CC BY
58
DOI: 10.24412/2074-5036-2022-3-88-93 УДК 616.9:616-091:636.92
Ключевые слова: кролики, вирусная геморрагическая болезнь, патоморфология Keywords: rabbits, viral hemorrhagic disease, pathomorphology
Кудряшов А. А., Левтеров Д. Е., Балабанова В. И.
ПАТОМОРФОЛОГИЯ ВИРУСНОЙ ГЕМОРРАГИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ КРОЛИКОВ
PATHOMORPHOLOGY OF VIRAL HEMORRHAGIC DISEASE OF RABBITS
ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины» Saint - Petersburg State University of Veterinary Medicine Адрес:196084, Россия, Санкт-Петербург, Черниговская ул., 5 Address: 196084, Russia, Saint-Petersburg, Chernigovskaya Str, 5
Кудряшов Анатолий Алексеевич, д. в. н., проф., зав. каф. патологической анатомии и судебной ветеринарной
медицины
Kudriashov Anatoly Alekseevich, Doctor of Veterinary Science, Professor, Head of the Pathologic Anatomy and
Forensic Veterinary Medicine Department Левтеров Дмитрий Евгеньевич, к. в. н., доцент каф. патологической анатомии и судебной ветеринарной медицины
Levterov Dmitry Evgenjevich, PhD, Associate Professor of the Pathologic Anatomy and Forensic Veterinary Medicine
Department
Балабанова Виктория Игоревна, д. в. н., профессор кафедры патологической анатомии и судебной ветеринарной медицины
Balabanova Victoria Igorevna, Doctor of Veterinary Science, Professor of the Pathologic Anatomy and Forensic
Veterinary Medicine Department
Аннотация. Цель работы - определить типичные патологоанатомические изменения при вирусной геморрагической болезни кроликов для уточнения морфогенеза данной болезни. Объектами исследования явились три кролика породы советская шиншилла, в возрасте 5 месяцев, принадлежащие крестьянскому хозяйству. Материалом исследования послужили органы кроликов. Животные болели около 2-х суток. Кролики были вскрыты по методу Г. В. Шора. При вскрытии отобрали патологический материал для дополнительных исследований: пробы печени для исследования методом иммуноферментного анализа (ИФА) на вирус геморрагической болезни кроликов, пробы легких, сердца, печени, селезенки и почек для гистологического исследования. Гистологические срезы готовили по общепринятой методике. Патологический материал фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина. Затем провели заливку в парафин и на ротационном микротоме изготовили срезы толщиной 5-7 мкм. Срезы окрасили гематоксилином и эозином. В результате исследования методом иммуноферментного анализа в пробах печени выявлен вирус геморрагической болезни кроликов. Патологоанатомические и патогистологиче-ские изменения при вирусной геморрагической болезни у исследованных кроликов проявились в двух основных компонентах: во-первых, в альтеративных изменениях печени, а именно, в зернистой, жировой и пигментной дистрофии, а также в некрозе гепатоцитов; во-вторых, в острой венозной гиперемии, кровоизлияниях и тромбозе мелких сосудов многих органов, связанных с развитием ДВС-синдрома. Обнаружение пигментной дистрофии в виде скопления желчных пигментов в гепатоцитах, логично объяснить несостоятельностью печеночных клеток к метаболизму в широком смысле слова: в нарушении выработки факторов свертывания крови, в нарушении метаболизма желчных пигментов.
Summary. The aim of the work is to determine typical pathoanatomic changes in viral hemorrhagic disease of rabbits to clarify the morphogenesis of this disease. The objects of the study were three rabbits of the soviet chinchilla breed, aged 5 months, belonging to a peasant farm. The study material was the organs of rabbits. The animals were sick for about 2 days. The rabbits were autopsied according to the method of G. V. Shor. At the autopsy, pathological material was selected for additional studies: liver samples for examination by enzyme immunoassay (ELISA) for rabbit hemorrhagic disease virus, lung, heart, liver, spleen and kidney samples for histological examination. Histological sections were prepared according to the generally accepted method. The pathological material was fixed in a 10 % solution of neutral formalin. Then the material was carried out in paraffin and sections 5-7 microns thick were made on a rotary microtome. The sections were stained with hematoxylin and eosin. As a result of the study by the method of enzyme immunoassay, the virus of hemorrhagic disease of rabbits was detected in liver samples. Pathoanatomic and pathohistological changes in viral hemorrhagic disease in the studied rabbits were manifested in two main components: firstly, in alterative changes in the liver, namely, in granular, fatty and pigmented dystrophy, as well as in hepatocyte necrosis; secondly, in acute venous hyperemia, hemorrhages and thrombosis of small vessels of many organs, related to the development of DIC syndrome. The detection ofpigmented dystrophy in the form of accumulation of bile pigments in hepatocytes is logically explained by the failure of liver cells to metabolism in the broad sense of the word: in violation of the production of blood clotting factors, in violation of the metabolism of bile pigments.
