CC BY
89
44. Yang X.H., Wu Q.L., Yu X.B., Xu C.X., Ma B.F., Zhang X.M., Li S.N., Lahn B.T., Xiang A.P. Nestin expression in different tumours and its relevance to malignant grade // J. Clin. Pathol. - 2008. - Vol. 61. - P. 467-473.
45. Zucker E., Röhrl R., Pillai D., Samii M., Loui R. Cancer stem cells plasticity// Cancer Res. - 2008. - Vol. 78. - P. 5706-5715.
Cведения об авторах
Бывальцев Вадим Анатольевич - доктор медицинских наук, профессор, заведующий курсом нейрохирургии, ГБОУ ВПО Иркутский государственный медицинский университет МЗ РФ, главный нейрохирург Департамента здравоохранения ОАО «РЖД», ведущий научный сотрудник лаборатории бор-нейтрон захватной терапии Института ядерной физики СО РАН, профессор кафедры травматологии, ортопедии и нейрохирургии Иркутской государственной академии последипломного образования, ведущий научный сотрудник Иркутского научного центра травматологии и хирургии.
Адрес: 664082, г. Иркутск, ул. Боткина д. 10; тел. 8(3952)638528; e-mail: [email protected].
Степанов Иван Андреевич - аспирант курса нейрохирургии, ГБОУ ВПО Иркутского государственного медицинского университета МЗ РФ.
Адрес: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, д. 14; тел. 8(3952) 638528; e-mail: [email protected].
Белых Евгений Георгиевич - младший научный сотрудник научно-клинического отдела нейрохирургии Иркутского научного центра хирургии и травматологии
Адрес: 664082, г. Иркутск, ул. Боткина д.10; тел. 8 (3952)638528; e-mail: [email protected].
Яруллина Анна Исмагиловна - аспирант курса нейрохирургии, ГБОУ ВПО Иркутского государственного медицинского университета МЗ РФ.
Адрес: 664082, г. Иркутск, ул. Боткина 10; тел. 8 (3952)638528; e-mail: [email protected].
Authors
ByvaltsevVadim Anatolyevich - Dr.Med. Sc., Professor, Head of the Neurosurgery Course of the Irkutsk State Medical University, the Chief Neurosurgeon of the Health Department of «Russian Railways», Leading Researcher at the Laboratory of boron-neutron capture therapy, Institute of Nuclear Physics SB RAS, Professor of the Department of Traumatology, Orthopaedics and Neurosurgery, Irkutsk State Academy of Postgraduate Education, Leading Researcher of the Irkutsk Scientific Center of Traumatology and Surgery.
Address: 10, Botkin Str., 664082, Irkutsk, RF; Phone 8 (3952) 638528; e-mail: [email protected].
Stepanov Ivan Andreevich - Graduate Student of the Course of Neurosurgery, Irkutsk State Medical University.
Address: 14, Krasnoe Vosstanie Str., Irkutsk, 664003, RF; Phone 8 (3952) 638528; e-mail: [email protected].
Belykh Evgeniy Georgievich - Jr. Researcher, Clinical Research Department of Neurosurgery, Irkutsk Scientific Center of Surgery and Traumatology.
Address: 10, Botkin Str., Irkutsk, 664082, RF; Phone 8 (3952) 638528; e-mail: [email protected].
Yarullina Anna Ismagilovna - Graduate Student of the Course of Neurosurgery, Irkutsk State Medical University.
Address: 10, Botkin Str., Irkutsk, 664082, RF; Phone 8 (3952) 638528; e-mail: [email protected].
© КОМАРОВА М. А., НАРОДОВ А. А., ЗАМАЙ Т. Н. УДК 577.29
ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АПТАМЕРОВ В ДИАГНОСТИКЕ И ТЕРАПИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ
ГОЛОВНОГО МОЗГА
М. А. Комарова 12 А. А. Народов 12, Т. Н. Замай 2 1 Красноярский научный центр СО РАН, председатель президиума - академик РАН В. Ф. Шабанов; лаборатория биомагнитных материалов и биосенсоров, руководитель - д. ф.-м. н., проф. П. Д. Ким; 2ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения РФ, ректор - д. м. н., проф. И. П. Артюхов, лаборатория биомолекулярных и медицинских технологий, руководитель - д. б. н. А. С. Замай.
P%'>м%. В статье представлен обзор селекции аптамеров к клеткам глиомы головного мозга. Показаны примеры их практического применения для создания средств диагностики и терапии злокачественных новообразований. Сделан вывод о том, что аптамеры являются перспективными биофармацевтическими препаратами и на их основе возможно создание средств диагностики, терапии и адресной доставки диагностических и терапевтических средств к опухолевым клеткам головного мозга.
Кл>ч%вы% слова: глиома головного мозга, аптамеры, диагностика, терапия.
PERSPECTIVES OF APTAMERS USING IN THE DIAGNOSTICS AND THERAPY OF THE CEREBRAL MALIGNANT NEOPLASMS
M. A. Komarova 12 A. A. Narodov 12, T. N. Zamay 2 'Krasnoyarsk scientific center RAS, 2Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V. F. Voino-Yasenetsky
Abstract. The article provides an overview of the aptamers selection to cells of the cerebral glioma. It were showed the examples of their practical applying for the creating the diagnostics and therapy tools for malignant tumors. It was concluded that aptamers are perspective biopharmaceuticals and on its basis it is possible to provide means of diagnosis, therapy and targeted delivery of diagnostic and therapeutic agents to tumor cells in the brain. Key words: cerebral glioma, aptamers, diagnostics, therapy.
Глиобластомы - первичные опухоли головного мозга, составляющие более 40% всех злокачественных новообразований центральной нервной системы. Выживаемость онкобольных с таким диагнозом редко превышает 12-15 месяцев [30]. Неблагоприятным является также прогноз выживаемости пациентов с метастазами солидных опухолей в головной мозг [9]. К глиальным опухолям головного мозга относятся астроцитомы, олигодендроглиомы или комбинации из глиальных клеток, таких как олигоастроцитомы и эпендимомы. Наиболее распространенным и агрессивным типом среди глиом головного мозга являются астро-цитомы. Эти опухоли характеризуются высокой скоростью роста, резистентностью к апоптозу, повышенным ангиоге-незом, прогрессирующей инвазией в нормальную паренхиму мозга и крайней нестабильностью генома. Кроме того, глиомы головного мозга характеризуются значительной неоднородностью на клеточном, транскрипционном и геномном уровнях. Особенностью этих новообразований является инфильтративный рост и отсутствие четких границ. Часто встречаются терапевтически резистентные опухоли. Наиболее высокая степень злокачественности опухолевых клеток связана с изменением их ионного гомеостаза, в частности, с деполяризацией клеточной мембраны до -45-55 мВ и увеличением внутриклеточной рН, вызванной увеличением экспрессии Na+/H+-обменника (NHE-1) [36].
