CC BY
11
DOI 10.29254/2077-4214-2017-4-3-141-203-208 УДК: 618.19-006:616-001. 28:575 (083.13)
Полник С. I., Рибченко Л. А., Захарцева Л. М., Клименко С. В.
ПОЛ1МОРФ1ЗМ ГЕНА LSP1 У ХВОРИХ Ж1НОК НА РАК
МОЛОЧНОТ ЗАЛОЗИ З УКРАТНИ
ДУ «Нацюнальний науковий центр радiацiйноí медицини НАМНУ»
(м. Кшв)
Робота виконана в межах НДР «Порiвняльне дослщження генетично! схильностi до розвитку раку молочно! залози у жшок, якi зазнали дiI юызуючо! радiацiI внаслiдок аварiI на ЧАЕС», № державно! ре-eстрацii 0114U002848.
Вступ. Незважаючи на поширенiсть i вираже-нiсть раку молочно! залози, точний мехаызм, що ле-жить в основi iнiцiювання та прогресування раку молочно! залози, до цих тр не е повнiстю зрозумтим. Рак молочно! залози викликаний взаемодiею рiзних генетичних факторiв та навколишнього середови-ща [21,26]. Фiзiологiчнi змшы, такi як репродуктив-нi чинники, гормональна стимуля^я, висока вага при народжены, ожирiння, фiзична бездiяльнiсть та вживання алкоголю, е визнаними факторами ризи-ку раку молочно! залози [8,9,20]. ^м того, мутаци дтянок у деяких високо- та середньо пенентрант-них генах, включаючи BRCA1, BRCA2, PTEN, TP53, CHEK2, ATM, BRIP1 i PALB2, пов'язан з високим i середнiм ризиком раку молочно! залози [12,19]. Проте, мутаци в цих генах пояснюють лише 25% ри-зику раку молочно! залози [23].
Генетичн полiморфiзми (SNP) в деяких генах можуть змшювати експресiю мРНК та бiлка, а отже, впливати на сприйнятливють до раку. Нещодавне вивчення асоцiацii геномiв (GWAS) виявило SNPs у 5 низько пенентрантних генах як додатковi фактори сприйнятливостi з високою частотою та подтвердило !х зв'язок з раком молочно! залози [11]. Один з цих геыв, лiмфоцит специфiчний бiлок 1 (LSP1), розта-шований на хромосомi 11p15.5. Вiн кодуе бток ци-тоскелетного бiлка, який виражаеться в гемопое-тичних та ендотелiальних клiтинах [11,12]. Виявлено багато полiморфiзмiв в генi LSP1, i один з найбiльш поширених полiморфiзмiв, LSP1 rs3817198 T> C, був широко вивчений для його потенцмного зв'язку з ризиком раку молочно! залози. Ктька публкацм повщомляють про значну асоцiацiю полiморфiзму LSP1 rs3817198 T> C з ризиком раку молочно! залози [3,4,14].
Однак mini дослщження не змогли пщтвердити подiбну асоцiацiю [5,17,24]. Chen et al. [7] провели мета-аналiз у 2010 роцi i зробили висновок, що пол^ морфiзм LSP1 rs3817198 T> C був суттево корельо-ваний з ризиком раку молочно! залози. Проте в той час було доступно лише Ым доогмджень. З тих тр ви-никли новi дослiдження з вивчення випадюв захво-рювання при оцшц асоцiацii [4,5,15,18,22].
Метою роботи було дослщити частоту пол^ морфiзму rs3817198 гена LSPly жiнок pi3Horo BiKy з Укра!ни, хворих на рак молочно! залози.
Об'ект i методи дослщження. Основну групу хворих було сформовано з 158 жшок вком 35-60 роюв з дiагнозом РМЗ, який був пщтверджений пс-тологiчно. Для визначення особливостей ктычного перебiгy захворювання були вивченi icторi! хвороби i медичнi картки хворих, створена комп'ютерна база даних. Основну групу роздтили на першу групу хворих, яку склали жшки з радiацiйним анамнезом i на другу, до яко! yвiйшли жiнки без радiацiйного анамнезу. До групи порiвняння (третя група) включили 57 практично здорових жшок ствставного вiкy.
Першу i другу групу роздiлили вщповщно до вiкy на двi групи < 40-50 рокiв та 51-60 роюв.
