CC BY
27
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 ШИФР СПЕЦИАЛЬНОСТЬ
УДК 615.072+615.371:579.841.95 03.02.03 Микробиология
14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология
Перспективы совершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной живой
И. В. Касина, С. А. Алексеева, 3. Е. Бердникова, Т. И. Немировская, А. С. Алехина
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Российская Федерация, 127051, Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2
Поступила 05.10.2017 г. Принята к публикации 26.10.2017 г.
В статье представлены перспективы совершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной живой (далее по тексту — вакцина туляремийная) по показателям «Подлинность», «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)» и «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов». Изучена возможность совершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной по показателю «Подлинность» с помощью коммерческого диагностического набора реагентов иммунохроматографическая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии («ИХ тест-система Р. №1агепв'1в»). Для оптимизации и усовершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной по показателю «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)» в качестве дополнительной питательной среды для определения количества живых микробных клеток рекомендовано использовать готовую к применению питательную среду для культивирования и выделения туляре-мийного микроба. Предложено усовершенствовать методику проведения экспертизы качества вакцины туляремийной по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» за счет исключения стадии пересева на ти-огликолевую среду на 5-7 сут, что экономически и практически целесообразно, а также снизит риск возможности получения ложноположительных результатов.
Ключевые слова: Ргапс^еНа Магепв^в; вакцина туляремийная живая; подлинность; специфическая активность; количество живых микробных клеток; питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба (РТ-агар), отраслевой стандартный образец.
Библиографическое описание: Насина ИВ, Алексеева СА, Бердникова ЗЕ, Немировская ТИ, Алехина АС. Перспективы совершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной живой. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2017; 17(4): 240-247.
Экспертиза качества иммунобиологических лекарственных препаратов (ИЛП) содержит комплекс мер, включающий проведение измерений, анализ испытаний совокупности свойств и характеристик, а также их сравнение с установленными требованиями с целью определения соответствия полученных и требуемых величин параметров качества и является основной составляющей в системе менеджмента качества. Усовершенствование экспертизы качества ИЛП, в том числе за счет экономических и технологических показателей, также является неотъемлемой частью системы качества [1-4].
Экспертиза качества вакцины туляремийной живой (далее по тексту — вакцина туляремийная) проводится с целью подтверждения соответствия показателей качества требованиям нормативной документации (далее НД) [5].
Цель работы — оценка перспективы совершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной по показателям: «Подлинность», «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)» и «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов».
В задачи исследования входило проведение испытаний образцов вакцины туляремийной по показателям качества «Подлинность», «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)», «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» по предлагаемой нами усовершенствованной методике и анализ полученных результатов.
Материалы и методы
Проведены испытания отраслевого стандартного образца вакцины туляремийной живой (ОСО 42-28-398-2016) серии 7 иммунохроматографическим методом по показателю «Подлинность». В испытании применяли набор реагентов иммунохроматографическая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии («ИХ тест-система F. tularensis») серии 11 производства ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Рос-потребнадзора (г. Оболенск, Серпуховский р-н) по ТУ 9398-092-78095326-2008 (регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05486) С помощью набора «ИХ тест-система F. tularensis» возможно выявление и идентификация возбудителя туляремии Francisella tularensis в микробных взвесях с концентрацией 107 м.к./мл, полученных из колоний микроорганизмов или из объектов внешней среды путем специальной пробоподготовки. В соответствии с инструкцией по применению, готовят микробную взвесь туляремийного штамма, выращенного на плотной питательной среде, в 0,01 М натрий-фосфатном буфере, рН 7,4 (далее по тексту — РБФ: раствор буферный фосфатный). РБФ готовят ex tempore, стерилизация раствора не требуется. Так как туляремийная вакцина представляет собой лиофилизированную в стабилизирующей среде живую культуру вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ, пробоподготовку для испытания осуществляли следующим образом: без предварительного
культивирования препарат разводили буферным раствором. Общую концентрацию микробных клеток в суспензии определяли в соответствии с разделом НД «Специфическая активность (концентрация микробных клеток)» по ОСО мутности бактериальных взвесей 42-28-85-2017 (10 МЕ), затем разводили до концентрации 109м.к./мл. Пробы прогревали на водяной бане при 56 °С в течение 30 мин, центрифугировали в течение 2 мин при 10000 об/мин, затем разводили с помощью РБФ до концентрации 108 и 107 м.к./мл. Пробы вакцины в концентрации 109, 108 и 107 м.к./мл исследовали с помощью набора «ИХ тест-система F. tularensis».
