CC BY
57
Шабалдина Е.В., Кутенкова Н.Е., Шабалдин А.В.
Кемеровская государственная медицинская академия, Детская городская клиническая больница № 5, УРАН Институт вычислительных технологий СО РАН,
г. Кемерово
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С ГИПЕРТРОФИЕЙ ЛИМФОИДНОГО ГЛОТОЧНОГО КОЛЬЦА И АТОПИЧЕСКОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИЕЙ К УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЕ
Полиморфизм в генах цитокинов определяет индивидуальные особенности синтеза и биологической активности молекул цитокинов. Гипертрофия миндалин лимфоидного глоточного кольца и атопическая сенсибилизация к условнопатогенной микрофлоре являются признаками иммунной недостаточности. Настоящее исследование было посвящено изучению особенностей распределения аллелей и генотипов IL1Ra, IL1b, IL4 у детей раннего возраста с гипертрофией лимфоидного глоточного кольца и с сенсибилизацией к условно-патогенной микрофлоре. При сравнении частот аллелей и генотипов ILIRa, IL1b, IL4 41 ребенка контрольной группы с 43 детьми, имеющими изолированные аденоидные вегетации, с 35 детьми, имеющими выраженную гипертрофию небных и носоглоточной миндалины, а также с 41 ребенком, имеющим признаки системного лимфатизма, включающими тимомегалию, выявили ряд достоверных ассоциаций. Генотип IL1b*T,T и IL1Ra* 2R,2R достоверно чаще встречались у детей с изолированными аденоидными вегетациями. МЬ*С,Т и IL1Ra*2R,2R достоверно чаще встречались у детей с гипертрофией миндалин лимфоидного глоточного кольца и с системным лимфатизмом. Генотип Mb^T достоверно чаще встречался у детей с атопической сенсибилизацией к гемолитическому стрептококку и к синегнойной палочке. Для генотипов IL4 не выявлено достоверно значимых ассоциаций.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: полиморфизм генов цитокинов; гипертрофия миндалин лимфоидного глоточного кольца.
Shabaldina E.V., Kutenkova N.E., Shabaldin A.V.
Kemerovo State Medical Academy,
Children's city clinical hospital N 5,
Institute of Coal of the SB HAS, Kemerovo
POLYMORPHISM OF GENE OF CYTOKINES AT CHILDREN OF EARLY AGE WITH HYPERTROTHY
OF PHARYNGEAL LYMPHOID RING AND WITH ATOPIC SENSITIZATION TO OPPORTUNISTIC MICROFLORA
Polymorphism of gene of cytokines defines specific features of synthesis and biological activity of molecules of cytokines. The hypertrophy of almonds of pharyngeal lymphoid ring and an atopic sensitization to opportunistic microflora are signs of immune insufficiency. The real research was devoted to studying of features of distribution allele and genotypes of lL1Ra, IL1b,
IL4 at children of early age of c by a hypertrophy of almonds of pharyngeal lymphoid ring and with a sensitization to opportunistic microflora. At comparison of frequencies allele and genotypes of IL1Ra, IL1b, IL4 of 41 children of control group with 43 children, having the isolated vegetations of adenoide, with 35 children, having the expressed hypertrophy palatal and a nasopharyngeal almond, and also with 41 children, having signs of the system lymphatism, including a of increase of thymus, revealed a number of authentic associations. The genotype of IL1b*T,T and IL1Ra* 2R,2R authentically met at children the isolated vegetations of adenoide more often. IL1b*^ T and IL1Ra*2R,4R met at children a hypertrophy of almonds of a pharyngeal lymphoid ring and with system lymphatism authentically more often. The genotype of IL1b*G,T authentically met at children an atopic sensitization to a Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans and P. aeruginosa more often. For genotypes of IL4 it is not revealed authentically significant associations.
KEY WORDS: polymorphism of gene of cytokines; the hypertrophy of pharyngeal lymphoid ring.
Цитокины (интерлейкины) являются главными регуляторами иммунного ответа, синтезирующимися при антигенном воздействии на иммунокомпетентные клетки. Они определяют качество и направленность иммунного ответа, как правило, преимущественно по клеточному или по гуморальному типам. Известно, что естественный
Корреспонденцию адресовать:
ШАБАЛДИНА Елена Викторовна,
650003, г. Кемерово, пр. Ленинградский, д. 47а, кв. 108. Тел.: +7-951-163-90-11.
