и др. клиническими проявлениями ПА и КА (табл. 2, 3). 128Аг§ аллель гена Е-селектина у жителей РА существенно повышает риск развития ПА и КА (табл. 2). Носи-тельство патологического гомозиготного Аг§128Аг§ генотипа и «мутантного» 128Аг§ аллеля БЕЬЕ ассоциировано главным образом с ПА (соответственно /2=12,31; Р=0,002;
OR=39; /2=21,96; Р=0,000003; OR=100) и в меньшей степени с КА (2=4,09; Р=0,04; OR=10). Патогенетическая роль замены аминокислот серина (Ser) на аргинин (Arg) в 128 позиции (Ser128Arg) и лейцина (Leu) на фенилаланин (Phe) в 554 позиции (Leu554Phe) белкового продукта гена SELE способствуют адгезии лейкоцитов на стадии раннего развития сосудистой атеромы и повышают риск преждевременных коронарных заболеваний сердца [5, 6]. Ser128Arg рассматривается как полиморфизм, у которого 128Arg аллель ассоциирован с повышенным риском развития ИБС, ИИ, ГБ, острым коронарным синдромом (ОКС), ИМ и хронической ишемией головного мозга, но, по данным Ghilardi G. (2004), эта замена не связана с риском развития атеросклероза [7, 21-24].
Таблица 2
Распределение Ser128Arg SNP гена SELE в норме при ССЗ, ЗНО и БА
Выборка Генотипы/ Больные Доноры x2 Р OR
Аллели (и=10) X Знач. 95% CI
л а Ser128Ser 0,676 1,000 0,10 0,01 - 1,81
а Ser128Arg 0,118 0,000 4,31 0,12 3,10 0,15 - 62,53
1н СП IN ю О Arg128Arg 0,206 0,000 5,73 0,30 - 109,40
Ser128 0,735 1,000 6,66 0,01 0,07 0,00 - 1,16
128 Arg 0,265 0,000 15,02 0,86 - 261,11
Ser128Ser 0,889 1,000 0,27 0,01 - 7,51
Ser128Arg 0,111 0,000 1,17 0,56 3,71 0,13 - 103,12
< ? W к Arg128Arg 0,000 0,000 1,11 0,02 - 61,38
Ser128 0,944 1,000 1,14 0,29 0,28 0,01 - 7,44
128 Arg 0,056 0,000 3,51 0,13 - 91,88
Ser128Ser 0,222 1,000 0,02 0,00 - 0,38
Ser128Arg 0,111 0,000 12,31 0,002 3,71 0,13 - 103,12
С Ъ С ^ Arg128Arg 0,667 0,000 39,00 1,72 - 883,67
Ser128 0,278 1,000 21,96 3,0E-6 0,01 0,00 - 0,19
128 Arg 0,722 0,000 100,64 5,13 - 1972,42
Ser128Ser 0,750 1,000 0,12 0,01 - 3,01
Ser128Arg 0,125 0,000 2,81 0,25 4,20 0,15 - 117,93
<С 00 Arg128Arg 0,125 0,000 4,20 0,15 - 117,93
Ser128 0,812 1,000 4,09 0,04 0,09 0,00 - 1,97
128 Arg 0,188 0,000 10,63 0,51 - 222,62
Ser128Ser 0,875 1,000 0,24 0,01 - 6,69
N 00 ч II St к Ser128Arg 0,125 0,000 1,32 0,52 4,20 0,15 - 117,93
Arg128Arg 0,000 0,000 1,24 0,02 - 69,01
Рч Ser128 0,938 1,000 1,29 0,26 0,25 0,01 - 6,62
128 Arg 0,063 0,000 3,97 0,15 - 104,18
Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05;х2>3,6
Миссенс мутация Ьеи554РЬе гена БЕЬЕ, часто ассоциируемая с АГ и повышенным (более чем в 2,8 раза) риском развития хронической ишемии головного мозга, у жителей РА (по нашим данным, табл. 1) и некоторых провинций Китая не связана с ССЗ: ГБ, развитием ИИ [7, 11, 21-25].
Сведения об ассоциации 128Аг§ аллеля с тяжестью течения астмы, предрасположенностью и прогрессированием клинических проявлений РМЖ в наших исследованиях не подтвердились (табл. 2) [26, 27].
