CC BY
57
УДК 615.322:547.8145.06:543.544.5.068.7
ПОЛИФЕНОЛЬНЫЙ СОСТАВ ЛИСТЬЕВ КРЫЖОВНИКА ОТКЛОНЕННОГО И ШЕЛКОВИЦЫ ЧЕРНОЙ
С.Л. ПЕЛИВДНОВД И.И.СЕЛИНА О.Д. АНДРЕЕВА Э.Т. ОГАНЕСЯН
Пятигорский филиал Волгоградского государственного медицинского университета
В статье изложены результаты исследования полифенольного состава крыжовника отклоненного (Grossulariareclinata (L) Mill.) и шелковицы черной (MorusnigraL.) методом ВЭЖХ. С помощью современных методов анализа установлено количественное содержание таких биологически активных веществ (БАВ), как хлорогеновая кислота, эпигаллокатехин галлат (ЭПГКГ), рутин.
Ключевые слова: крыжовник отклоненный, шелковица черная, метод ВЭЖХ, флавоноиды, кумарины и фенолкарбоновые кислоты.
e-mail: [email protected]
Введение. Для изучения полифенольного состава полученных извлечений из крыжовника отклоненного - Grossulariareclinata (L) Mill, (сорт - Московский красный) и шелковицы черной (MorusnigraL.) использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). С этой целью получили извлечения из листьев крыжовника отклоненного и листьев шелковицы черной трехкратной экстракцией спиртом этиловом 40%. Полученные извлечения объединяли, спирт отгоняли под вакуумом до объема 25 мл и далее подвергали детектированию. В экстракте крыжовника обнаружено 23 вещества, из которых идентифицировано 13 соединений полифеноль-ной природы. В экстракте шелковицы обнаружено 16 веществ, из которых идентифицировано 6 соединений полифенольной природы. Они представлены главным образом флавоноидами, ку-маринами и фенолкарбоновыми кислотами.
Обращает на себя внимание тот факт, что на ВЭЖХ-хроматограммах не идентифицировано 5 веществ экстракта крыжовника и 9 веществ экстракта шелковицы, характеризующихся высокой интенсивностью и значительными площадями пиков.
Цель исследования - изучение полифенольного состава листьев крыжовника отклоненного и шелковицы черной
Материалы и методы. Условия хроматографирования. Изучение качественного состава фенольных соединений проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы «GILSTON», модель 305, ФРАНЦИЯ; инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для «Windows». В качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка размером 4,6x250 мм KromasilC 18, размер частиц 5 микрон [3].
В качестве подвижной фазы - метанол-вода-фосфорная кислота концентрированная, в соотношении 400:600:5. Анализ проводили при комнатной температуре. Скорость подачи элюента 0,8 мл/мин. Продолжительность анализа 70 мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора «GILSTON» UV/VIS модель 151, при длине волны 254 нм.
Для исследования использовали представленный образец в разведении 1:10 70% спиртом этиловым (исследуемый раствор).
Параллельно готовили серию 0,05% растворов сравнения в 70% спирте этиловом: рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, геспередина, апигенина, гиперозида, дигидрок-верцетина, кемпферола, витексина,изовитексина, нарингенина, изорамнетина галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, цикориевой кислоты, коричной кислоты, феруловой кислоты, эллаговой, о-кумаровой, аскорбиновой кислоты, умбеллиферона, эскулетина, кумарина, метоксикумарина, эпигалокатехингаллата, эпикатехина. По 20 мкл исследуемого раствора и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали по вышеприведенной методике [1, 3, 4]-
Результаты и их обсуждение. Результаты проведенных исследований экстрактов крыжовника отклоненного и шелковицы черной приведены на рис. 1, 2 и в табл. 1, 2.
т\
250
200
150
100
50
непошш к-
||К(ф|Н'И;|||
фейн
план
н Н
II кксш
<|нру. инын к- га не пштексн
1)КМ1»111)И
;11^идентифицир
Крщщн
1У11П
К
Т1#
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101112 13 14 151617 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 3132 33 34 35 36 37 38 39 40 4142 4Эяин Рис. 1. ВЭЖХ-хроматограмма 4096 спиртового экстракта крыжовника отклоненного
»¡«спмегак-ии <ули рмн
рушн
/\
2 3 4 5 6 7 8 9 101112131 -11516171819202122232425262728293(13132333435363738394(14 1424344454647 мни
Рис. 2. ВЭЖХ-хроматограмма 4096 спиртового экстракта шелковицы черной
Таблица 1
Идентифнация фенольных соединений 40% спиртового экстракта листьев крыжовника отклонненого методом ВЭЖХ
Идентифицированные Время Количественное
соединения удерживания, сек соотношение, %
Галловая к-та 250,4 6-51
Хлорогеновая к-та 314,6 4,30
Цикориевая к-та 347,0 6,00
Кофейная к-та 423,4 6,69
Феруловая к-та 895,2 1,34
Витексин 633,6 3,99
Рутин 1301,4 1,35
Изовитексин 788,4 1,41
Таннин 197,5 6,37
ЭГКГ 301,0 3,39
Эпикатехин 377,4 5,55
Кумарин 1056,0 0,48
II
ва я к-тя
и
н
и
н
н
II
н
Таблица 2
Идентификация фенольных соединений 40% спиртового экстракта листьев шелковицы черной методом ВЭЖХ
Идентифицированные соединения Время удерживания, сек Количественное соотношение, %
Танин 196,56 29,76
Галловая кислота 249,06 7,23
Хлорогеновая кислота 315,48 5,16
Кофейная кислота 431,34 3,69
Рутин 1283,40 3,36
Оксиметоксикумарин 1696,20 0,69
Количественное определение хлорогеновой кислоты и ЭПГКГ в экстракте крыжовника отклоненного методом ВЭЖХ.