Для молекулярно-генетичного доcлiдження ви-користовували зразки периферiйно! кровi. Вид^ лення ДНК здiйcнювали за стандартним методом з використанням набору NeoPrep100 DNA Magnet (NeoGene, Укра!на). Також геномна ДНК екстрагува-лася iз фiкcованих формалiном i залитих парафшом тканин з використанням набору для видтення ДНК Quiamp DNA Mini Kit (Quiagen, Hilden, Ымеччина).
Генотипування полiморфних маркерiв rs3817198 гена LSP1, проводили методом алель-cрецифiчно! ПЛР з детек^ею резyльтатiв в режимi реального часу на амплiфiкаторi LightCycler II (Roche, Швейцарiя) з використанням cпецифiчних праймерiв та зондiв. Зонди мають флуоресцентну модифiкацiю та барв-ник-гасник (квенчер), який пригычуе флюоресцен-цю до тих пiр, поки ДНК-полiмераза, завдяки сво!й екзонyклеазнiй активноcтi не вивтьнить флуорохром в процеci елонгаци продукту ПЛР Кожен крок супро-воджувався рееcтрацiею флуоресцентного сигналу в дiапазонах, вiдповiдних iнтервалам флюоресценцй' флyорофорiв. Праймери для полiмеразно! ланцюго-во! Праймер для визначення полiморфiзмy rs3817198 гена LSP1, cинтезованi фiрмою «TIB MOLBIOL» (Hi-меччина), представлен в таблицi 1.
Реакцiйна сумш складалася iз зондiв виготов-лених фiрмою Roche Diagnostics (Hiмеччина). Амп-лiфiкацiю проводили в наступних умовах: початкова денатура^я 10 хв. при 95оС; 45 циклiв амплiфiкацi!, як екcпоненцiально збiльшyють кiлькicть амплiконiв для молекулярного аналiзy та включають денатура-цiю при 95оС - 10 с, реасо^ащю при 60оС - 10 с, синтез при 72оС 15 с; плавлення за температури 95оС - 20 с, 40оС - 40 с та; охолодження при 40оС - 30 с. Пюля закiнчення реакцi! амплiфiкацi! проводили
Таблиця 1.
Праймери для визначення полiморфiзму rs3817198 гена LSP1
Праймер Послiдовнiсть (5' ^ 3')
Прямий TCACCTG ATAC CAGATTC AAAC TCTC
Зворотшй GCTCATTTCACTAGAGTCAGCCCGG
облiк i аналiз одержаних результатiв згiдно рекомен-дацм фiрми-виробника.
Пошук мутацiй вiдбувався за допомогою методу ПЛР та аналiзу точки температурного плавлення Tm отриманих амплiконiв. Реакцiю ПЛР проводили з використанням реактивiв фiрми «TIB MOLBIOL» (ЬПмеччина). Змщення точки плавлення свщ-чило про змiни в нукле-отиднiй послiдовностi амплiкону. Аналiз точки Tm проводили за допомогою програми Light Cycler Software (build 4.1.1.21.) (Roche, Швей-царiя). Статистичн роз-рахунки виконували за допомогою пакету програми StatPlus Pro.
Визначення частоти полiморфних алелей та вщповщност розподiлу генотипiв оцЫювали за рiвнянням Хардi-Вайнберга. Силу асо^ацм алелiв, генотипiв та 1х сполучень за полiморфними варiан-тами геыв, що вивчались, з ризиком розвитку захво-рювання оцiнювали за величиною вщношення шан-сiв (ВШ) (odds ratio, OR) у межах 95%-го довiрчого штервалу (confidence interval, CI) за допомогою за допомогою методiв варiацiйноI статистики, прийня-тих для бюлопчних дослiджень [1,2] i рекомендова-них для обробки результатiв молекулярно-генетич-них дослiджень розраховували за рекоменда^ями Бабич i спiвавт [2].
Результати дослщження та 'Гх обговорення. У результатi проведеного молекулярно-генетичного аналiзу ДНК у 158 хворих на РМЗ (у 80 та 78 пащен-^в з радiацiйно-обумовленим та спонтанним РМЗ, вщповщно) та 57 пащетчв без РМЗ встановлено генотипи щодо полiморфiзму rs3817198 гена LSP1. Встановлений розподт генотипiв i алелей за пол^ морфним варiантом rs3817198 гена LSP1у першiй та друпй групах вiрогiдно не вiдрiзнявся вщ теоретично очiкуваного щодо рiвноваги Хардi-Вайнберга (табл. 2).
При аналiзi частоти полiморфного локусу rs3817198 гена LSP1 у вЫх обстежених жшок, неза-лежно вiд вiку частота мшорного алелю становила 53,16%. Розподт генотитв i частот алелей даного полiморфiзму представлено на рисунку.
