CC BY
75
№ 4 - 2012 г.
14.00.00 медицинские и фармацевтические науки УДК 575.113:616.12-008.331.1+616.12-005
ПОЛИМОРФИЗМ AGT 174 (С>Г) и ФУНКЦИИ ОРГАНОВ И СИСТЕМ ОРГАНИЗМА БОЛЬНЫХ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ И ХРОНИЧЕСКОЙ ФОРМОЙ ИБС В ГРУППЕ РИСКА ПО ПИТАНИЮ
3 1 112
А.М. Дыгай , М.Ю. Котловский , О.С. Котловская , Д.С. Кириченко , В.М. Говорун , Л.А. Шестакова1, Ю.В. Котловский1, Т.А. Соколова1
1ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет» (г. Красноярск)
НПО «Литех» (г. Москва)
о
НИИ фармакологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН (г. Томск)
Целью исследования было определение влияния полиморфизма гена ангиотензиногена AGT 174 (С>Т) на функции органов и систем в группе пациентов с хронической формой ИБС и гипертонией, характеризующихся наличием факторов риска по питанию. Было проведено исследование мужчин и женщин, здоровых и больных хронической формой ИБС, имеющих и не имеющих артериальную гипертензию, в возрасте 45-64 лет, в группе риска по питанию. Генотипирование проводили минисеквенированием с масс-спектрометрической детекцией. Липидный спектр сыворотки крови определяли энзиматическим колориметрическим методом. Ассоциация мужчин и женщин, носителей СС генотипа, с более высокой степенью стенокардии, по сравнению с носителями СТ генотипа гена AGT 174 (С>Т) не зависит от пола, и объясняется более зрелым возрастом и наличием терапии сопутствующих заболеваний среди носителей СС генотипа. Кроме того, группа женщин с СС употребляющий избыток жирной пищи, имеют увеличение общего холестерина, коэффициента атерогенности, липопротеидов низкой плотности и снижению протромбинового времени. Мужчины в группе риска по питанию не имеют сопряженности генотипов с общим холестерином и различий между генотипами по общему холестерину, коэффициенту атерогенности, липопротеидам низкой плотности и протромбиновому времени.
Ключевые слова: гипертензия, ангиотензиноген, полиморфизм, ишемическая болезнь сердца (ИБС), тип питания.
Котловский Юрий Васильевич — доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАЕН, заведующий ЦНИЛ КрасГМУ, контактный телефон: 8 (3912) 28-0914, 291-85-33, e-mail: kgmacnil@mail.ru
Дыгай Александр Михайлович — академик РАМН, профессор, директор НИИ фармакологии Томского научного центра Сибирского обделения РАМН, телефон: 8 (3822) 41-83-72, e-mail: csrl.ok@gmail.com
Г оворун Вадим Маркович — доктор биологических наук, профессор кафедры биохимии медико-биологического факультета РГМУ, президент компании «Литех», заместитель директора НИИ физико-химии медицины, заведующий лабораторией протеомики ИБХ РАН (г. Москва), телефон: 8 (499) 246-4401
Котловский Михаил Юрьевич — кандидат медицинских наук, научный сотрудник, заместитель руководителя по науке ЦНИЛ КрасГМУ, e-mail: kgmacnil@mail.ru
Котловская Ольга Сергеевна — научный сотрудник, заместитель руководителя по контролю качества лабораторный исследований, биолог ЦНИЛ КрасГМУ, телефон: 8 (3912) 28-09-14, 291-85-33, e-mail: csrl.ok@gmail.com
Кириченко Дарья Александровна — научный сотрудник, биолог ЦНИЛ КрасГМУ, телефон: 8 (908) 025-00-08, e-mail: astheno@mail.ru
Соколова Татьяна Алексеевна — кандидат медицинских наук, врач гинеколог-эндокринолог ЦНИЛ КрасГМУ, телефон: 8 (3912)28-09-14, 291-85-33, e-mail:
kgmacnil@mail.ru
Шестакова Людмила Анатольевна — кандидат медицинских наук, заведующая кафедрой патологической анатомии им. проф. П.Г. Подзолкова, факультет фундаментального медицинского образования КрасГМУ, телефон: 8 (3912) 28-09-14, 29185-33, e-mail: kgmacnil@mail.ru
Интерес к изучению гена ангиотензиногена (АГ) связан с тем, что его продукт — ангиотензиноген — является одним из компонентов ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РАС), играющей ключевую роль в развитии и прогрессировании сердечнососудистых заболеваний (сердечно-сосудистый континуум) [1-3]. Ген АГ находится на коротком плече 1-й хромосомы в локусе 1q42, в том же регионе, что и ген ренина. Он кодирует аминокислотную последовательность белковой молекулы ангиотензиногена. Варианты полиморфизма гена АГ отличаются одним нуклеотидом [2]. В данном гене известно несколько структурных полиморфизмов, среди которых физиологически значимыми являются мутации в 174-м кодоне с соответствующей заменой треонина на метионин. Эти мутации сопряжены с изменением свойств АГ [4, 5]. Известно, что уровень AT II и его активность, степень рецепторного связывания и скорость катаболизма генетически детерминированы, и различные мутации в генах, контролирующих РАС, влияют на эти показатели, а также оказывают опосредованное действие на другие физиологические функции.
