Показатели клеточного и гуморального иммунитета у беременных, перенесших герпес-вирусную инфекцию Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 618.2/3:612.017.1:616.523 А.С.Соловьева

ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У БЕРЕМЕННЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ГЕРПЕС-ВИРУСНУЮ ИНФЕКЦИЮ

ГУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН

РЕЗЮМЕ

При беременности часто обостряется герпесвирусная инфекция, вызывающая осложнения течения системных процессов. Осложнения затрагивают синтез гормонов в плаценте, окислительно-восстановительные процессы в клетках крови и фосфолипидный обмен в мембранах иммуноци-тов. В представленной работе подробно разбираются изменения клеточного состава Т-лимфоцитов и характер активности

В-лимфоцитов в периферической крови на различных этапах беременности при обострении гер-пес-вирусной инфекции. Освещается активность цитокинов провоспалительного действия и интенсивность секреции в периферическую кровь различных видов иммуноглобулинов.

SUMMARY

A.S.Solovieva

CELLULAR AND HUMORAL IMMUNE INDICES IN PREGNANT PATIENTS WITH HERPES VIRUS INFECTION

Disturbances of hormone synthesis in placenta, oxidation-reduction systemic processes in blood cells and phospholipids metabolism in immunocyte membrane often lead to exacerbation of herpes virus infection in pregnancy. The paper gives a detailed description of changes in cell content of T-lymphocytes and B-lymphocyte activity in peripheral blood during different gestation periods in patients with herpes virus infection. We analyze anti-inflammatory cytokine activity and secretion rate of different immunoglobuline into peripheral blood.

Иммунные ответы на неэмбриональные антигены при беременности ослаблены. Иммуносупрессия зависит не только от гормональной перестройки беременных, но и от наличия целого ряда специфических белков: фетопротеинов, плацентарных гликопротеинов. Эти белки наслаиваются на антигены клеточных мембран плаценты, несущие аллостерические гены отцовского происхождения, либо на реагирующие лимфоциты самой беременной. Неспецифическая иммуносупрессия является системным процессом, управляемым

из центральных органов иммуногенеза. Доказательством этому является отмеченное многими исследователями [1] уменьшение массы тимуса, спленомегалия (за счет увеличения красной пульпы), расширение мозгового вещества и паракортикальной зоны региональных лимфатических узлов. Лимфоциты-супрессоры при беременности аккумулируются и в лимфатических узлах, особенно дренирующих матку. Они подавляют цитотоксичноть любых аллогенных лимфоцитов и ослабляют их способность вызывать реакцию трансплантата против хозяина [2]. Супрессоры-лимфоциты в крови беременных женщин обнаруживаются, начиная с 5-й недели гестации. Они очень важны для предотвращения спонтанных абортов и повышения цито-токсической активности лимфоцитов.

Материалы и методы исследования

Исследуемую группу составили 80 женщин с обострением и в состоянии ремиссии герпес-вирусной инфекции на различных этапах беременности. Фосфолипиды мембран лимфоцитов определяли методом тонкослойной хроматографии. Иммуноглобулин Е определялся с помощью наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск). Показатели клеточного иммунитета производились с помощью стандартных тестов 1 и 2 уровней по Р .Петрову и Р.М.Хаитову.

Активность сукцинатдегидрогеназы производилась по Шелтон-Шнейдеру, АТФазы по Падикула, ганглиозиды определялись методом Бьюкнера, ми-элопероксидаза - по методу Карновеки.

Результаты исследования

Прямое действие вирусов герпеса на структурное и функциональное состояние иммунной системы весьма выражено во время беременности как на центральные органы иммуногенеза, так и на продуцируемые ими элементы, циркулирующие в периферической крови. В период обострения ВПГ начинают страдать как Т-, так и В-клетки иммунной системы матери. На уровне титра антител 1:12800 подавляется дифференцировка лимфоидных элементов как в сторону Т-лимфоцитов, так и в сторону формирования Т-хелперов. Особенно отчетливо проявляется уменьшение в периферической крови лимфоцитов-супрессоров. При высоком титре антител к вирусу герпеса это становится очевидным на всех этапах

беременности, особенно, если обострение происходило в первую половину беременности. Обычного увеличения процентного содержания лимфоцитов-супрессоров к моменту родов до 12-15% не наблюдается. Процент Т-супрессоров становится в пределах 5-7%. Одновременно в периферической крови беременных при любой интенсивности вирусной инфекции содержание Т-лимфоцитов (в том числе и популяция Т-хелперов) снижается на 10-15% (табл. 1-4).

