CC BY
32
КЛИНИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
И В. Зубков, О.В. Машковцев, профессор А.А. Косых, д.м.н. Г1.Г. Распутин
ПЕРФТОРУГЛЕРОДНЫЕ ЭМУЛЬСИИ УСИЛИВАЮТ РЕЗОРБЦИЮ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ПЕЧЕНИ ПОСЛЕ ЧАСТИЧНОЙ ГЕПАТЭКТОМИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ У ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ
Кировская государственная медицинская академия
До настоящего времени основным методом хирургического лечения объемных образований печени является резекция органа.
Несмотря на успехи в развитии хирургичес кой гепатологии, оперативные вмешательства на печени, в первую очередь, обширные резек ции, остаются одними из самых сложных в абдо минальной хирургии и сопровождаются высо кой летальностью и большим числом послеопе рационных осложнений (3).
Подавляющий процент в общей структуре послеоперационных осложнений, по многочис ленным данным, приходится на острую печеноч ную недостаточность и гнойно-воспалительные осложнения. Исследованиями последних лет ус тановлено, что развитие печеночной недостаточ ности ставят в зависимость от функционального состояния органа до операции. Известно, что при очаговых поражениях печени определяется неспецифический реактивный гепатит. После дний представляет собой вторичный гепатит, отражающий реакцию печеночной ткани на вне- печеночное заболевание, которое приводит к фиброзированию печени.
Важнейшим критерием благополучия после операционного периода является адекватная ре-паративная регенерация печени, которая нару шается прп развитии печеночно-клеточной недо статочности.
Одним из проявлений хронического воспале ния является активация мезенхимальных клеточ ных элементов, синтезирующих коллаген и гли- козаминогликаны. При длительном либо перио дически повторяющемся воздействии патогенно го фактора в печени формируется фиброз.
Открытым остается вопрос о конкретных ме ханизмах резорбции избыточно накопленной со единительной ткани в печени. Для этого важно знать состав новообразующейся соединительной ткани и ее свойства.
Фиброзные изменения, особенно на ранних стадиях, - процесс обратимый. С целью стиму ляции обратного развития явлений фиброза применяются различные лечебные мероприятия. В клинической практике для предотвращения фиброза применяют лекарственные препараты: глюкокортикоиды, гонадотропин человека; фи зиотерапевтические средства: облучение области печени красным светом, гелий-неоновым лазе ром, которые наряду с основным их действием блокируют синтез коллагена.
В этом контексте представляет интерес изуче ние эффективности использования эмульсий перфторорганических соединений при обшир ных резекциях печени (ОРГ1). Перфторуглерод- ные эмульсии (ПФУЭ) относятся к кровезамеща- ющим средствам и, как показало исследование их свойств, обладают полифункциональным действием. Изучение перфгорана - первого оте чественного кровезаменителя этого класса, раз решенного к клиническому применению (Регис трационное удостоверение МЗ РФ № 96/50/10 от 13.02.96) - выявило у него газотранспортные, противоишемические, иммунотропные свойства, а также способность к стимуляции роста тканей.
Голубев A.M. в 1993 году показал, что при взаимодействии макрофагов с частичками перф-торуглеродов (ПФУ) ведет к появлению так на зываемых «перфторофагов» - макрофагов, со держащих вакуоли с частичками ПФУЭ. Важ ным является гот факт, что на месте вторичных гранулем, представляющих из себя скопления лимфоцитов, заместивших перфторофаги, не об разуется соединительной ткани, в гранулемах практически отсутствуют фибробласты, не на блюдается образование коллагена (1).
Однако исследований по влиянию перфтора- на на соединительную ткань при обширных ре зекциях печени не проводилось.
Эксперименты проводились на 136 белых бес породных крысах. С целью создания модели хронического гепатита (ХГ) животным в течение 5 недель было выполнено 20 подкожных инъек ций по 0,3 мл 65% раствора четыреххлористого углерода в растительном масле. Динамику кол- лагеновых белков оценивали по содержанию гидроксипролина печени, который является специфичной для коллагена аминокислотой. О количестве основного вещества судили по со держанию гексозаминов (ГА) в навеске пече ни, отражающему суммарное количество гли-копротеинов, протеогликанов игликозаминог- ликанов.
Все животные были разделены на три груп пы, из которых первые две являлись конт
рольными. Животные 1-й группы были приняты за исходный уровень ХГ. Животным с ХГ (11 группа) производили резекцию печени в объеме 50%, а животным 111 группы - резекцию и введе ние ПФ. Забои животных производились на 2, 3, 7 и 30 сутки.
Была изучена морфометрически соединитель ная ткань печени, митотический индекс и под считано количество нормальных гепатоцитов.
Проведено биохимическое исследование печени на маркеры соединительной ткани.
