CC BY
17
УДК 615.453.6:615.256.55.07:615.011:543.544.5 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
А. А. ФЕДОТОВА, А. Г. ЯЛКАЕВ, В. А. КАТАЕВ, Р. А. ХАЛИКОВ, Ф. X. КИЛЬДИЯРОВ
ПОКАЗАТЕЛЬ «РАСТВОРЕНИЕ» В ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА ТАБЛЕТОК, СОДЕРЖАЩИХ 11-ДЕЗОКСИМИЗОПРОСТОЛ
ФГБОУ ВО Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации, ул. Пушкина, 96/98, Уфа, Россия, 450008.
АННОТАЦИЯ
Цель. Разработка условий проведения теста «Растворение» для таблеток 11-дезоксимизопростола. Материалы и методы. Испытания осуществляли на приборе типа «Лопастная мешалка». Температура среды растворения 37±0.5 градусов, скорость перемешивания 50 оборотов/мин, время отбора проб - 45 мин, объем среды растворения - 500 мл. Методика количественного определения ДМП в растворе - ВЭЖХ с УФ-детекцией, обращенно-фазная хроматография. Хроматограф «Shimadzu Prominence LC-20» (Япония) с матричным фотодиодным детектором SPD-20, колонка Discovery C18 (5мкм; 150 мм х 4,6 мм), подвижная фаза: вода-ацетонитрил (50:50), изократическое элюирование, детекция при длине волны 195 нм.
Результаты. Все испытанные серии отвечают требованиям ГФ по показателю «Растворение». Заключение. Разработана методика выполнения теста «Растворение» для таблеток 11-дезоксимизопростола.
Ключевые слова: таблетки, ДМП, 11-дезоксимизопростол, тест «Растворение», высокоэффективная жидкостная хроматография, ацетонитрил
Для цитирования: Федотова А.А., Ялкаев А.Г., Катаев В.А., Халиков Р.А., Кильдияров Ф.Х. Показатель «Растворение» в оценке качества таблеток, содержащих 11-дезоксимизопростол. Кубанский научный медицинский вестник. 2018; 25(1): 129-132. DOI: 10.25207 / 1608-6228-2018-25-1-129-132.
For citation: Fedotova A.A., Yalkaev A.G., Kataev V.A., Khalikov R.A., Kildiyarov F.Kh. Dissolution test in quality assessment of tablets containing 11-deoxymisoprostol. Kubanskij nauchnyj medicinskij vestnik. 2018; 25(1): 129-132. (In Russ.,English abstract). DOI: 10.25207 / 1608-6228-2018-25-1-129-132
A. A. FEDOTOVA, A. G. YALKAEV, V. A. KATAEV, R. A. KHALIKOV, F. KH. KILDIYAROV
DISSOLUTION TEST IN QUALITY ASSESSMENT OF TABLETS CONTAINING 11-DEOXYMISOPROSTOL
Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Bashkir State Medical University",
Ministry of Healthcare of the Russian Federation, Pushkin str., 96/98, Ufa, Russia, 450008.
ABSTRACT
Aim. Development of the dissolution test method of 11-deoxymisoprostol tablets.
Materials and methods. The research was carried out on a "paddle apparatus". The media dissolution temperature is 37±0,5 degrees, the stirring rate is 50 rpm, the sampling time is 45 minutes, the dissolution media volume is 500 ml. The method of quantitative determination of 11-deoxymisoprostol in sample solution - HPLC with UV-detection, reverse phase chromatography. Chromatograph "Shimadzu Prominence LC-20" (Japan) with a matrix photodiode detector SPD-20, column Discovery C18 (5 pm; 150 mm x 4.6 mm), mobile phase: water-acetonitrile (50:50), isocratic elution, detection at a wavelength of 195 nm.
Results. All tested tablet samples meet the requirements of the State Pharmacopoeia in terms of "Dissolution test". Conclusion. A dissolution test method of 11-deoxyimisoprostol tablets has been developed.