E-mail: [email protected]
полиморфизм в генах цитокинов определяет индивидуальные особенности синтеза и биологической активности молекул цитокинов [1, 2]. Именно с этим связывают развитие иммунопатологических конституций, таких как аллергический диатез и лимфатизм [3, 4]. Гипертрофия миндалин лимфоидного глоточного кольца и атопическая сенсибилизация к условно-патогенной микрофлоре (УПМ) являются признаками иммунной недостаточности, в том числе и при конституционально обусловленных состояних [5-7].
Цель настоящего исследования — изучение особенностей полиморфизмов в генах провоспалитель-
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С ГИПЕРТРОФИЕЙ ЛИМФОИДНОГО ГЛОТОЧНОГО КОЛЬЦА И АТОПИЧЕСКОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИЕЙ К УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЕ
ных и противовоспалительных цитокинов при различной степени выраженности лимфопролиферативного синдрома, включающего гипертрофию миндалин лимфоидного глоточного кольца и атопическую сенсибилизацию к представителям условно-патогенной микробиоты.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Для выполнения поставленных задач обследованы 129 детей с гипертрофией миндалин глоточного лимфоидного кольца, частой респираторной заболеваемостью (более 5 раз в год), а также с атопической сенсибилизацией хотя бы к одному представителю УПМ, и 41 условно-здоровый ребенок. Все обследованные дети находились в возрастном интервале 2-6 лет.
Критерии включения в основную группу: наличие у ребенка гипертрофии миндалин носоглоточного лимфоидного кольца II-III степени; наличие у ребенка рецидивирующих респираторных инфекций с частотой более 5 раз в год (В.А. Альбицкий, 1981); отсутствие у ребенка врожденной и хронической патологии [врожденные пороки (сердечно-сосудистой, дыхательной, мочеполовой, костно-мышечной систем, множественные пороки и т.д.); наследственные ферментопатии (муковисцидоз, дефицит альфа1-ан-титрипсина и т.д.); наследственные иммунодефициты (клеточные, гуморальные, фагоцитоза, комплемента и т.д.); хроническая патология легких (бронхоэкта-тическая болезнь и т. д.); атопическая сенсибилизация хотя бы к одному представителю условно-патогенной микрофлоры носоглоточного биотопа]; атопическая сенсибилизация исследовалась методом им-муноферментного анализа (ИФА) к Streptococcus (Str.) pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans, Staphylococcus (S.) aureus, S. epidermidis, Escherichia co-li, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Branchamella catarrhalis, Haemophilus influenza; возраст детей от 2 до 6 лет.
Дети основной группы были разделены на 3 подгруппы. В первую подгруппу были включены дети с аденоидными вегетациями II-III степени, с региональной лимфоаденопатией и гипертрофией небных миндалин, не превышающей I степени (n = 43). Во вторую подгруппу вошли дети с сочетанием гипертрофий носоглоточной (II-III степени) и небных (II-
IV степени) миндалин, а также с региональной и системной лимфоаденопатией (n = 35). В третью группу объединили детей с гипертрофией носоглоточного лимфоидного кольца аналогичной II подгруппе, но с обязательным катамнестическим документированием наличия у этих детей тимомегалии II-III степени (n = 41).
Представленное деление на подгруппы было связано с решением поставленных задач исследования. Для первой подгруппы имело место преимущественное поражение лимфоидной ткани носоглоточной миндалины (изолированные аденоидные вегетации), что могло быть вызвано конституционально обусловленными локальными нарушениями иммунитета. Вторую подгруппу можно отнести к локальному лимфатиз-му с преимущественным поражением лимфоидного глоточного кольца (ЛГК), что также может быть отражением определенной конституционально обусловленной иммунопатологии. Третья подгруппа — системный лимфатизм, для которого тимомегалия является большим диагностическим критерием, она отражает участие тимуса в антенатальных иммунных ответах и, как следствие, патологию клеточного иммунитета. В целом можно утверждать, что у детей основной группы имеет место иммунная недостаточность, которая клинически манифестирует через инфекционный синдром (частая респираторная заболеваемость), через различную степень выраженности лимфопролиферативного синдрома, а также через аллергический синдром, проявляющийся атопической инфекционной сенсибилизацией.
