CC BY
164
М.Ю. Крылов, Л.И. Беневоленская, В.А. Мякоткин
Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт ревматологии РАМН, Москва
ПОЛИМОРФИЗМ A19G ГЕНА ЛЕПТИНА И ПОЛИМОРФИЗМЫ Gln223Arg И Lysl09Arg ГЕНА РЕЦЕПТОРА ЛЕПТИНА ПРИ ПОСТМЕНОПАУЗАЛЬНОМ ОСТЕОПОРОЗЕ
Контакты: Михаил Юрьевич Крылов [email protected]
Цель. Исследовать связь полиморфизма A19G гена лептина (LEP) и полиморфизмов Gln223Arg и Lys109Arg гена рецептора леп-тина (LEPR) с предрасположенностью к постменопаузальному остеопорозу (ОП).
Материал и методы. Полиморфизмы были изучены с помощью ПЦР-анализа среди 428 женщин (254 женщин с ОП и 174 здоровых женщин). Исследованы антропометрические, денситометрические, биохимические маркеры ремоделирования и стандартные клинико-биохимические показатели.
Результаты. Найдены статистически достоверные различия в распределении генотипов полиморфизма A19G гена LEP между группой женщин с ОП и контролем (х2 = 9,41; p=0,009). Частота 19GG-генотипа у больных ОП была достоверно выше, чем в контроле[0R=2,0; 95% доверительный интервал (ДИ) 1,13—3,52 (р=0,011)]. Выявлена сниженная минеральная плотность костной ткани (МПКТ) шейки бедра у носителей 19GG-генотипа гена LEP по сравнению с гетерозиготным генотипом (p=0,06). У носителей гетерозиготного 223GlnArg-генотипа гена LEPR средние показатели МПКТтрохантера и всего бедра были статистически достоверно ниже, чем у пациенток с 223ArgArg-генотипом (p=0,013). Носители 223GlnGln-генотипа имели более высокий рост по сравнению с пациентками с 223GlnArg-генотипом (р=0,04). Не выявлено ассоциаций клиникобиохимических показателей с изученными полиморфизмами.
Выводы. Подтверждена роль A19G-полиморфизма гена лептина и Gln223Arg-полиморфизма гена рецептора лептина как важных генов-кандидатов, участвующих в формировании предрасположенности к остеопорозу.
Ключевые слова: ген лептина, ген рецептора лептина, однонуклеотидные полиморфизмы, остеопороз, минеральная плотность костной ткани
LEPTIN A19G POLYMORPHISM AND LEPTIN RECEPTOR Gln223Arg AND Lys109Arg POLYMORPHISMS
IN POSTMENOPAUSAL OSTEOPOROSIS M.Yu. Krylov, L.I. Benevolenskaya, V.A. Myakotkin
Research Institute of Rheumatology, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow
Contact: Mikhail Yuryevich Krylov [email protected]
Objective: to study an association of leptin (LEP) A19G polymorphism and leptin receptor (LEPR) Gln223Arg AND Lys109Arg polymorphisms with the predilection for postmenopausal osteoporosis (OP).
Subjects and methods. PCR analysis was used to examine the polymorphisms among 428 women (254patients with OP and 174 healthy women). The anthropometric, densitometric, and biochemical markers of bone remodeling and standard clinical and biochemical parameters were studied. Results. Statistically significant differences were found in the distribution of the genotypes of LEP A19G polymorphism between the women with OP and the controls (x2 = 9.41; p = 0.009). In the patients with OP, the 19GG genotype frequency was significantly higher than that in the controls [OR = 2.0; 95% confidence interval (CI) 1.13—3.52 (p = 0.011)]. LEP 19GG genotype carriers were found to have lower mineral bone density (MBD) of the femoral neck than heterozygotes (p = 0.06). In LEPR 223GlnArg heterozygotes, the mean MBD of the trochanter and whole hip was statistically significantly lower than that in patients with the genotype 223ArgArg (p = 0.013). 223GlnGln carriers were taller than 223GlnArg ones (p = 0.04). There were no associations of the clinical and biochemical parameters with the polymorphisms studied. Conclusion. Our study confirmed the role of LEP A19G and LEPR Gln223Arg polymorphisms as important candidate genes involved in the formation of a predilection for OP.