Keywords: pills, 11-deoxymisoprostol, dissolution test, high-performance liquid chromatography, acetonitrile
Введение лей: 1) способность к растворению твердой лекар-Для твердых дозированных лекарственных ственной формы в средах ЖКТ с высвобождением
форм одним из важных критериев оценки каче- действующего вещества, 2) проницаемость ле-
ства является их биологическая доступность. Её карственного вещества через ряд биологических
можно охарактеризовать как сумму двух показате- мембран клеток с последующим проникновением
в системным кровоток в количестве, достаточном для проявления терапевтического эффекта [1]. Определение биологической доступности можно провести двумя способами: 1) методами «in vitro», в т. ч. с помощью теста «Растворение», 2) биологическими методами «in vivo». Первый дает приближенные, но тем не менее верные результаты, соответствующие результатам при определении «in vivo». По сравнению с тестом «Растворение» биологические методы определения биодоступности могут выполняться не во всех фармацевтических лабораториях и требуют больше времени на анализ. Оценка биологической доступности таблеток, гранул, капсул проводится в соответствии с ГФ XIII, ОФС.1.4.2.0014.15 «Растворение для твердых дозированных лекарственных препаратов». Испытание по показателю «Растворение» предназначено для определения количества действующего вещества, которое в условиях, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации, за определенный промежуток времени должно высвобождаться в среду растворения из лекарственной формы.
Статья посвящена разработке теста «Растворение» для таблеток 11-дезоксимизопростола (ДМП). ДМП представляет собой синтетический аналог простагландина Е1, обладающий утерото-ническим действием [2]. При разработке таблеток на основе ДМП использовали экспериментальную субстанцию ДМП, синтезированную в лаборатории синтеза низкомолекулярных биорегуляторов ИОХ УНЦ РАН (Уфа).
Цель исследования: разработка условий проведения теста «Растворение» для таблеток ДМП.
Материалы и методы
В качестве объектов исследования использовали: стандарт ДМП, синтезированный в УфИХ РАН, таблетки ДМП по 0,2 г. Для приготовления подвижной фазы использовали ацетонитрил марки supergradient производства Sigma-Aldrich, воду подготавливали в соответствии с ФС.2.2.0020.15 «Вода очищенная».
Тест «Растворение» проводили согласно ГФ XIII издания на приборе «PJ-3 Tablet Four-usage Tester» (Китай). Аликвоту раствора после фильтрования упаривали на вакуумно-роторном испарителе «ИР-1 ЛТ Labtech» (Китай). Анализ перешедшего в раствор ДМП осуществляли на хроматографе фирмы «Shimadzu» марки «Prominence LC-20» (Япония), снабженном матричным фотодиодным детектором SPD-20. Результаты исследований обработаны статистически в программе Microsoft Excel с использованием t-критерия Стьюдента в соответствии с требованиями ГФ XIII, ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента».
Результаты и обсуждение
Объектом настоящего исследования являет-
ся таблетированная лекарственная форма ДМП. Субстанция синтезирована в ИОХ РАН (Уфа) [3], лекарственная форма разрабатывается в БГМУ (Уфа). Это - 2-дезметоксикарбонил-2-этоксикар-бонил-11-дезоксимизопростол, производное простагландина Е1. ДМП - вязкая прозрачная маслянистая жидкость желтоватого цвета без запаха, практически нерастворимая в воде, хорошо растворимая в спирте этиловом 95%, хлороформе.
Исследуемые таблетки получены влажным гранулированием [4], имеют среднюю массу 0,2 г и содержат 200 мкг ДМП. Вспомогательные вещества: ГПМЦ, МКЦ, натрия гликолят, аэросил, магния стеарат. Рабочий стандартный образец (РСО) готовили из образца ДМП, синтезированного в ИОХ РАН. Срок годности таблеток - 2 года [5]. Растворимость изучена на 2 сериях таблеток ДМП.
При разработке методики определения растворения исследуемой лекарственной формы за основу была взята стандартная методика, описанная в ГФ XIII издания ОФС «Растворение». Лекарственная форма по скорости высвобождения действующих веществ относится к 1 группе (таблетки). Испытания осуществляли на приборе типа «Лопастная мешалка». Температура среды растворения 37±0.5 градусов, скорость перемешивания 50 оборотов/мин. Время отбора проб -45 мин. Объем среды растворения - 500 мл. В качестве среды растворения выбрана вода, но вследствие того, что ДМП практически не растворим в воде, для увеличения сигнала при детекции концентрировали определяемое вещество путем отгонки растворителя при пониженном давлении и последующем растворением в меньшем объеме подвижной фазы.
Методика количественного определения ДМП в растворе - ВЭЖХ с УФ-детекцией [6]. Выбран обращено-фазный вариант хроматографии в изо-кратическом режиме. В качестве элюента была использована смесь ацетонитрил-вода (50:50), детекция при длине волны 195 нм.