В качестве препарата сравнения в соответствии с НД на вакцину туляремийную, использовали набор реагентов иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие туляремийные сухие производства филиала «Медгамал» ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» Минздрава России (серия 558).
Проведены испытания образцов четырех коммерческих серий (О9, 010, О11 и О12) вакцины туляремийной бактериологическим методом по показателю «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)». В испытании использовали питательную среду для культивирования и выделения туляремийного микроба, готовую к применению (серия 10), производства ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора (г. Оболенск) по ТУ 9398116-78095326-2010 и зарегистрированную на территории Российской Федерации (регистрационное удостоверение № ФСР 2011/10649).
Для сравнения применяли питательную среду для культивирования и выделения туляремийного микроба сухую (FT-агар), серии 21 производства ФБУН ГНЦ ПМБ Роспотребнадзора (г. Оболенск) по ТУ 9398-02878095326-2007 (регистрационное удостоверение № ФСР 2007/00899), рекомендованную НД на вакцину туляремийную.
По усовершенствованной нами методике проведения испытания по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» были испытаны стандартные образцы вакцины туляремийной. В качестве сравнения проводили испытания по методике, представленной в НД на вакцину туляремийную.
Кроме того, был проведен анализ результатов испытаний образцов 25 серий вакцины туляремийной живой и 11 образцов вакцины чумной живой серии 1-17 по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов».
Все препараты были исследованы в течение срока годности.
Результаты и обсуждение
Одним из основных показателей качества является подлинность препарата. В соответствии с ГФ XIII ОФС.1.8.1.0002.15 «Иммунобиологические лекарственные препараты», подлинность может подтверждаться различными лабораторными методами (биологическими, иммунобиологическими, молекулярными, химическими и физико-химическими), позволяющими специфически идентифицировать лекарственный препарат [6]. В соответствии с требованиями НД, подлинность вакцины туляремийной определяется иммунофлуоресцентным методом с помощью коммерческого препарата — иммуноглобулинов диагностических туляремийных флуоресцирующих или аналогичных, зарегистрированных на территории Российской
Рис. 1. Образец препарата вакцины туляремийной, окрашенный иммуноглобулинами диагностическими туляремийными флуоресцирующими в рабочем разведении 1:32. Увеличение х 1000.
Федерации. Метод определения подлинности основан на окраске микробных клеток туляремийного микроба специфическими иммуноглобулинами, меченными флуоресцентным красителем. Учет результатов проводится по че-тырехкрестовой системе. Специфическое свечение оболочки микробной клетки на 4 креста — сверкающая, а на 3 креста — яркая флуоресценция желтовато-зеленого цвета, четко контрастируемая с темным телом микробной клетки. Специфическое свечение оболочки микробной клетки на 4 и 3 креста считается положительным результатом на подтверждение наличия туляремийного микроба. Диагностические иммуноглобулины специфичны и не выявляют гетерологичные микроорганизмы. Туляремийный микроб представляет собой грамотрицательные очень мелкие (0,1-0,5 мкм) неподвижные полиморфные кокко-видные палочки. Как видно на фотографии, при увеличении в 1000 раз, микробные клетки светятся целыми конгломератами, что затрудняет учет результатов (рис. 1). Кроме того, основанием для поиска альтернативных методов испытания вакцины туляремийной по показателю «Подлинность» послужил и тот факт, что зарегистрированные на территории Российской Федерации иммуноглобулины диагностические туляремийные флуоресцирующие выпускаются единственным предприятием — филиалом «Медгамал» ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи» Минздрава России.