На основании полученных экспериментальных данных, можно утверждать, что присутствие в геноме «мутантного» 715Рго аллеля гена Р-селектина у жителей РА в 17 раз повышает риск заболеваний, развивающихся на фоне ПА (-7,54; Р=0,006) и в меньшей степени оказывает влияние на риск развития ИМ, ИБС, ОКН и др. осложнений
КА (табл. 3). T/G SNP (rs 6136) с заменой аминокислоты треонина (Thr) на пролин (Pro) в 715 позиции (Thr715Pro) в гене SELP стимулирует экспрессию и уровень секреции тром-боцитарного селектина; запускает развитие ранних коронарных заболеваний сердца, ЗНО [5]. Группа французских исследователей (Herrmann S.M., 1998), однако, полагает, что полиморфный вариант Pro715 SELP обладает протективными свойствами и, наоборот, снижает риск ИМ [7-9]. Возникшие противоречивые выводы о роли Thr715Pro полиморфизмов гена P-селектина в развитии заболеваний не разрешены и в двух масштабных мета-анализах, проведенных в 2014 году. Согласно данным Wu Z. (2014), основанным на анализе распределения T/G SNP (rs6136) у 5886 больных с инсультом, ИБС, ИМ и 18345 доноров, доказана его корреляция с высоким риском ИМ и ИБС. Zhou D.H. (2014) при сравнении частот Thr715Pro полиморфизмов гена SELP у 17304 доноров и больных с ИМ (n=1608), ИБС (n=3154) выявил особенно значимые связи среди азиатов и кавказцев, но отметил отсутствие ассоциации SNP среди арабско/североафриканского населения [28, 29]. Итоги другого мета-анализа, проведенные Zhao Y.J. (2014) для 2696 больных и 4724 доноров, отрицают корреляцию между Thr715Pro полиморфизмом и риском ИМ. Не выявлена связь Thr715Pro гена SELP и с ИИ [23].
Таблица 3
Частоты Thr715Pro полиморфизмов гена SELP в норме при ССЗ, ЗНО, БА
Выборка Генотипы/ Аллели Больные Доноры (n=10) x2 Р OR
Знач. 95% CI
Общая группа (n=28) Thr715Thr 0,536 0,889 3,77 0,15 0,14 0,02 - 1,31
Thr715Pro 0,321 0,111 3,79 0,41 - 35,07
Pro715Pro 0,143 0,000 3,49 0,17 - 71,25
Thr715 0,696 0,944 4,55 0,03* 0,13 0,02 - 1,10
715Pro 0,304 0,056 7,41 0,91 - 60,26
< Ii W Sc Thr715Thr 0,444 0,889 4,00 0,14 0,10 0,01 - 1,17
Thr715Pro 0,556 0,111 10,00 0,85 - 117,02
Pro715Pro 0,000 0,000 1,00 0,02 - 55,80
Thr715 0,722 0,944 3,20 0,07 0,15 0,02 - 1,47
715Pro 0,278 0,056 6,54 0,68 - 62,99
с V с S- Thr715Thr 0,400 0,889 4,85 0,09 0,08 0,01 - 1,29
Thr715Pro 0,200 0,111 2,00 0,10 - 41,01
Pro715Pro 0,400 0,000 13,57 0,51 - 358,66
Thr715 0,500 0,944 7,54 0,006* 0,06 0,01 - 0,63
715Pro 0,500 0,056 17,00 1,59 - 181,37
< |Г « £ Thr715Thr 0,714 0,889 3,50 0,17 0,31 0,02 - 4,41
Thr715Pro 0,000 0,111 0,38 0,01 - 10,75
Pro715Pro 0,286 0,000 8,64 0,35 - 214,62
Thr715 0,714 0,944 3,16 0,08 0,15 0,01 - 1,51
715Pro 0,286 0,056 6,80 0,66 - 69,64
N <-■ ч II Thr715Thr 0,571 0,889 2,12 0,35 0,17 0,01 - 2,16
Thr715Pro 0,429 0,111 6,00 0,46 - 77,75
Pro715Pro 0,000 0,000 1,27 0,02 - 71,64
Thr715 0,786 0,944 1,81 0,18 0,22 0,02 - 2,35
715Pro 0,214 0,056 4,64 0.43 - 50,44
Примечание: * - достоверность различий при Р<0,05;x2>3,6
4. Заключение
Связь полиморфизмов генов адгезивных молекул с развитием патологических процессов можно объяснить влиянием потенциированных генетических дефектов, нарушающих агрегацию тромбоцитов, лейкоцитов и инициирующих воспаление. Воз-
можно, это связано со спонтанной стойкой экспрессией Е-селектинов на поверхности эндотелиальной выстилки, активациейтромбоцитов, адгезией и повышенной проницаемостью лейкоцитов. Такой механизм поддерживает современную теорию атерогенеза с вовлечением иммунных механизмов в развитии сосудистой патологии [7]. Неоднозначность выводов международных мета-анализов подтверждает необходимость проведения этногенетических исследований для установления молекулярно-генетических маркеров онкологических, ССЗ и др. социально-значимых заболеваний в полиэтнических регионах России.
