Подходы к оценке минимальной остаточной болезни при В-линейных острых лимфобластных лейкозах в условиях таргетной терапии Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

подходы к ОЦЕНКЕ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ ПРИ B-ЛИНЕЙНЫХ ОСТРЫХ ЛИМФОБЛАСТНЫХ ЛЕЙКОЗАХ B УСЛОВИЯХ ТАРГЕТНОЙ ТЕРАПИИ

О.А. Безнос, Л.Ю. Гривцова, А.В. Попа, М.А. Шервашидзе, И.Н. Серебрякова, Н.Н. Тупицын

ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24

Контакты: Ольга Алексеевна Безнос beznos.olga@gmail.com

Введение. Проточно-цитометрические (ПЦ) алгоритмы детекции минимальной остаточной болезни (МОБ) хорошо отработаны и близки по чувствительности к молекулярно-биологическим методам. Однако помимо информативныхлейкозассоциирован-ных иммунофенотипов, отобранных с учетом фенотипа опухоли на этапе диагностики, необходимо принимать во внимание специфичность проводимой таргетной терапии и ее воздействие на клетку.

Цель работы — отобрать стабильные комбинации антигенов для выявления В-линейных предшественников у больных на терапии блинатумомабом (анти-CDW).

Материалы и методы. Больному Г., 4 лет, с ранним рецидивом острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ) (пре-пре-В иммуно-подварианта) после 3 курсов противорецидивного лечения с учетом сохранения МОБ-положительного статуса был назначен блинатумомаб в режиме монотерапии. Иммунофенотип опухолевых В-лимфобластов был детально охарактеризован имму-нологически методом ПЦ согласно протоколу консорциума EuroFlow как в дебюте заболевания, так и в рецидиве. Мониторинг МОБ в рецидиве проводили методом 8-цветной ПЦ с учетом индивидуально отобранных лейкозассоциированных иммунофенотипов.

Результаты. У больного, получающего лечение блинатумомабом, в курсе терапии В-линейного ОЛЛ была изменена стратегия мониторинга МОБ. С учетом отсутствия экспрессии CD19 основой идентификации В-линейных предшественников стали cyCD22 в сочетании с ядерной TdT и CD10.

Заключение. В случае назначения блинатумомаба в курсе терапии В-линейного ОЛЛ выявление В-линейных предшественников должно основываться на оценке экспрессии других пан-В-клеточных антигенов. В первую очередь это cyCD22 или cyCD79a в сочетании с ядерной TdT и CD10 в пределах ядросодержащих клеток образца.

Ключевые слова: минимальная остаточная болезнь, В-линейный острый лимфобластный лейкоз, таргетная терапия, блинатумомаб

DOI: 10.17650/1726-9784-2017-16-4-18-24

APPROACHES TO THE ASSESSMENT OF MINIMAL RESIDUAL DISEASE IN B-CELL ACUTE LYMPHOBLASTIC

LEUKEMIAS IN CONDITIONS OF TARGET THERAPY

O.A. Beznos, L. Yu. Grivtsova, A. V Popa, M.A. Shervashidze, I. N. Serebryakova, N. N. Tupitsyn

N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology; 24 Kashirskoe Sh., Moscow 115478, Russia

Background. Flow cytometry (FC) algorithms of detection of minimal residual disease (MRD) are well standardized, and approximate to molecular biologic methods. However, besides informative leukemia-associated aberrant immunophenotype, which are selected taking into account a tumor phenotype at diagnostics stage, it is necessary to consider specificity of the provided taget therapy and its influence on a cell.

Objective: to offer stable combinations of antigens to identify B-cell precursors in patients on therapy of blinatumomab. Materials and methods. Clinical observation of patient G. 4 years old with B-cell precursors acute lymphoblastic leukemia (ALL) (pre-pre-B immunosubtype), whom after 3 bloks of reinduction therapy, taking into account MRD-positive status, blinatumomab was appointed as a monotherapy. Tumor immunophenotype was characterized in details by FC protocol according to EuroFlow in debute and relapse of the disease. MRD monitoring was provided by 8-color FC taking into account personalized leukemia-associated aberrant immunophenotypes.

Results. In patient with B-cell precursors ALL received blinatumomab, the strategy of MRD monitoring was changed. Due to the lack of CD19 expression, identification of B-cell precursors was based on expression of cyCD22 in combination with nuclear TdT and CD10.