Key words: leptin gene, leptin receptor gene, single nucleotide polymorphisms, osteoporosis, bone mineral density
Известно, что у взрослых людей вариабельность по костной массе на 60—80% определяется генетическими факторами [1]. В настоящее время изучен большой спектр генов, часть из которых ассоциированы с минеральной плотностью костной ткани (МПКТ) и риском возникновения остеопоротических переломов [2]. К ним относятся гены, кодирующие цитокины и их рецепторы, включая TGFB1 [3] и ИЛ 6 [4]; гены, принимающие участие в росте и метаболизме костной ткани: COL1A1 [5, 6], VDR [7, 8], 808Т [9], LRP5 [10], — и гены, ответственные за гормональную активность яичников у женщин, — Е8Я1 [11, 12]. Некоторые из этих генов обладают плейотропными эффектами и ассоциированы с рядом метаболических заболеваний, таких как ожирение и инсулинорезистентность [13, 14].
Начиная с открытия в 1994 г., лептин стал объектом большого числа исследований с целью обнаружения факторов, регулирующих его выработку и ответственных за ожирение у людей [15]. Имеются достаточно убедительные доказательства, подтверждающие, что помимо участия в регуляции адипозогенеза, воспаления и репродуктивных функций ци-токиноподобный гормон лептин играет важную роль в регуляции роста и обмена костной ткани. J.A. Pasco и соавт. [16] выявили ассоциацию между концентрацией сывороточного лептина и массой костной ткани, что заставило авторов предложить гипотезу об участии циркулирующего лептина в регуляции костной массы. H. Blain и соавт. [17] показали, что уровень лептина является независимым предиктором массы тела и МПКТ шейки бедра у женщин в постменопаузе.
Таблица 1
Специфические пары праймеров и рестрикционные эндонуклеазы, использованные для анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов
Полиморфизм Праймеры 5’—3’ Размер продукта Эндонуклеаза
LEP F: 5’-CCCGCGAGGTGCACACTG-3’ 221 MspAlI
A19G R: 5’-AGGAGGAAGGAGCGCGCC-3’
LEPR Lysl09Arg F: 5’-TTT CCACT GTT GCTTT CGGA-З’ R: 5’-AAACTAAAGAATTTACT GTTG-AAACAAAT GGC-З’ 101 HaeIII
LEPR F: 5’-ACCCTTTAAGCTGGGTGTCCC-AAATAG-3’ MspI
Gln223Arg R: 5’-AGCTAGCAAATATTTTTGTAA-GCAATT-3’
^ш
Ген LEP, кодирующий синтез белка лептина человека, расположен на 7-й хромосоме в сегменте З1.З [18]. Было показано существование нескольких полиморфизмов в 5’ некодируемой области гена LEP [19, 20], из которых наиболее частым является A19G-полиморфизм. Проведенные исследования показали, что G-аллель в гомозиготном состоянии был ассоциирован с более низкими уровнями лептина по сравнению с AA- и AG-генотипами [20]. В то же время эти данные не были подтверждены в исследованиях во Франции и Финляндии [21, 22].
Функции лептина осуществляются с помощью связывания с лептиновым рецептором (LEPR), генетические варианты которого ассоциированы с большим спектром фенотипов, включая ожирение [2З], гиперлипидемию [24], диабет 2-го типа [25], рак молочной железы [26] и фенотип, определяющий циркулирующие уровни воспалительных маркеров [27]. Основными и наиболее частыми полиморфизмами гена LEPR являются Gln223Arg и Lysl09Arg. Роль полиморфизмов LEPR в детерминации лептинового профиля и МПКТ полностью не выяснена [28]. Показано, что Gln223Arg-полиморфизм гена LEPR играет важную роль в детерминации пика костной массы у корейских мужчин. Однако такая связь не обнаружена у женщин [29].