Введение
Вирусная геморрагическая болезнь кроликов (ВГБК) появилась и широко распространилась в Китае в 1984-1985 годах. Выяснили, что возбудитель ВГБК - калицивирус, к которому восприимчивы кролики и зайцы. Наиболее чувствительными оказались взрослые особи старше 5 месяцев. Заболеваемость составляла более 75 %, летальность 100 %. Болезнь в дальнейшем была зарегистрирована во многих странах мира: в Германии, Австрии, Чехословакии, Болгарии, Швеции, Польше, Венгрии, Италии и других, в том числе в СССР, Мексике, США [2].
В целом патогенез и патоморфологиче-ские изменения при ВГБК широко освещены. Однако имеются не вполне ясные детали. Так, некоторые авторы сообщают о пневмонии при этой болезни, тогда как, по мнению других авторов, для ВГБК закономерны нарушения гемодинамики, в том числе явления диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови в органах (за исключением печени), а не воспалительная реакция [1, 5]. M. Gleeson и O. A. Petritz [6] отмечают желтуху как одно из проявлений ВГБК, что не описано в других источниках литературы. Вышеперечисленные обстоятельства объясняют актуальность нашего исследования.
Цель работы - определить типичные пато-логоанатомические изменения при вирусной геморрагической болезни кроликов для уточнения морфогенеза данной болезни.
Материалы и методы исследования
Объектами исследования явились три кролика породы советская шиншилла в возрасте 5 месяцев, принадлежащие крестьянскому хозяйству. Материалом исследования послужили органы кроликов. Животные болели около 2-х суток. Вскоре после смерти кролики были вскрыты по методу Г. В. Шора. При вскрытии отобрали патологический материал для дополнительных исследований: пробы печени для исследования методом им-муноферментного анализа (ИФА) на вирус геморрагической болезни кроликов, пробы легких, сердца, печени, селезенки и почек для гистологического исследования. Исследование на вирус геморрагической болезни
кроликов проведено в лицензированной лаборатории. Гистологическое исследование проведено на кафедре патологической анатомии и судебной ветеринарной медицины ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины». Гистологические срезы готовили по общепринятой методике [3]. Патологический материал фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина. Затем провели заливку в парафин и на ротационном микротоме изготовили срезы толщиной 5-7 мкм. Срезы окрасили гематоксилином и эозином. Изучение гистологических препаратов провели при помощи светооптического микроскопа Микмед-5 при увеличении 160, 400 и 600. Микрофотографирование проводили при помощи цифровой камеры и программы Тоир1ек Р^оше FMA050.
Результаты исследования и обсуждение
Результаты клинического исследования
В начале заболевания кролики были малоактивны, неохотно двигались, отсутствовал аппетит. Отметили учащенное сердцебиение и учащенное дыхание. На вторые сутки имели место кровянистые выделения из ноздрей и примесь крови в фекалиях. Перед смертью (на вторые сутки) у животных наблюдали судороги.
Результаты патологоанатомического исследования
У всех кроликов установлены идентичные макроскопические изменения в ряде органов: в легких, сердце, печени, селезенке, почках и кишечнике.
Легкие были гиперемированы и отечны. Под плеврой и в глубине паренхимы органа обнаружили кровоизлияния в виде точек и мелких темно-красных пятен (рисунок 1). С поверхности разреза выделялась пенистая светло-красная жидкость.
Сердца кроликов выглядели типичными для смерти от асфиксии: полости правой половины расширены, наполнены жидкой кровью с рыхлыми ее свертками.
Печень была увеличенной, имела приту-пленные края, дряблую консистенцию, светло-коричневый цвет с красным и серым оттенками и мозаичным рисунком (рисунок 2).
89
При относительно слабом нажатии паренхима разрывалась. С поверхности разреза стекала кровь, просветы крупных кровеносных сосудов содержали жидкую кровь и ее рыхлые свертки. Желчный пузырь был наполнен темно-зеленой вязкой прозрачной желчью.
Селезенка была заметно увеличена, упругой консистенции, с поверхности темно-красного цвета. Поверхность разреза черно-красного цвета со стекающей кровью, соскоб умеренный.
