CC BY
11
DOI 10.31588/2413-4201-1883-236-4-216-220
УДК 619:616.993.1
ПОКАЗАТЕЛИ И ВЛИЯНИЕ ИНВАЗИРОВАННОСТИ BUXTONELLA SULCATA (JAMESON, 1926) ПРИ ЛЕЙКОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Шибитов С.К. - к.в.н., Козырева Н.Г. - к.б.н., Сафиуллин Р.Т. - д.в.н., профессор
ФГБНУ ФНЦ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко РАН
Ключевые слова: букстонеллез, Buxtonella sulcata, ВЛКРС, вирус лейкоза, крупный рогатый скот, ПЦР
Key words: Buxtonellosis, Buxtonella sulcata, BLV, leukemia virus, cattle, cows, PCR
Букстонеллез (Buxtonellosis) - паразитарное заболевание крупного рогатого скота, вызываемое простейшими Buxtonella sulcata. Трофозоиты имеют овоидное тело с хорошо заметным желобком, окаймленным двумя гребнями, идущими от одного конца тела к другому; цитостом недалеко от заднего конца, размер трофо-зоитов 60 - 138x46 - 100 (100x72) мкм., цисты тонкостенные, величиной 47 - 100 мкм., букстонеллы поражают слепую кишку толстого отдела кишечника [2].
Букстонеллез распространен во мнгих странах мира. В России интенсивность букстонеллеза в Центральном регионе и на Урале колебалась от низкой до средней, реже высокой [4]. Патологическое воздействие простейших Buxtonella sulcata на организм животных доказано в том случае, если их количество превышает 1000 цист на 1 г фекалий [13].
Считается, что вирус лейкоза чаще передается горизонтальным путем через иглы и другие инструменты, гематофагами - насекомыми или через открытые травмы ротовой полости и конечностей [6,7]. Возможна передача вируса вертикальным путем от матери к плоду [10].
Определенные виды инфузорий питаются микроорганизмами, клетками крови, инфузории могут заражаться различными вирусами эндобиотическим путем [1]. Общие положения концепции передачи возбудителей уже не ограничены ни наземными «патобиоценозами», ни теплокровными и кровососущими членистоногими как единственными хозяевами воз-
будителей, ни непрерывностью циркуляции их в очаге. Бактериальные популяции неоднородны по устойчивости к фагоцитозу (перевариванию) простейшими -большинство микробных клеток утилизируется в пищеварительных вакуолях, другие трансформируются, но отдельные клетки неизменно сохраняются интакт-ными, размножаются и выходят из погибших хозяев в окружающую среду. Паразитизм в амебах и инфузориях вследствие незавершенности фагоцитоза известен, по крайней мере, у 16 видов патогенных бактерий, в том числе легионелл, холерных вибрионов, иерсиний, листерий, сальмонелл, псевдомонад, буркхолдерий, мико-бактерий. Противостоять фагоцитозу простейшими могут лишь вирулентные их варианты, тогда как авирулентные утилизируются, что прямо доказано для L. pneumophila, Y. pestis, Mycobacterium bovis
[3].
Исходя из вышеперечисленного, нами проведено исследование зараженного лейкозом крупного рогатого скота в сравнении со здоровым поголовьем - на восприимчивость к инвазии Buxtonella sulcata, вторая задача заключалась в определении передачи вируса лейкоза эндобиотическим путем через цисты Buxtonella sulcata, которые выделяются в больших количествах во внешнюю среду и могут сохраняться несколько месяцев.
Материал и методы исследований. Букстонеллез изучали в животноводческом хозяйстве Калужской области на коровах дойного стада 2 - 8 лет, у которых
отбирали пробы фекалий из прямой кишки. Исследования проводили в течение 2017 года (январь, апрель, июнь, октябрь) всего 80 проб от РИД-положительных животных и 80 проб от здорового поголовья, таким образом, в каждом представленном месяце отбирали по 20 проб от здоровых коров и по 20 от РИД-положительных. Интенсивность инвазии (ИИ) определяли методом последовательных промываний 5 г фекалий в стаканах объемом 500 мл, трехкратно, количество цист подсчитывали в камере Мак Мастера в пересчете на 1 г фекалий.