За результатами молекулярно-генетичного тес-тування та статистичних розрахунюв встановлено розподiл генотитв та алелей генетичного полiмор-фiзму rs3817198 гена LSP1 серед жшок хворих на
РМЗ з юызуючим випромiнюванням в анамнезi та без нього порiвняно з контрольною групою, якi були подiленнi також на двi вiковi групи (табл. 3). Також для доотджуваного полiморфного локусу наведен результати статистичного обчислення вщносного ризику за рецесивною та домшантною моделями (табл. 3).
Аналiз розподiлу генотипiв генетичного полiмор-фiзму гв3817198 гена ЬБР1 показав статистично в^ рогiднi вщмшност для двох вiкових груп жшок хворих на РМЗ з радiацiйним анамнезом (вiком < 40-50 роюв *2=10,89; р=0,001 та вком 51-60 рокiв *2=10,24; р=0,001).
Частота генотипу ТТ серед жiнок I та II групи вком
< 40-50 роюв становила 44,4% та 40,9% вщповщно. В контрольна rpyni частота генотипу ТТ становила 37,5%. Не виявлено значних вщмшностей i в частотi Т алелi у rpyni жшок вком <40-50 I, II та контрольна rpyni, 55,6, 61,4 та 64,1% вщповщно. Частота гетерозиготного генотипу в групах жшок вком < 40-50 хворих на РМЗ з pадiацiйним анамнезом (22,2%) та жшок хворих на РМЗ без pадiацiйного анамнезу (40,9%) була нижчою поpiвняно з контрольною групою (53,1%).
Проведення статистичного обчислення вщношення шанЫв (OR) виявило пщвищення ризику появи раку молочно! залози при наявност генотипу полiмоpфного локусу rs3817198 гена LSP1y жшок вiком < 40-50 з pадiацiйним випpомiнюванням в анамнезi (OR=1,33), межi довipчого iнтеpвалy скла-ли (С195%: 0,50-3,52). Отpиманi нами результати свщчать про асоцiацiю генетичного полiмоpфiзмy rs3817198 гена LSP1 у жшок вiком < 40-50 хворих на РМЗ з pадiацiйним анамнезом.
У результат проведених дослiджень T.V Gorodnova et al. зробили висновок, про те що наяв-нiсть генотипу полiмоpфного локусу rs3817198 гена LSP1у жiнок асоцiацiю з пщвищеним ризиком РМЗ i також пщтверджено в кiлькох незалежних досл^ дженнях [14].
Так, у pоботi Celine M. Vachon et al. поpiвнювали асоцiацiю локусу rs3817198 гена LSP1 та вковими групами жiнок хворих на РМЗ (p=0,04) [25].
За результатами молекулярно-генетичного ана-лiзy генетичного полiмоpфiзмy rs3817198 гена LSP1
Рис. Розподш генотип1в i частот алелей rs3817198 гена LSPly досл1джуваних когортах.
Таблиця 2.
Частота генотишв та алелiв полiморфного локусу гб3817198 гена ЬБР1 серед пащен^в з раком молочно'Г залози з радiацiйним анамнезом та без нього
Генотипи/алелi Частота алелiв та генотитв,%
Хворi на РМЗ з радiацiйним анамнезом Хворi на РМЗ без радiацiйного анамнезу Контролына група
N Фактична частота HWE I2 Р N Фактична частота HWE !2 Р N Фактична частота HWE г2 Р
вком < 40-50 роюв
CC 12 33,3 19,8 8 18,2 14,9 3 9,4 12,9
CT 8 22,2 49,4 10,89 0,001 18 40,9 47,4 0,83 0,36 17 53,1 46,0 0,76 0,38
TT 16 44,4 30,9 18 40,9 37,7 12 37,5 41,0
C 32 44,4 34 38,6 23 35,9
T 40 55,6 54 61,4 41 64,1
вком 51-60 рQкiв
CC 6 13,6 5,2 4 11,8 7,0 3 12,0 10,2
CT 8 18,2 35,1 10,24 0,001 8 29,4 38,9 2,03 0,15 10 40,0 43,5 0,16 0,69
TT 30 68,2 59,7 18 58,8 54,1 12 48,0 46,2
C 20 22,7 18 26,5 16 32,0
T 68 77,3 34 73,5 34 68,0
Примггка. N - кшыгасты спостережень; НИЕ (На^у-ИетЬегд едиШЬг1ыт) - теоретично с^кувана частота при рiвновазi Хардi-Вайнберга.