5. Выводы
1. С системными патологическими процессами у жителей РА ассоциированы полиморфизмы Е-селектина БЕЬЕ Бег128Аг§ и Р-селектина БЕЬР ТЬг715Рго.
2. Носительство 715Рго аллели гена БЕЬР у жителей РА, сопряженное с предрасположенностью к атеросклерозу периферических сосудов, является молекулярно-генетическим предиктором сосудистых поражений головного мозга - ишемического и геморагического инсульта.
3. Полученные данные подтверждают связь полиморфизмов генов адгезивных молекул с атерогенезом и возможность их использования для донозологической диагностики осложнений преимущественно ПА и КА у жителей РА.
Примечания:
1. Soluble cell adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome / Y. Xie [et al.] // Chinese Medical Journal. 2000. No. 113 (3). P. 286288.
2. Кузник Б.И. Клеточные и молекулярные механизмы регуляции системы гемостаза в норме и патологии. Чита: Экспресс-издательство, 2010. 827 с.
3. Марков Х.М. Мозговой кровоток и церебральный инсульт. Ч. 1. Регуляция церебрального кровообращения // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2013. № 1. С. 8696.
4. Белоцкий С.М., Авталион Р.Р. Воспаление: мобилизация клеток и клинические деффекты. М.: БИНОМ, 2008. 240 с.
5. Heterogeneous effect of two selectin gene polymorphisms on coronary artery disease risk: a metaanalysis / Z. Wu [et al.] // PLoS One. 2014. No. 9 (2). P. 57-64.
6. Circulating soluble E-selectin levels and the Ser128Arg polymorphism in individuals from different ethnic groups / M.A. Miller [et al.] // Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases. 2005. No. 15 (1). P. 65-70.
7. Страмбовская Н.Н., Князева А.С. Сравнительная агрегационная активность тромбоцитов у носителей генетического полиморфизма основных белков тромбоцитарных рецепторов // Актуальные проблемы клинической и экспериментальной медицины: материалы Всерос. на-уч.-практ. конф., посвящ. 60-летию Читинской гос. мед. акад. Т. 1. Чита: РИЦ ЧГМА, 2013. С. 153-159.
8. The P-selectin gene is highly polymorphic: reduced frequency of the Pro715 allele carriers in patients with myocardial infarction / S.M. Herrmann [et al.] // Hum. Mol. Genet. 1998. Vol. 7. Р. 12771284.
References:
1. Soluble cell adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome / Y. Xie [et al.] // Chinese Medical Journal. 2000. No. 113 (3). P. 286288.
2. Kuznik B.I Cellular and molecular mechanisms of regulation of the hemostatic system in norm and pathology. Chita: Express Publishing House, 2010. 827 pp.
3. Markov Kh.M. Cerebral blood flow and cerebral stroke. Pt. 1: Regulation of cerebral blood circulation // Pathological Physiology and Experimental Therapy. 2013. No. 1. P. 86-96.
4. Belotskiy S.M. Avtalion R.R. Inflammation: mobilization of cells and clinical defects. M.: BINOM, 2008. 240 pp.
5. Heterogeneous effect of two selectin gene polymorphisms on coronary artery disease risk: a meta-analysis / Z. Wu [et al.] // PLoS One. 2014. No. 9 (2). P. 57-64.
