CC BY
52УДК 632:937.1.05
ПОИСК ЭФФЕКТИВНЫХ СРЕДСТВ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ И КОРМОВ ПРОТИВ МИКРОМИЦЕТА ASPERGILLUS FLAVUS
1И.И.Идиятов - кандидат биологических наук, ст.н.с.; 2С.Р.Галлямова - магистр;
1В.В.Бирюля - кандидат биологических наук, вед.н.с.; 1Л.Р.Валиуллин - кандидат биологических наук, зав. лабораторией; 1К.Х.Папуниди - доктор ветеринарных наук, профессор, зам. директора.
1ФГБНУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г.Казань (420075, г. Казань, Научный городок -2, тел.: +7(843)239-53-20, e-mail: [email protected]).
2Казанский Федеральный (Приволжский) университет, г.Казань (420008, г.Казань, Кремлевская, 18,
тел.: +7(843)292-69-77, e-mail:[email protected]).
Приведены результаты исследования антагонистического потенциала бактериальных сапрофитов природных биотопов в отношении фитопатогена Aspergillus flavus. C этой целью проведено выделение микроскопических плесневых грибов Aspergillus flavus из кормового сырья, осуществлен отбор проб из природных биотопов и выделение из них чистой культуры микроорганизмов, исследована противогрибковая активность выделенных изолятов в отношении тестового микромицета. В результате исследования изолятов методом встречных культур противогрибковое действие в отношении микромицета Aspergillus flavus установили у СБ10 и СБ15, ширина зоны ингибирования составляла 22,72±0,68 мм и 21,33±0,47мм, у СБ11, СБ13, СБ20 и СБ23, при этом рост мицелия патогена от посевного блока составлял 17,17±0,43 мм, 19,43±0,47 мм, 15,33±0,47 мм и 23,81±0,54 мм, соответственно. Методом агаровых блоков эффективность показали изоляты СБ12, СБ16, СБ20 и СБ22, их активность составляла 1,86±0,12,1,04±0,06,1,05±0,02,1,22±0,08. Изоляты СБ11, СБ12и СБ16 показали эффективность при постановке опыта по методу модифицированного штриха, зона задержки ими роста тестового штамма гриба составила, соответственно, 24,67±0,41мм, 25,17±0,20мм и 18,00±0,00мм. СБ12, СБ16, СБ20, СБ21, СБ22и СБ23 - по методу отсроченного антагонизма, степень ингибирования роста микромицета составляла 100%. Таким образом, наиболее перспективными бактериальными изолятами, проявившими противогрибковый эффект в отношении микромицета Aspergillus flavus типа фунгистатическая алиментарная активность являются СБ11 и СБ13, антибиотическую активность показали СБ10, СБ15 и СБ21. Высоким противогрибковым действием в процессе роста и активностью метаболитов характеризовались изоляты СБ12, СБ16, СБ20, СБ22 и СБ23.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Aspergillus flavus, природные биотопы, изоляты, антагонизм.
Многоступенчатая обработка сельскохозяйственных культур фунгицидами снижает заражённость возбудителями, однако к ним формируется устойчивость, возрастает токсигенность грибов, происходит быстрое их распространение. В связи с этим, большое внимание уделяется развитию биологических экологически чистых методов борьбы с грибковыми поражениями как альтернативе применения традиционных химических методов защиты. Наиболее перспективным при использовании биологического метода борьбы с фитопатогенными грибами являются природные антагонисты. Поскольку грибы рода Aspergillus, получившие в последнее время широкое распространение [1], в основном связаны с почвой, именно в ней эти возбудители чаще всего и подавляются антагонистами, поэтому почва и может служить источником их выделения. Использование бактериальных антагонистов основано главным образом на механизме антибиоза, регулирующем взаимоотношения полезных и вредных микроорганизмов.
В связи с изложенным целью работы явилось исследование антагонистической активности изолятов сапрофитных микроорганизмов выделенных из природных биотопов к грибам рода Aspergillus flavus.
Материалы и методы. Исследование проводили на полевом штамме микромицета Aspergillus flavus, выделенном с поверхности семян зерновых культур
согласно методическим указаниям и ГОСТ [2-4]. Для отбора сапрофитных бактериальных штаммов взвесь из проб почвы, ризосферы, вегетативных органов и семян зерновых культур (пшеницы, кукурузы) высевали на мясопептонный агар (МПА), культивировали при 370С до образования колоний, затем делали с них пересевы и выделяли чистые культуры. Антагонистическую активность изолятов определяли методами встречных культур, агаровых блоков, модифицированного штриха и отсроченного антагонизма [5-9].