Для диагностики глиом головного мозга применяют компьютерную томографию (КТ), магнитно-резонансную томографию (МРТ) и позитронно-эмиссионную томографию (ПЭТ) [2]. Обладая различными информационными возможностями, эти методы дополняют друг друга, позволяя детализировать различные стороны диагноза. МРТ уточняет топографо-анатомические взаимоотношения, особенности распространения и направления роста опухоли, КТ вносит дополнительную диагностическую информацию в определение гистобиологических качеств опухоли и позволяет визуализировать степень отграничения опухоли и перифокального отека, ПЭТ обладает высокой степенью достоверности в установлении диагноза и обеспечивает раннее определение рецидивирования процесса. Ангиогра-фическое исследование сосудов головного мозга выявляет изменения нормальной топографии сосудов или патологическую сосудистую сеть [2].
Среди проблем нейровизуализации глиальных опухолей выделяют сложность определения их истинных границ. В частности, участки тканей, определяемые как отек белого вещества головного мозга, на самом деле зачастую представляют собой зону инфильтрации опухолевыми клетками. Контрастное усиление опухоли отражает только рентгенологически видимую распространенность поражения мозга, а не истинную величину опухолевой инвазии [1]. Таким образом, анализ данных литературы показал, что существующие методы диагностики глиом головного мозга обладают недостаточно высокой степенью специфичности и чувствительности. Поэтому, несмотря на разнообразие
существующих методов диагностики, основная масса больных выявляется на поздних стадиях, когда исход лечения уже неблагоприятен, в то время как для проведения эффективного лечения и увеличения выживаемости пациентов необходима ранняя и своевременная диагностика раковых опухолей.
Перспективным направлением в разработке методов диагностики онкозаболеваний является использование биомаркеров. На сегодняшний день основными биомаркерами глиом головного мозга считаются генетические нарушения. В частности, мутация гена белка-гомолога фос-фатазы и тензина (PTEN), мутация и амплификация гена эпидермального фактора роста (EGFR), мутация гена белка р53, мутации изоцитратдегидрогеназы (IDH1 или IDH2) и потеря 1p и 12q хромосом. Результатом приобретенных генетических нарушений является нарушение регуляции и дисбаланс между активностью клеточного цикла и апоп-тозом. Важным прогностическим фактором, определяющим ответ опухоли на химиотерапию, является статус метилирования О6-метилгуанин-ДНК-метилтрансферазы (MGMT). Недавно установлена роль биомаркера эпители-ально-мезинхимальной трансформации.
В настоящее время традиционные диагностические и терапевтические препараты все чаще начинают замещаться средствами, получаемыми с помощью современных биотехнологий. В 2010 г. доля таких препаратов на мировом рынке составила 50%. Особую популярность приобретают средства диагностики и терапии на основе аптамеров. Ап-тамеры - синтетические однонитевые молекулы РНК или ДНК (размером 30-80 нуклеотидов), способные к специфичному связыванию с любыми молекулярными и клеточными мишенями: белками, малыми органическими молекулами, вирусными частицами [27], бактериями [21], антителами [26], целыми клетками [16,22], клеточными лизатами и даже тканями [33]. Аптамеры получают с использованием технологии SELEX, позволяющей осуществлять направленный отбор олигонуклеотидов, обладающих сродством к заданным биологическим мишеням. Схема селекции аптамеров к опухолевым тканям легкого представлена на рис. 1 [33].
Селекция аптамеров к глиоме
Для селекции аптамеров к глиоме головного мозга используют, как правило, клеточные культуры, в частности, культуры клеточных линий глиобластомы человека U251 [10,15], U87MG [7], A172 [4], U118-MG [18]. В частности, Y. Tan et al. методом cell-SELEX подобрали ДНК-аптамеры к клеткам глиобластомы человека со сверхэкспрессией мутантного рецептора эпидермального фактора роста EGFRvIII. В качестве мишени для селекции аптамеров они использовали клетки линии U87A, а в качестве негативной мишени - клетки человеческой глиомы линии U87MG. Подобранные аптамеры отличали клеточную линию U87A со сверхэкспрессией EGFRvIII от негативного контроля (клеток линии U87MG и HEK293) [32].
Отделение несвязавшихся аптамеров
i'i*.
Негативная селекция .
СО ЗДОРОВЫМИ fSfr if *Л
клетками легкого
4
Библиотека, оцЦНК- аптамеров
Кроме клеточных культур при селекции аптамеров к глиоме головного мозга широко используют белковые мишени. Так, для получения апта-меров к глиоме в качестве белковых мишеней были использованы белки тенасцин-С, характерный для внеклеточного матрикса злокачественных опухолей [10,15], мутантный рецептор эпидермального фактора роста EGFRvIII [32,34] и нуклеолин [8]. X.C. Chen et al. одновременно получали аптамеры AS1411 и GBI-10 к разным белковым мишеням. AS1411 - ДНК-аптамер специфически связывающийся с нуклеолином, белком ядерного матрикса, расположенным на поверхности опухолевых клеток, а GBI-10 - ДНК-аптамер был селективен к адгезивному белку внеклеточного матрикса тенасцину С, также экспрессирующимся на поверхности клеток глиобластомы человека [8].
Диагностика
Аптамеры, полученные к клеточным культурам и белковым мишеням, как показали данные литературы, привлекают все большее внимание исследователей в качестве средств для создания препаратов для диагностики глиальных опухолей головного мозга человека. Стоит при этом отметить, что все предлагаемые с использованием аптамеров методы, описанные в литературе, предназначаются только для визуализации опухолей in vivo, что, возможно, связано, в первую очередь, с отсутствием надежных биомаркеров глиом головного мозга и методов их идентификации.