Conclusion. In case of blinatumomab's appointment during B-cell precursors ALL therapy, it is necessary to change the strategy of B-cell precursors identification, due to the lack of CD19 expression. Detection of B-cell precursors should be provided by assessment

of other pan-B lineage antigens. First of all, it is cyCD22 or cyCD79a in combination with nuclear TdT and CD10, within the limits of nucleated cells of the sample.

Key words: minimal residual disease, B-lineage acute lymphoblastic leukemia, target therapy, blinatumomab

Введение

Оценка минимальной остаточной болезни (МОБ) является неотъемлемой частью современных протоколов лечения В-линейных острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ) у детей [1, 2]. Многопараметровая проточная цитометрия (ПЦ) дает возможности детальной иммунофенотипической характеристики опухоли на этапе диагностики с последующим отбором индивидуальных лейкозассоциированных имму-нофенотипов и персонализации мониторинга МОБ [3]. Протоколы детекции МОБ при ОЛЛ хорошо отработаны и близки по чувствительности к молекуляр-но-биологическим методам [4]. С применением углубленной риск-стратификации больных с учетом данных МОБ достигнуты значительные успехи терапии, отражением которых стало увеличение общей выживаемости до 80—90 %. Однако стандартная терапия остается неэффективной у 10—20 % детей с впервые диагностированным ОЛЛ [5, 6].

Ежегодно в клиническую практику входят новые таргетные препараты, призванные на молекулярном уровне воздействовать на болезнь, и целый ряд находится на разных стадиях клинических испытаний [7].

Новый виток развития таргетных препаратов произошел с разработкой биспецифических антител, представляющих новый класс препаратов на основе моноклональных антител, связывающихся с таргет-ным поверхностным антигеном с одной стороны и с Т-клеточным рецептором с другой, привлекая таким образом эффекторные Т-клетки и усиливая противоопухолевый эффект. Первым лекарственным средством в данном классе стал блинатумомаб, одобренный Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США для лечения Р^отрицательного рефрактерного/рецидивирующего В-линейного ОЛЛ. Поводом для одобрения стали результаты II фазы клинических исследований, в которой 43 % из 189 взрослых пациентов достигли полной ремиссии. МОБ-отри-цательный статус был зарегистрирован в 82 % случаев [8-11].

Блинатумомаб — моноклональное антитело с молекулярным весом 50 кДа, которое состоит из ветви анти-CD3, прикрепляется к CD3+ Т-клеткам и соединяется посредством линкера с ветвью анти-CD19, связывающейся с CD19+ В-клетками [12].

Антиген CD19 выбран в качестве целевой молекулы не случайно, это трансмембранный белок, появляющийся на ранних стадиях нормального

В-клеточного онтогенеза и сохраняющийся на всех этапах дифференцировки [13]. Его обязательное присутствие на клетках ОЛЛ В-линейной принадлежности обусловливает выбор данной детерминанты в качестве иммунотерапевтической мишени.

Несмотря на многообещающие начальные результаты лечения, некоторые пациенты не отвечают на терапию блинатумомабом или же после хорошего начального эффекта все же имеют прогрессирование заболевания. Рецидив болезни развивается в 30 % случаев [14].

При характеристике иммунофенотипа бластных клеток в рецидиве на фоне лечения блинатумомабом установлен факт отсутствия экспрессии CD19 на клетках опухоли. Это затрудняет идентификацию В-линейных предшественников и требует поиска новых методологических подходов к оценке количества клеток МОБ.

В данной статье рассматривается возможность оценки количества клеток МОБ с использованием многоцветной ПЦ у пациентов в ходе лечения блинатумомабом на примере больного с ранним рецидивом ОЛЛ (пре-пре-В иммуноподвариант).

Материалы и методы

Материалом исследования явились образцы костного мозга больного с ОЛЛ (пре-пре-В иммуноподвариант) в дебюте и рецидиве заболевания. Мор-фоцитохимическое исследование проводили в лаборатории гемоцитологии НИИ ДОГ ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (к.м.н. И.Н. Серебрякова). Подробная иммунофено-типическая характеристика бластов выполнена в лаборатории иммунологии гемопоэза НИИ КО ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России (руководитель, профессор Н.Н. Тупицын) методом 8-цветной ПЦ в соответствии с протоколами консорциума EuroFlow: проба ALOT (acute leukemia orientation tube) и уточняющая панель В-ли-нейного ОЛЛ (см. таблицу).