Статистическую обработку полученного цифрового материала осуществляли методом вариационной статистики с применением программы Microsoft Excel и критерия достоверности Стьюдента. Разница между сравниваемыми величинами считалась достоверной при p < 0,05.
Результаты исследований. Методом встречных культур (рис. 1) выяснили, что по механизму противогрибкового действия изоляты сапрофитных бактерий поделились на образующие стерильную зону антагонистического действия (табл. 1) и обладающие высоким показателем подвижности (табл. 2).
На 10 сут совместного культивирования все изоляты образовывали стерильную зону шириной от 15,5 до 26,0 мм, однако на 15 сут блок с СБ7 был поглощен тест-грибом, зона ингибирования мицелия оставшихся изолятов составила 1,5-24 мм. К 30 сут стерильную зону удержали лишь изоляты СБ10 и СБ15.
Таблица 1
Антагонистическая активность бактериальных изолятов, образующих стерильную зону в отношении
микромицета Aspergillus flavus
Изолят Ширина зоны ингибирования, мм
Срок культивирования,сут
10 15 30
СБ4 17,33±0,67 4,17±0,43 -
СБ5 17,00±0,65 2,98±0,22 -
СБ7 15,83±0,57 - -
СБ8 16,17±0,43 1,60±0,35 -
СБ9 17,10±0,35 8,63±0,37 1,17±0,23
СБ10 25,61±0,49 22,33±0,47 22,72±0,68
СБ14 18,41±0,59 5,52±0,48 -
СБ15 22,50±0,65 22,17±0,43 21,33±0,47
СБ18 19,00±0,35 2,71±0,39 -
СБ19 18,57±0,27 1,74±0,17 -
СБ21 17,65±0,35 1,57±0,27 -
Рис. 1. Антагонистическая активность изолятов в отношении микромицета АэрегдШиз АауиБ, установленная методом встречных культур: А - контроль, Б - СБ3, В - СБ10, Г - СБ11.
Из изолятов, обладающих подвижностью, высокая ингибирующая активность в отношении микромицета Aspergillus flavus проявилась у СБ11, СБ13, СБ20 и СБ23, которые на 5 сут совместного культивирования занимали наибольшую площадь питательного субстрата чашки Петри, блокируя дальнейшее разрастание тест-культуры гриба, вблизи зоны нарастания мицелий патогена частично лизировался. Изоляты СБ1, СБ2, СБ3, СБ12, СБ16, СБ17, СБ22 и СБ 23 к 30 сут инкубации занимали более половины площади чашки. Изоляты СБ6, СБ24 и СБ25 быстро продвигаясь от блока в первые сутки культивирования к 10 сут заняли половину чашки, однако в последующие сроки те-
стовый микромицет ингибировал их развитие, разрастаясь на занимаемой ими площади.
Методом агаровых блоков установили зону задержки роста микромицета и определили активность изолятов. Зона задержки роста микромицета Aspergillus flavus отмечалась при совместном культивировании с 12 изолятами из 25 отобранных (табл. 3). При этом наибольшую зону образовывала культура СБ12 - 25,08±0,30 мм, антагонистическая активность изолята была наибольшей в сравнении с остальными - 1,86. При инкубировании патогена с СБ16 зона задержки роста гриба составила 14,00±0,32 мм, активность - 1,04, с изолятом СБ20 - 14,17±0,18 мм и 1,05, СБ22 - 16,42±0,22 мм и 1,22, соответственно.