Целью настоящего исследования являлось изучение роли A19G-полиморфизма гена LEP, а также Gln223Arg- и Lys109Arg-полиморфизмов гена LEPR в формировании предрасположенности к постменопаузальному остеопорозу.
Материал и методы
Характеристика материала. Изучена выборка из З79 женщин в возрасте от 2З до 87 лет, проживающих в Московском регионе. Все они посетили Центр профилактики остео-пороза НИИР РАМН в период с 2005 по 2008 г. для рутинного клинико-инструментального обследования состояния костной системы. Из них 254 женщины постменопаузального возраста (от 46 до 87 лет, в среднем 67,5±7,9 года) составили группу больных с первичным остеопорозом (ОП). Все женщины были в естественной постменопаузе в течение 2 лет и более и не получали гормонозаместительной терапии. Ни одна из пациенток не принимала каких-либо лекарственных препаратов, которые могли влиять на МПКТ, таких как половые гормоны, глюкокортикоиды, кальций, витамин D и бисфосфонаты. У всех женщин отсутствовали заболевания, связанные с нарушениями костного метаболизма, такие как тиреоидит, диабет и заболевания почек. Остальные 174 здоровые неродственные женщины, проживающие в Москве или области, в возрасте от 2З до 84 лет (средний возраст 57,0+12,9 года) составили группу сравнения.
Каждая исследуемая была опрошена с помощью стандартного опросника, включавшего вопросы качества
жизни, анамнез менструальной и репродуктивной функций, перенесенных заболеваний, использования медикаментозных препаратов, перенесенных переломов, наличия семейного остеопороза.
У всех исследуемых были измерены антропологические показатели, проведено костное денситометрическое исследование и взяты образцы крови для выделения ДНК и изучения стандартных биохимических показателей. Кроме того, у части пациенток с ОП исследованы уровни биохимических маркеров костного ремоделирования: остеокальцина (ОК) и С-концевого телопептида коллагена 1-го типа (СТК). У всех исследованных женщин было получено информированное согласие для участия в настоящем исследовании.
Денситометрическое измерение МПКТ (в граммах на 1 см2) у всех женщин было проведено в поясничном отделе позвоночника (Li—Liv) и проксимальном отделе бедра методом DEXA (Hologic, QDR 4500 W). Коэффициент вариабельности измерений составлял от 1 до 5%.
Диагноз ОП ставился на основании критериев ВОЗ (Т-счет >-2,5 SD).
Генотипирование. Геномная ДНК была выделена из венозной крови всех женщин солевым методом [З0]. A^G-ва-рианты гена LEP и полиморфизмы Lysl09Arg и Gln223Arg гена LEPR были амплифицированы с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием специфических праймеров с последующим расщеплением соответствующими эндонуклеазами (табл. 1). ПЦР-смесь состояла из lxTaq полимеразного буфера (содержащего 2,5 mM MgCL), 200 мкмоль смеси деоксинуклеотид трифосфатов, 20 пмоль каждого ПЦР специфического праймера (компания «Синтол»), 1 ед. Taq полимеразы (компания «Хеликон») и 150—200 нг ДНК матрицы в общем объеме 20 мкл. Реакцию проводили в амплификаторе «Терцик» («ДНК Технология») или MyCycler (компании BioRaD) при следующих условиях: начальная денатурация при 94 "С — З мин с последующими З0 циклами денатурации при 94 "С — З5 с, отжига праймеров при 50— 60 "С — 45 с (в зависимости от состава праймеров), элонгации при 72 "С — 25 с и финальной достройкой при 72 "С в течение 5 мин. Ампликоны подвергали гидролизу соответствующими эндонуклеазами (компания «Сибэнзим») в соответствии с рекомендациями производителя. Продукты гидролиза (на основании которых устанавливались генотипы) амплифицированных ДНК-фраг-ментов были идентифицированы в 2—З% агарозном или 8% полиакриламидном геле, окрашены этидиумом бромидом с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете.
