CC BY
78
С.Н. Трусов, Д.П. Севбо, А.В. Бурякина, Ф.С. Михайлицын
ПОИСК ОРИГИНАЛЬНЫХ ДОСТУПНЫХ И ЭФФЕКТИВНЫХ АНТИГЕЛЬМИНТНЫХ СРЕДСТВ В РЯДУ САЛИЦИЛАНИЛИДОВ И ПУТИ СНИЖЕНИЯ ИХ ТОКСИЧНОСТИ
Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия; Институт Медицинской Паразитологии и Тропической Медицины
им. Е.И. Марциновского, Москва
В настоящее время на территории РФ сложилась напряженная эпидемиологическая ситуация, связанная с ростом заболеваемости паразитарными болезнями. При этом официально регистрируются только 11 гельминтозов из 287 видов [Сергиев,1992]. По оценкам специалистов ежегодно число заболевающих паразитарными заболеваниями превышает 20 млн. человек и имеет тенденцию к увеличению, уступая только респираторным инфекциям [0нищенко,2003]. По величине ущерба, наносимого здоровью людей, кишечные гельминтозы входят в четыре ведущих причины среди всех болезней и травм.
Среди эффективных антигельминтных препаратов, применяемых для лечения гельминтозов человека и животных широко используется фенасал (СССР), относящийся к группе салициланилидов, который является дженериком известного германского препарата йомезан («Байер»). Исследования показали, что он мало токсичен.
ОН
фенасал
Поэтому фенасал уже с конца 60-х годов используется для лечения те-ниаринхоза [Абдуллаев,1966], гименолепидоза [Беседина,1973], дифиллобот-риоза [Довженко,1973] у людей. К сожалению, производство данного препарата сокращается по причине использования газообразного хлора. Однако среди аналогов фенасала, в связи с отсутствием систематических сравнительных исследований, возможность поиска новых малотоксичных, доступных и эффективных антигельминтных средств в этом направлении далеко не исчерпаны.
В результате творческого сотрудничества с Институтом Медицинской Паразитологии и Тропической Медицины им. Е.И. Марциновского (ИМПиТМ, Москва) были синтезированы и испытаны менее токсичные аналоги фенасала -Вивалин (1) [Михайлицин,2006] и его хлорпроизводное - Ронтанокс (2) [Сев-бо,2009].
О
О
С
НО
■"Вг
Ронтанокс
3
Эти вещества получались по единой методике: в одногорлой колбе смешивают соответствующее производное анилина, 3,5-дибромсалициловую кислоту и смесь толуола и бензола. Смесь нагревают при перемешивании для удаления воды в виде азеотропной смеси с бензолом. После некоторого охлаждения реакционной массы добавляют рассчитанное количество свежеперегнан-ного фосфора (III) хлорида. Затем температура повышалась до 1000С и выдерживалась ещё 1,5-2 часа. После этого выливали толуольный раствор в стакан для кристаллизации. Выпавший кристаллический осадок отфильтровывали и сушили. Не вступившую в реакцию кислоту удаляют настаиванием в смеси воды и 5% раствор натрия гидрокарбоната. Осадок отфильтровывают, фильтрат подкисляют кислотой хлористоводородной разведенной, при этом выпадает не прореагировавшая 3,5-дибромсалициловая кислота. Смешивание осадка с раствором натрия гидрокарбоната продолжают до прекращения выделения кислоты после очередного подкисления фильтрата. Полученный осадок сушат до постоянной массы при 60-700С. Получают хроматографически однородные в системе гексан- хлористый метилен - метанол - триэтиламин (6:4:1:0,3) N-(4-метилфенил)-2-гидрокси-3,5-дибромбензамида (Вивалин), с выходом 75%. т. пл. 171-1720С, ^(3-хлор-4-метилфенил)-2-гидрокси-3,5-дибромбензамида (Ронтанокс) с выходом 67%. т. пл. 188 - 1900С.
Полученные салициланилиды были использованы при опытной дегельминтизации продуктивных сельскохозяйственных животных. Результаты использования представлены в таблице 1 (Трусов, 2007).
Указанные вещества проявили не только высокую противоцестозную и трематодоцидную активность, а для Ронтанокса была выявлена заметная нема-тодоцидная активность. Это свидетельствуют о правильности выбора направления поиска новых эффективных антигельминтиков широкого спектра действия.
Таблица 1
______Опытная дегельминтизация продуктивных животных
Препарат Доза, мг/мг Эффективность (%) в опыте
Мониезиоз овец
Вивалин 100 100
Ронтанокс 100 100
Фенасал 100 100
Фасциолез крупного рогатого скота
Вивалин 100 83,5
Ронтанокс 100 93,4
Нематодироз овец
Вивалин 100 4,9
Ронтанокс 100 32,4
В связи с успешным испытанием Ронтанокса был продолжен поиск новых низкотоксичных и эффективных, малостадийных (не более 2-3-х стадий) препаратов из группы салициланилидов с учетом соотношения «себестоимость— эффективность» с использованием простой технологии и доступных реактивов. Принимая во внимание уже выявленные некоторые закономерности в ряду «структура—активность» на примере вивалина и ронтанокса показано, что введение атома хлора в бензольное кольцо существенно повысило эффективность. Логичным продолжением данного направления в создании антигельминтиков явилось изучение влияния природы донорного заместителя в положении 4 бензольного фрагмента молекулы, т.е. замена метильного радикала на метокси-группу, а так же замена брома в остатке кислоты на хлор. Указанные соединения синтезированные в соответствии с методикой представленной выше. Характеристики и структуры полученных соединений представлены в таблице 2.