При герпес-вирусной инфекции стимулируется продукция В-лимфоцитов на всех этапах беременности. Мы отмечаем, что в этот период значительно активизируется выработка ^Е (табл. 5). Заметно нарушается иммуннорегуляторный индекс. На всех этапах беременности при обострении ГВИ отмечается увеличение соотношения СБ4:СБ8 (табл. 6).

Рассматривая уровень фагоцитарной активности при ГВИ у беременных, мы отметили, что при высоком титре антител к вирусу герпеса фагоцитарная активность резко возрастала и составила 56,0±2,1%; фагоцитарное число было 9,5±0,8 усл.ед., а фагоцитарный индекс - 1,6±0,06 усл.ед. У здоровых беременных эти цифры не превышали 45,2±1,2% при оценке фагоцитарной активности; 8,5±0,8 усл. ед. составляло фагоцитарное число, а фагоцитарный индекс был равен 1,2 усл. ед (рис. 1).

Микробицидная активность клеток периферической крови была значительно выше при обострении

ГВИ у беременных, нежели в период ремиссии. Это подтверждается увеличением числа лейкоцитов в периферической крови с интенсивной реакцией на миэлопероксидазу (рис. 2, 3).

Стимуляции макрофагальной системы в периферической крови беременных при герпес-вирусной инфекции реализуется не только в повышении их фагоцитарной активности, но и приводит к выработке интерлейкинов провоспалительного характера: ТОТа и 1Ь-8 (табл. 7).

Повышенное содержание ТОТа (90,4±2,8 пг/мл; контроль - 20±1,1 пг/мл) и 1Ь-8 (144,0±5,6 пг/мл; контроль 0) оказывают прямое влияние на лимфоциты периферической крови. Появляется до 0,5±1% лимфоцитов с признаками апоптоза.

Иммунные комплексы при герпес-вирусной инфекции во время беременности

Антитела продуцируются в организме для нейтрализации и выведения антигенов, поэтому в организме в кровеносном русле постоянно присутствует широкий спектр циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) с различными структурными и биологическими свойствами. Образование ЦИК - явление нормального иммунного ответа.

Незначительное количество ЦИК всегда присутствует в крови у здоровых беременных. Однако уровень ЦИК существенно увеличивается при вирусных

Таблица1

Иммунологические показатели беременных женщин с герпес-вирусной инфекцией на различных этапах

гестации при титре антител к ВПГ от 1:3200 до 1:6400

Триместры Лимфоциты, % Т-лимфо-циты, % В-лимфо-циты, % О-лим-фоциты, % Т-хел-перы, % Т-суп-рессоры, % IgA, г/л £-5 ед и (.3 « аде ЦИК, ед. опт. пл.

I триместр Контроль 32,4±1,1 35,0±2,0 55,0±2,1 р<0,05 62,5±2,0 19,0±0,4 р<0,01 14,1±1,3 40,0±0,9 р<0,001 20,8±1,3 47,0±1,8 49,9±2,0 8,0±0,9 р<0,01 12,6±1,2 2,2±0,06 р<0,001 1,32±0,12 1,6±0,04 1,22±0,25 17,5±0,8 р<0,01 12,8±1,2 0,115±0,004

II триместр Контроль 26,6±3,1 30,0±1,9 49,0±2,2 р<0,01 61,9±2,0 19,5±1,3 р<0,05 14,8±1,0 30,4±1,4 р<0,001 20,6±1,0 43,3±2,3 р<0,01 50,9±1,0 5,7±0,4 р<0,001 11,0±0,55 1,66±0,08 р<0,01 2,0±0,05 1,71±0,05 р<0,001 1,34±0,06 14,0±1,2 12,8±1,15 0,117±0,03