Биохимические показатели маркеров ремоделирования костной ткани ОК и СТК были исследованы в сыворотке больных ОП с помощью коммерческих наборов (Roche Diagnostics GmbH, Германия) согласно рекоменда-
Таблица 2
Возраст, годы Масса тела, кг Рост, см ИМТ, кг/м2
циям фирмы-производителя. Стандартные биохимические показатели — уровни кальция, фосфора и активность щелочной фосфатазы в сыворотке — были определены общепринятыми лабораторными методами.
Статистические методы. Различия в распределении частот генотипов и аллелей между группой больных и группой контроля определяли с помощью теста х2. Эффект влияния генотипов LEP и LEPR на антропологические параметры, МПКТ, уровни биохимических маркеров ремоделирования и общеклинических показателей был оценен с помощью метода ANOVA и post-hoc теста или непараметрического t-критерия Манна—Уитни. Значение p<0,05 считалось статистически значимым.
Результаты
В табл. 2 представлены базовые значения средних антропометрических, денситометрических и биохимических показателей в группе больных и в контроле. Практически все средние значения антропометрических и денситометрических показателей, а также уровень кальция в сыворотке в группе женщин с ОП статистически достоверно отличались от контроля.
Уровни фосфора и щелочной фосфа-тазы были сходными в обеих группах.
Анализ распределения частот изученных аллелей и генотипов у женщин с ОП и в контрольной группе представлен в табл. 3. Изучение частоты A19G-генотипов гена LEP у 248 пациенток с ОП и 120 женщин из контрольной группы показало статистически достоверные различия в их распределении (х2=9,4; p=0,009). Частота 19GG-генотипа у больных ОП была достоверно выше, чем в контроле [0R=2,0; 95% доверительный интервал (ДИ) 1,13-3,52 (р=0,011)].
Таким образом, вероятность возникновения ОП у носителей двойной дозы аллеля G была в 2 раза выше по сравнению с носителями других генотипов. Сравнение частоты комбинированного 19GG+19AG-генотипа в группе ОП и контроле показало незначительное снижение вероятности возникновения ОП [0R=1,9; 95% ДИ 1,1-3,23 (р=0,014)].
Носители 19GG-генотипа имели более низкий средний показатель МПКТ шейки бедра по сравнению с носителями гетерозиготного генотипа (0,598+0,088 и 0,620±0,076 г/см2), однако различия не достигали статистически значимой величины (p=0,06).
Полиморфизм Gln223Arg гена LEPR был изучен у 254 женщин с ОП и у 125 женщин из контрольной груп-
Характеристики изученной выборки
Характеристики Больные (n=247) Контроль (n=174) Р
67,4 ±7,9 64,7+11,2 156,9+7,1 26,8+8,0
57,0±12,9
81,4+13,6
160,0+17,2
З1,4+5,4
<0,001
<0,001
<0,050
<0,001
МПКТ, г/см2: Li—Liv позвоночника 0,716+0,081 1,028+0,084 <0,001
шейка бедра 0,616+0,078 0,842+0,066 <0,001
трохантер 0,549+0,081 0,749+0,08З <0,001
все бедро 0,742+0,10З 1,186+0,117 <0,001
СТК сыворотки, нг/мл 0,422+0,244
Остеокальцин сыворотки, нг/мл 42,6+18,2
Кальций сыворотки, моль/л 2,41+0,14 2,34+0,13 <0,001
Фосфор сыворотки, моль/л 1,16+0,76 1,12+0,17 0,587
Щелочная фосфатаза сыворотки, ед/л 173,0+60,6 172,4+82,3 0,939
Примечание. Все значения представлены как m+SD. СТК — С-концевой телопептид коллагена 1-го типа; ОК — остеокальцин.