Таблица 2
Антагонистическая активность изолятов, обладающих высокой подвижностью, в отношении микромицета
Aspergillus flavus
Изолят Рост мицелия патогена от посевного блока, мм
Срок культивирования, сутки
5 10 15 30
Контроль 31,63±0,57 43,20±0,82 53,50±0,50 70,00±0,00
СБ1 21,63±0,57 23,41±0,59 24,33±0,57 25,61±0,49
СБ2 19,20±0,41 21,63±0,57 23,10±0,59 25,33±0,67
СБ3 20,21±0,33 26,37±0,43 28,00±0,65 29,97±0,63
СБ6 28,90±0,50 39,35±0,52 47,90±0,45 59,47±0,63
СБ11 14,21±0,49 15,33±0,57 16,81±0,49 17,17±0,43
СБ12 25,61±0,49 28,41±0,49 30,61±0,49 30,90±0,71
СБ13 13,67±0,43 15,20±0,50 17,00±0,50 19,43±0,47
СБ16 24,90±0,41 27,63±0,57 28,51±0,49 29,89±0,61
СБ17 19,17±0,43 24,17±0,64 26,51±0,49 29,11±0,69
СБ20 10,00±0,50 13,43±0,47 14,57±0,43 15,33±0,47
СБ22 22,50±0,50 25,20±0,61 27,33±0,47 28,51±0,49
СБ23 16,71±0,49 19,00±0,50 20,97±0,63 23,81±0,54
СБ24 25,60±0,50 29,35±0,65 35,10±0,49 48,63±0,57
СБ25 26,41±0,49 29,61±0,59 37,33±0,47 50,17±0,43
Таблица 3
Антагонистическая активность изолятов в отношении микромицета Aspergillus flavus, выявленная методом
агаровых блоков
Изолят Зона задержки роста патогена, мм Активность изолята
1 2 3
СБ1 13,00±0,32 0,96±0,08
СБ2 - 0
СБ3 - 0
СБ4 - 0
СБ5 - 0
СБ6 - 0
СБ7 - 0
СБ8 - 0
СБ9 - 0
СБ10 13,33±0,27 0,99±0,11
СБ11 6,83±0,23 0,51±0,04
СБ12 25,08±0,30 1,86±0,12
СБ13 12,50±0,20 0,93±0,07
СБ14 9,75±0,34 0,72±0,08
СБ15 13,08±0,30 0,97±0,08
СБ16 14,00±0,32 1,04±0,06
J ЕТЕИОШРНЫЙ
Продолжение таблицы 3
1 2 3
СБ17 - 0
СБ18 - 0
СБ19 - 0
СБ20 14,17±0,18 1,05±0,02
СБ21 12,58±0,22 0,93±0,07
СБ22 16,42±0,22 1,22±0,08
СБ23 13,58±0,22 1,00±0,08
СБ24 - 0
СБ25 - 0
В результате исследования противогрибкового действия методом модифицированного штриха установили, что выделенные изоляты в той или иной степени обладали антагонистической активностью в отношении тест-культуры гриба (рис. 2). Зона задержки роста к 7
сут совместного культивирования варьировала от 4,5 до 25 мм (табл. 4). Наибольшую активность показали изоляты СБ 11, СБ12 и СБ16, зона задержки ими роста тестового штамма гриба составила, соответственно, 24,67±0,41 мм, 25,17±0,20 мм и 18,00±0,00 мм.
Рис. 2. Подавление развития микромицета Aspergillus flavus бактериальными изолятами (метод штриха, 7 сут культивирования).
Таблица 4
Антагонизм изолятов к микромицету Aspergillus flavus, установленный методом штриха
Изолят Зона задержки роста, мм
Срок культивирования
2 сут 4 сут 7 сут
1 2 3 4
СБ1 7,17±0,20 7,00±0,00 7,00±0,00
СБ2 10,33±0,41 10,17±0,20 9,83±0,20
СБ3 7,00±0,00 7,00±0,35 7,33±0,41
СБ4 5,17±0,20 6,83±0,20 7,17±0,20
СБ5 6,00±0,00 6,33±0,41 6,67±0,20
СБ6 7,00±0,00 7,17±0,20 7,33±0,20
Продолжение таблицы 4
1 2 3 4
СБ7 6,17±0,20 6,33±0,41 6,83±0,20
СБ8 6,00±0,00 5,67±0,20 5,83±0,20
СБ9 7,17±0,20 7,17±0,00 7,33±0,41
СБ10 8,83±0,20 9,00±0,00 9,17±0,20
СБ11 15,17±0,20 15,63±0,28 24,67±0,41
СБ12 25,00±0,00 25,17±0,20 25,17±0,20
СБ13 11,00±0,35 8,17±0,20 7,33±0,20
СБ14 6,00±0,35 6,00±0,00 5,83±0,20
СБ15 14,33±0,41 8,17±0,20 8,00±0,35
СБ16 20,50±0,35 18,17±0,20 18,00±0,00
СБ17 16,17±0,20 8,83±0,54 8,67±0,41
СБ18 5,00±0,35 4,83±0,20 4,67±0,20
СБ19 6,00±0,00 5,67±0,20 4,33±0,20
СБ20 7,17±0,20 6,50±0,00 7,67±0,41
СБ21 7,17±0,20 6,67±0,41 7,00±0,35
СБ22 7,00±0,00 6,50±0,00 7,33±0,20
СБ23 7,00±0,35 7,00±0,00 9,50±0,35
СБ24 6,17±0,20 6,17±0,20 6,00±0,35
СБ25 4,50±0,00 4,67±0,41 4,83±0,20
Рис. 3. Фунгистатическая активность изолятов в отношении микромицета Aspergillus flavus.