Почки увеличены в объеме, с поверхности окрашены неоднородно - в коричневый цвет с темно-красными пятнами (рисунок 3). На разрезе кора почек также имела коричневый цвет с темно-красными пятнами, мозговой слой - серо-красного цвета. На разрезе в паренхиме видны темно-красные полосчатые участки с нечеткими границами.
В слизистой оболочке тонкой кишки отметили немногочисленные точечные кровоизлияния.
Результаты исследования методом имму-ноферментного анализа
В результате исследования методом им-муноферментного анализа в пробах печени выявлен вирус геморрагической болезни кроликов.
Результаты гистологического исследования
При гистологическом исследовании проб органов были выявлены следующие пато-морфологические изменения.
В легких обнаружили гиперемию, отек, диффузные и очаговые кровоизлияния (рисунок 4), а также тромбоз у одного из кроликов. Степень наполнения кровеносных сосудов была разной: артериолы - полупустые, венулы - полнокровные. Морфологического проявления воспаления в легких не было обнаружено.
В сердечной мышце капилляры и венулы заполнены кровью. Обнаружены слабо наполненные капилляры со скоплениями эритроцитов в периваскулярных пространствах. В капиллярах отмечен тромбоз. Артериолы умеренно кровенаполнены.
В печени кроликов имела место диском-плексация гепатоцитов: балочное строение долек сильно нарушено, а местами полно-
90
стью отсутствовало. Цитоплазма печеночных клеток была зернистой и содержала многочисленные мелкие пустоты, соответствующие каплям жира, растворившегося в ходе изготовления гистологических препаратов (рисунок 5). Эти изменения соответствуют зернистой и жировой дистрофии. У двух кроликов в межклеточном пространстве находились немногочисленные лейкоциты, являющиеся, на наш взгляд, результатом воспалительной реакции на повреждение печени вирусом (рисунок 5). Ядра многих гепатоцитов и звездчатых макрофагов лизи-рованы, а в отдельных клетках ядра пикно-тичны; обнаружены двуядерные гепатоциты. Центральные вены долек - с большими просветами, заполнены лизированными эритроцитами. Во многих гепатоцитах находились глыбки желто-коричневого желчного пигмента (рисунок 6).
В селезенке многие эритроциты лизиро-ваны. Большие участки ретикулярной ткани лишены клеток красной и белой пульпы, выглядят как сеть набухших волокон с многочисленными и обширными участками отека. Белая пульпа представлена отдельными лимфатическими узелками и периартери-альными муфтами. Эти структуры содержат умеренное число лимфоцитов, ядра многих клеток пикнотичны. Найдены немногочисленные макрофаги и плазматические клетки.
Почки: почечные клубочки находились в состоянии или анемии, или полнокровия (рисунок 7). Более того, во многих венулах мозгового слоя, межканальцевых и клубочковых капиллярах имеют место стаз крови и тромбоз (рисунки 8, 9).
Анализируя результаты исследования, необходимо отметить, что патологоанато-мические и патогистологические изменения при вирусной геморрагической болезни у исследованных кроликов проявились в двух основных компонентах. Во-первых, в аль-теративных изменениях печени, а именно, в зернистой, жировой и пигментной дистрофии, а также в некрозе гепатоцитов (в гепатозе). Альтеративные изменения в печени объясняются тропизмом возбудителя вирусной геморрагической болезни кроликов к клеткам печени [4]. Во-вторых, во всех
Рис. 1. ВГБК. Кролик 5 мес. Легкие. Отек.
Рис. 2. ВГБК. Кролик 5 мес. Печень. Гепатоз.
Рис. 3. ВГБК. Кролик 5 мес. Почка. Пятнистое окрашивание.
Рис. 4. ВГБК. Кролик 5 мес. Гистосрез легкого. Гиперемия и кровоизлияния. Увеличение 140. Окраска гематоксилином и эозином.
% .*<» С.
1 ЩШ
/ . Л
I . « ,
. ЖШ * ■•«
/ • -
, - >
-а т ♦ *
А. .1 л
« -
Рис. 5. ВГБК. Кролик 5 мес. Гистосрез печени. Зернистая (синяя стрелка), жировая (коричневая стрелка), и некроз (черная стрелка) гепатоцитов. Лейкоциты (красная стрелка). Увеличение 600. Окраска гематоксилином и эозином.
•Л*. /
% ^
/ ■'Га
' _ •' Л 4 - . 'Г
х .. Г -
- . ■ .... 0 0 ■
ч
* _ *Ь
® Л а.