6. Circulating soluble E-selectin levels and the Ser128Arg polymorphism in individuals from different ethnic groups / M.A. Miller [et al.] // Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases. 2005. No. 15 (1). P. 65-70.
7. Strambovskaya N.N., Knyazeva A.S Comparative aggregation activity of platelets of the carriers of the genetic polymorphism of the major proteins of platelet receptors // Actual problems of clinical and experimental medicine: materials of Russian scient. and pract. conf., dedicated to the 60th anniversary of Chita State Medical Academy. Vol. 1. Chita: RITs ChSMA, 2013. P 153-159.
8. The P-selectin gene is highly polymorphic: reduced frequency of the Pro715 allele carriers in patients with myocardial infarction / S.M. Herrmann [et al.] // Hum. Mol. Genet. 1998. Vol. 7. P. 12771284.
9. Kelly A. SELP and SELPLG genetic variation is associated with cell surface measures of SELP and SELPLG: the atherosclerosis risk in communities (ARIC) // Carotid MRI Study Clin Chem. 2009. No. 55 (6). P. 1076-1082.
10. Association between ITGA2 C807T polymorphism and gastric cancer risk / J. Chen [et al.] // World J Gastroenterol. 2011. No. 17 (23). P. 2860-2866.
11. Polymorphisms in platelet glycoproteins Ia and IIIa are associated with arterial thrombosis and carotid atherosclerosis in type 2 diabetes / S. Pel-litero [et al.] // Thromb Haemost. 2010. No. 103 (3). P. 630-637.
12. Prothrombotic gene polymorphisms: possible contributors to hepatic artery thrombosis after or-thotopic liver transplantation / I.T. Pereboom [et al.] // Transplantation. 2011. No. 92 (5). P. 587593.
13. Association of platelet collagen receptor polymorphisms with premature acute myocardial infarction / A. Kazemi [et al.] // Blood Coagul Fibrinolysis. 2012. No. 23 (6). P. 527-531.
14. Association of the platelet GPIIb/IIIa polymorphism with atherosclerotic plaque morphology: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study / A.M. Kucharska-Newton [et al.] // Atherosclerosis. 2011. No. 216 (1). P. 151-156.
15. Causal Relationship of Susceptibility Genes to Ischemic Stroke: Comparison to Ischemic Heart Disease and Biochemical Determinants / P. Bentley [et al.] // PLoS One. 2010. No. 5 (2). P. 1521.
16. Integrin beta3 Leu33Pro polymorphism increases BRCA1-associated ovarian cancer risk / A. Jaku-bowska [et al.] // J. Med. Genet. 2007. No. 44 (6). P. 408-411.
17. Genetic variation of ITGB3 is associated with asthma in Chinese Han children / Y. Zhang [et al.] // PLoS One. 2013. No. 8 (2). P. 351-356.
18. The Leu33Pro polymorphism in the ITGB3 gene does not modify BRCA1/2-associated breast or ovarian cancer risks: results from a multicenter study among 15,542 BRCA1 and BRCA2 mutation carriers / A. Jakubowska [et al.] // Breast Cancer Res Treat. 2010. No. 121 (3). P. 639-649.
19. Platelet PIA1/PIA2 polymorphism and the risk of periprocedural myocardial infarction in patients with acute coronary syndromes undergoing coronary angioplasty / M. Verdoia [et al.] // Blood Coagul Fibrinolysis. 2014. No. 25 (2). P. 107113.
20. Relationship between glycoprotein IIIa platelet receptor gene polymorphism and coronary artery disease / M. Verdoia [et al.] // Angiology. 2015. No. 66 (1). P. 79-85.
21. Association of E-selectin gene polymorphisms with ischemic stroke in a Chinese Han population / D.X. Zhao [et al.] // J. Neurosci Res. 2012. No. 90 (9). P. 1782-1787.
22. A common missense single nucleotide polymorphism in the E-selectin gene is significantly associated with essential hypertension in the Han population but only weakly associated in the Uy-gur population / Z. Wang [et al.] // Hypertens Res. 2012. No. 35 (4). P. 413-417.
23. Correlations of SELE and SELP genetic poly-
9. Kelly A. SELP and SELPLG genetic variation is associated with cell surface measures of SELP and SELPLG: the atherosclerosis risk in communities (ARIC) // Carotid MRI Study Clin Chem. 2009. No. 55 (6). P. 1076-1082.