Таблица 3
Распределение аллелей и генотипов ЬЕР (A19G), ЬЕРЯ ^Ы223Л^) и ЬЕРЯ (Ьу8109Л^) полиморфизмов в группе женщин с остеопорозом и в контроле
Полиморфизмы Частота аллелей и генотипов Р OR (95% ДИ)
больные, n (%) контроль, n (%)
A19G
Аллели
A 216 (44,0) 134(0,56) 0,002 0,6 (0,44-0,84)
G 280 (56,0) 106 (0,44) 0,002 1,6 (1,19-2,26)
Генотипы
AA 45 (18,1) 36 (30,0) 0,01 0,5 (0,30-0,89)
AG 126 (50,8) 62 (51,7)
GG 77 (31,0) 22 (18,3) 0,011 2,0 (1,13-3,52)
Gln223Arg
Аллели
Gln 252 (49,0) 114(45,6) Цд
Arg 264 (51,0) 136 (54,4)
Генотипы
GlnGln 60 (23,4) 26 (20,8) Цд
GlnArg 132 (52,4) 62 (49,6)
ArgArg 62(24,2) 37 (29,6)
Lys109Arg Аллели
Lys Arg Генотипы 161 (84,0) 32 (16,0) 128 (82,0) 28 (18,0)
LysLys LysArg ArgArg 66 (68,7) 29 (30,2) 1 (1,0) 55 (70,5) 18(23,1) 5 (6,4)
Примечание. Щ - различия недостоверны.
пы (см. табл. 3). Статистически достоверных различий не наблюдалось.
Анализ средних антропологических показателей выявил связь Gln223Arg-полиморфизма гена ЬЕРЯ с ростом у пациентов с ОП. Носители генотипа 223GlnGln имели достоверно более высокий рост по сравнению с носителями гетерозиготного генотипа
223GlnArg (158,8+6,2 и 156,1+7,7 см соответственно, р=0,04).
Для Gln223Arg-пoлимoрфизма гена LEPR также установлена связь с МПКТ. У носителей гетерозиготного 223GlnArg-генoтипа средние показатели МПКТ трохан-тера и МПКТ всего бедра были статистически достоверно ниже, чем у пациенток с 223ArgArg-генoтипoм (0,534+0,083 и 0,572+0,070 г/см2 соответственно, p=0,0l3, и 0,724+0,103 и 0,767+0,090 г/см2 соответственно, p=0,035).
Полиморфизм Lysl09Arg гена LEPR был изучен у 96 пациенток с OП и 78 женщин из контрольной группы (см. табл. 3). Статистически достоверных различий не выявлено. Средние значения антропологических и денситометри-ческих данных также существенно не различались.
Распределение всех изученных полиморфизмов соответствовало закону Харди-Вайнберга.
Анализ биохимических показателей костного ремоделирования в группе пациентов с OП выявил связь А19G-пoлимoрфизма гена LEP со средним уровнем OK сыворотки. Концентрация OK в сыворотке была изучена у 46, а уровни СТК - у 134 пациенток. Женщины с 19GG-вариантoм из группы OП имели более высокие средние уровни OK по сравнению с носителями 19АА-варианта (51,0+16,3 нг/мл против 30,6+12,7 нг/мл, p=0,01).
В нашем исследовании мы не выявили зависимости содержания маркера резорбции костной ткани СТК, кальция, фосфора и щелочной фосфатазы у женщин с OП от изученных полиморфизмов генов LEP и LEPR.