Цисты букстонелл от РИД-положительных животных исследовали в ПЦР-РВ, предварительно разрушив их механически или при помощи жидкого азота, экстракцию РНК/ДНК из 100 мкл суспензии цист инфузорий проводили методом преципитации НК изопропанолом (набор реагентов «Рибо-Преп»). Элюировали РНК/ДНК в 50 мкл ТЕ-буфера, кДНК на матрице РНК получали при проведении реакции обратной транскрипции (ОТ-ПЦР) с использованием набора реагентов «Реверта-Ь». Амплификацию (ПЦР-РВ) осуществляли с помощью тест-системы «ЛЕЙКОЗ» (вариант БЯТ) для обнаружения ДНК провируса лейкоза КРС. Пробы анализировали коммерческими наборами реагентов производства ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора согласно соответствующим прилагаемым инструкциям. Всего было исследовано 30 проб. Результаты обрабатывали статистически в программе МБ Ехе1.
Результаты исследований. По результатам исследований экстенсивность инвазии (ЭИ) у свободных от ВЛКРС коров в январе составила - 85% , апреле -35%, июне - 40,1%, октябре - 65%; у коров РИД-положительных в январе равнялась -95%, апреле - 55%, июне - 25%, октябре -80%. Интенсивность инвазии (цист на грамм фекалий) в среднем на одну голову у коров свободных от ВЛКРС была в январе - 87, апреле - 154, июне - 67, октябре - 102; у коров РИД-положительных к лейкозу в январе - 119, апреле -188, июне -56, октябре - 215.
По полученным данным, только в июне наблюдалось снижение уровня зараженности у РИД-положительных коров по отношению к свободным от вируса животным, в то же время, в летний период у всех групп наблюдали снижение зараженности коров букстонеллезом.
Данное явление возможно объяснить повышенной температурой внешней среды, рационом питания (летом больше зеленых кормов), а также тем, что поголовье РИД-положительных коров в летний период не выпасалось.
По остальным месяцам инвазии-рованность букстонеллами у РИД-положительных коров была значительно выше, чем у не зараженных ВЛКРС коров и составила по ЭИ в январе выше на 10%, в апреле на 20% и в октябре на 25%, а ИИ была больше в январе на 32 цисты, в апреле на 34 и в октябре на 113 цист (табл. 1,2).
Таблица 1 - Динамика экстенсивности инвазии при букстонеллезе у РИД-
положительных и свободных от лейкоза крупного рогатого скота
Возрастная группа ЭИ % Январь ЭИ% Апрель ЭИ% Июнь ЭИ% Октябрь
Свободные от ВЛКРС коровы и нетели 85 35 40,1 65
Коровы и нетели РИД-положительные к ВЛКРС 95 55 25 80
Таблица 2 -Динамика интенсивности инвазии крупного при букстонеллезе у РИД-
положительных и свободных от лейкоза крупного рогатого скота
Возрастная группа ИИ цист в среднем на 1 голову Январь ИИ цист в среднем на 1 голову Апрель ИИ цист в среднем на 1 голову Июнь ИИ цист в среднем на 1 голову Октябрь
Свободные от ВЛКРС коровы и нетели 87 154 67 102
Коровы и нетели РИД-положительные к ВЛКРС 119 188 56 215
В целом с учетом всех исследуемых месяцев зараженность букстонеллами у РИД-положительного поголовья коров в исследуемом хозяйстве была выше и составила по ЭИ на 7,3%, а по ИИ в среднем выше на 42 цист/грамм, если не учитывать показатели июня, цифры значительно выше и составили в среднем за январь, апрель и октябрь по ЭИ на 15%, а по ИИ на 60 цист/грамм. Данные результаты показали зависимость инвазированности бук-стонеллезом крупного рогатого скота от наличия у последних ВЛКРС, что позволяет предположить снижение иммунитета у инфицированного ВЛКРС крупного рогатого к букстонеллезу.