Оценку фунгистатического действия выделенных изолятов провели методом отсроченного антагонизма. При культивировании микромицета на среде с инактивированными культурами бактерий 6 изолятов полностью задерживали рост гриба: СБ12, СБ16, СБ20, СБ21, СБ22 и СБ23.
Активность оставшихся изолятов оценивали подсчетом количества выросших колоний микромицета и выражали степенью ингибирования роста патогена (рис. 3).
Наибольшую фунгистатическую активность в отношении микромицета Aspergillus flavus показали изоляты
СБ12, СБ16, СБ20, СБ21, СБ22 и СБ23. Степень ингибирования развития гриба изолятом СБ10 была ниже на 7,6%, СБ15 - на 10,5%, СБ21 - 12,4% СБ10 - 13,0%, СБ13 - 20,0%. Минимальной фунгистатической активностью обладали изоляты СБ24, СБ5, СБ19, СБ8, СБ4, СБ2, СБ25, СБ17 и СБ6, степень ингибирования патогена составляла 7,6-17,1%. Активность изолятов СБ3, СБ7, СБ9 и СБ18 была до 30%, СБ11 и СБ14 не превышала 60%.
В результате проведенных исследований из 25 бактериальных изолятов, выделенных из природных биотопов, наиболее эффективными антагонистами
микроскопических патогенных грибов Aspergillus flavus являются 10 штаммов.
Анализируя данные по скринингу изолятов, обладающих антагонистической активностью в отношении микромицета Aspergillus flavus, полученные различными методами, можно сделать вывод о том, что активные штаммы обнаруживаются используя любой из них, однако полнота картины взаимодействия антагониста и патогена достигается постановкой нескольких взаимодополняющих опытов. Методом встречных культур установили характер взаимоотношений изолятов и патогена, степень ингибирования роста мицелия, ширину зоны роста гриба в присутствии антагониста, размер области диффузии веществ от блока изолята до мицелия гриба с образованием стерильной зоны. Так, наличие фунгистатического алиментарного антагонизма отмечали во взаимоотношениях изолятов СБ11, СБ13, СБ20 и СБ23. Фунгистатическим антибиотическим антагонизмом обладали изоляты СБ10 и СБ15, следовательно им был характерен синтез веществ, обладающих ингибирующим мицелий гриба действием. Метод агаровых блоков позволил оценить зону подавления роста гриба, морфологические изменения культур при культивировании антагониста непосредственно на среде с патогеном. Противогрибковый эффект изолятов в данном случае отражал способность последних сохранить зону нанесения, наибольшей активностью отличились изоляты СБ12, СБ16, СБ20 и СБ22. Метод модифицированного штриха, также как и метод встречных культур, показал способность изолятов к росту и выделению противогрибковых веществ на среде с патогеном, результат сокультивирования культур выражался
в зоне задержки роста патогена, наибольшую зону задержки роста имели изоляты СБ11, СБ12 и СБ16. Метод отсроченного антагонизма характеризовал фунгиста-тическую активность веществ, выделяемых изолятами, результат действия которых выражался в количестве колоний микромицета выросших на среде, содержащей инактивированные микроорганизмы, и индексом ингибирования его роста. Наибольшую фунгистатиче-скую активность проявили изолятыСБ12, СБ16, СБ20, СБ21, СБ22 и СБ23.