Критерии включения в группу сравнения: отсутствие у ребенка гипертрофии миндалин носоглоточного лимфоидного кольца; наличие у ребенка реци-вирующей респираторной патологии реже 4-х раз в год; отсутствие у ребенка врожденной и хронической патологии [врожденные пороки (сердечно-сосудистой, дыхательной, мочеполовой, костно-мышечной систем, множественные пороки и т.д.); наследственные ферментопатии (муковисцидоз, дефицит альфа-1-ан-титрипсина и т.д.); наследственные иммунодефициты (клеточные, гуморальные, фагоцитоза, комплемента и т.д.); хроническая патология легких (бронхоэкта-тическая болезнь и т.д.)]; отсутствие атопической сенсибилизации к УПМ; возраст детей от 2 до 6 лет.
Более 95 % детей в сравниваемых группах были представлены кавказоидами.
У всех обследованных детей забирали венозную кровь для проведения иммунологических исследований и выделения из лейкоцитов геномной ДНК. ДНК получали с помощью метода фенол-хлорофор-мной экстракции, образцы ДНК растворяли в 10 тМ Тпб/1 EDTA, pH 8,0 и хранили при 4°С.
Специальные методы исследования включали:
Типирование генов антагониста рецептора интерлейкина 1 (IL1Ra), гена интерлейкина 4 (IL4), гена интерлейкина 1Ь (IL1b). Исследование полиморфизмов интерлейкинов проводили из аутосомной ДНК с помощью полимеразно-цепной реакции (ПЦР) с праймерами, фланкирующими ис-
Сведения об авторах:
ШАБАЛДИНА Елена Викторовна, канд. мед. наук, доцент, зав. кафедрой оториноларингологии, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России, г. Кемерово, Россия. E-mail: [email protected]
КУТЕНКОВА Наталья Евгеньевна, врач аллерголог-иммунолог, МУЗ ДГКБ № 5, г. Кемерово, Россия.
ШАБАЛДИН Андрей Владимирович, доктор мед. наук, ст. науч. сотрудник, лаборатория геоэкологии и водных ресурсов, УРАН Институт вычислительных технологий СО РАН, г. Кемерово, Россия. E-mail: weit2GG7@ yandex.ru
■ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С ГИПЕРТРОФИЕЙ ЛИМФОИДНОГО ГЛОТОЧНОГО КОЛЬЦА И АТОПИЧЕСКОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИЕЙ К УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЕ
комый полиморфный регион. Для IL1Ra и IL4 — макросателлитный полиморфизм в пределах второго интрона. Для SNP IL1B (+3953, С->Т) использовали дополнительно рестрикцию рестриктазой TaqI. Электрофорезы продуктов амплификации различных аллелей исследуемых генов представлены на рисунках 1-3.
Иммуноаллергологическое исследование
проводили с помощью ИФА. Исследования проводили согласно прилагаемым инструкциям. Панель аллергенов для выявления атопической сенсибилизации составляла 88 показателей: 11 бытовых аллергенов, 33 пищевых аллергена, 22 пыльцевых аллергена, 11 грибковых аллергенов и 11 инфекционных аллергенов. Инфекционная панель включала Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans, S. aureus, S. epi-dermidis, E. coli, P. aeruginosa, Prot. vulgaris, Kl. pneumoniae, Br. catarrhalis, H. influenzae. Уровень сенсибилизации отражали по классам: 0 класс — антитела класса Е (АТЕ) ниже 10 нг/мл, I класс — АТЕ в пределах 11-25 нг/мл, II класс — АТЕ в пределах
Рисунок 1
Электрофореграмма продуктов амплификации VNTR IL1Ra в 6%-ном полиакриламидном геле. Дорожки обозначены полученными генотипами, (вверху обозначены аллели и маркер молекулярного веса ДНК плазмиды pBluscriptSKII гидролизованная эндонуклеазой рестрикции MspI)
26-50 нг/мл, III класс — АТЕ в пределах 51-100 нг/мл, IV класс — АТЕ свыше 100 нг/мл. Считали наличие у ребенка атопической реакции на аллерген при выявлении у него аллерген-специфических антител класса Е свыше 20 нг/мл. При выявлении поливалентной аллергии с очень высокой концентрацией аллерген-специфических антител класса Е проводили повторные исследования на глистную инвазию.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью стандартных генетико-статистических методов, используя пакет прикладных програм «Statistica for WINDOWS 5.0». В соответствии с равновесием Харди-Вайнберга провели сопоставление частот аллелей и генотипов генов цитокинов в исследуемых подгруппах и в группе сравнения с помощью критерия Фишера для малых выборок и поправкой Йетса на непрерывность [8]. По аналогии с исследованиями «HLA и болезни», исследовали положительные и отрицательные ассоциации с отдельными аллелями, генотипами и их сочетаниями (Коненков В.И., 2001); для каждого по-
Рисунок 2
Электрофореграмма продуктов амплификации VNTR IL4 в 6%-ном полиакриламидном геле.
