CC BY
93
Фармакология, токсикология
УДК 619:615.015.4
ПОДОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ИНЪЕКЦИОННОГО ПРЕПАРАТА
РИКАЗОЛ
Е.В. АБРАМОВА аспирант И.А. АРХИПОВ
Научный руководитель - доктор ветеринарных наук
А.В. БАЛЫШЕВ кандидат биологических наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28, e-mail: vigis@ncvort.ru Е.В. ГЛУХАРЕВА
ООО МНИЦ «ОЗОС», г. Москва, e-mail:cozos@mail.ru С.В. НОВИКОВА кандидат биологических наук
ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов, e-mail: sr-center@nita-farm.ru
Изучена подострая токсичность инъекционного препарата риказол, содержащего в 1 мл 100 мг рико-бендазола. Препарат в дозах 125 и 50 мг/кг при ежедневном введении в течение 7 сут не вызывал отклонений в поведении, потреблении корма и воды, гематологических и биохимических показателях, массовых коэффициентах органов, функциональном состоянии крыс. Введение риказола в дозе 250 мг/кг снижало привесы и массу тела, вызывало угнетение животных и падеж, изменения основных гематологических и биохимических показателей, в том числе эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, билирубина, мочевины и активности аланинаминотрансферазы. Доза препарата 250 мг/кг является токсичной.
Ключевые слова: риказол, рикобендазол, токсические свойства, крысы, биохимия, гематология.
Гельминтозы продуктивных животных причиняют большой экономический ущерб животноводческим хозяйствам. Наиболее эффективным методом борьбы с ними является применение антигельминтных препаратов. Компанией «Нита-Фарм» разработан новый инъекционный противопаразитарный препарат на основе рикобендазола - риказол.
Целью данной работы было изучение подострой токсичности риказола на лабораторных животных.
Материалы и методы
Подострую токсичность риказола изучали на 40 крысах-самцах исходной массой 190-200 г согласно Руководству и методам по оценке препаратов [14]. Животных разделили на 4 равноценные группы по 10 крыс в каждой: 3 опытные и 1 контрольную. Выбранные дозы препарата представляли дозировки, кратные значению ЛД 50, установленной в остром опыте - 2500 мг/кг по препарату. Риказол вводили ежедневно в течение 7 сут внутримышечно в дозах 250, 125, 50 мг/кг (1/10, 1/20, 1/50 от ЛД 50) по препарату. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор в объеме 0,4 мл/200 г.
В течение всего периода применения препарата наблюдали за общим со-
91
стоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела. В конце опыта через сутки после последнего введения риказола животных убивали декапитацией и отбирали пробы крови (с антикоагулянтом и без) для определения гематологических и биохимических показателей.
Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе, лейкограмму - общепринятым методом, биохимические показатели крови - на анализаторе Biosystems A-15. Устанавливали массу основных органов и рассчитывали массовые коэффициенты. Функциональное состояние ЦНС оценивали по визуальным наблюдениям за двигательной активностью, реакцией на внешние раздражители.
Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью сравнения средних значений по двустороннему t-критерию Стьюдента. Различия определяли при уровне значимости 0,05. Статистический анализ выполняли с помощью программы «Student-200».
Результаты и обсуждение
Как показали результаты исследований, введение риказола в дозе 250 мг/кг (1/10 от ЛД 50) отразилось статистически значимым образом на привесах. Изменения массы тела животных в указанной дозе фиксировали на 5-е сутки опыта. На 6-е сутки животные по сравнению с контролем хуже поедали корм, одна крыса пала, у одной регистрировали угнетение и тремор. Павшая крыса подверглась вскрытию.
При патологоанатомическом вскрытии были выявлены кровоизлияния на сердце, в легких. Опытные крысы потребляли корм и воду на протяжении всего опыта менее интенсивно, чем контрольные животные. Динамика прироста массы тела у крыс приведена в таблице 1.
1. Динамика прироста массы тела у крыс при введении риказола в трех дозах ______________________в течение 7 сут (n = 10)________________
Неделя Дозы, мг/кг (по препарату) Контроль
250 125 50
0 218,30±2,53 220,50±4,05 220,50±4,45 223,70±3,08
1 210,10±2,35* 231,23±2,12 235,14±2,05 238,48±2,22
% к исходной массе тела 84,10±2,13* 103,57±3,75 104,36±4,06 106,25±3,79
Примечание. *- P < 0,05.
Результаты исследований массовых коэффициентов органов крыс приведены в таблице 2. Как следует из приведенных в таблице 2 данных, риказол привел к изменению средней массы органов крыс, которым вводили дозу 250 и 125 мг/кг. Так, средняя масса сердца подопытных крыс, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг, составила 0,82±0,04 г против данных контроля 0,95±0,03 г. Средняя масса легких крыс после введения риказола в дозах 250 и 125 мг/кг составила соответственно 0,80±0,10 и 1,63±0,05 г против данных контроля 2,01±0,11 г. Средняя масса селезенки после введения риказола в дозах 50 и 125 мг/кг составила 0,55±0,05 г и 0,69±0,03 г против 1,00±0,06 г в контроле. Остальные массовые коэффициенты не претерпели достоверных изменений.