статистично Б1ропдних В1дм1нностей у частотах ге-нотип1в I алел1в не встановлено н1 у гругм ж1нок хво-рих на РМЗ з рад1ац1йним анамнезом, н1 у жшок хво-рих на РМЗ без рад1ац1йного анамнезу в1ком 51-60 роюв.
Генотип ТТ у груп1 ж1нок хворих на РМЗ з рад1а-ц1йним анамнезом та без рад1ац1йного анамнезу траплявся з бтышою частотою (68,2 I 58,8%), н1ж у контролын1й груп1 (48,0%), хоча в дослщних гру-пах виявилося менше гетерозитот за генотипом СТ (18,2 та 29,4% при 40,0% в контрольна груп1). Встановлено вищу частоту алеля Т у груп1 ж1нок хворих на
РМЗ з рад1ац1йним анамнезом (77,3%) та нижчу частоту в груп1 ж1нок 1з РМЗ без рад1ац1йного анамнезу (73,5%) пор1вняно з контрольною групою (68,0%) (табл. 2).
Як свщчаты резулытати обчислення показника вщношення шанс1в, наявн1сты генотипу ТТ не асоц1-юетыся з ризиком виникнення раку молочно! залози у ж1нок з рад1ац1йним анамнезом (ОЯ=2,32 (С195% 0,85-6,37)) та без ныого (ОЯ=1,55 (С195% 0,55-4,38)) у в1ц1 51-60 роюв.
Ген ЬБР1 кодуе бток з комплектування Р-асИп, який експресуетыся в л1мфоцитах, нейтроф1лах I
Таблиця 3.
Розподш генотипiв та алелiв полiморфного локусу гб3817198 гена ЬБР1 серед пащен^в з раком молочноГ залози з радiацiйним анамнезом та без нього порiвняно з контрольною групою
Генотипи алелi Контрольна група (n=57) Хворi на РМЗ з радiацiйним анамнезом (n=80) Хворi на РМЗ без радiацiйного анамнезу (n=78)
n (%) n (%) г2 Р OR (95% CI) n (%) г2 Р OR (95% CI)
вком < 40-50 роюв
CC 3 (9,4) 12 (33,3) 4,83 (1,22-19,13) 8 (18,2) 2,15 (0,52-8,84)
CT 17 (53,1) 8 (22,2) 9,01 0,01 0,25 (0,09-0,72) 18 (40,9) 1,65 0,44 0,61 (0,24-1,53)
TT 12 (37,5) 16 (44,4) 1,33 (0,50-3,52) 18 (40,9) 1,15 (0,45-2,94)
C 23 (35,9) 32 (44,4) 1,02 0,31 1,43 (0,71-2,84) 34 (38,6) 0,12 0,73 1,12 (0,58-2,19)
T 41 (64,1) 40 (55,6) 0,70 (0,35-1,40) 54 (61,4) 0,89 (0,46-1,74)
вком 51-60 роюв
CC 3 (12,0) 6 (13,6) 1,16 (0,26-5,10) 4(11,8) 0,98 (0,20-4,82)
CT 10 (40,0) 8 (18,2) 4,01 0,13 0,33 (0,11-1,01) 8(29,4) 0,79 0,67 0,63 (0,21-1,86)
TT 12 (48,0) 30 (68,2) 2,32 (0,85-6,37) 18 (58,8) 1,55 (0,55-4,38)
C 16 (32,0) 20 (22,7) 1,42 0,23 0,63 (0,29-1,36) 18 (26,5) 0,43 0,51 0,77 (0,34-1,71)
T 34 (68,0) 68 (77,3) 1,60 (0,74-3,48) 34 (73,5) 1,31 (0,59-2,92)
Примпжа. n - кшькють oci6, P - значимiсть вщмЫностей у розподiлi генотипiв мiж контрольною i дослiдною групою, OR (odds ratio) -коефiцieнт вiдношення шанав.