Дорожки обозначены полученными генотипами, (вверху обозначены аллели и маркер молекулярного веса ДНК плазмиды pBluscriptSKII, гидролизованной эндонуклеазой рестрикции MspI)
3R 2R/3R м.в.
L-*
- j -1
Information about authors:
SHABALDINA Elena Viktorovna, candidate of medical sciences,, managing chair of otorhinolaryngology, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: [email protected]
KUTENKOVA Natalia Evgenevna - the allergist-immunologist of Children's city clinical hospital №5, Kemerovo, Russia.
SHABALDIN Andrey Vladimirovich, doctor of medical sciences, the leading research assistant, laboratory of geoecology and water resources of Institute of coal of the Siberian Branch of the Russian Academy of Science, Kemerovo, Russia. E-mail: [email protected]
Рисунок 3
Электрофореграмма продуктов рестрикции И-1Р в 8%-ном полиакриламидном геле.
Дорожки обозначены полученными генотипами, (вверху обозначены аллели и маркер молекулярного веса ДНК плазмиды pBluscriptSKII, гидролизованной эндонуклеазой рестрикции MspI)
т * '
т сп с < ас сгтосп.к
лученного достоверно значимого различия рассчитывали относительный фактор риск (RR) и его доверительный интервал (С1) при 95%-ном уровне значимости. Ассоциацию считали положительной, если RR был больше 2. Результаты считали достоверными при ошибке менее 5 %, что соответствует медико-биологическим исследованиям [8].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
На первом этапе исследования провели сравнение частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфизма ^1Ь+3953 (3 экзон) в трех основных группах и в группе сравнения (табл. 1). Выявили, что частоты аллелей данного полиморфизма были сопоставимы во всех группах (р >
0,05). В то же время, для генотипов был получен ряд достоверных различий. Прежде всего, в группе детей с изолированными аденоидными вегетациями достоверно чаще, чем в группе сравнения, встречался генотип ^1Ь*Т,Т (24,24 % против 5,00 %, р < 0,05). В группе пациентов с локальным лимфатизмом ЛГК наиболее частым был генотип ^1Ь*С,Т, поэтому критерию была достигнута достоверность различий с группой сравнения (55,17 % против 27,50 %, р <
0,05). Надо отметить, что и у пациентов с
системным лимфатизмом также доминировал генотип IL1b*C,T. Частота встречаемости этого генотипа в группе детей с системным лимфатизмом была достоверно выше, чем в группе сравнения (58,54 % против 27,50 %, p < 0,05).
Рассматривая роль выявленных положительных ассоциаций с позиции детерминирования иммунной недостаточности, можно отметить следующее. Полиморфизм IL1b*+3953 находится в экзоне и, тем самым, замена одного нуклеотидного основания на другое приводит к изменению структуры молекулы IL1b, а значит и ее функции [1]. Показано, что в популяции доминирует С аллель и генотип CC полиморфизма IL1b*+3953, такое доминирование обозначается как мажорный генотип и аллель. Соответственно, аллель Т и генотип ТТ являются минорными. Кроме того, в ряде работ сообщается, что у пациентов, гомозиготных по Т аллелю, имеет место снижение активности IL1b [9]. Тем самым, вполне обоснованным является высокая частота встречаемости пациентов с Т аллелем в генотипе в основной группе, где, как говорилось выше, манифестирует иммунная недостаточность.