При исследовании 30 проб цист букстонелл от РИД-положительных коров в ПЦР-РВ, во всех пробах были получены отрицательные результаты, это может свидетельствовать об отсутствии эндобиоти-ческой передаче вируса лейкоза через цисты инфузорий Buxtonella sulcata. С другой стороны, учитывая факт, что клинические признаки при букстонеллезе проявляются при интенсивности инвазии более 1000 цист на 1 г фекалий, а в нашем случае заражённость была низкой или средней и это могло повлиять на отрицательный результат. В будущем данные исследования необходимо повторить в опыте in vitro, in vivo.
Заключение. Таким образом, зараженность букстонеллами у РИД-положительного поголовья крупного рогатого скота в исследуемом хозяйстве была выше чем у свободных от ВЛКРС коров и составила по экстенсивности инвазии на 7,3%, а
по интенсивности инвазии в среднем выше на 42 цисты/грамм, а если не учитывать отрицательные показатели июня, то зараженность РИД-положительных коров была значительно выше, чем у свободных от ВЛКРС животных и составила в среднем за январь, апрель и октябрь по экстенсивности инвазии на 15%, а по интенсивности инвазии на 60 цист/грамм. Полученные данные свидетельствуют о снижении восприимчивости к букстонеллезу у инфицированного ВЛКРС крупного рогатого скота и определить оппортунистические свойства букстонелл.
При исследовании 30 проб цист букстонелл от РИД-положительных коров в ПЦР-РВ, во всех случаях были получены отрицательные результаты, что может свидетельствовать об отсутствии эндобиоти-ческой передачи вируса лейкоза через цисты инфузорий Buxtonella sulcata. С другой стороны, отсутствие результата может быть также связано недостаточной выборкой животных с явными клиническими проявлениями букстонеллеза, а исследования в данном направлении необходимо продолжить. ЛИТЕРАТУРА:
1. Громов, Б.В. Эндоцитобионты клеток животных / Б.В.Громов // Сорос. образоват. журн. - 1998. - №. 2. - С. 73-78.
2. Крылов, М.В. Определитель паразитических простейших: человека, домашних животных и сельскохозяйственных растений / М.В. Крылов // Зоологический ин-т РАН. - 1996.-602 с.
3. Литвин, В.Ю. Сапронозы как природно-очаговые болезни / В. Ю. Литвин, Г. П. Сомов, В. И. Пушкарева //
Эпидемиология и вакцинопрофилактика. -2010. - №. 1. - С.12-15
4. Шибитов, С.К., Сафиуллин Р. Т. Распространение buxtonella sulcata крупного рогатого скота в Курганской области / С.К. Шибитов, Р.Т. Сафиуллин // Российский паразитологический журнал. -2016. - №. 4 (38).
5. Buxton BA, Hinkle NC, Schultz RD. Role of insects in the transmission of bovine leukosis virus: potential for transmission by stable flies, horn flies, and tabanids. American Journal of Veterinary Research 1985; 46: 123-126.
6. Esteban EN, Sanz ME, Gogorza LM. Premunization against babesiosis and iffusion of bovine leukosis. Veterinaria Argentina 1988; 5: 306-307.17. Rogers RJ, et al. Bovine
leucosis virus contamination of a vaccine produced in vivo against bovine babesiosis and anaplasmosis. Australian Veterinary Journal 1988; 65: 285-287.
7. Jacobsen K.L., Bull R.W., Miller J.M., Herdt T.H., Kaneene J.B. Transmission of bovine leukemia virus: prevalence of antibodies in precolostral calves. Prev Vet Med. 1983;1:265-272.
8. Tomczuk K. et al. Incidence and clinical aspects of colon ciliate B. sulcata infection in cattle //Bull Vet Inst Pulawy. -2005. - T. 49. - №. 1. - C. 29-33.