ендотелiальних кгмтинах. Бiлок ЬБР1 регулюе рух-ливють нейтрофiлiв, адгезiю до бiлкiв матриц ф^ бриногену та трансгендотелiальноI мiграцií [16,25]. Полiморфiзми в генiв ЬБР1 можуть призвести до змiн у вираженн та функцiI бiлка, а також регулю-вати шляхи передачi сигналiв вниз, тим самим мо-дулiзуючи прихильнiсть до раку молочно! залози [12,13,19]. гв3817198 Т> С полiморфiзм був широко вивчений для його потенцмно! зв'язку з ризиком раку молочно! залози, однак, висновки були безпщ-ставними. Полiморфiзм як при гомозиготнм моделi, так i порiвняння моделi алельних частот. Подальший стратифiкований аналiз показав, що ця асоцiацiя була помiтною в кавказьких популя^ях, в азiатських популя^ях i в популяцiйних дослiдженнях. Наши ре-зультати свiдчать, що полiморфiзм ЬБР1 гв3817198 Т> С е фактором ризику раку молочно! залози. Ра-нше единий мета-аналiз (у 2011 роцО дослiджував зв'язок мiж полiморфiзмом ЬБР1 гв3817198 Т> С i ризиком раково! стади молочно! залози [7]. Попере-днiй мета-аналiз включав лише 7 дослiджень з 33920 випадюв i 35 671 контролем i виявив суттеву зв'язок мiж полiморфiзмом ЬБР1 гв3817198 Т> С i молочною залозою раку за гомозиготною моделлю i порiвнян-ням моделi частот алей.
Висновки. Таким чином, проведення статистич-ного обчислення вщношення шансiв (ОЯ) виявило
пщвищення ризику появи раку молочно! залози при наявност генотипу полiморфного локусу гв3817198 гена ЬБР1у жшок вiком < 40-50 з радiацiйним випро-мiнюванням в анамнезi (ОЯ=1,33), межi довiрчого iнтервалу склали (С195%: 0,50-3,52).0триманi нами результати свiдчать про асо^а^ю генетичного пол^ морфiзму гв3817198 гена ЬБР1 у жiнок вком < 40-50 хворих на РМЗ з радiацiйним анамнезом.
Отриманi дан пiдтверджують вклад однонуклео-тидного полiморфного локусу гв3817198 гена ЬБР1в розвиток РМЗ, зокрема радiацiйно-асоцiйованого вiком < 40-50. Генотип Т/Т полiморфiзму гв3817198 гена ЬБР1в молодшiй вiковiй груп (< 40-5051-60 рокiв) хворих з радiацiйним анамнезом зумовлюе статистично пщвищений ризик розвитку радiацiйно-асоцiйованого РМЗ.
Перспективи подальших дослiджень. Визна-чення особливостей полiморфiзму полiморфного локусу гв3817198 гена ЬБР1 серед пацiентiв з раком молочно! залози з радiацiйним анамнезом та без нього порiвняно з контрольною групою шших кра!н зокрема Польщi та Швецi!.
^ÎTepaTypa
1. Babich P.N. Primeneniye sovremennykh staticheskikh metodov v praktike klinicheskikh issledovaniy. Soobshcheniye tret'ye. Otnosheniye shansov: ponyatiye, vychisleniye i interpretatsiya / P.N. Babich, A.V. Chubenko, S.N. Lapach // Ukrari'ns'kiy medichniy chasopis. - 2005. - T. 46, № 2. - S. 113-119.
2. Gubler Ye.V. Primeneniye neparametricheskikh kriteriyev statistiki v mediko-biologicheskikh issledovaniyakh: nauch. rukovodstvo / Ye.V. Gubler, A.A. Genkin. - Meditsina, 1973. - S. 44-56.
3. Barnholtz-Sloan J.S. FGFR2 and other loci identified in genome-wide association studies are associated with breast cancer in African-American and younger women / J.S. Barnholtz-Sloan, P.B. Shetty, X. Guan, S.J. Nyante [et al.] // Carcinogenesis. - 2010.
- № 31. - P. 1417-1423.
4. Butt S. Genetic predisposition, parity, age at first childbirth and risk for breast cancer / S. Butt, S. Harlid, S. Borgquist, M. Ivarsson [et al.] // BMC Res Notes. - 2012. - № 5. - P. 414.
5. Campa D. Interactions between genetic variants and breast cancer risk factors in the breast and prostate cancer cohort consortium / D. Campa, R. Kaaks, Le L. Marchand, C.A. Haiman [et al.] // J Natl Cancer Inst. - 2011. - № 103. - P. 1252-1263.
6. Celine M. Vachor Common Breast cancer Susceptibility Variants in LSP1 and RAD51L1 are Associated with Mamographic density measures that predict breast cancer risk / M. Vachor Celine, Christopher G. Scott, A. Peter [et al.] // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. - 2012. - Vol. 21, № 7. - P. 1156-1166.
7. Chen M.B. Association of a LSP1 gene rs3817198T > C polymorphism with breast cancer risk: evidence from 33,920 cases and 35,671 controls / M.B. Chen, C. Li, W.X. Shen [et al.] // Mol Biol Rep. - 2011. - № 38. - P. 4687-4695.