Обсуждение результатов
Частота G-аллеля в московской контрольной выборке здоровых женщин, равная 0,44, была сходна с его частотой в итальянской (0,38) и французской (0,36) популяциях, но достоверно отличалась от финской (0,67) [20-22]. Шиболее частый полиморфизм A19G гена LEP хорошо изучен при ожирении [21, 22]. Известно, что жировая ткань является важным источником синтеза эстрогенов у женщин в постменопаузе. Избыточное наличие жировой ткани ассоциируется с высокими уровнями инсулина [31, 32]. Эти гормоны участвуют в процессах костеобразования. Жировая ткань является также источником цитокинов, которые оказывают влияние на МПКТ [32]. Кроме того, показано, что у женщин с OП количество адипоцитов в костном мозге выше, чем у женщин с нормальными показателями МПКТ [33]. Вместе с тем отмечено, что ожирение не связано с A19G-пoлимoрфизмoм гена LEP [22]. Авторы показали, что он не ассоциирован ни с одним из показателей, связанных с ожирением: массой тела, индексом массы тела (ИМТ), массой жира. В изученной нами выборке около 40% женщин с OП имели повышенный ИМТ (>25 кг/м2), однако мы не установили связи ИМТ с A19G-пoлимoрфизмoм гена LEP. Данный полиморфизм также не был связан ни с одним из антропометрических показателей. Шши данные согласуются с результатами, полученными в финской популяции. Авторы показали отсутствие связи A19G-пoлимoрфизма с возрастом, ростом и ИМТ [22]. В доступной литературе нам не встретилось исследований по ассоциации A19G-пoлимoр-физма с МПКТ у женщин с O^
В группе пациенток с OП нами впервые была выявлена статистически значимо повышенная частота 19GG-генотипа по сравнению с контролем.
Пациентки с 19GG-генотипом имели средний показатель МПКТ шейки бедра на 4% ниже по сравнению с носителями 19АА. Однако, с другой стороны, эти пациентки имели повышенные уровни ОК и СКТ сыворотки по сравнению с носителями 19АА-генотипа. Трактовать полученные данные сложно. Не исключено, что высокие уровни маркеров костеобразования и резорбции у носителей 19GG могут быть связаны с усиленным метаболизмом костной ткани. При этом скорость процесса резорбции кости может доминировать над скоростью образования новой костной ткани. С другой стороны, связь сниженной МПКТ и высоких значений маркера костеобразования может реализовываться на уровне трабекулярного строения кости. Полученные нами данные о связи уровня ОК с МПКТ в зависимости от A19G-полиморфизма гена ЬЕР, с нашей точки зрения, требуют дальнейшего подтверждения на более значительных выборках.
Наши данные, показавшие ассоциацию Gln223Arg-полиморфизма гена ЬЕРЯ с МПКТ трохантера и всего бедра согласуются с результатами и. Fairbrother и соавт. [34], которые сообщают, что гетерозиготные носители этого полиморфизма имели более низкие показатели МПКТ в обеих областях и более низкий рост. Кроме того, Gln223Arg-полиморфизм, по данным этих авторов, ассоциировался с риском развития переломов позвоночника (ОЯ=1,76; р=0,0004). У молодых китаянок, молодых корейских и европейских мужчин Gln223Arg-поли-морфизм был ассоциирован с пиком костной массы [28, 35]. Среди 270 взрослых европейцев были выявлены ассоциация Gln223Arg-полиморфизма с костной щелочной фосфатазой и отсутствие связи с МПКТ [36]. Интерпретация связи полиморфизмов гена ЬЕРЯ с МПКТ затруднена из-за плейотропных функций системы лепти-на. В одном из исследований [37] приведены потенциальные факторы, отвечающие за связь между уровнями лептина и костной массы. К ним относятся сниженные уровни гормонов, возраст наступления менопаузы, повышенная активность провоспалительных цитокинов, размеры тела, его состав, наличие ожирения. Мы не обнаружили связи Lys109Arg-полиморфизма гена ЬЕРЯ с размерами тела, ИМТ и МПКТ у пациентов с ОП. При изучении полиморфизма Lys109Arg среди корейских женщин [29] авторы показали, что он ассоциирован с МПКТ, но только у женщин в пременопаузе. Это могло быть связано с различиями в уровнях половых гормонов, поскольку женщины в постменопаузе не получали гормонозаместительную терапию и показали сниженные средние уровни эстрадиола.
Настоящая работа имеет некоторые ограничения. Поскольку она является одномоментной, мы не смогли наблюдать изменений в показателях МПКТ или в скорости возникновения будущих переломов. Кроме того, не определены молекулярные механизмы выявленных ассоциаций. В целом не понятна причинная связь между заболеванием и установленной ассоциацией, что диктует необходимость продолжения генетических исследований данной патологии.