С целью поиска альтернативных методов оценки подлинности вакцины, нами был проведен анализ диагностических препаратов, предназначенных для выявления ту-ляремийного микроба, выпускаемых и зарегистрированных на территории Российской Федерации [7, 8]. Предпочтение имели препараты для ускоренной идентификации туляремийного микроба, осуществляемой в течение одного рабочего дня. Таким препаратом является «ИХ тест-система Г. Ш1агепз1з», предназначенная для экспресс-выявления и идентификации микробных клеток Г. tulaгeпsis при проведении лабораторных исследований объектов окружающей среды. Тест-система представляет собой пластиковую диагностическую панель (футляр) с лункой для внесения образца и с окошком для считывания результатов (рис. 2). Специфической мишенью, наличие которой в пробе выявляет данный тест, является ли-пополисахарид Г. tulaгeпsis. Были проведены испытания
Рис. 2. Результаты подтверждения подлинности ОСО вакцины туляремийной с помощью набора реагентов для иммунохроматогра-фического экспресс выявления и идентификации возбудителя туляремии («ИХ тест-системы F. tularensis»).
3 стандартных образцов вакцины туляремийной в концен-трацях 1 09, 108 и 107 м.к./мл. Для этого приготовленные (как описано в разд. «Материалы и методы») пробы вакцины в объеме 0,1 мл вносили на диагностическую панель. Через 15-20 мин учитывали результат. Положительным результатом на присутствие туляремийного микроба является наличие видимых глазом красных линий в зоне «С» и «Т», где зона «С» — контрольная полоса, а зона «Т» — опытная полоса. При этом интенсивность цвета полос не учитывается. Интенсивность полос в зоне «С» и «Т» может отличаться. Об отрицательном результате свидетельствует наличие красной линии только в зоне «С». Как видно на фотографии, в концентрации 107 м.к./мл в зоне «Т» тест-полоса практически не заметна, а в концентрациях
108 и 109 м.к./мл результаты явно положительные, четко видна тест-полоса (рис. 2). Таким образом, рекомендуемые нами концентрации вакцины для проведения испытания по показателю «Подлинность» составляют 108 и
109 м.к./мл.
Анализируя методику проведения испытаний в соответствии с НД и с использованием набора «ИХ тест-система F. tularensis» в отношении длительности пробоподго-товки, собственно продолжительности исследования и учета результатов, можно сделать вывод, что в целом продолжительность проведения обоих испытаний одинакова. Приблизительное время, затрачиваемое на испытание, составляет в обоих случаях 2-2,5 ч. Однако результаты, полученные с помощью набора «ИХ тест-система F. tula-rensis», несомненно, информативнее.
Одним из основных показателей качества вакцины является «Специфическая активность», обусловленная общей концентрацией микробных клеток и количеством живых микробных клеток [1, 2, 5]. На основании результатов, полученных по данному показателю, определяется количество накожных и внутрикожных доз вакцины в ам-
пуле. Штаммы F. tularensis особо требовательны куслови-ям культивирования, они не растут на питательных средах широкого применения — мясо-пептонном агаре и бульоне, агаре и бульоне Хоттингера. Оптимальными условиями для их культивирования являются слабощелочные агаровые или желточные среды с добавлением цистеина, де-фибринированной крови, тканевых экстрактов и других стимуляторов роста [9,10,11]. Питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба (FT-агар), рекомендованная НД, является оптимальной питательной средой, обеспечивающей все необходимые условия для культивирования вакцинного штамма F. tularensis.
Нами было проведено испытание образцов четырех коммерческих серий вакцины туляремийной по показателю «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)» с помощью питательной среды для культивирования и выделения туляремийного микроба, готовой к применению в сравнении с питательной средой для культивирования и выделения туляремийного микроба (FT-агар), согласно требованиям НД [5]. Испытуемая, готовая к применению питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба, изготовлена на основе сернокислотного гидролизата рыбной муки с цис-теином, стимулятором роста гемофильных бактерий и глюкозо-витаминной добавкой (глюкоза, тиамин хлорид, кальция пантотенат), по составу аналогична FT-агару. Однако, в отличие от FT-агара, данная среда выпускается готовой в стеклянных емкостях по 250 мл в качестве агаровой основы. Глюкозо-витаминная добавка прилагается к комплекту агаровой основы и выпускается по 5 мл в стеклянном флаконе. После расплавления и охлаждения до 45-50 °С агаровой основы, в стерильных условиях в нее добавляется раствор глюкозо-витаминной добавки согласно рекомендациям фирмы-производителя. После перемешивания питательную среду разливают в чашки Петри и используют в испытании.