10. Association between ITGA2 C807T polymorphism and gastric cancer risk / J. Chen [et al.] // World J Gastroenterol. 2011. No. 17 (23). P. 2860-2866.
11. Polymorphisms in platelet glycoproteins Ia and IIIa are associated with arterial thrombosis and carotid atherosclerosis in type 2 diabetes / S. Pel-litero [et al.] // Thromb Haemost. 2010. No. 103 (3). P. 630-637.
12. Prothrombotic gene polymorphisms: possible contributors to hepatic artery thrombosis after or-thotopic liver transplantation / I.T. Pereboom [et al.] // Transplantation. 2011. No. 92 (5). P. 587593.
13. Association of platelet collagen receptor polymorphisms with premature acute myocardial infarction / A. Kazemi [et al.] // Blood Coagul Fibrinolysis. 2012. No. 23 (6). P. 527-531.
14. Association of the platelet GPIIb/IIIa polymorphism with atherosclerotic plaque morphology: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study / A.M. Kucharska-Newton [et al.] // Atherosclerosis. 2011. No. 216 (1). P. 151-156.
15. Causal Relationship of Susceptibility Genes to Ischemic Stroke: Comparison to Ischemic Heart Disease and Biochemical Determinants / P. Bentley [et al.] // PLoS One. 2010. No. 5 (2). P. 1521.
16. Integrin beta3 Leu33Pro polymorphism increases BRCA1-associated ovarian cancer risk / A. Jakubowska [et al.] // J. Med. Genet. 2007. No. 44 (6). P. 408-411.
17. Genetic variation of ITGB3 is associated with asthma in Chinese Han children / Y. Zhang [et al.] // PLoS One. 2013. No. 8 (2). P. 351-356.
18. The Leu33Pro polymorphism in the ITGB3 gene does not modify BRCA1/2-associated breast or ovarian cancer risks: results from a multicenter study among 15,542 BRCA1 and BRCA2 mutation carriers / A. Jakubowska [et al.] // Breast Cancer Res Treat. 2010. No. 121 (3). P. 639-649.
19. Platelet PIA1/PIA2 polymorphism and the risk of periprocedural myocardial infarction in patients with acute coronary syndromes undergoing coronary angioplasty / M. Verdoia [et al.] // Blood Coagul Fibrinolysis. 2014. No. 25 (2). P. 107113.
20. Relationship between glycoprotein IIIa platelet receptor gene polymorphism and coronary artery disease / M. Verdoia [et al.] // Angiology. 2015. No. 66 (1). P. 79-85.
21. Association of E-selectin gene polymorphisms with ischemic stroke in a Chinese Han population / D.X. Zhao [et al.] // J. Neurosci Res. 2012. No. 90 (9). P. 1782-1787.
22. A common missense single nucleotide polymorphism in the E-selectin gene is significantly associated with essential hypertension in the Han population but only weakly associated in the Uy-gur population / Z. Wang [et al.] // Hypertens Res. 2012. No. 35 (4). P. 413-417.
23. Correlations of SELE and SELP genetic poly-
morphisms with myocardial infarction risk: a me-ta-analysis and meta-regression / Y.J. Zhao [et al.] // Mol Biol Rep. 2014. No. 41 (7). P. 45214532.
24. Ser128Arg gene polymorphism for E-selectin and severity of atherosclerotic arterial disease / G. Ghilardi [et al.] // J. Cardiovasc Surg (Torino). 2004. No. 45 (2). P. 143-147.
25. P-selectin polymorphisms' influences on P-selectin serum concentrations and on their familial correlation: the STANISLAS family study / J.B. Marteau [et al.] // J. Thromb Haemost. 2008. No. 6 (6). P. 920-927.
26. E-selectin S128R polymorphism leads to severe asthma / E. Nadi [et al.] // Iran J. Allergy Asthma Immunol. 2007. No. 6 (2). P. 49-57.
27. Polymorphic variant Ser128Arg of E-Selectin is associated with breast cancer risk and high grade tumors / R. Naidu [et al.] // Onkologie. 2011. No. 34 (11). P.592-597.