В 2014 году X. Wu et al. для визуализации опухоли у мышей успешно применили метод однофо-тонной эмиссионной компьютерной томографии, используя для этого аптамер против EGFRvIII, к которому была присоединена в качестве молекулярного зонда радиоактивная метка (188Re) [31,39]. M. Alibolandi et al. сообщили о применении квантовых точек из теллурида кадмия, связанных с апта-мером AS1411 к тенасцину-С, в качестве зонда для молекулярной визуализации клеток глиобластомы линии U87MG [3].
В 2013 г. была описана конструкция на основе магнитного нанокристалла, конъюгированного с апта-мерами, который может быть использован для детекции ангиогенеза при глиобластоме (рис. 2). В экспериментах in vivo на модели глиобластомы мыши этот зонд продемонстрировал эффективное адресное связывание со своей
Негативная селекция с клетками крови
Отделение несвязавшихся аптамеров
Позитивная селекция с клетками рака легкого
Отделение
несвязавшихся
аптамеров
Анализ специфичности аптамеров к клеткам рака легкого
Отделение ^ ^связавшихся аптамеров
Амплификация отобранных аптамеров
II Очистка ПЦР- продуктов f с помощью cut off фильтров | для получения оцДНК-аптамеров
-—TTAAGGCGTAA—-
—-CGATCATTACG-—
Секвенирование
Бактериальное клонирование
Рис. 1. Схема селекции аптамеров к опухолевой ткани легкого человека [33].
Рис. 2. Использование аптамера к VEGFR2 для визуализации ангиогенеза в глиобластоме методом МРТ [20].
с мишенью - рецептором фактора роста сосудов УЕСЕЯ2, а также возможность визуализации опухоли методом магнитно-резонансной томографии с высокой чувствительностью, что создает перспективу его применения в качестве контрастного вещества [19]. Причем в исследованиях
Рис. 3. Схема нанозонда на основе QD-аптамера и распознавания им тенасцина С [8].
in vitro на клетках глиобластомы человека линии U87MG было показано отсутствие цитотоксичности этого нанозонда [20].
X. C. Chen et al. описали конструкцию нанозонда на основе ДНК-аптамера к тенасцину С (GBI-10), меченному квантовыми точками, и его применения для обнаружения опухолевых клеток глиобластомы (рис. 3). Эффективность полученных наноконструкций показана в экспериментах in vitro на клетках глиомы человека линии U251. Такой нанозонд перспективен для разработки новых методов динамического отслеживания и визуализации опухоли в режиме реального времени [8].
D. W. Hwang et al. предложили неинвазивный таргет-ный метод визуализации опухоли с применением опухоль-специфичного нанозонда (MFR-AS1411), состоящего из меченых радиоактивной и флуоресцентной меткой наночастиц, связанных с аптамерами к нуклеолину (AS1411). Эксперименты показали высокую специфичность этого зонда к опухолевым клеткам в условиях in vivo при внутривенном введении. Однако системное введение наночастиц приводило к их неспецифическому накоплению в печени мононуклеарными фагоцитами и, кроме того, была обнаружена мультимодальность нанозонда, т. е. его способность связываться с другими типами опухолей [17]. Несмотря на все недостатки, группа ученых из Китая под руководством H. Ma предложила использовать подобную бифункциональную систему на основе мультимеров аптамеров для визуализации опухоли [25].
Аптамеры оказались перспективными для визуализации патологических сосудов. Хорошо известно, что микрососуды опухоли отличаются по своим структурно-функциональным свойствам от микрососудов нормальных тканей, что позволяет создавать адресные диагностические препараты противоопухолевой терапии. В частности, ДНК-аптамер (III.1), селективно
связывающимся с микрососудами опухоли и несвязывающийся с сосудами здоровой ткани мозга крысы, включая перитумораль-ную область, может быть использован в качестве зонда для анализа патологического ангио-генеза в опухоли [5]. Терапия
Применение аптамеров, как показали данные литературы, может быть эффективным не только для диагностических целей, но и для терапии глиом головного мозга, в том числе, для целевой доставки химиопрепаратов (рис. 4), что особенно актуально в терапии опухолей головного мозга, поскольку самостоятельное преодоление гематоэнцефа-лического барьера и проникновение молекул большинства лекарственных средств в мозг затруднено [13]. В частности, описан метод доставки лекарств в опухолевые клетки глиомы на основе PEGePLGA наночастиц, модифицированных аптамерами. Присоединение аптамера значительно увеличивало аккумуляцию наночастиц с паклитакселом в клетках глиомы линии С6, усиливая цитотоксичность химиопрепарата. В экспериментах in vivo введение системы аптамер-наночастица-паклитаксел приводило к задержке роста ксенотрансплантантов С6-опухолей у мышей, а также увеличивало выживаемость крыс с внутричерепными С6-глиомами [14].
Все разрабатываемые в настоящее время противоопухолевые препараты на основе аптамеров можно подразделить на две группы - «функциональные» аптамеры, обладающие противоопухолевой активностью, и конъюгаты аптамеров с терапевтическими препаратами.
Рис. 4. Адресная доставка противоопухолевых препаратов к опухолевым клеткам с помощью конъюгатов аптамеров с наночастицами.
N. Li et al. были получены аптамеры, специфичные к рецептору эпидермального фактора роста человека (EGFR). Полученный РНК-аптамер E07 отличался высокой степенью аффинности к своей мишени (Kd 2,4 нМ) и был способен не только конкурировать за связывание рецептора с его естественным лигандом - EGFR, но и связываться с его му-тантной формой EGFRvIII в экспрессирующих его клетках глиобластомы человека линии U87MGAvIII. Апта-мер E07 легко интернализовался различными EGFR-экспрессирующими клетками (клеточные линии плоскоклеточной карциномы A431 и рака молочной железы MDA-MB-435) и связывался с рецептором, блокируя его аутофосфорилирование, тем самым предотвращая пролиферацию опухолевых клеток в 3D-культурах [23].
РНК-аптамер к EGFR, полученный Y. Wan, подавлял подвижность и пролиферацию клеток первичных культур глиобластомы человека, он ингибировал фосфорилиро-вание EGFR, индуцированное его связыванием с лиган-дом. Помимо этого, при взаимодействии с анти-EGFR аптамером клетки, теряли способность к нормальной трансформации внутренней структуры и миграции, вследствие чего снижалась их инвазивность и вероятность метастазирования. Данные свойства позволяют использовать анти-EGFR аптамер в качестве терапевтического средства [35].