По ростовым свойствам обе питательные среды соответствовали требованиям НД. При посеве 10 м.к. вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ после инкубирования при температуре (37±1)°С в течение 2 сут питательные среды обеспечивали рост единичных (от 5 до 7) колоний, что подтверждает их чувствительность. При посеве 100 м.к. вакцинного штамма показатель прорастания питательных сред составил от 70 до 73 % от посевной дозы. Морфология выросших колоний вакцинного штамма на обеих питательных средах после инкубирования при температуре (37±1) °С в течение 5 сут была идентична. Из общего количества выросших колоний, число иммуноген-ных SR-типа белого цвета на FT-агаре составило 88 %, на испытуемой среде — 90 %. Степень диссоциации в виде неиммуногенных колоний серого цвета на FT-агаре составила 8 %, на испытуемой среде — 10 %, что не превышает 20 % от общего числа выросших колоний (рис. 3 и 4). Таким образом, используемые питательные среды обеспечивают стабильность основных биологических свойств микроорганизма. При сравнительном высеве образцов вакцины на обеих средах были получены близкие значения количества колониеобразующих единиц вакцинного штамма. Результаты во всех опытах показали незначительные колебания (от 5 до 12 %), входящие в 20 % диапазон, приемлемый для биологических методов. В итоге, рассчитанные количества накожных и внутрикожных доз вакцины в одной ампуле по результатам выросших коло-
Рис. 3. Колонии вакцинного штамма Р. №1агепв1в, выращенные при посеве 10 м.к. после инкубирования при температуре (37±1) °С на РТ-агаре (чашка 1) и на готовой к применению питательной среде (чашка 2) в течение 5 сут.
Рис. 4. Колонии вакцинного штамма Р. tularensis, выращенные при посеве 100 м.к., после инкубирования при температуре (37±1) °С на РТ-агаре (чашка 1) и на готовой к применению питательной среде (чашка 2) в течение 5 сут.
ний на обеих питательных сред, соответствовали друг другу.
Но учитывая экономические и практические показатели проведения экспертизы качества, готовая питательная среда более выгодна и удобна в применении, поскольку не требует предварительной подготовки лабораторной
посуды (мытья, укупорки и стерилизации), необходимости приготовления в лабораторных условиях (исключаются этапы взвешивания, растворения и кипячения компонентов среды, ее стерилизации). Кроме того, условия промышленного выпуска гарантируют стандартность ее состава.
Рис. 5. Результаты посева и последующего пересева на 5-е сут Рис. 6. Результаты посева без последующего пересева стандарт-стандартного образца № 1 вакцины туляремийной, пробирки 1, 6 - ного образца вакцины туляремийной, пробирки 1, 3 — контроль
контроль среды.
среды.
Таким образом, питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба, готовая к применению, может быть рекомендована для внесения в нормативную документацию на вакцину туляремийную живую как альтернативная питательная среда для определения показателя «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)».
В настоящее время испытание вакцины туляремийной по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» проводят в соответствии с требованиями НД и ГФХШ ОФС.1.2.4.0003.15 «Стерильность» методом прямого посева с использованием только тиогликолевой среды [12]. Каждый испытуемый образец препарата растворяют в 1 мл растворителя (0,9 % раствор натрия хлорида) и высевают в соотношении 1:20 в две емкости с тиогликолевой средой. Посевы инкубируют при двух температурных режимах (32,5±2,5) °С и (22,5±2,5) °С в течение 14 сут. На 5-7 сутки проводят пересев на тиогликолевую среду. На 14 сутки проводят предварительный учет результатов испытания. В период инкубирования наблюдается появление в верхнем слое питательной среды слабой опалесцен-ции, как специфического признака роста микробных клеток туляремийного вакцинного штамма в виде мелких облаковидных нежных образований на фоне прозрачной среды. Далее из каждой пробирки с посевом и «пересевом» готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопиру-ют и проводят окончательный учет результатов. Препарат считают прошедшим испытание при наличии в мазке только культуры туляремийного вакцинного штамма (мелкие грамотрицательные кокковидные палочки).