8. Cheung K.L. Endocrine therapy for breast cancer: an overview / K.L. Cheung // Breast. - 2007. - № 16. - P. 327-343.
9. Chlebowski R.T. Estrogen plus progestin and breast cancer incidence and mortality in the Women's Health Initiative Observational Study / R.T. Chlebowski, J.E. Manson, G.L. Anderson, J.A. Cauley [et al.] // J Natl Cancer Inst. - 2013. - Vol. 105. - P. 526-535.
10. Clerget-Darpoux F. Introduction to the genetic epidemiology of multifactorial diseases / F. Clerget-Darpoux, S. Lyonnet, P. Broet // Medecine France. - 2009.
11. Easton D.F. Genome-wide association study identifies novel breast cancer susceptibility loci / D.F. Easton, K.A. Pooley, A.M. Dunning, P.D. Pharoah [et al.] // Nature. - 2007. - № 447. - P. 1087-1093.
12. Fanale D. Breast cancer genome-wide association studies: there is strength in numbers / D. Fanale, V. Amodeo, L.R. Corsini, S. Rizzo, V. Bazan, A. Russo // Oncogene. - 2012. - № 31. - P. 2121-2128.
13. Fletcher O. Candidate gene-environment interactions in breast cancer / O. Fletcher, F Dudbridge // BMC Med. - 2014. - № 12.
- P. 195.
14. Gorodnova T.V. Distribution of FGFR2, TNRC9, MAP3K1, LSP1, and 8q24 alleles in genetically enriched breast cancer patients versus elderly tumor-free women / T.V. Gorodnova, E. Kuligina, G.A. Yanus, A.S. Katanugina [et al.] // Imyanitov EN Cancer Genet Cytogenet. - 2010. - № 199. - P. 69-72.
15. Jiang Y Risk of genome-wide association study newly identified genetic variants for breast cancer in Chinese women of Heilongji-ang Province / Y Jiang, J. Han, J. Liu, G. Zhang [et al.] // Breast Cancer Res Treat. - 2011. - № 128. - P. 251-257.
16. Lanigan F. Molecular links between mammary gland development and breast cancer / F. Lanigan [et al.] // Cell Mol Life Sci. -2007. - Vol. 64. - P. 3159-3184.
17. Latif A. Breast cancer susceptibility variants alter risks in familial disease / A. Latif, K.D. Hadfield, S.A. Roberts [et al.] // Med Genet. - 2010. - № 47. - P. 126-131.
18. Long J. Evaluation of breast cancer susceptibility loci in Chinese women / J. Long, X.O. Shu, Q. Cai, YT. Gao [et al.] // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. - 2010. - № 19. - Р 2357-2365.
19. Ripperger T. Breast cancer susceptibility: current knowledge and implications for genetic counseling / T. Ripperger, D. Gadzicki,
A. Meindl, B. Eur Schlegelberger // J Hum Genet. - 2009. - № 17. - Р 722-731.
20. Silva Idos S. Birth size and breast cancer risk: re-analysis of individual participant data from 32 studies / S. Silva Idos,
B. De Stavola, V. McCormack // PLoS Med. - 2008. - № 5. - Р 193.
21. Song M. Breast cancer prevention based on gene-environment interaction / M. Song, K.M. Lee, D. Kang // Mol Carcinog. - 2011.
- Vol. 50. - P. 280-290.
22. Sueta A. A genetic risk predictor for breast cancer using a combination of low-penetrance polymorphisms in a Japanese population / A. Sueta, H. Ito, T. Kawase [et al.] // Breast Cancer Res Treat. - 2012. - № 132. - Р 711-721.
23. Thompson D. The genetic epidemiology of breast cancer genes / D. Thompson, D. Easton, J. Mammary // Gland Biol Neoplasia.
- 2004. - № 9. - Р 221-236.
24. Travis R.C. Gene-environment interactions in 7610 women with breast cancer: prospective evidence from the Million Women Study / R.C. Travis, G.K. Reeves, J. Green, D. Bull [et al.] // Lancet. - 2010. - № 375. - Р 2143-2151.
25. Vachon C.M. Common breast cancer susceptibility variants in LSP1 and RAD51L1 are associated with mammographic density measures that predict breast cancer risk / C.M. Vachon, C.G. Scott, P.A. Fasching [et al.] // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.
- 2012. - № 21. - Р 1156-1166.
26. Wolff M.S. Breast cancer risk and environmental exposures / M.S. Wolff, A. Weston // Environ Health Perspect. - 1997. -Vol. 105. - P. 891-896.