По полученным данным количество соеди нительной ткани в печени интактных крыс было 0,109±0,015 усл. единиц, процентное содержание нормальных гепатоцитов 88,2+0,45%, а их мито-тический индекс (МИ) 0.4+0,02%о. Гидроксппро- лин и гексозамины печени составили 1,94±0,11 мг/г, и 9,59±0,63 мг/г соответственно.
Исходный уровень патологии показал, что объемная плотность соединительной ткани оказалась равной 0,192±0,023 усл. единиц, что в 1.8 раз выше, чем у нормальных животных (Р<0,05), количество нормальных гепатоцитов (НГ) и МИ составило 38,79 + 1,642% и 2,21±0.062%„ соответ ственно.
Биохимические исследования показали, что уровень гидроксипролина ткани печени на высо те патологии составил .2,63±0,26 мг/г. и был дос товерно выше нормы на 35% (Р<0,05), а количе ство гексозаминов 16,05±2.47, что достоверно выше нормы почти на 70% (Р<0,05). Динамика тканевого гидроксипролина в обеих группах ис следования была сходной за исключением досто верно низкого показателя к 30-м суткам в основ ной группе, относительно нормы и группы кон троля (рис.1). Если же взять во внимание дина мику гексозаминов, то можно отметить, что в группе без введения перфторана этот показатель во все сроки исследования был достоверно выше нормы (рис.2). Согласно теории В.В. Серова (1981) коллагенсинтезирующие клетки предвари тельно создают своеобразную матрицу из глико- заминогликанов и гликопротеинов, которая за тем необходима для правильной ориентации и самосборки коллагеновых фибрилл (7). С учетом выше приведенных собственных показателей и данных литературы можно сказать, что резекция усиливает процессы резорбции в раннем после операционном периоде, но этот эффект не стоек.
Через 48 часов после операции объемная плотность соединительной ткани печени умень шилась на 35% от исходного уровня и составила 0,125±0,031 усл. ед. Схожую динамику имело со держание гексозаминов. В то же время отмеча лось статистически значимое снижение тканево го гидроксипролина на 40%. Количество НГ ко 2-м суткам резко снизилось относительно исход ного уровня патологии и нормы (Р(0,001). Мито- тическая активность гепатоцитов через 48 часов увеличилась в 4 раза.
В группе с введением перфторана наблюда лась сходная динамика за исключением не столь резкого падения НГ (в 2 раза против 5 в группе без введения перфторана). Также отмечено, что МИ был выше, чем в предыдущей группе, в 2 раза н выше нормы почти в 400 раз.
На 3-й сутки в 1-й группе животных объемная плотность соединительной ткани несколько уве личилась, на 7-е сутки оставалась на том же уровне, при этом показатель все еще не отличал ся от исходного уровня патологии (р>0,05). В группе с введением перфторана к 3-м суткам оп ределяется нормализация исследуемого показа теля, а к 7-м суткам он составил 0,078+0,0008 усл. единиц, что было достоверно ниже нормы. Дальнейшую динамику объемной плотности во локнистых структур можно проследить по гра фику (рис. 3).
Количество НГ в группе сравнения к 3-м сут кам увеличилось в 3 раза относительно предыду щего срока наблюдения, оставаясь достоверно ниже нормы (Р<0,001), что сочеталось с незначи тельным повышением МИ. В группе с введением перфторана в этот срок наблюдения исследуемые показатели имели сходную динамику, но просле живались достоверно высокие показатели МИ и НГ разница (Р<0,001 и Р<0,05 соответственно).
К 7-м суткам в обеих группах наблюдалось значительное падение МИ, однако в основной группе МИ был в 2 раза выше, чем в группе сравнения (Р.<0,001).
— Норма ----ХГ+РЕЗ ХГ+РЕЗ+ПФ
мг\г
25 л 20 15 10
сут 0 2 3
30
5
7
Рис. 1. Сравнительная динамика тканевого гидроксипролина печени крыс, с хроническим гепатитом после резекции органа и группы после резекции и введения перфторана
мг\г g .... Норма
----ХГ+РЕЗ
0,5 0
0 2 3 7 30 сут
Рис.2. Сравнительная динамика тканевы х гексозаминов печени крыс, с хроническим гепатитом после резекции органа и группы после резекции и введения перфторана
усл.ед 0,25
0,2 -- - норма -- ХГ+рез+ПФ -- ХГ+РЕЗ
Рис.3. Динамика объемной плотности волокнистых структур соединительной ткани печени крыс, с хроническим гепатитом после резекции печени и группы после резекции и введения перфторана
(Р,+0,0()1), что сочеталось с уменьшением ко личества нормальных гепатоцитов в группе сравнения в и увеличением в основной которые составили 9,06+2,022%, и 72.37+2,385% соответ ственно. К 30-м суткам количество НГ в основ ной группе нормализовалось, а в группе сравне ния было достоверно ниже нормы. Митотичес- кпй индекс через месяц после операции был дос товерно выше в обеих группах исследования (табл. 1)
Резюмируя вышесказанное, полученные дан ные свидетельствуют о том. что под влиянием перфторана происходит снижение количества соедипительно-тканных волокон и основного белка соединительной ткани, а также усиливает ся регенерация гепатоцитов. что подтверждает ся данными литературы (6).