III триместр Контроль 28,0±1,1 32,0±1,7 57,0±1,4 р<0,01 64,4±2,0 20,2±0,95 р<0,001 13,9±1,2 29,8±1,2 р<0,001 20,6±1,0 43,8±1,9 р<0,05 51,7±2,4 7,0±0,5 р<0,001 12,7±1,28 1,88±0,03 р<0,001 0,99±0,09 1,82±0,01 р<0,001 1,36±0,06 16,2±0,95 р<0,01 11,0±1,2 0,113±0,04

Таблица 2

Иммунологические показатели беременных женщин с герпес-вирусной инфекцией

при титре антител 1:12800

Триместры Лимфоциты, % Т-лимфо-циты, % В-лимфо-циты, % О-лимфо-циты, % Т-хел-перы, % Т-супрес-соры, % ^А, г/л £-5 ед и О |н ЦИК, ед. опт. пл.

I триместр Контроль 30,0±1,7 р<0,05 36,0±1,8 46,3±3,2 р<0,01 60,0±2,0 19,5±0,3 р<0,001 14,1±1,31 12,5±1,4 р<0,001 20,8±1,3 40,0±1,9 р<0,01 49,9±2,0 6,3±0,8 р<0,001 12,6±1,2 0,97±0,08 р<0,05 1,32±0,1 1,2±0,05 1,2±0,2 15,0±0,7 р<0,05 12,8±0,8 0,160±0,08

II триместр Контроль 25,7±2,3 30,0±1,9 52,0±1,8 р<0,001 61,9±2,0 19,5±1,7 р<0,05 14,8±1,0 24,0±1,6 р<0,05 20,6±1,0 45,0±2,8 р<0,05 50,9±1,0 7,0±1,1 р<0,01 11,0±0,5 2,9±0,06 2,0±0,05 1,5±0,1 1,3±0,06 17,7±0,5 р<0,001 12,8±1,1 0,18±0,03

III триместр Контроль 25,0±1,1 р<0,05 32,0±1,7 53,3±2,9 р<0,01 64,0±2,0 18,5±3,5 12,9±1,2 29,3±4,1 р<0,05 20,6±1,0 48,0±4,9 51,7±2,4 5,3±0,2 р<0,001 12,3±1,5 1,0±0,05 0,99±0,03 1,75±0,2 1,36±0,06 15,3±0,4 р<0,001 12,0±0,7 0,171±0,02

Таблица 3

Иммунологические показатели у беременных женщин с герпес-вирусной инфекцией при титре антител в пределах от 1:6400 до 1:1600

Триместры, нед. I триместр II триместр III триместр

10 неделя 13 неделя 23 неделя 32 неделя 35 неделя

Титр антител 1:6400 1:6400 1:3200 1:1600 1:1600

Дата 14.03.01 02.04.01 16.06.01 23.08.01 18.09.01

Лимфоциты, % 23,2±1,4 32,0±1,4 27,0±1,3 29,1±0,9 20,0±1,3

Т-лимфоциты, % 36,0±1,5 42,0±1,9 50,0±2,1 56,5±1,8 55,0±2,6

В-лимфоциты, % 28±1,1 22,0±1,2 18,1±0,8 18,8±0,7 19,0±1,8

О-лимфоциты, % 16,7±1,3 16,4±1,3 40,5±0,7 45,2±1,8 45,1±2,6

Т-хелперы, % 30,0±1,2 36,0±1,9 44,0±2,6 44,0±1,1 42,0±0,9

Т-супрессоры, % 6,0±0,6 6,0±0,9 66,0±0,8 12,5±1,3 13,0±1,1

^А, г/л 2,8±0,3 3,6±0,3 2,4±0,1 5,0±0,8 1,9±0,3

^М, г/л 2,2±0,1 2,4±0,1 3,0±0,3 3,3±0,3 1,75±0,2

^в, г/л 10,0±0,9 16,5±0,9 16,0±0,9 20,5±0,9 19,5±0,4

ЦИК, ед.опт.пл. 0,115±0,03 0,129±0,008 0,113±0,003 0,117±0,05 0,113±0,006

Таблица 4

Иммунологические показатели у беременных женщин с герпес-вирусной инфекцией при титре антител