Далее в сравниваемых группах рассмотрели особенности распределения аллелей и генотипов полиморфизма рецепторного антагониста интерлейкина 1 (IL1RaN). Данный полиморфизм находится во втором интроне и связан с макросателлитными повторами в 86 пар нуклеотидных оснований (bp). Описано четыре возможных аллеля с двумя повторами (repeat — 2R), с тремя (3R), с четырьмя (5R) и с пятью (5R) [10]. Частоты данных аллелей в сравниваемых группах достоверно не отличались. Основные отличия были связаны с генотипами. Так, в группе детей с изолированными аденоидными вегетациями достоверно чаше встречался генотип IL1Ra*2R,2R (21,21 % против 5,00 % в группе сравнения, p < 0,05). При сравнении особенностей генетического полиморфизма в группах детей с локальным лимфатизмом ЛГК и системным лимфатизмом выявлены одинаковые достоверности. Так, в обоих подгруппах достоверно чаще, чем в группе сравнения, встречался генотип IL1Ra*2R,4R (58,62 % в группе с локальным лимфатизмом ЛГК, 43,90 % в группе с системным лимфатизмом против 27,50 % в группе сравнения, p < 0,05 для обеих комбинаций). Других достоверных различий не получено.
Таблица 1
Частота встречаемости генотипов полиморфизма И1Ь*+3953 в группах детей с различной степенью выраженности лимфопролиферативного синдрома иммунной недостаточности
Изолированные Группа Локальный Системным
МЬ*+3953 аденоидные
, , сравнения лимфатизм ЛГК лимфатизм
(3 экзон) , ,,, вегетации , , ,,,
(п = 41) ^ (п = 35) (п = 41)
(п = 43)
Генотипы абс. % абс. % абс. % абс. %
СС 27,GG 67,5G 18,GG 54,55 1G,GG 34,48 12,GG 29,27
СТ 11,GG 27,5G 7,GG 21,21 16,GG 55,17* 24,GG 58,54*
TT 2,GG 5,GG 8,GG 24,24* 3,GG 1G,34 5,GG 12,2G
Примечание: * p < G,G5.
■ ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С ГИПЕРТРОФИЕЙ ЛИМФОИДНОГО ГЛОТОЧНОГО КОЛЬЦА И АТОПИЧЕСКОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИЕЙ К УСЛОВНО-ПАТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЕ
Таблица 2
Частота встречаемости генотипов полиморфизма ИШа*М (УИТР в группах детей с различной степенью выраженности лимфопролиферативного синдрома иммунной недостаточности
IL1RaN (VNTR 2 intron) Группа сравнения (n = 41) Изолированные аденоидные вегетации (n = 43) Локальный лимфатизм ЛГК (n = 35) Системный лимфатизм (n = 41)
Генотипы абс. % абс. % абс. % абс. %
2R,2R 2,00 5,00 7,00 21,21* 4,00 13,79 4,00 9,76
2R,3R 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
2R,4R 11,00 27,50 8,00 24,24 17,00 58,62* 18,00 43,90*
2R,5R 0,00 0,00 1,00 3,03 1,00 3,45 2,00 4,88
3R,3R 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
3R,4R 0,00 0,00 0,00 0,00 1,00 3,45 1,00 2,44
3R,5R 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
4R,4R 27,00 67,50 17,00 51,52 6,00 20,69 16,00 39,02
4R,5R 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
5R,5R 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
Примечание: * р < 0,05.
Механизм влияния интронных макросателлитов на экспрессию гена достаточно широко описаны в литературе. Отправной точкой в этих рассуждениях является факт, что интрон с пятью тандемами длиннее интрона с двумя повторами, именно это и лежит в основе регуляции синтеза цитокина. Так, считается, что «длинный интрон» тормозит сплайсинг гена, а «короткий», наоборот, его активирует. Тем самым, трансляция с гена на синтез белка будет замедляться при увеличении кратности пар нук-леоитидных оснований [11]. С этих позиций у лиц, имеющих короткие интроны 2R,2R, активность синтеза рецепторного антагониста интерлейкина 1 является самой высокой. Если учесть факт, что данный цитокин является основным негативным регулятором ^1Ь, то вполне понятным является ограничение выработки ^1Ь у лиц с генотипом IL1Ra*2R,2R. Данный феномен описан в литературе [12]. Тем самым, снижение активности ^1Ь при изолированных аденоидных вегетациях детерминируется сразу по двум генам семейства интерлейкина 1. Это необходимо учитывать при назначении локальной иммуномодулирующей терапии. Для локального и системного лимфатизма показана положительная ассоциация с гетерозиготой IL1Ra*2R,4R, как и ранее — с гетерозиготой по гену ^1Ь*С,Т. В обеих гетерозиготах присутствовали гены, понижающие выработку ^1Ь (напрямую аллель Т — ^1Ь; и опосредовано через гиперсинтез ^Ша — аллель 2R). В то же время, гетерозиготные генотипы широко представлены в некоторых популяциях и даже обсуждается эволюционная целесообразность гетерозиготности в целом, с этих позиций локальный и системный лимфатизм навряд ли можно считать состояниями, детерминированными по генам семейства интерлейкина 1. Вполне возможно, что в формировании локального и системного лимфатизма основную роль оказывает микробное микроокружение матери, плода, новорожденного ребенка. А минорные аллели, входящие в состав
гетерозиготных генотипов, лишь усиливают неэффективность первичного иммунного распознавания антигенов условно-патогенных микроорганизмов носоглоточного биотопа.