Цель исследования — определение влияния полиморфизма гена ангиотензиногена AGT 174 (С>Т) на функции органов и систем в группе пациентов с хронической формой ишемической болезни сердца (ИБС) и гипертонией, характеризующихся наличием факторов риска по питанию.
Материалы и методы. Исследуемая группа включала 102 относительно здоровых пациентов, а также болеющих хронической формой ИБС, имеющих и не имеющих диагноз гипертонии. Больные находились на амбулаторном лечении конкором и кардиомагнилом (действующее соединение аспирин). Группы обследуемых имели возрастной интервал от 45 до 64 лет. Отличий по возрасту между обследуемыми группами без (54,00 ± 1,02 года) и с гипертонией (54,48 ± 0,64 года) не было (р = 0,680; Т критерий Стьюдента). Для группы относительно здоровых пациентов критериями исключения
являлись наличие ИБС, острые заболевания, хронические заболевания в стадии обострения, наличие сахарного диабета, выраженные нарушения липидного обмена, тяжелые нарушения функции печени и почек, артериальная гипертония. Критерии исключения групп с ИБС и АГ: инфаркт миокарда, прогрессирующая стенокардия, инсульт, тромбоэмболия легочной артерии менее чем за 6 месяцев до обследования, стенокардия напряжения 3-4 функционального класса, тяжелые нарушения функции печени, почек, острые и хронические заболевания в стадии обострения. Материалом для исследования полиморфизмов служили образцы ДНК, полученные методом фенольнохлороформной экстракции из 500 мкл цельной венозной крови. Анализ SNP (однонуклеотидных полиморфизмов генов) проводили методом минисеквенирования с последующим масс-спектрометрическим фракционированием олигонуклеотидных зондов при помощи MALDI-TOF масс-спектрометрии. Работа проводилась совместно с НПФ «Литех», г. Москва. Статистическая обработка данных, в том числе таблиц сопряжения, проводилась с использованием программного пакета SPSS 18.0 (Statistical Package for the Social Sciences). Различия считали достоверными при р < 0,05.
Результаты и обсуждение .Отличий по возрасту, наличию или отсутствию стенокардии и гипертонии между носителями генотипов СС и СТ гена АГ не отмечалось (р = 0,0069, р = 0,267, р = 0,224 по критерию Манна-Уитни), что позволило исследовать смешанную группу здоровых и больных стенокардией, имеющих и не имеющих АГ. Мы исследовали группу, включающую людей с нерегулярным питанием и людей с регулярным питанием с избытком жирной пищи, то есть группу риска по питанию. Выяснено, что в смешанной группе мужчин и женщин СС генотип связан с более высокой степенью стенокардии (р = 0,044 (см. табл.). Распределение генотипов AGT 174 (С>Т) в группах по степени стенокардии характеризовалось преобладанием СС генотипа у пациентов со 2-й степенью стенокардии. Люди с СС генотипом (51 человек) имели средний ранг 30,18, ассоциирующий со второй степенью стенокардии, в то время как гетерозиготы СТ (12 человек) имели средний ранг 39,75, ассоциирующий со стенокардией первой степени (р = 0,031).
Показатели функциональной активности органов и систем организма мужчин и женщин, здоровых и больных хронической формой ИБС, имеющих и не имеющих гипертоническую болезнь, в возрасте от 45 до 64 лет в группе риска по питанию в зависимости от генотипа 174 (С>Т) гена AGT представлены в табл.