Мониторинг МОБ в рецидиве проводили после каждого блока противорецидивной терапии, а также по окончанию курса блинатумомаба методом 8-цвет-ной ПЦ с учетом индивидуально отобранных лейкоз-ассоциированных иммунофенотипов.

Клиническое наблюдение

Пациент Г., 4лет, болен ОЛЛ, L2, пре-пре-В (ВП) иммуноподвариант с июня 2015 г. С признаками

Протокол консорциума EuroFlow

№/флу- Антиген

орохром FITC РЕ РегСР-су5.5 Ре-су7 АРС АРС-Н7 V450 V500

Проба ALOT

1 суМРО CD79a CD34 CD19 CD7 SmCD3 CyCD3 CD45

Уточняющая панель В-линейного ОЛЛ

1 CD58 CD66c CD34 CD19 CD10 CD38 CD20 CD45

2 су^М CD33 CD34 CD19 CD117 + sIgM sIg-^ sIg-к CD45

3 п^Т CD13 CD34 CD19 CD22 CD24 CD9 CD45

4 CD15 + CD65 NG2 CD34 CD19 CD123 CD81 CD21 CD45

■

а-1 1024

£ 512

а-2 1024

101 102 10' 104 Ш45 PacO V500-A

10'

I512

ГС

^ 256' Щ

«

О

о_

<

у 102

о

и

101 102 10' TdT FITC FITC-A

101 102 10' CD19 PE-Cy7 PE-Cy7-A

«

и

о_

<

О

и

101 102 10' Ш34 PerCP-Cy55 PerCP-A

100 101 102 10' CD38 APC-H7 APC-H7-A

101 102 10' Ш81 APC-H7 APC-H7-A

102 10' СD66c PE PE-A

Рис. 1. Иммунофенотип властных клеток в дебюте заболевания (пре-пре-В иммуноподвариант ОЛЛ): а — бластные клетки, выявленные на основании слабой экспрессии CD45 (цитограмма а-1; CD45 (ось х) V! SSC (ось у) — гейт 1 (красный цвет)), мономорфоно экспрессирующие CD19 (цитограмма а-2; CD19 (ось х) V! SSC (ось у) — гейт 2 (синий цвет)), а также nuTdT(ось х) в сочетании со слабой экспрессией sCD22 (ось у); б — В-лимфобласты характеризуются яркой экспрессией CD10 (ось у), часть бластов CD34+ (СD34 — ось х); в — оценка экспрессии антигенов аберрантности CD58 (ось у) V! CD38 (ось х): при сопоставлении с остаточными нормальными В-линейными предшественниками (гейт 4) бластные клетки имеют фенотип СD5SrCD38k'w; г — В-лимфобласты аберрантны в отношении молекулы CD81 (ось х) V! CD45 (ось у); д — оценка экспрессии CD66c (ось х) V! CD10 (ось у), часть бластов CD66c+

б

а

10

в

г

10

10

; 1

г )

: 0,1 0,01

01.09.2016 01.10.2016 01.11.2016

__Я-■

06.09.2016 12.10.2016 21.11.2016

CD19, % Syto+ 0,15 1,05 1,5

МОБ, % 0,007 0,03 0,04

Пороговый уровень МОБ, % 0,01 0,01 0,01

Рис. 2. Динамика уровня МОБ на фоне противорецидивной терапии

рецидива 01.08.2016 больной поступил в отделение НИИ ДОГФГБУ «НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, где была проведена первичная диагностика (руководитель, профессор А.В. Попа).

Бласты в дебюте заболевания характеризовались мономорфной экспрессией CD19 и ядерной TdT(nuTdT) в сочетании со слабой экспрессией sCD22 (рис. 1а). Ярко экспрессировали CD10, часть бластов была CD34+ (рис. 1б). Обращает на себя внимание отсутствие

аберрантности по CD58 (антиген экспрессирован на уровне остаточных нормальных В-линейных предшественников) в сочетании со слабой (аберрантной) экспрессией CD38 (рис. 1в). Клетки опухоли были аберрантны в отношении молекулы CD81 (рис. 1г), что служило одним из основных критериев в дальнейшем мониторинге МОБ. Часть бластов была CD66c+ (рис. 1д).

В условиях отделения гематологии областной больницы в период с 17.07.2015 по 09.03.2016 было проведено лечение по протоколу ALL IC-BFM 2002 для средней группы риска. На 15-й день лечения достигнут хороший морфологический ответ — содержание бластов в мие-лограмме составляло <5 %. Мониторинг МОБ не выполняли. С 02.03.2016начато проведение поддерживающей терапии.