При сравнении аллелей и генотипов инт-ронного макросателлитного полиморфизма гена IL4 достоверных различий между сравниваемыми группами не обнаружили.
Как уже говорилось выше, в критерии отбора в основную группу входила атопическая сенсибилизация к представителям УПМ носоглоточного биотопа. Так, атопическая сенсибилизация к стрептококкам (Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans) с уровнем специфических антител класса Е в сыворотке крови свыше 25 нг/мл встречалась у 92,4 % пациентов основной группы. Второй по частоте встречаемости была выраженности атопическая сенсибилизация средней и более степени к P. aeruginosa (20,2 %). Тем самым, можно утверждать, что эти возбудители оказывали существенный вклад в формирование частой респираторной заболеваемости не только посредством своего пер-систирования, но и за счет развития на их антигены атопических реакций поддерживающих аллергическое воспаление в носоглотке. С этих позиций провели оценку встречаемости аллелей и генотипов исследуемых полиморфизмов среди пациентов основных подгрупп, имеющих атопическую сенсибилизацию к выше указанным представителям УПМ. В качестве сравнения использовали детей контрольной группы и представителей основной группы, но без выше перечисленных атопических сенсибилизаций.
При сравнении частот встречаемости аллелей и генотипов у детей с атопическими сенсибилизациями к стрептококкам и синегнойной палочке с детьми без этих атопий были выявлены достоверные различия лишь в частотах встречаемости генотипов полиморфизма IL1b*+3953 (табл. 3). Так, у детей с атопическими реакциями на антигены стрептококков (Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans) и на антигены P. aeruginosa достоверно чаще встречался генотип IL1b*C,T (46,77 % и 47,06 %, соответственно, против 28,57 % в группе сравнения, p < 0,05).
Как уже говорилось выше, гетерозиготный генотип IL1b*C,T содержит минорный аллель Т, который оказывает влияние на функциональную активность молекулы IL1b. Этот цитокин является ведущим медиатором иммунного ответа и главной секреторной молекулой в семействе интерлейкина 1 [1]. Известно, что в данном семействе имеется еще и интерлейкин 1-альфа (IL1a), который участвует во внутриклеточных регуляциях и поэтому представлен, в основном, не секреторной формой. Тем самым, именно IL1b обеспечивает второй сигнальный импульс, после антигенного воздействия (первый сигнальный импульс), на развитие специфического иммунного ответа [3]. Соответственно, у лиц, имеющих в генотипе один мажорный аллель (нормальная функция цитокина), а другой минорный (сниженная функция
Таблица 3
Частота встречаемости генотипов полиморфизма И1Ь*+3953 в группах детей с атопическими реакциями к различным представителям УПМ носоглоточного биотопа
IL1b*+3953 (3 экзон) Контроль (n = 50) Аллергия на стрептококки (n = 110) Аллергия на синегнойную палочку (n = 24)
Генотипы абс. % абс. % абс. %
СС 8,00 57,14 24,00 38,71 7,00 41,18
СТ 4,00 28,57 29,00 46,77* 8,00 47,06*
TT 2,00 14,29 9,00 14,52 2,00 11,76
Примечание: * p < 0,05.
цитокина), активация иммунного ответа против запредельных концентраций представителей УПМ может проходить по аллергическому типу. Здесь надо отметить, что первичное сверхпороговое инфицирование детей УПМ и, особенно, таким ее представителем, как синегнойная палочка, вполне вероятно приходится на интранатальный и ранний постнатальный период и связано с инфицированием этими представителями УПМ матерей или микроокружения родильных домов. В целом эти данные подтверждают, что формирование иммунной недостаточности и, особенно, лимфопролиферативного синдрома обусловлено не только генетическими факторами, но и сформированным микробным микроокружением.