Аптамеры, полученные к клеточной линии глиобластомы человека U87MG обладали способностью ингибировать активность основных регуляторов клеточной пролиферации - ERK 1/2 и циклина D1 [7]. РНК-аптамер к мутант-ному рецептору эпидермального фактора роста (EGFRvIII), экспрессирующийся в тканях глиобластомы и связанный с резистенстностью опухоли к лучевой и химиотерапии, уменьшал количество EGFRvIII. Авторы объяснили этот феномен со способностью аптамеров взаимодействовать с вновь синтезированным EGFRvIII, нарушая его глико-зилирование и уменьшая количество зрелых EGFRvIII, достигающих поверхности клетки [24].
Методы ингибирования экспрессии мидкина аптаме-рами также рассматриваются как вариант для лечения глиобластомы [28,36]. В работе итальянских коллег сообщается о применении аптамера в качестве антагониста известного опухолевого биомаркера - фактора роста тромбоцитов в (PDGFRP), вовлеченного в процессы клеточной пролиферации, миграции и ангиогенеза. РНК-аптамер Gint4.T специфически связывался с человеческим PDGFRp, подавляя активацию рецептора, тем самым блокируя передачу сигнала в клеточных линиях и первичных культурах клеток глиобластомы человека. Кроме того, он ингибировал миграцию и пролиферацию клеток, индуцировал дифференцировку и блокировал рост опухоли в условиях in vivo. Причем лучший противоопухолевый эффект аптамер Gint 4.T показывал в сочетании с аптаме-ром, специфичным к рецептору эпидермального фактора роста [6].
B. G. Nair et al. была разработана методика селективного удаления опухолевых клеток с использованием магнитных наночастиц, модифицированных аптамерами. При действии внешнего вращающегося магнитного поля наночастицы были способны вызывать апоптоз клеток. В качестве специфического лиганда для адресной доставки магнитных наночастиц в опухолевые клетки были использованы ДНК-аптамеры, специфичные к тенасцину-С [10]. Эффективность описанной нанохирургической системы продемонстрирована в экспериментах in vitro на клетках ГБ человека линии U251 [29].
В 2012 г. был предложен метод трансдукции аптамеров в опухолевые клетки с помощью аденовирусов. Апта-мер-модифицированные аденовирусы способны легко осуществлять трансдукцию терапевтических аптамеров и их конъюгатов с лекарственными препаратами в клетки. Кроме того, данные конструкции, конъюгированные с флуоресцентными зондами, позволяют контролировать транспорт противоопухолевых препаратов. Наночастицы из полиэтиленгликоль-поли-e-капролактона, покрытые ДНК-аптамером GMT8, специфичным к клеткам глиобла-стомы человека линии U87, связывали с флуоресцентной меткой и цитостатическим препаратом доцетакселом. Данная система (ApNP) продемонстрировала положительные результаты в экспериментах in vitro и in vivo (на мышиной модели): была показана способность частиц проникать внутрь опухолевого сфероида и индуцировать апоптоз клеток, а также достигать непосредственно участков головного мозга, пораженных опухолью, и ингибировать ее рост [12].
В 2006 году J. Brian et al. описал методику, лежащую в основе опухоль-специфичной таргетной терапии в условиях in vivo. РНК-аптамер TTA1, подобранный к белку внеклеточной матрикса опухоли тенасцину С, меченный флуоресцентной (Red) и радиоизотопной (99тТс) метками, успешно связывался с опухолевой тканью [6,37].
В работе M. Oli описан еще один потенциальный метод таргетного воздействия на раковые и стволовые опухолевые клетки глиобластомы, использующий конъюгаты аптамеров с золотыми наностержнями. При воздействии безопасного лазера с излучением в ближней ИК-области спектра золотые наностержни излучают тепло, тем самым вызывая апоптоз раковых клеток. Аптамеры при этом обеспечивали направленность и селективность доставки наностержней в клетки-мишени, что приводило к их избирательному воздействию только на опухолевые клетки глиобластомы.
У больных со злокачественными опухолями описана возможность применения иммунотерапии с использованием аптамеров. Так, B. Schrand et al. создали конъюгат двух аптамеров. На основе димерного аптамера к рецептору 4-1BB и аптамера, подобранного к человеческому VEGF, был создан конъюгат (VEGF-4-^В). В экспериментах in vivo на мышах с онкоген-индуцированной глиомой высокой степени злокачественности было показано,
что противоопухолевый эффект конъюгата VEGF-4-1ВВ при внутривенном введении значительно превосходит таковой от введения смеси отдельных аптамеров к VEGF и 4-1ВВ [30].
Перспективными являются каскадные системы доставки лекарственных средств для лечения опухолей головного мозга, направленные на проникновение препарата через ГЭБ, а также на его адресную доставку к клеткам-мишеням. Согласно этой стратегии, Н. Gao et al. создали каскадную систему доставки препаратов в опухолевые клетки глиомы головного мозга на основе наночастиц из полиэтиленгликоль-поли-£-капролактона (PEG-PCL), связанных со специфичным к нуклеолину ДНК-аптамером AS141 и TGN-пептидом. TGN-пептид обеспечивал проникновение наночастиц через ГЭБ, в то время как аптамер служил для специфичного связывания системы с клетками-мишенями, тем самым обеспечивая адресность доставки препарата в опухолевые клетки. В качестве модели лекарственного средства для целевой доставки использовали цитостатический препарат доцетаксел. Результаты исследований показали способность системы проникать через ГЭБ, селективно накапливаться в опухолевых клетках и ингибировать рост опухолевого сфероида. Эффект достигался за счет того, что система, проникая внутрь опухолевого сфероида, вызывала апоптоз не только поверхностных клеток опухоли, но и клеток, расположенных в центральной его части [11,14]. Позднее описанная система была модифицирована: в качестве лиганда, обусловливающего адресность доставки, использовали ДНК-аптамер GMT8, специфичный к клеткам глиобластомы человека линии U87 [11].
На основании анализа литературы о применении апта-меров для диагностики и терапии злокачественных новообразований головного мозга можно сделать следующие выводы:
1. Для селекции аптамеров к глиоме головного мозга используются белковые мишени и клеточные культуры глиобластомы человека различных линий.
2. Полученные к глиоме головного мозга аптамеры используются для усовершенствования существующих методов диагностики злокачественных новообразований головного мозга in vivo. Данные о разработке биосенсоров на основе аптамеров, пригодных для ранней диагностики злокачественных новообразований, отсутствуют.