Изучение роли лептина, его рецептора, их генетических полиморфизмов, а также влияния центральной нервной системы (системы гипоталамуса) необходимо для уточнения патогенетических механизмов развития ОП и других вариантов патологии костей.
ЛИТЕРАТУРА
1. Rosen C.J., Beamer W.G., Donahue L.R. et al. Defining the genetics of osteoporosis: Using the mouse to understand man. Osteoporosis Int 2001;12:803-10.
2. Uitterlinden A.G., van Meurs J.B., Rivadeneira F. et al. Identifying genetic risk factors for osteoporosis. J Musculoskelet Neuronal Interact 2006;6:16-6.
3. Tzakas P., Wong B.Y., Logan A.G. et al. Transforming growth factor beta-1 (TGFB1) and peak bone mass: Association between intragenic polymorphisms and quatitative ultrasound of the heel. BMC Musculoskelet Disord 2005;14:6-29.
4. Chung H.W., Seo J.-S., Hur S.E. et al. Association of interleukin-6 promoter variant with bone mineral density in premenopausal women. J Hum Genet 2003;48:243-8.
5. Grant S.F.A., Reid D.M., Blake G. et al. Reduced bone density and osteoporosis associated with a polymorphic Sp1 binding site in the collagen type 1-alpha 1 gene. Nat Genet 1996;14:203-5.
6. Uitterlinden A.G., Burger H., Huang Q. et al. Relation of alleles of the collagen type 1-alpha-1 gene virto bone density and the risk of osteoporotic fractures in postmenopausal women. N Engl J Med 1998;338:1016-21.
7. Baker A.R., McDonnell D.P., Hughes M. et al. Cloning and expression of full-length cDNA encoding human vitamin D receptor. Proc Natl Acad Sci USA 1988;85:3294-8.
8. Тагиева А.Н., Сметник В.П., Сухих Г.Т. и др. Изучение роли генов рецептора витамина D (VDR), альфа-рецептора эстрогенов (ERa) и альфа-1-цепи коллагена первого типа (C0LIA1) в заболеваемости постменопаузальным остеопорозом. Мед генет 2005;4(2):90-5.
9. Uitterlinden A.G., Arp P.P., Paeper B.W. et al. Polymorphisms in the sclerosteosis/van Buchem disease gene (SOST) region are associated with bone-mineral density in elderly whites. Am J Hum Genet 2004;75:1032-45.
10. Mizuguchi T., Furuta I., Watanabe Y. et al. LRP5, low-density-lipoprotein-receptor-related protein 5, is a determinant for bone mineral density. J Hum Genet 2004;49:80-6.
11. Choi J.Y., Shin A., Park S.K. et al. Genetic polymorphisms OPG, RANK, and ESR1 and bone mineral density in Korean postmenopausal women. Calcif Tissue Int 2005;77:152-9.
12. Крылов М.Ю., Греченко А.В., Самар-кина Е.Ю. и др. Ассоциация минераль-
ной плотности костной ткани с полиморфизмами гена альфа-рецептора эстрогена (ESR) при постменопаузальном остеопорозе. Науч-практич ревматол 2005;1:8-11.
13. Ralston S.H. Genetic determinants of osteoporosis. Curr Opin Rheumatol 2005;17:475-9.
14. Ferrari S.L., Rizzoli R. Gene variants for osteoporosis and their pleiotropic
effects in aging. Mol Aspects Med 2005;26:145-67.
15. Zhang Y., Proenca R., Maffei M. et al. Positional cloning of the mouse obese gene and its human homologue. Nature 1994;372:425-32.
16. Pasco J.A., Henry M.J., Kotowicz M.A. et al. Serum leptin levels are associated with bone mass in no obese women. J Clin Endocrinol Metab 2001;86:1884-7.
17. Blain H., Vuillemin A., Guillemin F. et al. Seruml leptin level is a predictor of bone mineral density in postmenopausal women. J Clin Endocrinol Metab 2002;87:1030-5.