При очередном плановом обследовании 20.07.2016 в общем анализе крови обнаружены бластные клетки — 42 %, в миелограмме — 80 %. Диагностирован рецидив заболевания. Больной госпитализирован в НИИ ДОГ ФГБУ «НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава

Рис. 3. Оценка МОБ по окончании курса блинатумомаба: а — количество ядросодержащих клеток составляет 96,5 % на основании экспрессии Syto41 (ось х) V! SSC (ось у) — гейт 1 (красный цвет); б — выявлено 9,4 % клеток-предшественников на основании экспрессии nuTdT(осьу) V! CD10 (ось х) в пределах ядросодержащих клеток — гейт 2 (синий цвет); в — nuTdT+CD10+ клетки характеризовались отчетливой экспрессией cyCD22; г — экспрессия CD19 на nuTdT+CD10+ клетках отсутствовала (CD19 (ось х) V! CD10 (ось у)); д — большинство В-линейных предшественников были CD58+CD38lш (CD38 (ось х) V! CD58 (ось у)); наряду с этим 0,12 % В-линейных предшественников демонстрировали фенотип CD58++CD38lш — гейт 3 (темно-синий цвет)

Рис. 4. Иммунофенотип опухолевых В-лимфобластов во 2-м рецидиве болезни (пре-пре-В иммуноподвариант ОЛЛ): а — бластные клетки, выявленные на основании слабой экспрессии CD45 (цитограмма а-1; CD45 (ось х) V! SSC (ось у) — гейт 1 (красный цвет)), характеризовались отчетливой экспрессией cyCD22 (ось х) V! SSC (ось у) — гейт 2 (синий цвет); б — В-лимфобласты ярко экспрессировали CD10 (ось у) в сочетании с nuTdT(ось х); в — только 23 % бластов экспрессировали CD19 (CD10 (ось х) V! CD19 (ось у)); г — бластные клетки отчетливо экс-прессируют антиген CD38 (ось х) в сочетании со слабой экспрессией CD58 (ось у); присутствует 4 % CD58++CD38hw клеток; д — экспрессия CD81 соответствует таковой как в дебюте, так и в рецидиве заболевания, т.е. аберрантна (CD81 (ось х) V! CD45 (ось у)) в сопоставлении с остаточными нормальными В-линейными предшественниками (гейт 4)

России. Иммунофенотип бластных клеток соответствовал таковому при первичной диагностике (CD19+C D10+cyCD22+ TdT+CD58+CD38lowCD81,ow), особенностью было отсутствие экспрессии CD34.

Проведено 3 блока противорецидивной терапии. После каждого блока определяли количество клеток МОБ. Сохранялся МОБ-положительный статус (рис. 2).

Таким образом, у ребенка с ранним рецидивом ОЛЛ после 3-го курса противорецидивной терапии отмечалось в динамике нарастание количества клеток МОБ. В целях достижения МОБ-отрицательного статуса перед планируемой аллогенной трансплантацией гемо-поэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) было решено провести курс лечения блинатумомабом в режиме монотерапии с последующим контролем ответа и решением вопроса о сроках выполнения алло-ТГСК.

По окончании курса блинатумомаба (22.12.2016) состояние пациента было удовлетворительным, клинические признаки прогрессирования заболевания отсутствовали. Оценен статус МОБ. Морфологически в пунктате костного мозга выявлено 4,4 % бластов. Иммунологически, в пределах ядросодержащих клеток (рис. 3а) на основании экспрессии nuTdT в сочетании с CD10 (рис. 3б) и cyCD22 (рис. 3в) обнаружено 9,4 % В-линейных предшественников с закономерным отсутствием экспрессии CD19 (рис. 3г). Экспрессия маркеров аберрантности была такой же, как в дебюте и в рецидиве заболевания. Обращает на себя внимание появление популяции В-линейных предшественников с фенотипом CD58++CD38-(рис. 3д) в количестве 0,12 %. Иммунологически было высказано предположение о начале 2-го рецидива заболевания.