Показатели функциональной активности органов и систем организма мужчин
и женщин
Тип генотип а По л ССТ (ранги ) ХО (ранги ) К-атер (М ± м) ЛПНП (ранг) ПТВ (ранги ) ТВ (М ± м) ВОЗГ (ранги ) Терапи я (ранги)
СС м, ж 41,06 46,53 2,31 ± 0,13 46,9 28,85 17,76 ± 0,22 38,12 45,20
СТ м, ж 32,23* 34,42* 1,76 ± 0,16* 31,5** 39,13 16,86 ± 0,35 * 27,35* 35,75*
СС ж 19,07 21,24 2,31 ± 0,22 20,74 9,13 18,06 ± 0,44 12,96 18,83
СТ ж 14,23 9,68** 1,47 ± 0,19 * 10,73* * 17,00* 16,52 ± 0,63 10,75 14,73
СС м 26,80 25,58 2,31 ± 0,17 26,05 20,23 17,61 ± 0,24 20,43 26,77
СТ м 21,81 25,27 2,02 ± 0,23 23,92 23,09 17,02 ± 0,43 18,91 21,88
Примечания: Обозначение пола: м — мужчины, ж — женщины. Степень стенокардии (ССТ) выражается в единицах 1-нет (ССТ), 2-(ССТ)-первой степени, 3-(ССТ)-второй степени. Холестерин общий (ХО) измеряется в ммоль/л (норма 3,5-5,17 ммоль/л). Коэффициент атерогенности (К-атер) норма 2-3. Липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) измеряются в ммоль/л (норма < 3,87 ммоль/л). Протромбиновое время (ПТВ) измеряется в секундах (норма 13-18 сек). Тромбиновое время (ТВ) измеряется в сек. (норма 15-20 сек). Возрастные группы (ВОЗГ) 1—45—49 лет, 2—50—58 лет. Терапия — прием лекарств по сопутствующим заболеваниям. Звездочкой * отмечена достоверность нижних показателей по отношению к верхним *— р<0,05.,** — Р < 0,01. Статистические данные обрабатываются для К-атер и ТВ по Критерию Стьюдента, для остальных показателей по критерию Манна Уитни.
Кроме того, носители генотипа СС имели более высокий уровень общего холестерина (р =
0,017), чем СТ. Также с СС генотипом связан более высокий коэффициент атерогенности (р = 0,021), уровень ЛПНП(р = 0,009), снижением протромбинового времени (р=0,049). Между генотипами СС и СТ полиморфизма 174 (С>Т) гена AGT и коэффициентом атерогенности выявлена сопряженность по X Пирсона (р = 0,042) и отношению правдоподобия (р = 0,032). Повышение тромбинового времени (р = 0,036),
ассоциирующее с генотипом СС (см. табл.), очевидно, объясняется снижением протромбина, ведущего к уменьшению тромбина и увеличению тромбинового времени.
Изменение тромбинового времени встречается как в объединенной группе по питанию, так и в группе риска по питанию, т. е. не зависит от типа питания. Выявлено, что в смешанной по полу группе (м, ж) СС генотип ассоциируют с более зрелым возрастом 50-58 лет по сравнению с гетерозиготным, ассоциировавшими с более молодой группой 45-49 лет (р = 0,035). Найдена ассоциация СС с наличием терапии по сопутствующим заболеваниям (р = 0,043). В группе риска по питанию, также как и обобщенной группе по питанию отмечается сопряжение между генотипами полиморфизма 174 (С>Т) AGT и коллаген-индуцируемой агрегации тромбоцитов (КИАТ). При нормальной КИАТ частоты генотипов СС (59,4 %) и СТ (40,6 %) были в 1,5 раза меньше и в 3,2 раза больше чем соответствующие генотипы СС (87,5 %) и СТ (12,5 %) при повышенной КИАТ. Связь между СС, СТ и КИАТ подтверждается статистически (р = 0,011 для х , р = 0,024 для поправки на непрерывность, р = 0,009 для отношения правдоподобия, р = 0,022 и р = 0,011 для критерия Фишера, р = 0,028 для критерия Мак Немара). Связь линейна (р = 0,011), обратно-симметричная, средней силы (у к = —0,655; р = 0,007). Эти результаты указывают на сопряженность генотипов и КИАТ, не зависящую от типа питания. Все данные объединенной группы мужчин и женщин (м, ж, табл.), показывают ассоциацию СС с патологией организма, выражающуюся в увеличении степени стенокардии, атеросклероза (возрастание ХО, К-атер и ЛПНП) и в гиперкоогуляции крови (уменьшении ПТВ). Наличие ассоциации полиморфизмов СС с более зрелым возрастом и терапией по сопутствующим заболеваниям в смешанной группе (м, ж) позволяет предположить механизм патологии, связанный с более зрелым возрастом и нарастанием в связи с этим количества сопутствующих заболеваний и проведением их терапии. Возможно, более зрелый возраст, наличие сопутствующих заболеваний и терапии по ним у людей с СС генотипом, обуславливает наличие патологии.