Заключение. Осуществлено выделение микромицета Aspergillus flavus из кормового сырья, проведен отбор проб из природных биотопов, выделение из них чистой культуры микроорганизмов, исследование их антагонистической активности. Наиболее перспективными изолятами, проявившими противогрибковый эффект в отношении микромицета Aspergillus flavus, для использования как основа биофунгицидов в качестве живых культур являются СБ11 и СБ13. К перспективным изолятам для синтеза противогрибковых веществ можно отнести СБ10, СБ15 и СБ21. Изолятами, обладающими высоким противогрибковым действием в процессе роста и активностью метаболитов, являются СБ12, СБ16, СБ20, СБ22 и СБ23.
Финансирование исследования. Работа выполнена при поддержке ФГБУ «Фонд содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере» (Фонд содействия инновациям) в рамках выполнения Соглашения о предоставлении гранта на выполнение научно-исследовательских работ за №10244ГУ/2015.
Литература
1. Азизбекян, Р.Р. Биологическая защита растений - использование штаммов спорообразующих бактерий для борьбы с фитопатогенными грибами в теплицах / Р.Р. Азизбекян, Н.И. Кузнецова, А.И. Кузин, М.А. Николаен-ко // Материалы Международной научно-практической конференции «Биологическая защита растений - основа стабилизации агроэкосистем» 20-22 сентября 2016 г. Выпуск 9 - Краснодар, 2016. - С. 202-204.
2. Методические указания к занятиям спецпрактикума по разделу «Микология. Методы экспериментального изучения микроскопических грибов» для студентов 4 курса дневного отделения специальности «G 31 01 01 - Биология» / Авт.-сост. В.Д. Поликсенова, А.К. Храмцов, С.Г. Пискун. - Мн.: БГУ, 2004. - 36 с.
3. «Методические указаниями по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов» от 25.02.1985.
4. ГОСТ 13496.6-71 "Комбикорм. Метод выделения микроскопических грибов".
5. Лабораторный практикум по микробиологии. Учебно - методический комплекс. - Минск: УО «Белорусский государственный педагогический университет имени Максима Танка», 2012. - 129 с.
6. Пестинская, Т. В. О взаимоотношениях грибов обитающих в почве / Т.В.Пестинская // Ботан. журн. - 1958. - Т. 43, № 9. - С. 1270-1277.
7. Montealegre, J.R. Selection of bioantagonistic bacteria to be used in biological control of Risoctoniasolani in tomato/ J.R.Montealegre, R.Reyes, L.M.Perez et al. // Electronic Journal of Biotechnology. - 2003. - Vol. 6, № 2. -P. 116-127.
8. Егоров, Н.С. Выделение микробов-антагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности / Н.С.Егоров. - М.: Изд-во МГУ, 1957. - 78 с.
9. Обухов, Ю.И. Методы оценки эффективности биоцидной обработки текстильных материалов / Ю.И.Обухов, А.В. Разуваев //Рынок легкой промышленности. -2010. - № 80.
FINDING THE MOST EFFICIENT MEANS OF BIOLOGICAL PROTECTION OF PLANTS AND FODDER AGAINST ASPERGILLUS FLAVUS MICROMYCETE
1Idiyatov I.I. - Candidate of Biological Sciences; 2Gallyamova S.R. - master student assistant;
1Valiullin L.R. - Candidate of Biological Sciences; 1Biryulya V.V. - Candidate of Biological Sciences;
1Papunidi K.Kh. - Doctor of Veterinary Sciences, professor.
1Federal Center of Toxicological, Radiation and Biological Safety, Kazan (e-mail: [email protected]).
2Kazan Federal University, Russia, Kazan.