28. SELP genetic polymorphisms may contribute to the pathogenesis of coronary heart disease and myocardial infarction: a meta-analysis / D.H. Zhou [et al.] // Mol. Biol. Rep. 2014. No. 41 (5). P. 3369-3380.
29. Contribution of SELP and PSGL-1 genotypes and haplotypes to the presence of coronary heart disease in Tunisians / L. Ghazouani [et al.] // Mol. Biol. Rep. 2011. No. 38 (1). P. 495-501.
30. Андреенко Е.Ю. Изучение роли полиморфизма генов, контролирующих систему гемостаза и функцию эндотелия сосудов, в раннем развитии ишемической болезни сердца: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2010. 27 с.
31. Сироткина О.В. Молекулярно-генетические механизмы активации тромбоцитов и чувствительности к антиагрегантным препаратам: автореф. дис. ... д-ра биол. наук. СПб., 2011. 48 с.
32. Аксютина Н.В. Клинико-генетические предикторы возникновения ишемического инсульта у больных с фибрилляцией предсердий: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. Красноярск, 2014. 40 с.
33. Севостьянова К.С. Генетические факторы риска тромбоза глубоких вен нижних конечностей у хирургических пациентов: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Новосибирск, 2012. 19 с.
34. Жарков П.А. Влияние носительства протром-ботических полиморфизмов на риск развития тромбозов у детей: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2013. 25 с.
35. Комарова А.Г. Особенности реализации острой коронарной недостаточности у больных с полиморфизмом гена ITGB3: автореф. дис. ... канд. мед. наук. М., 2010. 24 с.
morphisms with myocardial infarction risk: a me-ta-analysis and meta-regression / Y.J. Zhao [et al.] // Mol Biol Rep. 2014. No. 41 (7). P. 45214532.
24. Ser128Arg gene polymorphism for E-selectin and severity of atherosclerotic arterial disease / G. Ghilardi [et al.] // J. Cardiovasc Surg (Torino). 2004. No. 45 (2). P. 143-147.
25. P-selectin polymorphisms' influences on P-selectin serum concentrations and on their familial correlation: the STANISLAS family study / J.B. Marteau [et al.] // J. Thromb Haemost. 2008. No. 6 (6). P. 920-927.
26. E-selectin S128R polymorphism leads to severe asthma / E. Nadi [et al.] // Iran J. Allergy Asthma Immunol. 2007. No. 6 (2). P. 49-57.
27. Polymorphic variant Ser128Arg of E-Selectin is associated with breast cancer risk and high grade tumors / R. Naidu [et al.] // Onkologie. 2011. No. 34 (11). P.592-597.
28. SELP genetic polymorphisms may contribute to the pathogenesis of coronary heart disease and myocardial infarction: a meta-analysis / D.H. Zhou [et al.] // Mol. Biol. Rep. 2014. No. 41 (5). P. 3369-3380.
29. Contribution of SELP and PSGL-1 genotypes and haplotypes to the presence of coronary heart disease in Tunisians / L. Ghazouani [et al.] // Mol. Biol. Rep. 2011. No. 38 (1). P. 495-501.
30. Andreenko E.Yu. The study of the role of polymorphisms of genes controlling hemostasis and vascular endothelial function in early development of coronary heart disease: Diss. abstract for the Cand. of Med. degree. M., 2010. 27 pp.
31. Sirotkina O.V. Molecular genetic mechanisms of platelet activation and sensitivity to antiplatelet drugs: Diss. abstract for the Doctor of Biol. degree. SPb., 2011. 48 pp.
32. Aksyutina N.V. Clinical and genetic predictors of ischemic stroke of patients having atrial fibrillation: Diss. abstract for the Doctor of Med. degree. Krasnoyarsk, 2014. 40 pp.
33. Sevostyanova K.S. Genetic risk factors for deep vein thrombosis of the lower extremities of surgical patients: Diss. abstract for the Cand. of Med. degree. Novosibirsk, 2012. 19 pp.
34. Zharkov P.A. Influence of carriage of prothrom-botic polymorphisms on the risk of thrombosis of children: Diss. abstract for the Cand. of Med. degree. M., 2013. 25 pp.
35. Komarova A.G. Features of realization of acute coronary insufficiency of patients having ITGB3 gene polymorphism. Diss. abstract for the Cand. of Med. degree. M., 2010. 24 pp.