С целью более детального анализа выявленных взаимосвязей важным, на наш взгляд, являлось выяснение гендерных различий. Поэтому мы исследовали те же самые показатели раздельно у мужчин и женщин. Исследование сопряженности всех показателей, приведенных в таблице, с генотипами СС и СТ в группе риска по питанию показывает сопряженность генотипов с ОХ плазмы крови и регулярным питанием с избытком жира только у женщин. Таким образом, женщины, носители гомозигот СС при регулярном питании с избытком жирной пищи в большем проценте случаев имели более
высокий ХО (90,9 %) по сравнению с носителями СТ генотипа (9,1 %). Сопряженность статистически достоверна (р = 0,011 для х , р = 0,008 для поправки на непрерывность, р = 0,025 для отношения правдоподобия, р = 0,050 и р = 0,011 для критерия Фишера, р = 0,016). Связь линейная (р = 0,010), обратная, симметричная, средней силы (К по Спирмену = —0,497; р = 0,008).
Наличие этой сопряженности только у женщин указывает на возможность обусловленности более высокой патологии у женщин носителей СС гомозигот потреблением ими избытка жирной пищи, вследствие чего у них более высокий холестерин (р = 0,002), приводящий к увеличению атерогенности (р = 0,018), ЛПН (р = 0,006) и снижению показателей ПТВ (р = 0,013) по сравнению с женщинами
носителями СТ генотипа. Наличие аналогии по этим показателям в смешанной группе (м, ж) обусловлено женщинами (ж).
Ассоциация мужчин и женщин (м, ж) — носителей гомозигот СС — с более высокой степенью стенокардии по сравнению с носителями гетерозигот СТ не зависит от пола и обусловлена более зрелым возрастом и наличием терапии сопутствующих заболеваний.
Если женщины носители СС генотипа имеют более высокий ХО (р = 0,002), то у мужчин носителей СС и ТТ генотипа, как видно из таблицы, различий по ХО не наблюдалось (р = 0,947). Также не наблюдалось отличий в распределении генотипов в группе мужчин и по другим показателям (см. табл.).
Заключение. Исследование мужчин и женщин здоровых и больных хронической формой ИБС, имеющих и не имеющих артериальную гипертензию, в возрасте 45-64 лет в группе риска по питанию показывает, что ассоциация мужчин и женщин, носителей СС генотипа, с более высокой степенью стенокардии, по сравнению с носителями СТ генотипа гена AGT 174 (С>Т), не зависит от пола и объясняется более зрелым возрастом и наличием терапии сопутствующих заболеваний среди носителей СС генотипа. Женщины с СС генотипом, употребляющие избыток жирной пищи, имели повышенный общий холестерин, коэффициент атерогенности, липопротеиды низкой плотности и пониженное протромбиновое время. Мужчины в группе риска по питанию не имели сопряженности генотипов с общим холестерином и различий между генотипами по общему холестерину, коэффициенту атерогенности, липопротеидам низкой плотности и протромбиновому времени.
Список литературы
1. Пузырев В. П. Гены синтропий и сердечно-сосудистый континуум / В. П. Пузырев,
О. А. Макеева, М. В. Голубченко // Вестник ВОГиС. — 2006. — Т. 10, № 3. — С. 479-493.
2. Genetic polymorphism and coronary artery disease in the south of France / I. Сапауу [et al.] // Tromb. Haemost. — 2000. — Vol. 2. — P. 212-216.
3. Investigating the genetic determinants of cardiovascular disease using candidate genes and meta-analysis of association studies / Р. Juan [et al.] // Annals of human Genetics. — 2006. — Vol. 70, N 2. — P. 145-169.
4. Gambaro G. Association studies of genetic polymorphism and complex disease / G. Gambaro, F. Anglani, А. d’Angelo // Lancet. — 2000. — Vol. 355. — P. 308-311.
5. Association of angiotensinogen M235T and A(-6)G gene polymorphism with coronary heart disease with independence of essential hypertension: The PROCAGENE Study / С. Jose [et al.] // JACC. — 2001. — Vol. 37, N 6. — P. 1536-1542.
AGT 174 (^T) POLYMORPHISM AND FUNCTIONS OF HUMAN BODY ORGANS AND SYSTEMS OF PATIENTS WITH IDIOPATHIC HYPERTENSION AND CHRONIC FORM OF CORONARY DISEASE IN NUTRITON RISK GROUP
■? / / I 7
А.М. Dygay , M.Y. Kotlovsky , O.S. Kotlovskaya , D.A. Kirichenko , V^. Govorun ,
L.А. Shestakova1, Y.V. Kotlovsky1, Т.A. Sokolova1
1SBEIHPE «Krasnoyarsk State Medical University Minhealthsocdevelopment» (Krasnoyarsk c.)