Многочисленные испытания туляремийной вакцины (25 коммерческих серий), проведенные в Испытательном
центре экспертизы качества МИБП, по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» показали, что зона облаковидных образований и слабой опалесцен-ции в первичном посеве и «пересеве» не меняется, сохраняя специфические признаки роста микробных клеток туляремийного штамма.
Особенностями ростовых свойств туляремийного микроба в жидких питательных средах является то, что его размножение происходит медленно и плохо (скудный рост по поверхности среды), что связано с аэрофильно-стью бактерий. Лучшими средами для выращивания бактерий туляремии являются полужидкие среды при добавлении к жидким средам коллоидов (куриного желтка, агара и т.д.), либо при аэрации среды [9-11].
В целях демонстрации отличий ростовых особенностей различных возбудителей особо опасных инфекций, нами были проведены сравнительные испытания стандартных образцов вакцины туляремийной живой (ОСО 42-28-398-2016) серии 7 и вакцины чумной живой серии 1-17 по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов». На фотографиях (рис. 6, 7 и 8) представлены результаты испытания. Посевы вакцины туляре-мийной, культивируемые при обеих температурах в течение 14 сут, по степени мутности визуально не отличались от контрольной незасеянной среды. В посевах вакцины туляремийной наблюдалась лишь легкая опалесцен-ция в верхней части пробирки (рис. 6). В отличие оттуля-ремийного микроба, чумной микроб дает обильный хлопьевидный рост (рис. 7). В связи с этим, «пересев» вакцины чумной на 5-7 сутки необходим, так как визуально нельзя отличить рост специфического микроорганизма от роста контаминанта. На рисунке 8 показаны результаты
Рис. 7. Результаты посева без последующего пересева стандартного образца вакцины туляремийной (пробирки 1-4) и образцов вакцины чумной живой (пробирки 5 и 6 ), пробирки 1,3 — контроль среды.
посева и «пересева» чумной вакцины. При «пересеве» наблюдается специфический рост чумного микроба (единичные хлопьевидные включения без помутнения питательной среды). Далее, в соответствии с требованиями НД необходимо проводить идентификацию микроорганизма микроскопией мазков, окрашенных по Граму.
На основании полученных результатов считаем возможным внесение изменений в методику проведения испытания вакцины туляремийной живой по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» путем исключения стадии «пересева» на 5-7 сут. Совершенствование методики проведения испытания вакцины туляремийной живой по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» экономически и практически целесообразно, а также уменьшит риск возможности получения ложноположительных результатов.
Выводы
1. Перспектива совершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной по показателю «Подлинность» состоит в применении коммерческого диагностического набора реагентов иммунохроматографическая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя туляремии («ИХ тест-система F. tularensis») в качестве альтернативного способа идентификации туляремийного микроба. При проведении данного испытания рекомендуемые концентрации вакцины составляют 108 и 109 м.к./мл.
2. Для усовершенствования экспертизы качества вакцины туляремийной по показателю «Специфическая активность (количество живых микробных клеток)» реко-
Рис. 8. Результаты посева образца № 5 (пробирки 1 и 3) и последующего пересева (пробирки 2 и 4 ) образцов вакцины чумной живой.
мендована к использованию в качестве альтернативной готовая к применению питательная среда для культивирования и выделения туляремийного микроба.
3. Усовершенствование методики проведения экспертизы качества вакцины туляремийной по показателю «Отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов» в виде исключения стадии пересева на 5-7 сутки экономически и практически целесообразно.
Литература
1. Насина ИВ, Горяев АА, Ращепкин ЛИ, Фадейкина ОВ, Неми-ровская ТИ, Устинникова ОБ и др. Аттестация и продление срока годности новой серии отраслевого стандартного образца специфической активности и иммуногенности вакцины туляремийной живой. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2015; (4): 32-8.