1:3200 на всем протяжении беременности

Триместры, нед. I триместр II триместр III триместр

18 неделя 22 неделя 26 неделя 30 неделя

Титр антител 1:3200 1:3200 1:3200 1:3200

Лимфоциты, % 34,1±1,2 29,0±2,6 27,0±1,9 31,4±3,5

Т-лимфоциты, % 63,0±2,9 45,0±2,8 57,6±1,8 51,8±2,9

В-лимфоциты, % 32,0±2,2 24,8±0,95 27,3±0,9 29,6±1,9

О-лимфоциты, % 25,7±0,6 41,3±2,2 46,3±2,9 20,7±0,8

Т-хелперы, % 33,1±4,9 35,5±2 38,4±1,8 38,2±1,9

Т-супрессоры, % 12,0±0,9 13,1±0,8 10,0±1,1 11,5±0,9

^А, г/л 2,5±0,6 3,4±0,5 4,0±0,6 2,0±0,2

^М, г/л 2,3±0,4 1,4±0,3 2,5±0,3 1,1±0,08

^в, г/л 14,0±1,1 21,0±1,3 15,0±1,3 10,0±0,8

ЦИК, ед.опт.пл. 0,110±0,003 0,115±0,002 0,113±0,003 0,095±0,01

Таблица 5

Активность !^Е у беременных с герпес-вирусной инфекцией на различных этапах гестации

Показатели I триместр II триместр III триместр

IgE, МЕ 28,0±0,3 51,0±0,5 182,0±0,8

Контроль 15,0±1,2 10,5±1,8 18,1±0,9

Таблица 6

Динамика иммунорегуляторного индекса в периферической крови беременных с ГВИ

Триместры Т-хелперы/Т-супрессоры Титр антител к ВПГ Индекс иммунорегуляторный

I триместр 43,0/11,8 3,6

II триместр 42,5/12,0 1:600 3,5

III триместр 44,0/12,5 3,5

I триместр 33,1/12,0 2,75

II триместр 35,5/13,1 1:3200 2,70

III триместр 38,4/10,0 3,8

I триместр 30/6 5,0

II триместр 36/6 1:6400 6,0

III триместр 43,8/7,0 6,2

I триместр II триместр III триместр 40,0/6,3 45,0/7,0 48,0/5,3 1:12800 6.3 6.4 9,01

Рис. 1. Периферическая кровь беременной с герпес-вирусной инфекцией во время обострения. Фагоцитирующий нейтрофил (St. aureus, штамм 209).

Рис. 2. Периферическая кровь беременной с гер пес-вирусной инфекцией. Титр антител 1:12800. Реакция на миэлопероксидазу (по Катоуєку) в нейтро-филах. Увеличение 15x100.

Рис. 3 Контроль на миэлопероксидазу в нейтро-филах периферической крови по Kranovsky. Увеличение 15x100.

Рис. 4. Периферическая кровь беременной с гер-пес-вирусной инфекцией. Титр антител 1:12800. В мембранах лимфоцитов высокая активность реакции на ганглиозиды - 32,0±1,2% (контроль - 6,5±1,1%). Реакция по Бюкнеру. Увеличение 15x90.

Рис. 5. Периферическая кровь беременной при герпес-вирусной инфекции (ремиссия). На клеточной мембране лимфоцита активизируются рецепторные белки, формируя кэппинговые структуры. В зоне кэппинга активна АТФ-аза. Реакция на АТФ-азу по Падикула-Херману. Увеличение 10x90.

Рис. б. Периферическая кровь беременной при вспышке герпес-вирусной инфекции (титр 1:12800). На клеточной мембране лимфоцита активизируются рецепторные белки, образуя кэппинговые структуры. Реакция на сукцинатдегидрогеназу по Шелтон-Шнейдеру. Увеличение 10x90.