Отмечены различия в относительной массе органов крыс, которым вводили риказол в дозах 250 и 125 мг/кг. Так, относительная масса печени крыс, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг, достигала 3,91±0,15 % против 3,34±0,16 % в контроле, относительная масса легких - 0,38±0,05 и 0,70±0,03 % против 0,84±0,05 % в контроле после введения риказола в дозах 250 и 125 мг/кг, относительная масса селезенки - 0,26±0,04 и 0,30±0,05 % против данных контроля 0,41±0,05 % после дачи препарата в дозах 250 и 125 мг/кг.
92
2. Влияние риказола на массовые коэффициенты органов белых крыс (n = 10)
Показатель Дозы, мг/кг (по препарату) Контроль
250 125 50
Ср. масса тела, г 210,10±2,35* 231,23±2,12 235,14±2,05 238,48±2,22
Ср. масса сердца, г 0,82±0,04* 0,93±0,03 0,90±0,03 0,95±0,03
Отн. масса сердца, % 0,39±0,05 0,40±0,02 0,38±0,06 0,40±0,03
Ср. масса печени, г 8,22±0,26 7,91±0,22 7,25±0,30 7,97±0,42
Отн. масса печени, % 3,91±0,15* 3,42±0,24 3,08±0,19 3,34±0,16
Ср. масса легких, г 0,80±0,10* 1,63±0,05* 1,98±0,07 2,01±0,11
Отн. масса легких, % 0,38±0,05* 0,70±0,03* 0,84±0,06 0,84±0,05
Ср. масса селезенки, г 0,55±0,11* 0,69±0,13* 0,81±0,19 1,00±0,15
Отн. масса селезенки, % 0,26±0,04* 0,30±0,05* 0,34±0,07 0,41±0,05
Ср. масса почек,г 1,64±0,05 1,68±0,05 1,70±0,05 1,76±0,08
Отн. масса почек, % 0,78±0,05 0,72±0,07 0,72±0,06 0,73±0,06
I________
Примечание. *- P < 0,05.
Объективная оценка токсических свойств риказола также включала определение гематологических и биохимических показателей крыс. Состояние крови - важный компонент токсикологических исследований.
Результаты определения гематологических показателей белых крыс обобщены в таблице 3.
3. Влияние риказола на гематологические показатели крыс при внутримы-_______________шечном введении в течение 7 сут (n = 10) ____________
Показатель Дозы, мг/кг (по препарату) Контроль
250 125 50
Эритроциты, 1012/л 7,56±0,14 7,02±0,54 8,37±0,14 7,86±0,16
Г ематокрит, % 37,18±2,66* 42,69±0,50 44,51±0,78 43,95±1,27
Гемоглобин, г/л 118,07±8,87* 136,80±1,97 143,87±1,94 141,40±3,96
Тромбоциты, 109/л 818,60±62,52 934,30±40,39 1134,00±25,64 1068,20±38,85
Лейкоциты, 109/л 2,58±0,75* 6,74±0,99* 8,36±0,55 10,86±0,84
СОЭ мм/ч 0,40±0,14 0,60±0,16 0,50±0,18 0,30±0,05
Лейкограмма
Палочкоядерные нейтрофилы, % 0 0,70±0,23 0,87±0,29 0,90±0,34
Сегментоядерные нейтрофилы, % 3,40±0,98* 7,30±1,84* 17,00±3,30 29,30±4,72
Эозинофилы, % 0 0 0 0,40±0,22
Моноциты, % 8,50±0,70* 7,20±1,16 5,10±1,30 4,70±0,82
Лимфоциты, % 88,10±2,04* 84,80±8,54 77,03±3,56 64,70±3,66
Примечание. *- P < 0,05.
93
Как следует из приведенных данных, при внутримышечном введении препарата животным в дозе 250 мг/кг массы животного 7 сут подряд отмечено уменьшение количества гематокрита, гемоглобина, лейкоцитов.
Также наблюдали изменения в лейкограмме: уменьшение содержания сегментоядерных нейтрофилов - 3,40±0,98 % против 29,30±4,72 % в контрольной группе. Кроме того, отмечали повышение содержания моноцитов и лимфоцитов - соответственно 8,50±0,70 и 88,10±2,04 % против 4,70±0,82 и 64,70±3,66 % в контролеп.
При введении препарата в дозе 125 мг/кг было установлено уменьшение содержания эритроцитов и лейкоцитов, число которых составило 7,02±0,54 х 1012/л и 6,74±0,99 х 109/л против данных контроля 7,86±0,16 х 1012/л и 10,86±0,84 х 109/л соответственно. В лейкограмме отмечали снижение уровня сегментоядерных нейтрофилов до 7,30±1,84 %. Доза 50 мг/кг массы животного не оказывала достоверного влияния на гематологические показатели крыс.
Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод о том, что препарат в дозах 250 и 125 мг/кг оказывает негативное влияние на костномозговое кроветворение. Установленный лимфоцитоз, вероятно, связан с развитием лейкопении. Число лимфоцитов не изменяется, однако из-за уменьшения числа нейтрофилов в процентном соотношении число лимфоцитов увеличивается. Наблюдаемый эффект называют относительным лимфоцитозом. Он возникает в результате истинной нейтропении.
В таблице 4 приведены результаты определения биохимических показателей сыворотки крови белых крыс после многократного введения риказола.
4. Влияние риказола на биохимические показатели крови
Показатель Дозы, мг/кг Контроль
250 125 50
Билирубин общий, мкмоль/л 9,38+1,70* 15,63+1,32* 21,49+1,86 22,52+2,61
Билирубин прямой, мкмоль/л 1,50+0,30* 3,94+0,59 4,25+0,58 3,64+0,47
АСТ, Ед/л 238,40+18,82 311,00+25,77 336,09+10,19 344,80+46,53
АЛТ, Ед/л 46,80+2,56* 49,20+3,67* 52,64+1,92 77,50+12,66
Мочевина, ммоль/л 5,95+0,76* 6,29+0,21* 9,63+4,00 7,25+0,10
Креатинин, мкмоль/л 64,60+9,92 52,60+0,89 55,45+3,48 59,80+2,72
Общий белок, г/л 60,60+4,13* 63,70+1,05* 73,45+1,68 69,50+1,45
ЩФ, Ед/л 69,80+9,82* 191,09+13,41* 221,50+53,73 235,80+10,53
а- амилаза, Ед/л 115,54+20,83* 225,20+37,09* 737,60+37,63 950,60+79,55
Г люкоза, ммоль/л 3,62+0,74* 2,51+0,18* 2,04+0,23 1,84+0,34
ЛДГ, Ед/л 1677,00+86,90* 1636,91+17,70* 1720,00+212,30* 1849,30+34,94
Примечание. *- P < 0,05.
Как следует из приведенных данных, при введении препарата в дозах 250 и 125 мг/кг произошло статистически достоверное снижение уровня общего билирубина, активности аланинаминотрансферазы, уровня мочевины, общего белка, активности щелочной фосфатазы, а-амилазы и лактатдегидрогеназы. Также, в дозе 250 мг/кг регистрировали повышение уровня глюкозы в крови опытных животных.
Данные изменения указывают на то, что препарат в увеличенных дозах оказывает гепатотоксическое воздействие на организм животных. Увеличе-
94
ние содержания лактатдегидрогеназы может свидетельствовать о наличии мышечной дистрофии.
Суммируя полученные результаты исследования подострого опыта, можно сделать заключение, что доза риказола 250 мг/кг при введении крысам в течение 7 сут является токсичной, доза 125 мг/кг - пороговой, 50 мг/кг -недействующей.
Литература
1. Rukovodstvo po jeksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv. - M., 2000.
2. Belen'kijM.D. Jelementy kolichestvennoj ocenki farmakologicheskogo jef-fekta. - L.: Gosmedizdat, 1963. - 152 s.
3. Piralishvili I.S. K metodike podscheta jeozinofilov v perifericheskoj krovi // Lab. delo. - 1962. - № 3. - S. 20-22.
4. Prikaz MZ SSSR № 755 ot 12.08.77 g. «Pravila provedenija rabot s ispol'zovaniem jeksperimental'nyh zhivotnyh».
Subacute toxicity of ricazol as injection
E.V. Abramova postgraduate
I.A. Arkhipov
doctor of veterinary sciences
A.V. Balyshev PhD in biologic sciences
All-Russian Scientific Research Institute of Helminthology named after K.I. Skryabin
117218, Moscow, B. Cheremushkinskaya st., 28, e-mail: arkhipov@vniigis.ru
E.V. Glukhareva
International research center «OZOS», Moscow, e-mail: cozos@mail.ru
S. V. Novikova PhD in biologic sciences
«Nita-Farm», Saratov, e-mail: sr-center@nita-farm.ru
Subacute toxicity of Ricazol as injection, containing in 1 ml 100 mg Rico-bendazole is studied. The preparation in doses of 125 and 50 mg/kg at daily introduction during 7 days didn't cause deviations in behavior, consumption of forage and water, hematologic and biochemical indicators, mass coefficients of bodies, a functional condition of rats. Introduction Ricazol in a dose of 250 mg/kg reduced additional weights and body weight, caused oppression of animals and a case, changes of the main hematologic and biochemical indicators, including erythrocytes, leukocytes, hemoglobin, bilirubin, urea and activity alanine aminotransferase. The dose of ricazol of 250 mg/kg is toxic.
Keywords: Ricazol, Ricobendazole, toxic properties, rats, biochemistry, hematology.
95