4. Все разрабатываемые в настоящее время противоопухолевые препараты на основе аптамеров можно подразделить на две группы - «функциональные» аптамеры, обладающие противоопухолевой активностью, и конъюгаты аптамеров с терапевтическими препаратами (лекарственными средствами, магнитными и золотыми частицами, радиоактивными элементами, квантовыми точками).
Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (проект № 14-15-00805).
Литература
1. Журавлева М.А., Шершевер А.С., Бенцион Д.Л. Использование перфузионной КТ в динамическом наблюдении за результатами комбинированного и комплексного лечения глиом головного мозга // Лучевая диагностика и терапия. - 2012. - № 2. - С. 58-64.
2. Олюшин В.Е. Глиальные опухоли головного мозга: краткий обзор литературы и протокол лечения больных // Нейрохирургия. - 2005. - № 4. - С.41-47
3. Alibolandi M., Abnous K., Ramezani M., Hosseinkhani H., Hadizadeh F. Synthesis of AS1411-Aptamer-Conjugated CdTe Quantum Dots with High Fluorescence Strength for Probe Labeling Tumor Cells // J. Fluoresc. - 2014. - Vol. 24, № 5. - P.1519-1529.
4. Bayrac A.T., Sefah K., Parekh P., Bayrac C., Gulbakan B., Oktem H.A., Tan W. In vitro Selection of DNA Aptamers to Glioblastoma Multiforme // ACS chemical neuroscience. -2011. - Vol. 2, № 3. - P. 175-181.
5. Blank M., Weinschenk T., Priemer M., Schluesener H. Systematic evolution of a DNA aptamer binding to rat brain tumor microvessels. selective targeting of endothelial regulatory protein pigpen // The Journal of biological chemistry. -2001. - Vol. 276, № 19. - P. 16464-16468.
6. Camorani S., Esposito C.L., Rienzo A., Catuogno S., Iaboni M., Condorelli G., de Franciscis V., Cerchia L. Inhibition of receptor signaling and of glioblastoma-derived tumor growth by a novel PDGFRp aptamer // Mol. Ther. - 2004. -Vol. 22, № 4. - P. 828-841.
7. Cerchia L., Esposito C.L., Jacobs A.H., Tavitian B., Franciscis V. Differential SELEX in human glioma cell lines // PLoS One. - 2009. - Vol. 4, № 11. - e7971.
8. Chen X.C., Deng Y.L., Lin Y., Pang D.W., Qing H., Qu F., Xie H.Y. Quantum dot-labeled aptamer nanoprobes specifically targeting glioma cells // Nanotechnology. - 2008. -Vol. 19, № 23. - P. 235105.
9. Chiou S.M. Survival of brain metastasis patients treated with gamma knife surgery alone // Clin. neurolneurosurg. -2013. - Vol. 115, № 3. - P. 260-265.
10. Daniels D.A., Chen H., Hicke B.J., Swiderek K.M., Gold L. A tenascin-C aptamer identified by tumor cell SELEX: systematic evolution of ligands by exponential enrichment // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2003. - Vol. 100, № 26. -P. 15416-15421.
11. Gao H., Qian J., Yang Z., Pang Z., Xi Z., Cao S., Wang Y., Pan S., Zhang S., Wang W., Jiang X., Zhang Q. Whole-cell SELEX aptamer-functionalised poly(ethyleneglycol)-poly (s-caprolactone) nanoparticles for enhanced targeted glioblastoma therapy // Biomaterials. - 2012. - Vol. 33, № 26. - P. 6264-6272.
12. Gao H., Qian J., Cao S., Yang Z., Pang Z., Pan S., Fan L., Xi Z., Jiang X., Zhang Q. Precise glioma targeting of and penetration by aptamer and peptide dual-functioned nanoparticles // Biomaterials. - 2012. - Vol. 33, № 20. -P. 5115-5123.
13. Gao H., Yang Z., Zhang S., Pang Z., Liu Q., Jiang X. Study and evaluation of mechanisms of dual targeting drug delivery system with tumor microenvironment assays compared with normal assays // Acta Biomater. - 2014. - Vol. 10, № 2. - P. 858-867.
14. Guo J., Gao X., Su L., Xia H., Gu G., Pang Z., Jiang X., Yao L., Chen J., Chen H. Aptamer-functionalized PEG-PLGA nanoparticles for enhanced anti-glioma drug delivery // Biomaterials. - 2011. - Vol. 32, № 31. - P. 8010-8020.
15. Hicke B.J., Marion C., Chang Y.F., Gould T., Lynott C.K., Parma D., Schmidt P.G., Warren S. Tenascin-C aptamers are generated using tumor cells and purified protein // The Journal of biological chemistry. - 2001. - Vol. 276, № 52. -P. 48644-48654.
16. Hicke B.J., Stephens A.W., Gould T., Chang Y.F., Lynott C.K., Heil J., Borkowski S., Hilger C.S., Cook G., Warren S., Schmidt P.G. Tumor targeting by an aptamer // The Journal of Nuclear Medicine. - 2006. - Vol. 47, № 4. - P. 668-678.
17. Hwang D.W., Ko H.Y., Lee J.H., Kang H., Ryu S.H., Song I.C., Lee D.S., Kim S. A Nucleolin-Targeted Multimodal Nanoparticle Imaging Probe for Tracking Cancer Cells Using an Aptamer // The Journal of Nuclear Medicine. - 2010. -Vol. 51, № 1. - P. 98-105.
18. Kang D., Wang J., Zhang W., Song Y., Li X., Zou Y., Zhu M., Zhu Z., Chen F., Yang C.J. Selection of DNA aptamers against glioblastoma cells with high affinity and specificity // PLoS One. - 2012. - Vol. 7, № 10. - e42731.
19. Kim B., Yang J., Hwang M., Choi J., Kim H.O., Jang E., Lee J.H., Ryu S.H., Suh J.S., Huh Y.M., Haam S. Aptamer-modified magnetic nanoprobe for molecular MR imaging of VEGFR2 on angiogenic vasculature // Nanoscale Research Letters. - 2013. - Vol. 8, № 1. - P. 399.
20. Kim Y., Wu Q., Hamerlik P., Hitomi M., Sloan A.E., Barnett G.H., Weil R.J., Leahy P., Hjelmeland A.B., Rich J.N. Aptamer identification of brain tumor-initiating cells // Cancer research. - 2013. - Vol. 73, № 15. - P. 4923-4936.