Таблица 7

Активность интерлейкинов у беременных с герпес-вирусной инфекцией

Интерлейкины I-III триместры Контроль

TNFa, пг/мл 90,4±2,8 10-12

IL-2, пг/мл 142,4±5,1 0

IL-4, пг/мл 23,2±1,4 0

IL-8, пг/мл 144,0±5,6 0

Таблица 8

Фосфолипидный спектр мембран лимфоцитов (%) у женщин с герпесом в разные сроки беременности

Сроки Группы фосфолипидов

PE РС SPH LPС Pi Ps

I триместр 23,0±1,5 22,4±3,1 24,3±2,0 14,5±2,0 8,3±0,3 7,5±0,2

II триместр 20,7±1,3 23,0±0,3 23,9±1,4 15,8±1,3 7,7±0,4 6,9±1,0

III триместр 20,3±1,2 24,4±1,3 24,1±1,1 16,5±1,0 7,4±0,2 4,3±0,5

Контроль 26,0±1,8 25,6±1,9 27,5±2,1 5,5±0,9 8,7±0,6 6,7±0,8

заболеваниях, таких как вирус герпеса. ЦИК оказывают влияние на В-лимфоциты и способствуют высвобождению из них супресс-факторов, что влияет на антителообразование.

ЦИК стимулирует быструю локализацию антигенов в лимфоидных фолликулах, ответственных за развитие реакции гиперчувствительности немедленного типа. Как известно, это способствует усилению хемотаксиса полиморфноядерных лейкоцитов и дополнительному выбросу лизосомальных протеаз, в том числе и катионных белков в кровоток и межклеточное пространство соединительной ткани, что и обуславливает активизацию воспалительного процесса.

Как показали наши исследования, количество ЦИК увеличивается по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса у беременных. Так, при титре антител к вирусу герпеса 1:800 в периферической крови определяется не больше 0,088±0,003 единиц оптической плотности ЦИК. Если титр антител поднимается до уровня 1:1600 - 1:3200, содержание ЦИК в периферической крови увеличивается до 0,106 - 0,113 единиц оптической плотности (соответственно). При постоянно высоком титре антител величиной 1:12800 концентрация ЦИК в периферической крови увеличивается до 0,171 единиц оптической плотности (табл. 2).

Лимфоциты периферической крови испытывают прямое воздействие токсических продуктов вирусной инфекции и реагируют на них изменением строения клеточной мембраны. В наружной оболочке лимфоцитов увеличивается содержание ганглиозидов (рис. 4), а также изменяется ее фосфолипидный спектр (табл. 8).

Следует обратить внимание, что при этом снижается уровень фосфатидилхолина и фосфатидилинози-толамина в мембранах лимфоцитов, стремительно нарастает удельный процент лизофосфатидилхолина, с которым связывается «текучесть» клеточных мембран и предпосылки к формированию перекисей жирных кислот.

Большая роль отводится в последнее время фос-фатидилинозитолам, которые принимают участие в энергетических процессах клеток и обеспечивают транспорт мессенджеров через клеточную мембрану. Воздействие токсинов вируса на мембрану лимфоцитов заметно подавляет синтез, как фосфатидилсери-на, так и фосфатидилинозитолов (табл. 8). Неудивительно, что на этом фоне происходят перегруппировки белкового компонента мембраны лимфоцитов. На фоне высокого титра антител к вирусу герпеса (1:6400 - 1:12800) на мембранах лимфоцитов появляется большое количество сар-рецепторных образований. Этот процесс протекает на высокоэнергетическом уровне клетки. Поэтому в зоне кратковременного существования кеппинг-структур активизируется как АТФ (рис. 5), так и окислительные ферменты (рис. 6).

Выводы

1. Герпес-вирусная инфекция во время беременности резко изменяет характер иммунологических реакций, отражаясь на интенсивности продукции как Т-, так и В-лимфоцитов.

2. В периферической крови усиливается фагоцитарная активность нейтрофилов и макрофагов, а также их микробицидная реакция.

3. При запуске герпес-вирусной инфекции в периферической крови беременных увеличивается содержание интерлейкинов, провоспалительной направленности (TNF2, IL8), а также активность INFy.

ЛИТЕРАТУРА

1. Генетико-физические взаимоотношения матери и плода [Текст]/С.И.Колесников, Л.М.Морозова.-Новосибирск: Наука, 1985.-182 с.

2. Impaiment of host in graft reaction in pregnant mice. II Selective suppression of cytotoxic T-cell génération correlates with soluble supressior activity and with successful allogeneci pregnancy [Text]/D.A.Clarc, M.Vc Dermott, M.Szewzuk.-Cell Immunol.-1980.-Vol.52.-P.106-118.

П □ □