Таким образом, полученные результаты показали, что развитие изолированных аденоидных вегетаций имеет положительные ассоциации с гомозиготными генотипами ^1Ь*Т,Т и IL1Ra*2R,2R. Оба
эти генотипа способствуют ограничению функциональной активности основного медиатора инициации иммунного ответа IL1b. Поэтому патогенетически обусловленным может быть локальное применение рекомбинантного интерлейкина в консервативном лечении гипертрофии носоглоточной миндалины. Развитие локального и системного лимфатизма связано не только с генетическим детерминированием по генам семейства интерлейкина 1 (положительные ассоциации с гетерозиготными генотипами IL1b*C,T и IL1Ra*2R,4R), но и с инфекционными факторами, в частности, с высоким уровнем атопических реакций к антигенам стрептококков (Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans) и синегнойной палочке. Причем, развитие аллергических реакций на Str. pyogenes, Str. pneumoniae, Str. mutans и P. aeruginosa детерминировано этими же генотипами (IL1b*C,T и IL1Ra*2R,4R). Соответственно, локальная иммунотерапия гипертрофий миндалин лимфоидного глоточного кольца при лимфатизме должна включать противоспалительные препараты, в том числе топические стероиды, местные антибактериальные средства, а также мукозальную вакцинацию на фоне адью-вантной терапии.
В целом проведенное исследование показало, что различные проявления гипертрофии миндалин лимфоидного глоточного кольца имеют свои иммуноге-нетические особенности, а также могут быть следствием аллергического воспалительного процесса, поддерживаемого атопическими реакциями на антигены стрептококков и синегнойной палочки. Это надо учитывать при назначении консервативной топической терапии, в том числе иммуномодулирующей.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Симбирцев, А.С. Биология семейства интерлейкина-1 человека /Симбирцев А.С. //Иммунология. - 1998. - № 3. - С. 9-17.
2. Симбирцев, А.С. Функциональный полиморфизм генов регуляторных молекул воспаления /А.С. Симбирцев, А.Ю. Громова //Ци-токины и воспаление. - 2005. - Т. 4, № 2. - С. 3-11.
3. Клиническая иммунология и аллергология (I том) /под ред. Л. Йегер - М., 1986. - 436 с.
4. Ровда, Ю.И. Проблема лимфатизма в педиатрии /Ю.И. Ровда, И.В. Силантьева //Мать и дитя в Кузбассе. - 2011. - № 1. - С. 3-9.
5. Особенности иммунного и цитокинового статусов у детей с гипертрофией лимфоидного глоточного кольца и сопутствующей аллергией к инфекционным антигенам /Е.В. Шабалдина [и др.] //Рос. оториноларингология. - 2012. - № 2. - С. 118-123.
6. Особенности сенсибилизации детей с гипертрофией носоглоточной миндалины и сопутствующим аллергическим диатезом /Н. Е. Ку-тенкова [и др.]. //Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии - междисциплинарные проблемы: Труды межрегион. форума. - СПб., 2010. - С. 155-157.
7. Тимчук, Л.Э. Роль функционального полиморфизма генов IL-1b и IL-1RA в иммунопатогенезе и лечении хронического гнойного ри-носинусита /Л.Э. Тимчук: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - СПб., 2007. - 153 с.
8. Лакин, Г.Ф. Биометрия /Лакин Г.Ф. - М., 1990. - 352 с.
9. Шкаруба, Н.С. Аллельный полиморфизм генов IL1b, TNF и его рецепторов у больных ревматоидным артритом и эффективность ан-
тицитокиновой терапии /Н.С. Шкаруба: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Новосибирск, 2012. - 114 с.
10. The interleukin-1 receptor antagonist gene: a single-copy variant of the intron 2 variable number tandem repeat (VNTR) polymorphism /J.E. Vam-vakopoulos [et al]. //Eur. J. of Immunogenetics. - 2002. - V. 29. - Р. 337-340.
11. Interleukin-1 receptor antagonist: Role in Biology /W.P. Arend [et al]. //Annu. Rev. Immunol. - 1998. - V. 16. - P. 27-55.
12. Santtila, S. Presence of the IL-1RA allele 2 (IL1RN*2) is associated with enhanced IL-1beta production in vitro /S. Santtila, K. Savinainen, M. Hur-
me //Scand. J. Immun. - 1998. - V .47, N 3. - P. 195-198.