Одним из основных, на наш взгляд, механиз мов, ведущих к усилению резорбции соедини тельной ткани, является активация цитохром Р- 450 зависимой монооксигеназной системы. Важной особенностью является то, что актива ция индукторов цитохрома Р-450 приводит к увеличению относительной массы печени, ко торое обусловлено как гипертрофией, так и гиперплазией гепатоцитов (5). Известно, что индукторы микросомальпых монооксигеназ активируют купферовские клетки которые за пускают процессы, направленные на резорб цию соединительной ткани(2, 4).
Таким образом, применение перфторана при ОРП, как кровезаменителя с полифункци ональным действием, значительно усиливает процессы фиброклазии патологически изменен ной печени.
Литература
1. Голубев A.M. Итоги и перспективы изучения влияния фторуглеродных кровезаменителей на био логические системы // Перфторорганические актив
ные среды для медицины и биологии: Сб. научных трудов. - Пущино, 1993. - С. 88-93.
2.Далгатов Г.Д., Гумерова А.. Шахназарова М.Д. и др. Побочный эффект применения перфторуглерод- ной эмульсии важнее основного? // Перфтороргани- ческие соединения в биологии и медицине: Сб. науч ных трудов. - Пущино, 2001. - С. 83-88.
3Журавлев В.А. Радикальные операции у «неопе рабельных» больных с очаговыми поражениями пече ни. -Киров: Изд-во «Вятка», 2000. - 224 с.
4.Косых А. А. Соединительная ткань печени в нор ме, при хроническом гепатите и циррозе в условиях регенерации: Дис. ... докт. мед. наук. - М., 1992. - 475 с.
5.Образцов В В.. Гришаиова А.Ю., Мишин В.М. Индукция микросомной монооксигеназы полностью фторированными органическими соединениями (об зор) // Вопр. мед. химии. - 1989. - № 3. - С. 9-18.
6Распутин П.Г. Применение эмульсий перфтор- органических соединений в резекционной хирургии печени: Дис. ... докт. мед. наук. - Пермь, 2000. - 340 с.
7. Серое В В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань.
Таблица 1
Соавнительныи анализ пока Сутки/ Показатель ателеи ноомального количества гепаюцитов и митот 2-я группа (хронический гепатит + резекция) ческого индекса экспеоиментальных животных 3-я группа (хронический гепатит + резекция +перфторан)
Норма НГ 88,2±0,45% 88,2±0,45%
МИ 0,04±0,002%с 0,04±0,002%е
0-сутки НГ 38,79±1,642 38,79±1,642
ми 2,21 ±0,062 2,21 ±0,062
2-сутки НГ 6,91 ±0,274 17,80±2,00*'**
ми 8,19±0,409 15,08±0,174*'**
3-сутки НГ 20,24±0,981 23,63±0,445*'**
ми 10,29±0,218 16,57±0,233*'**
7-сутки НГ 9,06±2,022 72,37±2,385*'**
ми 1,64 ±0,005 3,03±0,098*'**
30-сутки НГ 77,54±1,166 79,67±0,163**
ми 0,64 ±0,048 3,28±0,010*'**
Примечание:
0-сутки - исходный уровень патологии
* - достоверность различий между группой «хронический гепатит + резекция +перфторан» и нормой ** -достоверность различий между группами «хронический гепатит + резекция +перфторан» и «хрони ческий гепатит + резекция».
3 Заказ 8-48
- М„ Медицина, 1981. - 312 с.
Summary
PERFLUOROCARBON EMULSIONS STRENTHEN THE RESORPTION OF CONJUNCTURE TISSUE OF THE LIVER AFTER PARTIAL HEPATECTOMY IN EXPERIMENTAL ANIMALS WITH CHRONIC
HEPATITIS
I.V. Zubkov, O.V. Mashkovtsev, A.A. Kosykh, P.G. Rasputin Kirov State Medical Academy Key words: conjunctive tissue, perfluorocarbon emulsions, partial hepatectomy, chronic hepatitis.
Intraoperative introduction of perfluorocarbon emulsions strengthens the resorbtion of conjunctive tissue during partial hepatectomy. It is proved by the content of hydroxprolinum and hexosamines of the liver and also by the measurement of volumetric density of fiber structures of the liver and by rise of mitotic activity of liver cells.