Рис. 6. ВГБК. Кролик 5 мес. Гистосрез печени. Глыбки желчных пигментов в гепатоцитах (стрелка). Увеличение 600. Окраска гематоксилином и эозином.
Актуальные вопросы ветеринарной биологии № 3 (55), 2022
91
Рис. 7. ВГБК. Кролик 5 мес. Гистосрез почки. Анемия (левый клубочек) и гиперемия (правый клубочек) клубочковых капилляров. Увеличение 600. Окраска гематоксилином и эозином.
исследованных органах отмечены острая венозная гиперемия, а также кровоизлияния и тромбоз, связанные, по мнению P. J. Kerr, T. M. Donnelly [7], с развитием ДВС-синдрома. Наряду с альтеративными изменениями, в печени исследованных кроликов обнаружена миграция лейкоцитов, что указывает на начало экссудативной фазы воспаления, т. е. на начало острого реактивного гепатита. Обнаружение пигментной дистрофии в виде скопления желчных пигментов в гепатоци-тах логично объяснить несостоятельностью печеночных клеток к метаболизму в широком смысле слова: в нарушении выработки факторов свертывания крови, в нарушении метаболизма желчных пигментов. Обнаружение пигментной дистрофии в виде скопления желчных пигментов в гепатоцитах у кроликов в нашем исследовании согласуется с данными M. Gleeson и O. A. Petritz [6], которые отметили желтуху, как одно из проявлений ВГБК. Очевидно, если бы исследованные нами кролики болели дольше, то результат нарушения обмена желчных пигментов стал бы заметен в виде желтухи уже при макроскопическом исследовании.
Заключение
В результате исследования сделаны следующие выводы:
1. Патологоанатомические и патогистоло-гические изменения при вирусной геморрагической болезни у исследованных кроликов проявились в двух основных компонентах:
Рис. 8. ВГБК. Кролик 5 мес. Гистосрез почки. Стаз и тромбоз венул мозгового слоя (стрелка). Увеличение 140. Окраска гематоксилином и эозином.
- • о
в V
* в *г:
V Г-Ж fe%-' -
- г1 •
* •>
л
с г V -V :v
у • 4' У-
•• ' » ». • • . > А *
. v * . vs. -.
* « - • * . »
* ч • « i . *\Ь*
К V. V; < ' ь - ----
Рис. 9. ВГБК. Кролик 5 мес. Гистосрез почки. Тромбоз клубочковых капилляров (стрелка). Увеличение 600. Окраска гематоксилином и эозином.
во-первых, в альтер ативных изменениях печени, а именно, в зернистой, жировой и пигментной дистрофии, а также в некрозе гепатоцитов; во-вторых, в острой венозной гиперемии, кровоизлияниях и тромбозе мелких сосудов многих органов, связанных с развитием ДВС-синдрома.
2. Обнаружение пигментной дистрофии в виде скопления желчных пигментов в гепа-тоцитах, логично объяснить несостоятельностью печеночных клеток к метаболизму в широком смысле слова: в нарушении выработки факторов свертывания крови, в нарушении метаболизма желчных пигментов.
Список литературы
1. Аверин С. А. Патоморфодиагностика и патогенез вирусной геморрагической болезни кроликов / С. А. Аверин, Г. П. Дымина, Н. И. Архипов,
92
Н. В. Черных, Г. М. Карпов // Ветеринария. 1992. № 7-8. С. 32-35.
2. Бакулов И. А. Вирусная геморрагическая болезнь кроликов (расшифровка этиологии, разработка методов диагностики и борьбы) / И. А. Бакулов, И. Ф. Вишняков, А. Л. Семенихин // Ветеринария. 1992. № 7-8. С. 30-32.
3. Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники. / Г. А. Меркулов. Л.: Медицина, 1969. 423 с.
4. Руководство по вирусологии: Вирусы и вирусные инфекции человека и животных / под ред. академика РАН Д. К. Львова. М.: ООО «Издательство
«Медицинское информационное агентство», 2013. С.994-1000.
5. Шевченко А. А. Вирусная геморрагическая болезнь / А. А. Шевченко, Л. В. Шевченко // Болезни кроликов. М.: Аквариум Принт, 2011. С. 32.
6. Gleeson M. Emerging Infectious Diseases of Rabbits / M. Gleeson, O. A. Petritz // Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice. 2020. V. 23 (2). P. 249-261. doi:10.1016/j.cvex.
7. Kerr P. J. Viral Infections of Rabbits / P. J. Kerr, T. M. Donnelly // Veterinary Clinics of North America: Exotic Animal Practice. 2013. V.16 (2). P. 437-468. doi:10.1016/j.cvex.
93