Испытания проводились на 6 объединенных образцах из 10 таблеток. В сосуд для проведения испытания помещают 10 таблеток. Через 45 мин отбирают 50 мл раствора, фильтруют через фильтр (PTFE) с диаметром пор 45 мкм, отбрасывая первые 10 мл фильтрата.
20,0 мл полученного фильтрата отгоняют при пониженном давлении и температуре не выше 35°С досуха. Перемешивают с 10 мл подвижной фазы, смывая сухой остаток со стенок колбы в течение 15 минут, и фильтруют через фильтр с диаметром пор 45 мкм, отбрасывая первые 5 мл фильтрата.
Количественное определение высвободившегося ДМП проводят методом ВЭЖХ с УФ-детекци-ей на приборе Shimadzu Prominence LC-20. По 20 мкл испытуемого раствора и раствора В РСО ДМП последовательно хроматографируют на жидкостном хроматографе высокого давления с детекто-
ром по УФ поглощению, получая не менее 3 хро-матограмм для каждого раствора.
Количество ДМП, перешедшего в раствор из таблетки, в процентах (Х) вычисляют по формуле:
мин;
скорость потока подвижной фазы - 1,5 мл/
детектирование при длине волны - 195 нм; температура колонки - 35±0,1°С.
X =
Si . Эо * 1 * 10* 10 * 500 *Р* 100 Si *ас • Р *0,4
S0 «25*25*50*20.0,2*«» 100 S0*n
где S1 - площадь пика ДМП на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика ДМП на хроматограмме раствора В РСО;
а0 - навеска РСО ДМП в миллиграммах; Р - содержание ДМП в РСО в процентах; n - количество таблеток, взятых для анализа; 0,2 - номинальное содержание действующего вещества в миллиграммах в таблетке.
В раствор через 45 мин должно перейти не менее 75% (Q) ДМП.
Условия хроматографирования:
- колонка Discovery C18 (5мкм; 150 мм х 4,6 мм) и защитный картридж Phenomenex (3 мкм, 4мм х 3,0 мм), заполненные сорбентом с октадецилси-лильными группами. Должен выполняться тест «Проверка пригодности хроматографической системы». Время удерживания ДМП - около 15 мин. Изократическое элюирование.
- подвижная фаза: смесь вода-ацетонитрил (50:50);
Приготовление РСО ДМП.
Около 25 мг (точная навеска) ДМП помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 20 мл ацетонитрила, растворяют перемешиванием, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (раствор А). 1мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем 75% раствором ацетонитрила до метки (раствор Б). 10 мл раствора Б помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем 75% раствором ацетонитрила до метки и перемешивают (раствор В). Концентрация раствора В РСО ДМП равна 8 мкг/мл.
Срок годности раствора А при температуре не выше 5°С 2 суток.
На рисунках 1 и 2 представлены хроматограм-мы раствора РСО и испытуемого раствора.
Количество ДМП которое должно высвободиться в среду растворения за нормируемое время, выраженное в процентах от заявленного содержания ДМП по требованиям ГФ XIII - не менее 75%.
При испытании методики на серийных образцах таблеток ДМП были получены результаты, представленные в таблице:
Рис. 1. Хроматограмма раствора рабочего стандартного образца ДМП. Fig. 1. Chromatogram of the work standard solution of 11-deoxymisoprostol.
Рис. 2. Хроматограмма испытуемого раствора таблеток ДМП. Fig. 2. Chromatogram of the test solution of 11-deoxymisoprostol pills.
Таблица / Table
Результаты испытания по показателю «Растворение» для таблеток
11-дезоксимизопростола
Dissolution test results for 11-deoxymisoprostol pills
№ серии Степень высвобождения Х, % Среднее, степень высвобождения Хср, %
86,16
86,25
3 87,14 85,59 85,87 86,42 86,24
87,34
88,73
5 87,56 89,11 86,65 88,27 87,94
Установлено, что все испытываемые серии отвечают требованиям ГФ по показателю «Растворение»: среднее количество действующего вещества, высвободившегося в раствор, должно быть не менее Q +10% от заявленного содержания действующего вещества в таблетке.
Заключение
Таким образом, разработаны условия проведения теста «Растворение» для таблеток ДМП. Разработанная методика позволяет достоверно определить высвобождение ДМП из разработанных таблеток и соответствует требованиям ОФС «Растворение».
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Смехова И.Е., Перова Ю.М., Кондратьева И.А. и др. Тест «Растворение» и современные подходы к оценке эквивалентности лекарственных препаратов. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2013; 2: 50-61.