2. Насина ИВ, Ращепкин ЛИ, Горяев АА, Алексеева СА, Неми-ровская ТИ, Мовсесянц АА. Оценка качества вакцины туляремийной живой по результатам испытаний в рамках обязательной сертификации. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение 2016; 16(4): 253-9.
3. Мовсесянц АА, Миронов АН, Меркулов ВА, Борисевич ИВ. Цели и задачи испытательного центра экспертизы качества иммунобиологических лекарственных препаратов. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения 2012; (1): 7-9.
4. Мовсесянц АА, Бондарев ВП, Олефир ЮВ, Меркулов ВА, Шим-чукЛФ. Стандарты качества иммунобиологических лекарственных препаратов — новое в Государственной фармакопее Российской Федерации. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения 2016; (2): 38-41.
5. ФС.3.3.1.0019.15. Вакцина туляремийная живая. XIII изд. Т. 3. М.; 2015. С. 923-30. Available from: http://www.femb.ru/ feml.
6. 0ФС.1.8.1.0002.15. Иммунобиологические лекарственные препараты. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 2. М.; 2015. С. 867-79. Available from: http://www.femb.ru/feml.
7. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней. Практическое руководство. Онищенко ГГ, Нутырев ВВ, ред. М.; «Шико», 2013. С. 522-3.
8. Дятлов ИА, Нутырев ВВ, Храмов МВ. Питательные среды для выделения, культивирования и идентификации возбудителей особо опасных инфекций бактериальной природы. М.; 2012. С. 383-90.
9. Шепелин ИА, Миронов АЮ, Шепелин НА. Возбудители особо опасных бактериальных инфекций. Справочник бактериолога. М.; 2016.
10. Мещерякова ИС. Таксономия, идентификация и иммунологическая диагностика туляремии: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М.; 1990.
11. Поздеев ОН. Медицинская микробиология. М.; 2004:392-4.
12. ОФС. 1.2.4.0003.15. Стерильность. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. 1. М.; 2015. С. 925-46. Available from: http://www.femb.ru/feml.
Об авторах
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Российская Федерация, 127051, Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2. Насина Ирина Владимировна. Главный эксперт лаборатории бактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. биол. наук.
Алексеева Светлана Александровна. Ведущий эксперт лаборатории бактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. биол. наук.
Бердникова Зинаида Евтропиевна. Главный эксперт лаборатории бактериологических питательных сред и культур клеток Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. биол. наук.
Немировская Татьяна Ивановна. Начальник лаборатории бактериальных вакцин Испытательного центра экспертизы качества МИБП, канд. мед. наук.
Алехина Александра Сергеевна. Инженер-лаборант лаборатории бактериологических питательных сред и культур клеток Испытательного центра экспертизы качества МИБП.
Адрес для переписки: Касина Ирина Владимировна; Kasina@expmed.ru
Prospects for improving evaluation of live tularemia vaccine quality
I. V. Kasina, S. A. Alekseeva, Z. E. Berdnikova, T. I. Nemirovskaya, A. S. Alekhina
Federal State Budgetary Institution
«Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products»
of the Ministry of Health of the Russian Federation,
Petrovsky boulevard 8, bld. 2, Moscow 127051, Russian Federation
The article presents prospects for improving the evaluation of live tularemia vaccine (hereinafter — tularemia vaccine) quality in terms of the following parameters: «Identification», «Specific activity (the number of living microbial cells)» and the «Absence of extraneous microorganisms and fungi». The authors investigated the possibility of improving evaluation of tularemia vaccine quality as regards the «Identification» parameter by using a commercial diagnostic test kit — immunochromatographic test system for express detection and identification of tularemia agent («F. tularensis ICA test system»). In order to optimize and improve the evaluation of tularemia vaccine quality as regards «Specific activity (the number of living microbial cells)» parameter it is recommended to use a ready-to-use growth medium for cultivation and isolation of tularemia microbe — as an additional culture medium for determination of the number of living microbial cells. It is proposed to improve the methodology of tularemia vaccine quality evaluation as regards the «Absence of foreign microorganisms and fungi» parameter by eliminating the stage of subculturing material in thioglycollate medium for 5-7 days, which is reasonable from economic and practical points of view and also reduces the risk of false positive results.