18. Isse N., Ogawa Y., Tamura N. et al. Structural organization and chromosomal assignment of the human obese gene. J Biol Chem 1995;270:27728-33.
19. Mammes O., Betoulle D., Aubert R. et al. Novel polymorphism in the 5' region of LEP gene. Diabetes 1998;47:487-9.
20. Hager J., Clement K., Francke S. et al. A polymorphism in the 5' untranslated region of the human ob gene is associated with low leptin levels. Int J Obes 1998;22:200-5.
21. Lucantoni R., Ponti E., Berselli M.E. et al. The A19G Polymorphism in the 5' Untranslated Region of the Human Obese GeneDoes Not Affect Leptin Levels in Severely Obese Patients. J Clin Endocrinol Metab 2000;85:3589-91.
22. Karvonen K., Pesonen U., Heinonen P. et al. Identification of new sequence variant in the leptin gene. J Clin Endocrinol Metab 1998;83:3239-42.
23. Perusse L., Rankinen T., Zuberi A. et al. The human obesity gene map: The 2004 update. Obes Res 2005;13:381-490.
24. Van der Vleuten G.M., Kluijtmans L.A., Hijmans A. et al. The Gln223Arg polymorphism in the leptin receptor is associated with familial combined hyperlipi-demia. Int J Obes Relat Metab Disord 2006;30:892-8.
25. Park K.S., Shin H.D., Park B.L. et al. Polymorphisms in the leptin receptor (LEPR) - putative association with obesity and T2DM. J Hum Genet 2006;51:85-91.
26. Snoussi K., Strosberg A.D., Bouaouina
N. et al. Leptin and leptin receptor polymorphisms are associated with increased risk and poor prognosis of breast carcinoma. BMC Cancer 2006;20:6-38.
27. Zhang Y.Y., Gottardo L., Mlynarski W. et al. Genetic variability at the leptin receptor (LEPR) locus is a determinant of plasma fibrinogen and C-reactive protein levels. Atherosclerosis 2007;191(1):121-7.
28. Koh J.M., Kim D.J., Hong J.S. et al. Estrogen receptor alpha gene polymorphisms Pvu II and Xbal influence association between leptin receptor gene polymorphism (Gln223Arg) and bone mineral density in young men. Eur J Endocrinol 2002;147:777-83.
29. Song K.H., Koh J.M., Hong J.S. et al. Lack of association between bone mineral density and leptin receptor gene polymorphism in young women and postmenopausal women. Kor J Bone Metab 2003;10:39-46.
30. Miller S.A., Dykes D.D., Polesky H.F. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res 1988;16:12-5.
31. Grodin J., Siiteri P., McDonald P.
Source of estrogen production in postmenopausal women. J Clin Endocrinol Metab 1973;36:207-14.
32. Reid I. Relationships among body mass, its components, and bone. Bone 2002;13:547-55.
33. Justensen J., Stenderup K., Ebbesen E.N. et al. Adipocyte tissue volum in bone marrow in increased with aging and in patients with osteoporosis. Biogerontology 2001;2:165-71.
34. Fairbrother U., Tanko L., Walley A. et al. Leptin Receptor Genotype at Gln223Arg Is Associated With Body Composition, BMD, and Vertebral Fracture in Postmenopausal Danish Women. J Bone Miner Res 2007;22:544-50.
35. Jiao J., Meng X.W., Xing X.P. et al.
Bone mineral density and leptin receptor polymorphism Gln223Arg in Han women in Beijing. Zhong-hua Nei Ke Za Zhi 2004;4:276-9.
36. Crabbe P., Goemaere S., Zmierczak H. et al. Are serum leptin and the Gln223Arg polymorphism of the leptin receptor determinants of bone homeostasis in elderly men? Eur J Endocrinol 2006;154:707-14.
37. Rosen C.J., Ackert-Bicknell C., Beamer W.G. et al. Allelic differences in a quantitative trait locus affecting insulin-like growth factor-1 impact skeletal acquisition and body composition. Pediatr Nephrol 2005;20:255-60.
Поступила 06.04.2010
