Пептиды как противоопухолевые лекарственные средства Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



76 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Внутриклеточную локализацию белков р53 и p21 исследо- результаты. Получена гибридома IgG1 изотипа, ставали методом флуоресцентной микроскопии. Способность бильно продуцирующая МКА к белку GAGE. Полученные комплексов платины вызывать апоптоз исследовали мето- МКА 4G1-D2 специфически реагировали с белковыми дом проточной цитофлуориметрии после окрашивания лизатами клеточных линий меланом Mel Il, Mel Ibr и ли-клеток FITC-меченным аннексином V и йодистым пропи- нией эритромиелоидного лейкоза К562, экспрессирующи-дием, а также по состоянию белка PARP методом иммуно- ми ген GAGE. Методом иммуноцитохимии выявлена также блоттинга. Для ингибирования эффекторных каспаз ис- специфическая цитоплазматическая реакция у линии пользовали Z-VEID-FMK (ингибитор каспазы-6) К562. C клетками крови здоровых доноров и линии легоч-и Z-DEVD-FMK (ингибитор каспазы-3 и -7). ных фибробластов WI-38, в которых отсутствует экспрес-результаты. Все исследуемые комплексы платины сия гена GAGE, специфической реакции антител не выяв-в концентрации IC50 вызывают накопление в ядре белка лено. р53 через 12 ч и белка р21 через 24 ч после введения соеди- Заключение. Полученные МКА могут быть исполь-нений. Результаты проточной цитофлуориметрии показа- зованы для широкого спектра научно-исследовательских ли, что исследуемые комплексы платины вызывают оста- и медицинских целей, в том числе для изучения функ-новку клеточного цикла в ранней S-фазе и индукцию циональных свойств белка и для иммунодиагностики процесса апоптоза. Исследуемые соединения вызывают опухолей. каспазозависимую деградацию белка PARP, которая блокируется ингибиторами каспаз-3, -7 -6. В то же время даже Е.Н. Фишер, Г.В. Раменская, В.В. Смирнов при использовании ингибиторов каспаз наблюдается ча- ПЕПтиды как ПротивооПУХолЕвыЕ стичная деградация белка PARP. лекарственные Средства Заключение. Аминонитроксильные комплексы плати- ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава ны (IV) в концентрации IC50 вызывают р53-зависимую, России (Сеченовский Университет), Москва, Россия каспаза-3-независимую индукцию апоптоза в опухолевых Наряду с сердечно-сосудистыми заболеваниями онко-клетках MCF-7. логия является основной причиной смертности во многих странах мира. Из-за резистентности к лекарственным сред-Ю.П. Финашутина, Н.В. Голубцова, М.А. Барышникова, ствам и отсутствия избирательности действия существуют Н.А. Лыжко, В.А. Мисюрин, А.В. Мисюрин, З.С. Шпрах потребности в создании новых терапевтических препара-ПолУчЕниЕ моноКлонАлЬнЫХ АнтитЕл тов. Пептидные препараты относятся к новым и перспек-4G1-D2 К рАКово-тЕСтиКУлярномУ тивным подходам к лечению онкологических заболеваний. БЕлКУ GAGE Обнаружение пептидных/белковых рецепторов и пепти-ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» дов, влияющих на опухоль, позволит создать более эффек-Минздрава России, Москва, Россия тивные и селективные противоопухолевые препараты. введение. Применение моноклональных антител Короткие пептидные средства имеют ряд преимуществ (МКА) широко распространено в онкологии для изучения по сравнению с другими лекарственными препаратами опухолевых антигенов, иммунодиагностики и иммуноте- (ЛП). По сравнению с рекомбинантными белками и анти-рапии опухолей. В качестве потенциальных антигенов телами пептиды обладают меньшей иммуногенностью, для иммунотерапии широкого спектра онкологических более высокой активностью, проникновением в органы заболеваний можно рассматривать, например, белки или опухоли, а по сравнению с малыми органическими GAGE, относящиеся к группе раково-тестикулярных ан- молекулами обладают более высокой эффективностью тигенов. Они экспрессируются в различных типах опухо- и селективностью. лей, но не экспрессируются в нормальных тканях, и вызы- Одним из классических примеров назначения пепти-вают иммунный ответ. Для оценки прогностических дов в качестве противоопухолевых препаратов является и терапевтических свойств антигенов семейства GAGE использование агонистов гонадотропин-рилизинг гормона необходима проверка их экспрессии в опухолевых клетках (аГнРГ), аналоги которого (гозерелин, трипторелин, бусе-на уровне белка с помощью высокоспецифичных МКА релин) являются ведущими препаратами в гормональной к GAGE. терапии рака предстательной железы. Учитывая длитель-Цель исследования. Получить МКА, специфичные ность лечения при данном заболевании, целесообразно к раково-тестикулярному антигену GAGE. выпускать ЛП в виде пролонгированных лекарственных материалы и методы. Мышей линии BALB/С в возра- форм (подкожные капсулы, имплантаты). Длительное выс-сте 3,5 мес 5-кратно иммунизировали (внутрибрюшинно) вобождение имплантируемых препаратов способствует с интервалом 2 нед очищенным рекомбинантным белком улучшению гонадной десенсибилизации, а также повыше-GAGE1. Слияние проводили на 3-й день после последней нию удобства за счет сокращения частоты дозирования. иммунизации с использованием клеток мышиной миело- Помимо назначения пептидов при гормонально-зави-мы NS-1, при помощи раствора полиэтиленгликоля симой опухоли, возможно также их применение при гор-ПЭГ/ДМСО (Sigma). Отбор продуцирующих клонов про- мональных заболеваниях. Примером является синтети-водили методом непрямого ИФА и иммуноблоттинга. ческий аналог соматостатина октреотид, который Фракцию иммуноглобулинов из асцитной жидкости очи- применяется как при опухолях гастропанкреатической щали с помощью аффинной хроматографии. Экспрессию эндокринной системы, так и для лечения акромегалии. гена GAGE в клетках определяли с помощью ОТ-ПЦР. Производство терапевтических пептидов на сегодняшний

Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

77

момент является перспективным направлением. За счет замены в химической структуре аминокислотных остатков возможно получить любой интересующий пептид. Короткие физиологически активные пептидные молекулы представляют наибольший интерес в качестве основы для разработки инновационных ЛП. В результате процесса одного синтеза на выходе можно получить сразу несколько продуктов (трипторелин и бусерелин). Роль пептидов представляет собой новую терапевтическую перспективу, направленную на повышение эффективности лечения и тем самым сокращение смертности от онкологии.

Д. С. Хачатрян1, Б.В. Егорова2, Е.В. Матазова2,

A.О. Якушева2, Д.В. Авдеев1,3, М.Г. Медведев3,4,

B.Н. Осипов1,5, С.Н. Калмыков2,6

условия получения комплексов тетрапептида для лечения и диагностики нейроэндокринных опухолей

НИЦ «Курчатовский институт» — ИРЕА, Москва, Россия;

2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия; 3Высший химический колледж РАН, Москва, Россия; 4ФГБУН ИНЭОС РАН, Москва, Россия; 5ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;

6НИЦ «Курчатовский институт», Москва, Россия

введение. Bi-213 (T 1/2 = 46 мин) и радионуклида: многих редкоземельных элементов демонстрируют перспективность для терапии и диагностики раковых заболеваний. Исследуемый тетрапептид является коротким аналогом октреотида — синтетического аналога соматостатина, используемого в настоящее время при лечении и диагностике нейроэндокринных опухолей, в том числе в составе радиофармпрепаратов.

Цель исследования. Получение и определение устойчивости комплексов конъюгата тетрапептида DOTA-H-Phe-D-Trp-Lys (BOC)-Thr(OMe) с катионами висмута и европия.