Спустя 2 нед развилась клиническая картина рецидива заболевания. Морфологически в пунктате костного мозга выявлено 47 % бластов. Иммунологически бласты были мономорфны по экспрессии cyCD22 (рис. 4а) и nuTdT, ярко экспрессируя CD10 (рис. 4б). Экспрессия CD19 отмечалась только на части (23 %) бластов (рис. 4в). При оценке аберрантности наблюдались изменения в иммунофенотипе опухолевых клеток. Так, при сохранении отсутствия аберрантности по CD58 экспрессия CD38 стала более выраженной. Обращает на себя внимание увеличение популяции бластных клеток с фенотипом CD58++CD38- (т. е. типичных аберрантных) до 4 % (рис. 4г). В-лимфобла-сты сохраняли свою аберрантность в отношении молекулы семейства тетраспонина CD81 (рис. 4д).

Больному был проведен курс высокодозной химиотерапии по схеме FLA + бортезомиб, после чего предпринята попытка алло-ТГСКот матери.

Обсуждение

Таким образом, у больного с ранним рецидивом В-линейного ОЛЛ мониторинг МОБ был сопряжен с некоторыми трудностями. Наиболее часто используемым критерием аберрантности В-линейных предшественников при определении клеток МОБ считается гиперэкспрессия антигена CD58 в сочетании со слабой экспрессией либо отсутствием антигена CD38. Нормальные же В-линейные предшественники имеют иммунофенотип CD58+CD38low/- [15, 16]. Однако у данного пациента аберрантность по CD58/CD38 (как в дебюте, так и в рецидиве болезни) отсутствовала, и детекция МОБ базировалась на оценке экспрессии альтернативных маркеров [3]. В данном случае были использованы антигены CD81 и CD66c.

Стандартный цитометрический протокол детекции МОБ подразумевает оценку В-линейных предшественников в гейте CD19+ в пределах ядросодержащих клеток [17—19]. Это невозможно в случае терапии блинатумомабом, так как на большинстве бластов антиген CD19 утрачивается [14]. По окончании курса блинатумомаба с учетом его специфичности была выбрана альтернативная стратегия выявления В-ли-нейных предшественников. Показано, что пиИТ определяется на самых ранних этапах костномозговых В-линейных предшественников наряду с цитоплазма-тическими CD22 и CD79 [13], и основой детекции МОБ у данного пациента стала оценка этих маркеров в сочетании с CD10. При обращении внимания на количество В-линейных предшественников (9,4 %) и их полное соответствие первичному иммунофено-типу опухоли (CD58+CD38lowCD81low) было высказано предположение о начале развития 2-го рецидива заболевания, которое позже подтвердилось.

Показано, что зачастую в рецидиве ОЛЛ на фоне блинатумомаба бластные клетки демонстрируют иммунофенотип CD19- [14]. В данном случае в рецидиве заболевания после терапии блинатумомабом только 23 % бластов были CD19+.

Заключение

В случае назначения блинатумомаба в курсе терапии В-линейного ОЛЛ необходимо изменить стратегию поиска В-линейных предшественников ввиду отсутствия экспрессии антигена CD19. Выявление В-линей-ных предшественников должно основываться на оценке экспрессии других пан-В-клеточных антигенов. В первую очередь это цитоплазматические CD22 или CD79a в сочетании с экспрессией пиИТ и мембранного CD10 в пределах ядросодержащих клеток образца.

ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES

1. Borowitz M.J., Devidas M., Hunger S.P. et al. Clinical significance of minimal residual disease in children acute lymphoblastic leukemia and its relationship to other prognostic factors: a Children's Oncology Group study. Blood 2008;111(12):5477-85.

DOI: 10.1182/blood-2008-01-132837. PMID: 18388178.

2. Dworzak M.N., Froschl G., Printz D. et al. Prognostic significance and modalities of flow cytometric minimal residual disease detection in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood 2002;99(6):1952-8. DOI: 10.1182/ blood.V99.6.1952. PMID: 11877265.

3. Безнос О.А., Гривцова Л.Ю., Попа А.В. и др. Определение минимальной

остаточной болезни при В-линейных острых лимфобластных лейкозах с использованием подходов EuroFlow. Клиническая онкогематология 2017;10(2):158-68.

4. van Dongen J.J., van der Velden V.H., Bruggemann M., Orfao A. Minimal residual disease diagnostics in acute lymphoblastic leukemia: need for sensitive, fast, and standardized technologies. Blood 2015;26(125):3996-4009.

DOI: 10.1182/blood-2015-03-580027. PMID: 25999452.