Key words: Francisella tularensis; live tularemia vaccine; identification; specific activity; number of living microbial cells; growth medium for cultivation and isolation of tularemia microbe (FT agar); branch standard sample.
Bibliographic description: Kasina IV, Alekseeva SA, Berdnikova ZE, Nemirovskaya TI, Alekhina AS. Prospects for improving evaluation of live tularemia vaccine quality. BlOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment 2017; 17(4): 240-247.
References
1. Kasina IV, GoryaevAA, Rashchepkin LI, Fadeykina OV, Nemirovskaya TI, Ustinnikova OB et al. Certification and shelf-life extension of a new batch of the branch reference standard for live tularemic vaccine's specific activity and immunogenicity. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment 2015; (4): 32-8 (in Russian).
2. Kasina IV, Raschepkin LI, Goryaev AA, Alekseeva SA, Nemirovskaya TI, Movsesyants AA. Live tularemia vaccine quality assessment according to test results under the mandatory certification. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment 2016; 16(4): 253-9 (in Russian).
3. Movsesyants AA, MironovAN, Merkulov VA, Borisevich IV. Aims and objectives Testing Center for Quality Expertise of Medical Im-munobiological Preparations. The Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products 2012; (1): 7-9 (in Russian).
4. Movsesyants AA, Bondarev VP, Olefir YuV, Merkulov VA, Shimc-huk LF. Quality standards for immunobiological medicinal products — new texts in the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. The Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products 2016; (2): 38-41 (in Russian).
5. OFS.3.3.1.0019.15. The tularemia vaccine live. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. 13th ed. V. 3.P. 923-30. Available from: http://www.femb.ru/feml (in Russian).
6. OFS.1.8.1.0002.15. Immunobiological medicinal products. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. 13th ed. V. 2. P. 867-79. Available from: http://www.femb.ru/feml (in Russian).
7. Laboratory diagnosis of infectious diseases. A practical guide. Onishchenko GG, Kutyrev VV, eds. Moscow: «Shiko»; 2013. P. 522-3 (in Russian).
8. DyatlovIA, Kutyrev VV, Khramov MV. Nutrient medium for isolation, cultivation and identification of pathogens of especially dangerous infections of bacterial nature. Moscow; 2012. P. 383-90 (in Russian).
9. Shebalin IA, Mironov AYu, Shepelin KA. causative Agents ofespe-cially dangerous bacterial infections. Reference bacteriologist. Moscow; 2016 (in Russian).
10. Meshcheryakova IS. Taxonomy, identification and immunological diagnosis of tularemia. Dr. Med. Sci. [authoref. dissertation] Moscow; 1990 (in Russian).
11. Pozdeev OK. Medical Microbiology. Moscow; 2004. P. 392-4 (in Russian).
12. 0FS.1.2.4.0003.15. Sterility. State Pharmacopoeia of the Russian Federation. 13th ed. V. 1. P. 925-46. Available from: http:// www.femb.ru/feml (in Russian).
Authors
Federal State Budgetary Institution «Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products» of the Ministry of Health of the Russian Federation, Petrovsky boulevard 8, bld. 2, Moscow 127051, Russian Federation.
Kasina IV. Chief expert of the Laboratory of Bacterial Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products' Quality. Candidate of Biological Sciences.
Alekseeva SA. Leading expert of the Laboratory of Bacterial Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products' Quality. Candidate of Biological Sciences.
Berdnikova ZE. Chief expert of the Laboratory of Bacteriological Culture Media and Cell Cultures of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products' Quality. Candidate of Biological Sciences.
Nemirovskaya TI. Head of the Laboratory of Bacterial Vaccines of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products' Quality. Candidate of Medical Sciences.
Alekhina AS. Lab technician of the Laboratory of Bacteriological Culture Media and Cell Cultures of the Testing Centre for Evaluation of Medicinal Immunobiological Products' Quality.
Contact e-mail: Kasina Irina Vladimirovna; Kasina@expmed.ru