ПОЛ1МОРФ1ЗМ ГЕНА LSP1 У ХВОРИХ Ж1НОК НА РАК МОЛОЧНОТ ЗАЛОЗИ З УКРАТНИ Полшик С. I., Рибченко Л. А., Захарцева Л. М., Клименко С. В.
Резюме. Рак молочно! залози викликаний взаeмодieю piзних генетичних фактоpiв та навколишнього се-редовища. Генетичн полiмоpфiзми (SNP) в деяких генах можуть змшювати експреЫю мРНК та бтка, а отже, впливати на сприйнятливють до раку. Метою роботи було дослщити частоту полiмоpфiзмy rs3817198 гена LSP1y жшок piзного в^ з Укра!ни, хворих на рак молочно! залози. Основну групу хворих було сформовано з 158 жшок вком 35-60 роюв з дiагнозом РМЗ, який був пщтверджений пстолопчно. Пошук мутацм вщбувався за допомогою методу ПЛР та аналiзy точки температурного плавлення Tm отриманих амплкоыв. Реак^ю ПЛР проводили з використанням pеактивiв фipми «TIB MOLBIOL» (Нмеччина). Змщення точки плавлення свщчило про змши в нуклеотиднм послщовност амплкону. Аналiз точки Tm проводили за допомогою про-грами Light Cycler Software (build 4.1.1.21.) (Roche, Швейцаpiя). Статистичн розрахунки виконували за допомогою пакету програми StatPlus Pro. Генотип ТТ у груп жшок хворих на РМЗ з pадiацiйним анамнезом та без pадiацiйного анамнезу траплявся з бтьшою частотою (68,2 i 58,8%), ыж у контрольна груп (48,0%), хоча в дослщних групах виявилося менше гетерозитот за генотипом СТ (18,2 та 29,4% при 40,0% в контрольна грут). Встановлено вищу частоту алеля Т у груп жшок хворих на РМЗ з pадiацiйним анамнезом (77,3%) та нижчу частоту в груп жшок iз РМЗ без pадiацiйного анамнезу (73,5%) поpiвняно з контрольною групою (68,0%). Встановлений розподт генотитв i алелей за полiмоpфним ваpiантом rs3817198 гена LSP1y першм та друпй групах вipогiдно не в^^знявся вщ теоретично очкуваного щодо piвноваги Хард^Вайнберга. Про-ведення статистичного обчислення вщношення шанЫв (OR) виявило пщвищення ризику появи раку молочно! залози при наявност генотипу полiмоpфного локусу rs3817198 гена LSP1y жшок вком < 40-50 з pадiацiйним випромшюванням в анамнезi (OR=1,33), межi довipчого штервалу склали (С195%: 0,50-3,52).0тpиманi нами результати свщчать про асоцiацiю генетичного полiмоpфiзмy rs3817198 гена LSP1 у жшок вком < 40-50 хворих на РМЗ з pадiацiйним анамнезом.
За результатами молекулярно-генетичного аналiзy генетичного полiмоpфiзмy rs3817198 гена LSP1 ста-тистично вipогiдних вiдмiнностей у частотах генотитв i алелiв не встановлено н у гpyпi жшок хворих на РМЗ з pадiацiйним анамнезом, н у жiнок хворих на РМЗ без pадiацiйного анамнезу вком 51-60 роюв. Ключовi слова: ген LSP1, iонiзyюче випpомiнювання, рак молочно! залози.
ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА LSP1 У БОЛЬНЫХ ЖЕНЩИН РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ С УКРАИНЫ Полиник С. И., Рыбченко Л. А., Захарцева Л. М., Клименко С. В.