5. Litzow M.R. Antigen-based immunotherapy for the treatment of acute lymphoblastic leukemia: the emerging role of blinatumomab. Immunotargets Ther 2014;3:79-89.

DOI: 10.2147/ITT.S37292. PMID: 27471701.

6. Hoffman L.M., Gore L. Blinatumomab, a bi-specific anti-CD19/CD3 BiTE® antibody for the treatment of acute lymphoblastic leukemia: perspectives and current pediatric applications. Front Oncol 2014;4:63. DOI: 10.3389/ fonc.2014.00063. PMID: 24744989. Wolach O., Stone R.M. Blinatumomab for the treatment of Philadelphia chromosome-negative, precursor B-cell acute lymphoblastic leukemia. Clin Cancer Res 2015;21(19):4262-9.

DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-0125. PMID: 26283683.

7. Przepiorka D., Ko C.W., Deisseroth A. et al. FDA approval: Blinatumomab. Clin

24 Оригинальные статьи

Cancer Res 2015;21(18):4035-9. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-15-0612. PMID: 26374073.

8. Gokburget N., Zugmaier G., Klinger M. et al. Long-term relapse-free survival

in a phase 2 study of blinatumomab for the treatment of patients with minimal residual disease in B-lineage acute lymphoblastic leukemia. Haematologia 2017;102(4):132-5. DOI: 10.3324/haematol.2016.153957. PMID: 28082340.

9. Klinger M., Brandl C., Zugmaier G. et al. Immunopharmacologic response of patients with B-lineage acute lymphoblastic leukemia to continuous infusion of T cell-engaging CD19/CD3-bispecific BiTE antibody blinatumomab. Blood 2012;119(26):6226-33.

DOI: 10.1182/blood-2012-01-400515. PMID: 22592608. 10. Topp M.S., Gökbuget N., Zugmaier G. et al. Long-term follow-up of hematologic relapse-free survival in a phase 2 study of blinatumomab in patients with MRD in B-lineage ALL. Blood 2012;120(26):5185-7. DOI: 10.1182/blood-2012-07-441030. PMID: 23024237.

11. Lee K.J., Chow V., Weissman A. et al. Clinical use of blinatumomab for B-cell acute lymphoblastic leukemia in adults. Ther Clin Risk Manag 2016;12:1301-10. DOI: 10.2147/TCRM.S84261. PMID: 27601914.

12. Dworzak M.N., Fritsch G., Froschl G. et al. Four-color flow cytometric investigation of terminal deoxynucleotidyl transferase-positive lymphoid precursors in pediatric bone marrow: CD79a expression precedes CD19 in early B-cell ontogeny. Blood 1998;92(9):3203-9. PMID: 9787156.

13. Ruella M., Barrett D.M., Kenderian S.S. et al. Dual CD19 and CD123 targeting prevents antigen-loss relapses after CD19-directed immunotherapies.

J Clin Invest 2016;126(10):3814-26. DOI: 10.1172/JCI87366. PMID: 27571406.

14. Veltroni M., De Zen L., Sanzari M.C. et al. Expression of CD58 in normal, regenerating and leukemic bone marrow B-cells: implications for the detection of minimal residual disease in acute lymphocytic leukemia. J Hematol 2003;88(11):1245-52.

PMID: 14607753.

15. Romero-Ramirez H., Morales-Guadarrama M.T., Pelayo R. et al. CD38 expression in early B-cell precursors contributes to extracellular signal-regulated kinasemediated apoptosis. Immunology 2014;144(2):271-81. DOI: 10.1111/ imm.12370. PMID: 25155483.

16. Гривцова Л.Ю., Попа А.В., Купрыши-на НА. и др. Оценка минимальной ре-зидуальной болезни при острых лим-фобластных лейкозах из В-линейных предшественников у детей методом трехцветной проточной цитометрии. Иммунология гемопоэза 2008;5(2):8—33.

17. Гривцова Л.Ю., Попа А.В., Серебрякова И.Н., Тупицын Н.Н. К дальнейшей стандартизации определения остаточных бластных клеток в костном мозге детей с В-линейными острыми лимфобластными лейкозами на 15-й день индукционной терапии. Иммунология гемопоэза 2011;8(1):35-54.

18. Гривцова Л.Ю., Тупицын Н.Н. Иммунологическая оценка гемодиллюции костного мозга при лабораторных исследованиях (на основании теста

М. Локен). Медицинский алфавит 2015;18(259):67-70.