При определении антигельминтной активности в отношении Hymenolepis папа, установлено, что отмечается аналогичная картина - введение атома хлора в положение 3 бензольного фрагмента молекулы значительно увеличивает про-тивоцестодозное действие, что отражено в табл. 4.
Таблица 2
Шифр Формула и химическое название Температура плавления, оС Выход, %
ВИВ-2 о осн3 Вг^^^-"""^Вг К-(4-метоксифенил)-2-гидрокси-3,5-дибромбензамид 139-1400С 62
МСТ-13 о С^:ш—( \—осн3 Вг^^-'^Вг К-(4-метокси-3 -хлорфенил)-2-гидрокси-3,5 -дибромбензамид 186-1870С 67
МСТ-01 о "£Г^С' К-(4-метил-3 -хлорфенил)-2-гидрокси-3,5 -дихлорбензамид 148-1490С 65
Снижение токсичности возможно при ацетилировании фенольного гид- 380 -
роксила остатка салициловой кислоты. Первоначальная методика получения ацетильных производных заключалась в ацетилировании уксусным ангидри-домв ацетоне в присутствии пиридина. Но более детальное изучение ацетокси-производных с использованием ТСХ, ВЭЖХ и ИК-спектроскопии показало наличие 2 продуктов: целевых 2-ацетоксипроизводных салициланилидов и ацети-лированной 3,5-дибром-салициловой кислоты. Эта примесь была выделена и установлено её строение: в ИК-спектре, снятом в диске калия бромида, регистрируется выраженная полоса пропускания при 1700 см-1 , которая отсутствует в ацетоксианилидах. Поэтому в дальнейшем реакция проводилась с применением хлористого ацетила в среде бензола в присутствии пиридина, что не только повысило выход целевых продуктов, но и практически исключило образование побочного продукта. Характеристики и структуры полученных соединений представлены в табл. 3.
Острую токсичность изучали на примере Ронтанокса и его ацетильного (МСТ-03) и метокси- (МСТ-13) производных.
Было установлено, что при введении перорально этих веществ в дозах 501-5010 мг/кг (1% клахмальный клейстер) гибели животных не наблюдалось, что позволяет считать значение ЬБ50 превышает 5000 мг/кг. Аналогичный результат был получен в случае метокси аналога (МСТ-13) и ацетильного производного (МСТ-03).
Таблица 3
Шифр Формула и химическое название Температура плавления, оС Выход, %
МСТ-04 о НС 0 о Н3С_С_0\^'\ \ / Вг^^^^Вг К-(4-метилфенил)-2-ацетокси-3,5-дибромбензамид 163-1640С 70
МСТ-03 о о < / \ II 1 ^ЯН^ V- СНз Н3С"С_0Й1^ К-(4-метил-3 -хлорфенил)-2-ацетокси-3,5 -дибромбензамид 150-1510С 77
МСТ-02 о о С^ / \ II 1 ^ЯН^ т—СН3 К-(4-метил-3 -хлорфенил)-2-ацетокси-3,5 -дихлорбензамид 160-1610С 78
Для большинства синтезированных соединений были получены результаты предварительных испытаний их эффективности при гименолепидозе на белых мышах. Препараты вводили в виде водной 1% суспензии в крахмальном клейстере перорально.
Результаты испытаний противогименолепидозной активности этих соединений в сравнении с фенасалом представлены в табл. 4 (Михайлицын, 2010).
Таблица 4
Доза (в г/кг) Эффективность лечения (% животных, полностью освободившихся от цестод)
ВИВ-2 МТС-02 МТС-13 МТС-04 МТС-03 Фенасал
0,5 - 100 100 100 100 100
0,25 - 92,8 - - 80,7 62
Чтобы оценить относительную токсичность соединений использовали внутрибрюшинное введение в 1% клахмальном клейстере, несмотря на то, что при испытании антигельминтной активности и опытной дегельминтизации животных использовали пероральное введение суспензии. При этом оказалось, что для Ронтанокса ЬБ50 рассчитанное экспресс-методом Прозоровского с использованием пробит-анализа, составило 180 мг/кг, в то время как при внутри-брюшинном введении ацетильного аналога (МСТ-03) в дозе более 1000 мг/кг гибели животных не наблюдалось. Аналогичный результат получен и для ме-токси-аналога Ронтанокса (МСТ-13). Т.о. установлено, что оценить острую токсичность наших соединений можно только при внутрибрюшинном введении в 1% клахмальном клейстере, при этом замена метильноц группы в Ронтаноксе на метокси-группу способствовало заметному снижению токсичности без изменения активности, а ацетилирование по фенольному гидроксилу делает сали-циланилиды практически не токсичными.