21. Kolovskaya O., Savitskaya A., Zamay T., Reshetneva I., Zamay G., Erkaev E., Wang X., Wehbe M., Salmina A., Perianova O., Zubkova O., Spivak E., Titova N., Glazyrin Y., Mezko V., Berezovski M., Zamay A. Development of Bacteriostatic DNA Aptamers for Salmonella // Journal of Medicinal Chemistry. - 2013. - Vol. 56, № 4. - P. 1564-1572.
22. Kolovskaya O.S., Zamay T.N., Zamay A.S., Glazyrin Y.E., Spivak E.A., Zubkova O.A., Kadkina A.V., Erkaev E.N., Zamay G.S., Savitskaya A.G., Trufanova L.V., Petrova L.L., Berezovski M.V. DNA-aptamer/protein interaction as a reason of apoptosis and proliferation stop in ehrlich ascites adenocarcinoma cells // Biochemistry (Moscow) Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. - 2014. - Vol. 8, № 1. - P. 60-72.
23. Li N., Nguyen H.H., Byrom M., Ellington A.D. Inhibition of Cell Proliferation by an Anti-EGFR Aptamer // Plos ONE. - 2011. - Vol. 6, № 6. - e20299.
24. Liu Y., Kuan C.T., Mi J., Zhang X., Clary B.M., Bigner D.D., Sullenger B.A. Aptamers selected against the
unglycosylated EGFRvIII ectodomain and delivered intracel-lularly reduce membranebound EGFRvIII and induce apoptosis // Biol. Chem. - 2009. - Vol. 390, № 2. - P. 137-144.
25. Ma H., Gao Z., Yu P., Shen S., Liu Y., Xu B. A dual functional fluorescent probe for glioma imaging mediated by blood-brain barrier penetration and glioma cell targeting // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2014. - Vol. 449, № 1. - P. 44-48.
26. Muharemagic D., Labib M., Ghobadloo S.M., Zamay A.S., Bell J.C., Berezovski M.V. Anti-Fab Aptamers for Shielding Virus from Neutralizing Antibodies // Journal of the American Chemical Society. - 2012. - Vol. 134, № 41. - P. 17168-17177.
27. Muharemagic D., Zamay A.S., Ghobadloo S., Evgin L., A. Savitskaya, Bell J.C., Berezovski M.V. Aptamer-Facilitated Protection of Oncolytic Virus from Neutralizing Antibodies // Molecular Therapy - Nucleic Acids. - 2014. - Vol. 3. -e167. doi:10.1038/mtna.2014.19.
28. Muramatsu T. Midkine: a promising molecule for drug development to treat diseases of the central nervous system // Cur. Pharm. Des. - 2011. - Vol. 17, № 5. - P. 410-423.
29. Nair B.G., Berezhnoy A., Brenneman R., Williams A., Levay A., Kong L.Y., Rao G., Zhou S., Heimberger A.B., Gil-boa E., Nagaoka Y., Morimoto H., Yoshida Y., Maekawa T., Kumar D.S. Aptamer conjugated magnetic nanoparticles as nanosurgeons // Nanotechnology. - 2010. - Vol. 21, № 45. -P. 455102.
30. Schrand B. Targeting 4-1BB costimulation to the tumor stroma with bispecific aptamer conjugates enhances the therapeutic index of tumor immunotherapy // Cancer Immunology Research. - 2014. - Vol. 2, № 9. - P. 867-877.
31. Stupp R., Hegi M.E., Mason W.P. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolamide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomized phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trail // The lancet oncology. - 2009. - Vol. 10, № 5. - P. 459-466.
32. Tan Y., Shi Y.S., Wu X.D., Liang H.Y., Gao Y.B., Li S.J., Zhang X.M., Wang F., Gao T.M. DNA aptamers that target human glioblastoma multiforme cells overexpressing epidermal growth factor receptor variant III in vitro // Acta Pharmacol Sin. - 2013. - Vol. 34, № 12. - P. 1491-1498.
33. Zamay G.S., Kolovskaya O.S., Zamay T.N., Krat A.V., Zubkova O.A., Spivak E.A., Wehbe M.B., Gargaun A.A., Muharemagic D.A., Komarova M.A., Grigorieva V.L., Savchenko A.A., Modestov A.A., Berezovski M.V., Zamay A.S. Aptamers selected to postoperative lung adenocarcinoma detect circulating tumor cells in human blood // Molecular theraphy-Nature. - 2015. - Vol. 23. - P. 1-11.
34. Wan Y., Kim Y.T., Li N., Cho S.K., Bachoo R., Ellington A.D., Iqbal S.M. Surface-immobilized aptamers for cancer cell isolation and microscopic cytology // Cancer research. -2010. - Vol. 70, № 22. - P. 9371-9380.
35. Wan Y., Tamuly D., Allen P.B., Kim Y.T., Bachoo R., Ellington A.D., Iqbal S.M. Proliferation and migration of tumor cells in tapered channels // Biomedical microdevices. -2013. - Vol. 15, № 4. - P. 635-643.
36. Wang J., Takeuchi H., Sonobe Y., Jin S., Mizuno T., Miyakawa S., Fujiwara M., Nakamura Y., Kato T., Muramatsu H., Muramatsu T., Suzumura A. Inhibition of midkine alleviates experimental autoimmune encephalomyelitis through the expansion of regulatory T cell population // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2008. - Vol. 105, № 10. - P. 3915-3920.
37. Wu X., Liang H., Tan Y., Yuan C., Li S., Li X., Li G., Shi Y., Zhang X. Cell-SELEX aptamer for highly specific radionuclide molecular imaging of glioblastoma in vivo // PLoS One. - 2014. - Vol. 9, № 6. -e90752.
References
1. Zhuravleva M.A., Shershever A.S., Bentsion D.L. Using of perfusion CT in dynamic observation of the results of combined and complex treatment the cerebral gliomas // Radiation Diagnostics and Therapy. - 2012. - № 2. - P. 58-64.
2. Olyushin V.E. Glial cerebral tumors: an overview of the literature and report of treatment of patients // Neurosur-gery. - 2005. - № 4. - P. 41-47
3. Alibolandi M., Abnous K., Ramezani M., Hosseinkhani H., Hadizadeh F. Synthesis of AS1411-Aptamer-Conjugated CdTe Quantum Dots with High Fluorescence Strength for Probe Labeling Tumor Cells // J. Fluoresc. - 2014. - Vol. 24, № 5. - P. 1519-1529.
