CC BY
13
НАЦИОНАЛЬНЫЕ ПРИОРИТЕТЫ РОССИИ. 2011. № 2 (5). СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВЫПУСК
ПОДБОР РЕАГЕНТОВ
ДЛЯ ЭЛЮЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ТУЛЯРЕМИИ С МАГНОИММУНОСОРБЕНТНОЙ МАТРИЦЫ ДЛЯ ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ПОСТАНОВКИ ИНДИКАЦИОННЫХ АНАЛИЗОВ
Ю.Ю. Гаркуша, И.В. Жарникова, И.С. Тюменцева, Е.Н. Афанасьев, Е.В. Жданова, С.А. Курчева ФГУЗ «Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора, г. Ставрополь
Нами разработаны магноиммуносорбенты (МИС), обеспечивающие селективное концентрирование возбудителя туляремии, присутствующего в водных объектах окружающей среды в низких концентрациях, не позволяющих его обнаружить известными методами лабораторного исследования.
Иммуноферментный анализ (ИФА) можно проводить без элюции антигена (Аг) с иммобилизованной магнитной матрицы, а, например, реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) и реакцию агглютинации латекса (РАЛ) - только с элюированным Аг.
Цель исследования - подбор эффективных реагентов, позволяющих максимально извлекать Аг с иммобилизованной матрицы с сохранением его активности.
В работе использованы штаммы туляремийного микроба из лаборатории «Коллекция патогенных микроорганизмов» ФГУЗ «СтавНИПЧИ» Роспотребнадзора: F.tularensis Мшга, F.tularensis 890-Аз, F.tularensis Schu, F.tularensis 543/6, F.tularensis 15 НИИЭГ, F.tularensis 503/840. При разработке иммобилизованных препаратов применяли алюмосиликат, окись железа (II). Модификаторами сорбентов являлись декстран (поли-глюкин) и натрия перхлорат. В работе использовали тест-системы иммуноферментные и наборы реагентов для постановки РНГА, РАЛ производства ФГУЗ «СтавНИПЧИ» Роспотребнадзора.
Первоначально проанализированы физико-химические закономерности взаимодействия антиген-антитело (Аг-Ат). Антигенные детерминанты взаимодействуют с активным центром антител, имеющих определенную аминокислотную последовательность, образуя прочные нековалентные связи. В связи с этим не-
обходимо подобрать элюирующие растворы, разрушающие связь Аг с Ат и сохраняющие активность Аг. Для элюирования используют буферные растворы с низким рН, а также растворы, содержащие гуанидин-НС1 или мочевину. Концентрированные солевые растворы, например 3 М №С1, не относят к специфическим элю-ентам, но они могут быть использованы для ослабления электростатических взаимодействий между Ат и иммобилизованным на носителе Аг.
При приготовлении МИС, сорбции и элюирова-нии необходимо иметь в виду высокую лабильность Ат в присутствии денатурирующих агентов. Для элюции Аг с магноиммуносорбентной матрицы нами апробирован органический растворитель - ацетонитрил (С2Н^) с молекулярной массой 41,05 г/моль, разрушающий иммунокомплекс Аг-Ат. Предварительно проверив его при постановке РНГА, РАЛ на предмет возможности давать ложноположительный результат и получив хорошие показатели, провели элюцию Аг следующим образом: после инкубации МИС со взвесью туляремийного микроба в концентрации 1х106 м.к./мл и отмывки от несвязавшегося Аг вносили 0,5 мл аце-тонитрила на 20 мин, сливали надосадок, представляющий собой элюированный Аг, доводили рН до 6-7. Далее проводили постановку РНГА, РАЛ. Установлено, что Аг туляремийного микроба выявлялся в реакциях в концентрации 1,25х105 м.к./мл.
Таким образом, для постановки РНГА и РАЛ после селективного концентрирования возбудителя туляремии из объектов окружающей среды целесообразно проводить элюирование патогена с магнитной иммунной матрицы, используя ацетонитрил.
СРЕДА ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ АЛКИЛСУЛЬФАТАЗЫ У LISTERIA MONOCYTOGENES
Г.Г. Шубин, О.В. Дуванова, Г.Л. Карбышев, А.Н. Терентьев, С.О. Водопьянов ФГУЗ «Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт»
В настоящее время листериоз представляет собой актуальную медико-социальную проблему по причине широкой распространенности возбудителя и ряда трудностей в диагностике заболеваний. В дополнение
к бактериологическим методам диагностики листери-оза в практику введены ПЦР, ИФА, сконструированы листериозные антигенный и антительный полимерные диагностикумы. Дальнейшее изучение биохими-