Для исследования использовали представленный образец в разведении 1:10 70% спиртом этиловым (исследуемый раствор).
Параллельно готовили растворы в 70% спирте метиловом PCO. Для этого около 0,02 г (точная навеска) хлорогеновой кислоты или 0,04 ЭПГКГ помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл спирта этилового 70%, перемешивали до растворения и доводили объём до метки тем же растворителем (PCO).
По 20 мкл исследуемого раствора и раствора PCO вводили в хроматограф и хроматографи-ровали по вышеприведенной методике [2, 5].
Расчет количественного содержания хлорогеновой кислоты и ЭПГКГ производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы «Мультихром» для Windows и с помощью формулы:
С% = Shc. х Сет, х юох 10 х 100. где Sct. xlx (100 - W)
S ис. - площадь пика хлорогеновой кислоты или ЭПГКГ в исследуемом растворе;
S ст. - площадь пика стандартного раствора PCO хлорогеновой кислоты или ЭПГКГ;
С % - концентрация хлорогеновой кислоты или ЭПГКГ в % в испытуемом образце;
С ст.- концентрация PCO хлорогеновой кислоты или ЭПГКГ в г/мл;
а - навеска исследуемого образца в г;
W - влага в %.
Результаты проведенных исследований приведены в табл. 3.
Таблица 3
Результаты количественного определения хлорогеновой кислоты и ЭПГКГ в экстракте крыжовника методом ВЭЖХ
Найдено в %
хлорогеновой кислоты ЭПГКГ
0,051 0,0996
Количественное определение хлорогеновой кислоты и рутина в экстракте шелковицы методом ВЭЖХ.
Для исследования использовали представленный образец в разведении 1:20 70% спиртом этиловым (исследуемый раствор).
Параллельно готовили растворы в 70% спирте метиловом PCO. Для этого около 0,02 г (точная навеска) хлорогеновой кислоты или 0,08 рутина помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл спирта этилового 70%, перемешивали до растворения и доводили объём до метки тем же растворителем (PCO).
По 20 мкл исследуемого раствора и раствора PCO вводили в хроматограф и хроматографи-ровали по вышеприведенной методике [3, 5].
Расчет количественного содержания хлорогеновой кислоты и рутина производили методом абсолютной калибровки с помощью компьютерной программы «Мультихром» для Windows и с помощью формулы:
С% = Shc. X Сет. X 100 X 20 X 100. где Sct. XIX (100 - W)
S ис. - площадь пика хлорогеновой кислоты или рутина в исследуемом растворе; S ст. - площадь пика стандартного раствора PCO хлорогеновой кислоты или рутина; С % - концентрация хлорогеновой кислоты или рутина в % в испытуемом образце; С ст.- концентрация PCO хлорогеновой кислоты или рутина в г/мл; а - навеска исследуемого образца в г; W - влага в %.
Результаты проведенных исследований приведены в табл. 4.
Таблица 4
Результаты количественного определения хлорогеновой кислоты и рутина в представленном образце методом ВЭЖХ
Найдено в %
хлорогеновой кислоты рутина
0,14 0,058
Выводы:
1. Проведены химические исследования листьев крыжовника отклоненного Grossulariareclinata (L) Mill, и листьев шелковицы черной (MorusnigraL.).
Впервые обнаружены:
• в листьях крыжовника отклоненного: галловая, хлорогеновая, цикориевая, кофейная, феруловая кислоты, витексин, изовитексин, рутин, танин, ЭГКГ, эпикатехин, кумарин;
• в листьях шелковицы черной: танин, галловая, хлорогеновая, кофейная кислоты, рутин, оксиметоксикумарин.
2. С помощью современных методов установлено количественное содержание некоторых групп БАВ:
• в листьях крыжовника: хлорогеновая кислота - 0,051%, ЭПГКГ - 0,0996%;
• в листьях шелковицы: хлорогеновая кислота - 0,14%, рутин - 0,058%.
Литература
1. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды / В.А. Бандюкова // Химия природ, сырья. - 1983. - № 3. - С. 263-273.
2. Дейнека, В.И. ВЭЖХ в исследовании флавоноидов. Определение рутина / В.И. Дейнека, А.М. Григорьев, В.М. Староверов // Хим-фармац. жури. - 2004. - Т. 38, № 4. - С. 23-25.
3. Запрметов, М. Н. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях // М. Н. Запрметов. - М.: Наука, 1993.-272 с.
4. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений // Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. - Алма-Ата : Наука, 1978. - 220 с.
5. Лобанова, И.Ю. Изучение влияния рН среды на характер УФ-спектров при очистке водных извлечений от сопутствующих соединений при количественном определении фенологликозидов коры осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова, С.С. Рассыпнова // Актуальные проблемы фармации : сб. науч. ст. - Барнаул, 2008. - С. 68-73.
P0IYPHEN0IIC COMPOSITION OF GOOSEBERRY REJECTED AND DIACK MULBERRIES LEAVES
S.L. PELIVANOVA I.I. SELINA A.O.ANDREEVA E.T. OGANESYAN
Pyatigorsk Branch of Volgograd State Medical University
Investigation of polyphenol composition of gooseberry rejected (Grossularia reclinata (L) Mill.) and black mulberry (Morus nigra L.) is reported by HPLC in this article. Quantitative content of biologically active substances (BAS) such as chlorogenic acid, epi-gallocatechin gallate (EPGKG), routines was established by using modern methods of analysis.
Keywords: gooseberry rejected, black mulberry, the HPLC method, flavonoids, coumarins and phenol carbonic acids.
e-mail: [email protected]