Другим направлением поиска малотоксичных и эффективных антигельминтных средств явилось введение гетероцикличесих азот-, серу- и кислородсодержащих фрагментов, а именно бензтиазола-1,3 и бензоксазола-1,3. Это привело к усложнению схемы получения, которая состояла уже из 3 стадий: взаимодействия соответствующего 2-тиола с 3,4-дихлорнитробензолом в среде диметил-формамида, последующим восстановлением чугунными стружками полученного нитропроизводного, а затем ацилированием аминосоединения 3,5-дибромсалициловой кислотой. В результате были получены вещества, представленные ниже.
HO Br
Cl Br
Шифр Х Температура плавления, оС Выход, %
МСТ-06 S 198-2020С 60
МСТ-20 O 198-199 50
Полученные соединения проявили высокую противоцестозную активность в отношении Hymenolepis nana на белых мышах - в дозах 0,5 и 0,25 г/кг оба соединения проявили активность 100%. Интересно отметить, что введение бензтиазольного фрагмента в структуру салициланилида способствовало значительному увеличению нематодоцидной активность в отношении Trichocephalus mirus, которая составила 94% в дозе 500 мг/кг, в то время как Ронтанокс показал значительно более низкую противонеметодную активность (около 33%) (Сафонова, 2003).
Основываясь на ранее полученных данных при определении острой токсичности Ронтанокса значение LD50 для МСТ-06 определялась сразу при внутрибрюшинном введении в 1% крахмальном клейстере, которое составило около 490 мг/кг, что указывает на существенное снижение токсичности при введении гетероциклического фрагмента - почти в 2,5 раза.
Т. о. В результате исследований были выявлены основные пути снижения токсичности и увеличение антигельминтной активности и спектра действия в ряду салициланилидов.
Список литературы
1. Абдулаев, А.М. Изучение эффективности фенасала при лечении больных тениаринхозом [Текст] / А.М. Абдуллаев // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1966. - № 4. - с. 484-485.
2. Антигельминтное средство на основе ^(3-хлор-4- метилфенил) -3,5- диб-ромсалициламида: патент РФ2370484: Зарегистрирован в Государственный Реестр Изобретений РФ 20.10.2009г./ Д.П. Севбо, Е.И. Саканян, С.Н. Трусов.
3.Беседина, Т.К. О лечении больных гименолепидозом фенасалом [Текст] / Т.К. Беседина [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1972. - № 2. - с. 160-162.
4. Довженко, В.А. Сроки контроля при лечении больных дифиллоботриозом фенасалом и его комбинациями [Текст] / В.А. Довженко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1973. - № 2. - с. 222-223.
5. Михайлицин,Ф.С. Оценка широты противогельминтного действия препарата вивалина(ВИГ-08) [Текст] / Ф.С. Михайлицин[и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2006. - № 1.- С. 57-59
6. Михайлицин,Ф.С. Оценка пртивогименолепидозной активности соедине-
ний МСТ-04 [Текст] / Ф.С. Михайлицин [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2009. - № 3.- С. 40
7. Михайлицин,Ф.С. Оценка пртивогименолепидозной активности соединений МСТ-03 [Текст] / Ф.С. Михайлицин [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2009. - № 4.- С. 46
8. Михайлицин,Ф.С. Пртивогименолепидозная активность соединения МСТ-02 [Текст] / Ф.С. Михайлицин [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2010. - № 1.- С. 38-39
9. Онищенко, Г.Г. О мерах по усилению профилактики паразитарных болезней в России [Текст] / Г.Г. Онищенко // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - № 3.- С. 3-7
10. Сафонова, Т.В. Противотрихоцефалезная активность препаратов Г-1730 и Г-1732 / Сафонова, Т.В.[и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 2003. - № 4.- С. 21-22
11. Сергиев, В.П. Регистрируемая и истинная распространенность паразитарных болезней [Текст] / В.П. Сергиев // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - 1992. - № 2.- С. 3-5
12. Трусов, С.Н. Спектр антигельминтной активности ронтанокса [Текст] / С.Н. Трусов, [и др.] // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. -2007. - № 4.- С. 50-51.
bastet64@mail.ru
Н.Н. Турецкова
ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ ГРУППЫ СПАЗМОЛИТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ
Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая
академия
Многокомпонентные лекарственные препараты (ЛП) на сегодняшний день занимают значительную долю на рынке фармацевтической продукции, что связано с ростом числа заболеваний, приходящихся на одного пациента. Кроме того, комбинация нескольких лекарственных веществ (ЛВ) в одном препарате позволяет снизить нежелательные побочные эффекты, получить синергическое действие ЛВ, избавить пациента от необходимости приема нескольких монопрепаратов.
В то же время отличительной чертой современного фармацевтического рынка является преобладание воспроизведенных ЛП (дженериков). Решению проблемы эквивалентности дженериков уделяется большое внимание и одним из методов её оценки является метод in vitro по тесту «Растворение».
Цель исследования - изучение фармацевтической и биологической эквивалентности по тесту «Растворение» многокомпонентных ЛП группы спазмолитических средств.