9. Urman H. D., Kelley G. W. B. sulcata a ciliate associated with ulcerative colitis in a cow and prevalence of infection in Nebraska cattle //Iowa State University Veterinarian. -1963. - T. 26. - №. 2. - C. 11.
ПОКАЗАТЕЛИ И ВЛИЯНИЕ ИНВАЗИРОВАННОСТИ BUXTONELLA SULCATA JAMESON, 1926) У ИНФИЦИРОВАННОГО ВИРУСОМ ЛЕЙКОЗА И СВОБОДНОГО ОТ
ВИРУСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Шибитов С.К., Козырева Н.Г., Сафиуллин Р.Т.
Резюме
В статье приведены данные зараженности коров букстонеллезом в зависимости от инфицированности ВЛКРС и свободных от вируса животных, при этом установлено, что вирусоносители наиболее подвержены инвазированию простейшими Buxtonella sulcata. При помощи ПЦР-РВ определено отсутствие передачи вируса ВЛКРС через цисты инфузорий Buxtonella sulcata.
По результатам исследований экстенсивность инвазии у свободных от ВЛКРС коров в январе составила - 85%, апреле - 35%, июне - 40,1%, октябре - 65%; у коров РИД-положительных в январе равнялась - 95%, апреле - 55%, июне - 25%, октябре - 80%. Интенсивность инвазии цист на грамм фекалий в среднем на одну голову у коров свободных от ВЛКРС была в январе - 87, апреле - 154, июне - 67, октябре - 102; у коров РИД-положительных к лейкозу в январе - 119, апреле -188, июне - 56, октябре - 215. В целом, зараженность букстонеллами у РИД-положительного поголовья коров в исследуемом хозяйстве была выше и составила по ЭИ на 7,3%, а по ИИ в среднем выше на 42 цист/грамм. Данные результаты показали зависимость инвазированности букстонеллезом крупного рогатого скота от наличия у последних ВЛКРС, что позволяет предположить снижение иммунитета у инфицированного ВЛКРС крупного рогатого к букстонеллезу. При исследовании 30 проб цист букстонелл от РИД-положительных коров в ПЦР-РВ, во всех пробах были получены отрицательные результаты, это может свидетельствовать об отсутствии эндобиотической передачи вируса лейкоза через цисты инфузорий Buxtonella sulcata. С другой стороны, учитывая факт, что клинические признаки при букстонеллезе проявляются при интенсивности инвазии более 1000 цист на 1 г фекалий, а в нашем случае заражённость была низкой или средней и это могло повлиять на отрицательный результат.
INDICATORS AND INFLUENCE OF INFECTION WITH BUXTONELLA SULCATA (JAMESON, 1926) IN BLV INFECTED COWS
Shibitov S.K., Kozyreva N.G., Safiullin R.T.
Summary
The article cites data on the infection of, depending on the infection BLV. Using PCR-RV, the lack of transmission of the BLV through the cysts of the infusoria of Buxtonella sulcata was determined.
According to the results of the research, the incidence rate of cattle was 85% in January, 35% in April, 40.1% in June, 65% in October; 95% for RID-positive cows in January, 55% for April, 25% for June and 80% for October. The intensity of cyst infestation per gram of feces on average per head in cows, without BLV was in January - 87, April - 154, June - 67, October - 102; the RID-positive cows for leukemia in January - 119, April - 188, June - 56, October - 215. In general, infection with Buxtonella sulcata from RID-positive cows in the study was higher 7.3% on average, an intensity on 42 cysts / gram. These results showed an inversion of buxtonellosis in cattle in the presence of the BLV. 30 tests from the cysts from the RID-positive cows in PCR-RV, negative results were obtained in all samples, this may indicate the absence of an endobiotic transmission of the leukemia virus through the Buxtonella sulcata intestinal cysts. On the other hand, taking into account the fact that clinical signs with the use of buxtonellosis appear with the infusion of more than 1000 cysts per 1 g of feces, and in our case the infection was low or medium, and this can affect the negative result.