Резюме. Рак молочной железы вызван взаимодействием различных генетических факторов и окружающей среды. Генетические полиморфизмы (SNP) в некоторых генах могут менять экспрессию мРНК и белка, а следовательно, влиять на восприимчивость к раку. Целью работы было исследовать частоту полиморфизма rs3817198 гена LSP1y женщин разного возраста из Украины, больных раком молочной железы. Основную группу больных было сформировано из 158 женщин в возрасте 35-60 лет с диагнозом РМЖ, который был подтвержден гистологически. Поиск мутаций происходил с помощью метода ПЦР и анализа точки температурного плавления Tm полученных ампликонов. Реакцию ПЦР проводили с использованием реактивов фирмы «TIB MOLBIOL» (Германия). Смещение точки плавления свидетельствовало об изменениях в нуклеотидной последовательности ампликона. Анализ точки Tm проводили с помощью программы Light Cycler Software (build 4.1.1.21.) (Roche, Швейцария). Статистические расчеты выполняли с помощью пакета программы StatPlus Pro. Генотип ТТ в группе женщин больных РМЖ с радиационным анамнезом и без радиационного анамнеза случался с большей частотой (68,2 и 58,8%), чем в контрольной группе (48,0%), хотя в опытных группах оказалось меньше гетерозитот по генотипу СТ (18,2 и 29,4% при 40,0% в контрольной группе). Установлено высокую частоту аллеля Т в группе женщин больных РМЖ с радиационным анамне-
зом (77,3%) и низкую частоту в группе женщин с РМЖ без радиационного анамнеза (73,5%) по сравнению с контрольной группой (68,0%). Установленное распределение генотипов и аллелей по полиморфным вариантом rs3817198 гена LSPty первой и второй группах достоверно не отличался от теоретически ожидаемого по равновесия Харди-Вайнберга. Проведение статистического вычисления отношения шансов (OR) выявило повышение риска появления рака молочной железы при наличии генотипа полиморфного локуса rs3817198 гена LSP1 у женщин в возрасте < 40-50 с радиационным излучением в анамнезе (OR = 1,33), границы доверительного интервала составили (СИ95%: 0,50-3,52). Полученные нами результаты свидетельствуют об ассоциации генетического полиморфизма rs3817198 гена LSP1 у женщин в возрасте < 40-50 больных РМЖ с радиационным анамнезом.
По результатам молекулярно-генетического анализа генетического полиморфизма rs3817198 гена LSP1 статистически достоверных различий в частотах генотипов и аллелей не установлено ни в группе женщин больных РМЖ с радиационным анамнезом, ни у женщин больных РМЖ без радиационного анамнеза возрасте 51-60 лет.
Ключевые слова: ген LSP1, ионизирующее излучение, рак молочной железы.
GENE LSP1 POLYMORPHISM IN WOMEN WITH BREAST CANCER IN UKRAINE
Polinyk S. I., Rybchenko L. A., Zakhartseva L. M., Klymenko S. V.
Abstract. Breast cancer is caused by the interaction of various genetic factors and the environment.
Genetic polymorphisms (SNPs) in some genes may alter the expression of mRNA and protein, and therefore, affect the susceptibility to cancer.
The aim of the work was to investigate the frequency of rs3817198 polymorphism of the LSP1 gene in women of all ages from Ukraine with breast cancer patients. The main group of patients was formed from 158 women aged 35-60 years old with a diagnosis of breast cancer, which was confirmed histologically. The search for mutations was done using the PCR method and the analysis of the temperature melting point Tm of the amplicons obtained. The PCR reaction was performed using TIB MOLBIOL (Germany) reagents. The displacement of the melting point indicated changes in the nucleic acid sequence of the amplicon. The Tm analysis was performed using Light Cycler Software (build 4.1.1.21.) (Roche, Switzerland). Statistical calculations were performed using the StatPlus Pro program package. The TT genotype in the group of women with breast cancer with a radiation history and radiation history was more frequent (68.2 and 58.8%) than in the control group (48.0%), although the experimental groups showed less heterosisit after the genotype of ST (18.2 and 29.4% at 40.0% in the control group). A higher allele T frequency was found in the group of women with breast cancer with a radiation history (77.3%) and a lower frequency in the group of women with breast cancer without a radiation history (73.5%) compared with the control group (68.0%).
The established distribution of genotypes and alleles for the polymorphic version of rs3817198 of the LSP1 gene in the first and second groups was not significantly different from the theoretically anticipated on the Hardy-Weinberg equilibrium. The statistical analysis of the odds ratio (OR) revealed an increased risk of developing breast cancer in the presence of the genotype of the polymorphic rs3817198 locus of the LSP1 gene in women aged < 40-50 with a history of radiation (OR = 1.33), confidence intervals (IC 95%: 0.50-3.52). The results obtained by us confirm the association of genetic polymorphism of rs3817198 of the LSP1 gene in women < 40-50 in patients with breast cancer with a radiation anamnesis.
According to the results of the molecular genetic analysis of the genetic polymorphism rs3817198 of the LSP1 gene, there are no statistically significant differences in the frequencies of genotypes and alleles in the group of women with breast cancer patients with a radiation history, nor in women with breast cancer without a radiation history in the age of 51-60 years.
Keywords: LSP1 gene, ionizing radiation, breast cancer.
Рецензент - проф. Баштан В. П.
Стаття надшшла 11.10.2017 року