4. Bayrac A.T., Sefah K., Parekh P., Bayrac C., Gulbakan B., Oktem H.A., Tan W. In vitro Selection of DNA Aptamers to Glioblastoma Multiforme // ACS chemical neuroscience. -2011. - Vol. 2, № 3. - P. 175-181.
5. Blank M., Weinschenk T., Priemer M., Schluesener H. Systematic evolution of a DNA aptamer binding to rat brain tumor microvessels. selective targeting of endothelial regulatory protein pigpen // The Journal of biological chemistry. -2001. - Vol. 276, № 19. - P. 16464-16468.
6. Camorani S., Esposito C.L., Rienzo A., Catuogno S., Iaboni M., Condorelli G., de Franciscis V., Cerchia L. Inhibition of receptor signaling and of glioblastoma-derived tumor growth by a novel PDGFRß aptamer // Mol. Ther. - 2004. -Vol. 22, № 4. - P. 828-841.
7. Cerchia L., Esposito C.L., Jacobs A.H., Tavitian B., Franciscis V. Differential SELEX in human glioma cell lines // PLoS One. - 2009. - Vol. 4, № 11. - e7971.
8. Chen X.C., Deng Y.L., Lin Y., Pang D.W., Qing H., Qu F., Xie H.Y. Quantum dot-labeled aptamer nanoprobes specifically targeting glioma cells // Nanotechnology. - 2008. -Vol. 19, № 23. - P. 235105.
9. Chiou S.M. Survival of brain metastasis patients treated with gamma knife surgery alone // Clin. neurolneurosurg. -2013. - Vol.115, № 3. - P. 260-265.
10. Daniels D.A., Chen H., Hicke B.J., Swiderek K.M., Gold L. A tenascin-C aptamer identified by tumor cell SELEX: systematic evolution of ligands by exponential enrichment // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2003. - Vol. 100, № 26. -P. 15416-15421.
11. Gao H., Qian J., Yang Z., Pang Z., Xi Z., Cao S., Wang Y., Pan S., Zhang S., Wang W., Jiang X., Zhang Q. Whole-cell SELEX aptamer-functionalised poly(ethyleneglycol)-poly (s-caprolactone) nanoparticles for enhanced targeted glioblastoma therapy // Biomaterials. - 2012. - Vol. 33, № 26. - P. 6264-6272.
12. Gao H., Qian J., Cao S., Yang Z., Pang Z., Pan S., Fan L., Xi Z., Jiang X., Zhang Q. Precise glioma targeting of and penetration by aptamer and peptide dual-functioned nanoparticles // Biomaterials. - 2012. - Vol. 33,№ 20. -P. 5115-5123.
13. Gao H., Yang Z., Zhang S., Pang Z., Liu Q., Jiang X. Study and evaluation of mechanisms of dual targeting drug delivery system with tumor microenvironment assays compared with normal assays // Acta Biomater. - 2014. - Vol. 10, № 2. - P. 858-867.
14. Guo J., Gao X., Su L., Xia H., Gu G., Pang Z., Jiang X., Yao L., Chen J., Chen H. Aptamer-functionalized PEG-PLGA nanoparticles for enhanced anti-glioma drug delivery // Biomaterials. - 2011. - Vol. 32, № 31. - P. 8010-8020.
15. Hicke B.J., Marion C., Chang Y.F., Gould T., Lynott C.K., Parma D., Schmidt P.G., Warren S. Tenascin-C aptam-ers are generated using tumor cells and purified protein // The Journal of biological chemistry. - 2001. - Vol. 276, № 52. - P. 48644-48654.
16. Hicke B.J., Stephens A.W., Gould T., Chang Y.F., Lynott C.K., Heil J., Borkowski S., Hilger C.S., Cook G., Warren S., Schmidt P.G. Tumor targeting by an aptamer // The Journal of Nuclear Medicine. - 2006. - Vol. 47, № 4. -P. 668-678.
17. Hwang D.W., Ko H.Y., Lee J.H., Kang H., Ryu S.H., Song I.C., Lee D.S., Kim S. A Nucleolin-Targeted Multimodal Nanoparticle Imaging Probe for Tracking Cancer Cells Using an Aptamer // The Journal of Nuclear Medicine. - 2010. -Vol. 51, № 1. - P. 98-105.
18. Kang D., Wang J., Zhang W., Song Y., Li X., Zou Y., Zhu M., Zhu Z., Chen F., Yang C.J. Selection of DNA aptamers against glioblastoma cells with high affinity and specificity // PLoS One. - 2012. - Vol. 7, № 10. -e42731.
19. Kim B., Yang J., Hwang M., Choi J., Kim H.O., Jang E., Lee J.H., Ryu S.H., Suh J.S., Huh Y.M., Haam S. Aptamer-modified magnetic nanoprobe for molecular MR imaging of VEGFR2 on angiogenic vasculature // Nanoscale Research Letters. - 2013. - Vol. 8, № 1. - P. 399.
20. Kim Y., Wu Q., Hamerlik P., Hitomi M., Sloan A.E., Barnett G.H., Weil R.J., Leahy P., Hjelmeland A.B., Rich J.N. Aptamer identification of brain tumor-initiating cells // Cancer research. - 2013. - Vol. 73,№15. - P. 4923-4936.
21. Kolovskaya O., Savitskaya A., Zamay T., Reshetneva I., Zamay G., Erkaev E., Wang X., Wehbe M., Salmina A., Perianova O., Zubkova O., Spivak E., Titova N., Glazyrin Y., Mezko V., Berezovski M., Zamay A. Development of Bacterio-static DNA Aptamers for Salmonella // Journal of Medicinal Chemistry. - 2013. - Vol. 56, № 4. - P. 1564-1572.
22. Kolovskaya O.S., Zamay T.N., Zamay A.S., Glazyrin Y.E., Spivak E.A., Zubkova O.A., Kadkina A.V., Erkaev E.N., Zamay G.S., Savitskaya A.G., Trufanova L.V., Petrova L.L., Berezovski M.V. DNA-aptamer/protein interaction as a reason of apoptosis and proliferation stop in ehrlich ascites adeno-carcinoma cells // Biochemistry (Moscow) Supplement Series A: Membrane and Cell Biology. - 2014. - Vol. 8, № 1. -P. 60-72.
23. Li N., Nguyen H.H., Byrom M., Ellington A.D. Inhibition of Cell Proliferation by an Anti-EGFR Aptamer // Plos ONE. - 2011. - Vol. 6, № 6. - e20299.