материалы и методы. Во всех экспериментах были использованы долгоживущие радионуклиды Bi-207 и Eu-152 и синтезированные конъюгаты тетрапептида с используемым в настоящее время хелатором DOTA. Подобраны условия для анализа связанного в комплекс и свободного катиона методом тонкослойной хроматографии с последующей авторадиографией и у-спектрометрией, с помощью которых далее были определены степени включения катиона в экспериментах по поиску оптимальных рН, концентрационного диапазона и температуры проведения реакции.

результаты. Показано, что включение катиона на 90—95 % происходит в течение 30 мин (для катиона висмута) — 1 ч (для катиона европия) при 90 °C, что характерно для конъюгатов DOTA, и общей концентрации лиганда 1 х 10-4 M (для катиона висмута) и 3 х 10-4 M (для катиона европия). Связывание катионов европия происходит с одинаковым выходом при рН 5 и рН 8, в то же время связывание катионов висмута значительно (на 40 %) уменьшается при понижении значения рН с 8 до 5. Исследована устойчивость полученных комплексов в среде сывороточных белков и изотоническом растворе.

Заключение. Получены комплексы катионов висмута и европия с конъюгатом DOTA—тетрапептид, отработаны условия их получения и анализа. Показана устойчивость получаемых комплексов в сыворотке и изотоническом растворе.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ, грант № 18-03-00891.

А.В. Холодова1-2, В.П. Максимова2, Т.И. Фетисов2, Е.А. Лесовая2,3, М.Г. Якубовская2, К.И. Кирсанов2

противоопухолевые препараты как эпигенетические регуляторы экспрессии генов

1МИТХТ, Москва, Россия;

2ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина»

Минздрава России, Москва, Россия;

3ФГБОУВО РязГМУ Минздрава России, Рязань, Россия

введение. Накоплен ряд данных о способности некоторых химиопрепаратов необратимо ингибировать метил-трансферазы, эпигенетически модулируя экспрессию генов, а также об их влиянии на состояние гистонов, что играет большую роль в репарации повреждений ДНК, обеспечивая эффективность комбинированной химиотерапии. Однако к настоящему моменту эпигенетическая активность исследована лишь для ограниченной группы химиотерапевтических лекарственных средств.

Цель исследования. Изучение влияния противоопухолевых препаратов на эпигенетические механизмы регуляции экспрессии генов при помощи модельной системы HeLa TI.

материалы и методы. В работе использовалась клеточная линия HeLa TI с эпигенетически репрессированным ретровирусным вектором, несущим репортерный ген GFP. Эпигенетическую активность соединений определяли методом проточной цитофлуориметрии по увеличению доли GFP-положительных клеток. Для изучения интегрального уровня метилирования ДНК использовался метод пиро-секвенирования с бисульфитной конверсией для некоди-рующих повторов LINE1, анализ изменений гистоновых модификаций проводили при помощи вестерн-блоттинга.

результаты. При скрининге 21 препарата эпигенетическая активность была выявлена у 6 агентов. Доля GFP-поло-жительных клеток возрастала относительно интактного контроля при действии: топотекана — в 2,9 раза, дексамета-зона — в 3,6 раза, доцетаксела — в 4,2 раза, вальпроата — в 4,4 раза, бортезомиба — в 5,7 раза, вориностата — в 8,2 раза. При этом отсутствие активности было продемонстрировано для следующих препаратов: AZD 8055, LY 294 002, висмоде-гиб, вортманнин, доксорубицин, олапариб, паклитаксел, понатиниб, рапамицин, флавоперидол, ифосфамид, цикло-фосфамид, цисплатин, этопозид. Для каждого из активных соединений был проведен анализ влияния агентов на интегральный уровень метилирования ДНК, а также уровень ги-стоновых модификаций. Было показано, что вориностат, топотекан и дексаметазон увеличивали долю модификаций H4K20me3 относительно контроля, в то время как вальпроат никак не влиял на их уровень в клетке.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РНФ (проект № 17-15-01526).

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