SPA «Liteh» (Moscow c.)
SRI of pharmacology of Tomsk scientific center of the SB RAMS (Tomsk c.)
Objective of research was estimation of influence of angiotensinogen gene AGT 174 (C>T) polymorphism on function of organs and systems in group of patients with chronic form of coronary disease and hypertension, which were characterized by nutrition risk factors. Research among healthy men, women and patients with chronic form of coronary disease, who have or not arterial hypertension, at the age of 45-64 years, in nutrition risk group was performed. Genotyping was carried out with minisequencing with mass and spectrometer detection. Lipid spectrum of blood serum was determined by enzymatic colorimetric method. The association of men and women, CC genotype carriers, with higher degree of stenocardia, in comparison with CT genotype carriers of AGT 174 (C>T) gene doesn’t depend on sex, and can be explained by more mature age and existence of therapy of associated disease among CC genotype carriers. Besides, group of CC genotype women who take surplus of greasy food, have augmentation of the general cholesterin, factor of atherogenicity, lipoproteins of low density and depression of prothrombin time. Men in nutrition risk group have no associativity of genotypes to the general cholesterin and differences between genotypes on the general cholesterin, factor of atherogenicity, lipoproteins of low density and prothrombin time.
Keywords: hypertension, angiotensinogen, polymorphism, coronary disease (CD), nutrition type.
About authors:
Kotlovsky Yury Vasilievich — doctor of medical sciences, professor, corresponding member of the Russian Academy of Natural Sciences, head of CSRL at SBEI HPE «Krasnoyarsk state medical university», office number: 8 (3912) 28-09-14, 291-85-33, e-mail: kgmacnil@mail.ru
Dygay Alexander Mikhaylovich — academician of the Russian Academy of Medical Science, professor, director of SRI of pharmacology of Tomsk scientific center of the SB RAMS, phone: 8 (3822) 41-83-72, e-mail: csrl.ok@gmail.com
Govorun Vadim Markovich — doctor of biological sciences, professor of biochemistry chair of medicobiological faculty at RSMU, president of Liteh company, deputy director at SRI of
physicchemistry of medicine, head of laboratory of proteomics at IBC RAN (Moscow), phone: 8 (499) 246-4401
Kotlovsky Mikhail Yurievich — candidate of medical sciences, therapist of CSRL at SBEI HPE «Krasnoyarsk state medical university», e-mail: kgmacnil@mail.ru
Kotlovskaya Olga Sergeevna — research scientist, deputy administrator on quality control of laboratory researches, biologist of CSRL at SBEI HPE «Krasnoyarsk state medical university», office number: 8 (3912) 28-09-14, 291-85-33, e-mail: csrl.ok@gmail.com
Kirichenko Darya Aleksandrovna — research scientist, biologist of CSRL at SBEI HPE «Krasnoyarsk state medical university», an e-mail: astheno@mail.ru
Sokolova Tatyana Alekseevna — candidate of medical sciences, doctor the gynecologist-endocrinologist of CSRL at SBEI HPE «Krasnoyarsk state medical university», phone: 8 (3912) 28-09-14, 291-85-33, e-mail: kgmacnil@mail.ru
Shestakova Lyudmila Anatolyevna — candidate of medical sciences, head of pathological anatomy chair n. a. prof. P. G. Podzolkov, faculty of fundamental medical education at SBEI HPE «Krasnoyarsk state medical university», phone: 8 (3912) 28-09-14, 291-85-33, e-mail: kgmacnil@mail.ru
List of the Literature:
1. Puzyrev V. P. Genes of syntopy and cardiovascular continuum / V. P. Puzyrev, O. A. Makeev, M. V. Golubchenko // Bulletin of VSG&S. — 2006. — V. 10, № 3. — P. 479-493.
2. Genetic polymorphism and coronary artery disease in the south of France / I. Canavy [et al.] // Tromb. Haemost. — 2000. — Vol. 2. — P. 212-216.
3. Investigating the genetic determinants of cardiovascular disease using candidate genes and meta-analysis of association studies / Р. Juan [et al.] // Annals of human Genetics. — 2006. — Vol. 70, N 2. — P. 145-169.
4. Gambaro G. Association studies of genetic polymorphism and complex disease / G. Gambaro, F. Anglani, А. d’Angelo // Lancet. — 2000. — Vol. 355. — P. 308-311.
5. Association of angiotensinogen M235T and A(-6)G gene polymorphism with coronary heart disease with independence of essential hypertension: The PROCAGENE Study / C. Jose [et al.] // JACC. — 2001. — Vol. 37, N 6. — P. 1536-1542.