24. Liu Y., Kuan C.T., Mi J., Zhang X., Clary B.M., Bigner D.D., Sullenger B.A. Aptamers selected against the ungly-cosylated EGFRvIII ectodomain and delivered intracellu-larly reduce membranebound EGFRvIII and induce apoptosis // Biol. Chem. - 2009. - Vol. 390, № 2. - P. 137-144.
25. Ma H., Gao Z., Yu P., Shen S., Liu Y., Xu B. A dual functional fluorescent probe for glioma imaging mediated by blood-brain barrier penetration and glioma cell targeting // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2014. - Vol. 449, № 1. -P. 44-48.
26. Muharemagic D., Labib M., Ghobadloo S.M., Zamay A.S., Bell J.C., Berezovski M.V. Anti-Fab Aptamers for Shielding Virus from Neutralizing Antibodies // Journal of the American Chemical Society. - 2012. - Vol. 134, № 41. -P. 17168-17177.
27. Muharemagic D., Zamay A.S., Ghobadloo S., Evgin L., A. Savitskaya, Bell J.C., Berezovski M.V. Aptamer-Facilitated Protection of Oncolytic Virus from Neutralizing Antibodies // Molecular Therapy - Nucleic Acids. - 2014. - Vol. 3. -e167. doi:10.1038/mtna.2014.19.
28. Muramatsu T. Midkine: a promising molecule for drug development to treat diseases of the central nervous system // Cur. Pharm. Des. - 2011. - Vol. 17, № 5. - P. 410-423.
29. Nair B.G., Berezhnoy A., Brenneman R., Williams A., Le-vay A., Kong L.Y., Rao G., Zhou S., Heimberger A.B., Gilboa E., Nagaoka Y., Morimoto H., Yoshida Y., Maekawa T., Kumar D.S. Aptamer conjugated magnetic nanoparticles as nanosurgeons // Nanotechnology. - 2010. - Vol. 21, № 45. - P. 455102.
30. Schrand B. Targeting 4-1BB costimulation to the tumor stroma with bispecific aptamer conjugates enhances the therapeutic index of tumor immunotherapy // Cancer Immunology Research. - 2014. - Vol. 2, № 9. - P. 867-877.
31. Stupp R., Hegi M.E., Mason W.P. Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolamide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomized phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trail // The lancet oncology. - 2009. - Vol. 10, № 5. - P. 459-466.
32. Tan Y., Shi Y.S., Wu X.D., Liang H.Y., Gao Y.B., Li S.J., Zhang X.M., Wang F., Gao T.M. DNA aptamers that target human glioblastoma multiforme cells overexpressing epidermal growth factor receptor variant III in vitro // Acta Pharmacol Sin. - 2013. - Vol. 34, № 12. - P. 1491-1498.
33. Zamay G.S., Kolovskaya O.S., Zamay T.N., Krat A.V., Zubkova O.A., Spivak E.A., Wehbe M.B., Gargaun A.A., Muharemagic D.A., Komarova M.A., Grigorieva V.L., Savchenko A.A., Modestov A.A., Berezovski M.V., Zamay A.S. Aptamers selected to postoperative lung adenocarcinoma detect circulating tumor cells in human blood // Molecular theraphy-Nature. - 2015. - Vol. 23. - P. 1-11.
34. Wan Y., Kim Y.T., Li N., Cho S.K., Bachoo R., Ellington A.D., Iqbal S.M. Surface-immobilized aptamers for cancer cell isolation and microscopic cytology // Cancer research. -2010. - Vol. 70, № 22. - P. 9371-9380.
35. Wan Y., Tamuly D., Allen P.B., Kim Y.T., Bachoo R., Ellington A.D., Iqbal S.M. Proliferation and migration of tumor cells in tapered channels // Biomedical microdevices. -2013. - Vol. 15, № 4. - P. 635-643.
36. Wang J., Takeuchi H., Sonobe Y., Jin S., Mizuno T., Miyakawa S., Fujiwara M., Nakamura Y., Kato T., Muramatsu H., Muramatsu T., Suzumura A. Inhibition of midkine alleviates experimental autoimmune encephalomyelitis through the expansion of regulatory T cell population // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2008. - Vol. 105, № 10. -P. 3915-3920.
37. Wu X., Liang H., Tan Y., Yuan C., Li S., Li X., Li G., Shi Y., Zhang X. Cell-SELEX aptamer for highly specific radionuclide molecular imaging of glioblastoma in vivo // PLoS One. - 2014. - Vol. 9, № 6. -e90752.
Сведения об авторах
Комарова Мария Андреевна - научный сотрудник лаборатории биомолекулярных и медицинских технологий, ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.
Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; тел. 8 (391) 2280876; e-mail: [email protected].
Народов Андрей Аркадьевич - доктор медицинских наук, профессор кафедры и клиники хирургических болезней им. проф. А. М. Дыхно с курсом эндоскопии и эндохирургии ПО, ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.
Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1; тел. 8 (391) 2280876; е-mail: [email protected].
Замай Татьяна Николаевна - доктор биологических наук, профессор кафедры физиологии им. проф. А.Т. Пшоника, ГБОУ ВПО Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В. Ф. Войно-Ясенецкого МЗ РФ.
Адрес: 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1, тел. 8 (391) 2280876; е-mail: [email protected].
Authors
Komarova Mariya Andreevna - Research Fellow, Laboratory For Biomolecular and Medical Technologies, Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V. F. Voino-Yasenetsky, Ministry of Health of the Russian Federation.
Address: 1, Partizan Zheleznyak Str., Krasnoyarsk, 660022, RF; Phone: 8 (391) 2280876; e-mail: [email protected].
Narodov Andrey Arkadievich - Dr.Med.Sc., Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F. Voino-Yasenetsky, Ministry of Health of the Russian Federation.
Address: 1, Partizan Zheleznyak Srt., Krasnoyarsk, 660022, RF; Phone: 8 (391) 2280876; e-mail: [email protected].
Zamay Tatiana Nikolaevna - Dr.Biol.Sc., Laboratory For Biomolecular and Medical Technologies, Krasnoyarsk State Medical University named after Prof. V.F.Voino-Yasenetsky, Ministry of Health of the Russian Federation.
Address: 1, Partizan Zheleznyak Str., Krasnoyarsk, 660022, RF; Phone: 8 (391) 2280876, e-mail: [email protected].