2. [Smekhova I.E., Perova Ju.M., Kondratieva I.A., Rodygina A.N., Turetskova N.N. Dissolution Studies and Modern Ways to Equivalence Evaluation of Drug Products. Drug Development & Registration. 2013; 2: 50-61. (In Russ., English abstract)].
3. Габдрахманова С.Ф., Сапожникова Т.А., Басченко Н.Ж. и др. Влияние аналога мизопростола - 11-дезоксимизопростола на сократительную активность матки крыс и его абортивные свойства. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2010; 73 (3): 18-20. [Gabdrakhmanova S.F., Sapozhnikova T.A., Baschen-ko N. Zh., Zarudii F.S., Ivanova N.A. Effect of 11-deoxy-16-hy-droxy-16-methylprostaglandin on the contractile activity of the rat uterus and its abortive properties. Ëksperimentalnaya i Klinicheskaya Farmakologiya. 2010; 73 (3): 18-20. (In Russ., English abstract)].
4. Иванова Н.А., Шайнурова А.М., Мифтахов М.С. Про-станоиды. LXIX. Синтез этилового эфира (±)-11,15-дидезок-си-16-метил-16-гидроксипростагландина Ег Химико-фармацевтический журнал. 1998; 32(6): 39-40. [Ivanova N.A.,
Shainurova A.M., Miftakhov M.S. Prostanoids. Part LXIX. Synthesis of (±)-11,15-dideoxy-16-methyl-16-hydroxyprostaglandin E, ethyl ester. Pharmaceutical Chemistry Journal. 1998; 32(6): 325-326].
5. Ялкаев А.Г., Кильдияров Ф.Х., Катаев В.А. и др. Экспериментальное исследование комбинаций вспомогательных веществ в технологии твердой дозированной лекарственной формы 11-дезоксимизопростола. Медицинский вестник Башкортостана. 2016; 11(5): 102-105. URL:https:// cyberleninka.ru/article/n/eksperimentalnoe-issledovanie-kombi-natsiy-vspomogatelnyh-veschestv-v-tehnologii-tverdoy-dozirovan-noy-lekarstvennoy-formy-11. [Yalkaev A.G., Kildiyarov F.Kh., Kataev V.A., Fedotova A.A., Ayupova G.V. A pilot study of combinations of excipients in the technology of solid dosage form of 11-deoxyimipopros-tol. Bashkortostan Medical Journal. 2016; 11(5): 102-105. (In Russ., English abstract). URL:https://cyberleninka.ru/article/n/eksperimen-talnoe-issledovanie-kombinatsiy-vspomogatelnyh-veschestv-v-teh-nologii-tverdoy-dozirovannoy-lekarstvennoy-formy-11 ].
6. Ялкаев А.Г., Кильдияров Ф.Х., Катаев В.А. и др. Исследование стабильности таблеток 11-дезоксимизопростола. Вестник Волгоградского государственного медицинского университета. 2017; 3: 109-112. DOI: 10.19163/1994-9480-2017-3(63)-109-112. [Yalkaev A.G., Kildiyarov F.Kh., Kataev V.A., Khalikov R.A., Fedotova A.A. 11-desoxymisoprostol tablets: investigation of tablet stability. Journal of Volgograd State Medical University. 2017; 3: 109-112. (In Russ., English abstract). DOI: 10.19163/1994-9480-2017-3(63)-109-112].
7. Ялкаев А.Г., Кильдияров Ф.Х., Катаев В.А. и др. Разработка и валидация методики количественного определения таблеток 11-дезоксимизопростола. Медицинский альманах. 2017; 3: 198202. DOI: 10.21145/2499-9954-2017-3-198-202. [Yalkayev A.G., Kildiyarov F.Kh., Karayev V.A., Khalikov R.A., Fedotova A.A. Development and validation of quantitative determination of 11-desoxy-misoprostol pills. Medical almanac. 2017; 3: 198-202. (In Russ., English abstract). DOI: 10.21145/2499-9954-2017-3-198-202].
Поступила /Received 27.12.2017 Принята в печать/Accepted 02.02.2018
Авторы заявили об отсутствии конфликта интересов / The authors declare no conflict of interest
Контактная информация: Ялкаев Александр Гэоргиевич; e-mail: [email protected]; Россия, 450008, г. Уфа, ул. Пушкина, 96/98.
Corresponding author: Aleksandr G. Ialkaev; e-mail: [email protected]; 96/98, Pushkina str, Ufa, Russia, 450008.