The article presents the results of investing the antagonistic potential of bacterial saprophytes in natural biotopes against Aspergillus flavus phytopathogen. For this purpose Aspergillus flavus microscopic mold fungi was isolated from fodder, samples were taken from natural biotopes and a pure culture of microorganisms was isolated, antifungal activity of isolates against test micromycete was studied. Using the method of counter cultures in the studies showed that antifungal action against Aspergillus flavus micromycete was established in SB10 and SB15, the width of the inhibition zone was 22.72±0.68 mm and 21.33±0.47 mm, in SB11, SB13, SB20 and SB23 while pathogenic mycelium growth from the seed block was 17.17±0.43 mm, 19.43±0.47 mm, 15.33±0.47 mm and 23.81±0.54 mm, respectively. The efficiency of using agar blocks was shown by the isolates SB12, SB16, SB20 and SB22, their activity was 1.86±0.12, 1.04±0.06, 1.05±0.02, 1.22±0.08. The isolates SB11, SB12 and SB16 showed efficacy when the modified streak method was used, the zone of delay in their growth of the test strain of the fungus was 24.67±0.41mm, 25.17±0.20mm and 18.00±0.00mm, respectively. SB12, SB16, SB20, SB21, SB22 and SB23 were determined using the method of delayed antagonism, the degree of inhibition of micromycete growth was 100%. Thus, the most promising bacterial isolates that showed an antifungal effect against Aspergillus flavus micromycete type fungistatic nutritional activity are SB11 and SB13, antibiotic activity was shown by SB10, SB15 and SB21. High antifungal activity during growth and activity of metabolites were characterized by isolates SB12, SB16, SB20, SB22 and SB23.
KEYWORDS: Aspergillus flavus, natural biotopes, isolates, antagonism.
References
1. Azizbekyan, R.R. Biologicheskaya zashita rasteniy - ispolzovanie shtammov sporoobrazyushih bacteriy dlya borbi s fitopatogenami gribami v teplicah [Biological protection of plants: using strains of spore-forming bacteria with phytopathogenic fungi in glasshouses] / R.R.Azizbekyan, N.I.Kyznecova, A.I.Kyzin, M.A.Nikolaenko // «Biologicheskaya zashita rasteniy -osnova stabilizacii agroekosistem» - Biological protection of plants is a basics for stabilisation of agroecosystems: proceedings from scientific and practical conference Sept. 20 - 22, 2016. Vol. 9 - Krasnodar, 2016. - P. 202-204.
2. Metodicheskie ukazaniyakzanya k zanyatiyam specpraktiky maporazdely «Mikologiya. Metody experimentalnogo izycheniya mikroskopicheskih gribov» dlya studentov 4 kyrsa dnevnogo otdeleniya specialnosti «G 31 01 0l - Biologiya» [Methodological guidelines for courses in special disciplines "Mycology. Methods of experimental studies of microscopic fungi"for 4th year students in specialty "G31 01 01- Biology"] / authors V.D.Polixenova, A.K.Hramcov, S.G.Piskyn. - BGY 2004. - 36 p.
3. «Metodicheskie ukazaniya po sanitarno - mikologicheskoy ocenke i ylychsheniu kachestva kormov» ot 25.02.1985 ["Methodic guidelines on sanitation and mycological evaluation and improvement of fodder quality" of 25.02.1985].
4. ГОСТ 13496.6-71 "Kombikorm. Metody vudeleniya mikroskopicheskich gribov" - [State standard 13496.6-71 "Mixed fodders. Methods of microscopic fungi isolation"].
5. Laboratornuy practicum po microbiologii. Ychebno-metodicheskii kompleks [Laboratory practice guideline on microbiology. Academic and methodological complex]. - Minsk.YO«Belorusskii gosudarstvennuy pedagogicheskii universitet imeni Maksima Tanka», 2012. - 129 p.
6. Pestinskaya, T.V. O vzaimootnosheniyah gribov obitauchih v pochve [On interrelation of fungi living in soil] / T.V. Pestinskaya // Botan.zhurnal. - 1958. - Vol. 43, № 9. - P. 1270-1277.
7. Montealegre, J.R. Selection of bioantagonistic bacteria to be used in biological control of Risoctoniasolani in tomato/ J.R. Montealegre, R. Reyes, L.M. Perez et al. // Electronic Journal of Biotechnology. - 2003. - Vol. 6, № 2. - P. 116-127.
8. Egorov, N.S. Vudelenie microbov-antogonistov i biologicheskie metodu ycheta ih antibioticheskoi aktivnosti [Isolation of antogonistic microbes and biological methods of accounting their antibiotic activity]/ N.S.Egorov. -Moscow:Izd-voMGU, 1957. - 78 p. 9. Obuchov, U.I. Metodu ocenki effectivnosti biocidnoi obrabotki tekstilnuh materialov [Methods of efficiency evaluation of biocide-based treatment of textile materials] / U.I.Obuchov, A.V.Razuvaev // Runoklegkoi promashlennosti- 2010. - №80.
