CC BY
4MEDICAL SCIENCES
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СОБАК, ПОЛУЧАВШИХ КАРТУЛЕКС В
ТЕЧЕНИЕ ДВУХ МЕСЯЦЕВ
КрасильниковаН.В.
соискатель ученой степени Ph.D. (Biol.Sc.), Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации
PATHOMORPHOLOGICAL STUDY OF DOGS THAT RECEIVED KARTULEX FOR TWO
MONTHS
Krasilnikova N.
Ph.D. (Biol.Sc.) student,
Federal state budgetary institution "National medical research center of cardiology" of the Ministry of
health of the Russian Federation
АННОТАЦИЯ
Исследование токсичности картулекса при внутрижелудочном введении в условиях 2-месячного субхронического эксперимента выполнены на 8 беспородных собаках. После окончания хронического исследования было проведено патоморфологическое исследование следующих внутренних органов и тканей животных: головной мозг, щитовидную железу, слюнные железы, тимус, легкие, сердце, пищевод, брюшину, селезенку, печень, поджелудочную железу, надпочечники, почки, желудок, кишечник, предстательную железу и яички. Таким образом, проведенные патоморфологические исследования собак, получавших внутрижелудочно картулекс в испытанной дозе 4,3 мкг/кг в течение двух месяцев, не выявили патологических изменений внутренних органов у животных.
ABSTRACT
The study of the toxicity of Kartulex with intragastric administration in a 2-month subchronic experiment was performed on 8 mongrel dogs. After the end of the chronic study, a pathomorphological examination of the following internal organs and tissues of animals was carried out: brain, thyroid gland, salivary glands, thymus, lungs, heart, esophagus, peritoneum, spleen, liver, pancreas, adrenal glands, kidneys, stomach, intestines, prostate and testicles. Thus, the pathomorphological studies of dogs that received intragastric Kartulex at a tested dose of 4.3 mcg/kg for two months did not reveal pathological changes in internal organs in animals.
Ключевые слова: патоморфологическое исследование, картулекс, хронический эксперимент.
Keywords: pathomorphological research, Kartulex, chronic experiment.
Введение.
Проблема резистентных инфекций имеет не только клинические (повышение смертности, в том числе среди лиц трудоспособного возраста, инвали-дизация пациентов), но и экономические последствия. Так на уровне системы здравоохранения дополнительные расходы связаны с увеличением потребления ресурсов системы здравоохранения (дополнительные дни в отделении реанимации и интенсивной терапии, пролонгация госпитализации, дополнительные диагностические исследования, оперативные вмешательства и т.д.), на уровне общества экономические потери связаны в том числе с неэффективностью других медицинских технологий, применение которых сопровождается назначением антимиробных препаратов (трансплантации костного мозга, выхаживание новорожденных с низкой массой тела и так далее) [1].
В связи с этим актуальной задачей современной медицины является создание новых высокоэффективных лекарственных средств, обладающих выраженными фармакологическими свойствами,
не вызывающих нежелательных побочных эффектов, привыкания к ним и применяемых как самостоятельно, так и совместно с другими препаратами.
В результате проведенных исследований установлено, что препарат картулекс проявляет высокую антимикробную активность в экспериментах in vitro и in vivo.
В этой связи является актуальным изучение безопасности препарата картулекс с использованием современных методов.
Материалы и методы исследования. Токсикологическое исследование картулекса проведено на базе лаборатории лекарственной токсикологии ФГБУ «НМИЦ кардиологии» Минздрава России (руководитель лаборатории д.м.н., проф. Е.В. Арзамасцев).
Исследования выполнены на 8 беспородных собаках (самцы, первоначальная масса тела 12-14,5 кг), которые были разделены на 2 группы по 4 животных в каждой: 1 группа - контроль; 2 группа -картулекс, 4,3 мкг/кг. Применяемая доза препарата в 10 раз превышала суточную терапевтическую дозу для человека. Изучаемый препарат в испытуемой дозе 4,3 мкг/кг в небольшом количестве воды
вливали в рот собакам на корень языка 1 раз в день в течение 2 месяцев.
После окончания эксперимента была проведена эвтаназия животных передозировкой тиопен-тала с премедиуацией дроперидола, их внутренние органы были подвергнуты макроскопическому и патогистологическому исследованию.
Вскрытие животных проводили сразу же после их гибели, по полной паталогоанатомической схеме, что исключало возможный аутолиз тканей и позволяло проводить дополнительные исследования. На каждое животное составляли полный протокол вскрытия с характеристикой паталогоанато-мических признаков во всех органах и системах организма.
Для патоморфологического исследования образцы свежей ткани фиксировали в 10% нейтрализованном растворе формалина для получения в последующем парафиновых срезов толщиной в 4-5 мкм. Обезвоживание, обезжиривание и проводку тканей с их уплотнением в парафинах с различной температурой плавления (+37-57° С) проводили в микропроцессорном автомате «Сакура» (Япония) по заранее составленной программе. Заливку тканей в парафин с воском и формирование тканевых блоков - ручным способом. Микротомирование парафиновых блоков тканей осуществляли с помощью санного (Россия) и ротационных (Райхерт, Австрия; А0-820, США) микротомов, что позволяло получать серийные срезы. После депарафинирова-ния, срезы окрашивали гематоксилин-эозином и другими азокрасителями, заключали в пихтовый бальзам под покровные стекла и готовили для визуального просмотра постоянные микропрепараты.
Микроскопию проводили на микроскопе (До-кувал, Германия).
Полученные в каждом наблюдении комплексные патоморфологические данные от получавших картулекс собак, сравнивали с данными контрольных животных.
Результаты и обсуждение.
Макроскопическое исследование.
1 группа - контроль. В данной группе беспородные собаки-самцы с густой шерстью, умеренного питания. Неповрежденные кожные покровы и костный скелет. Обычное расположение внутренних органов. Гладкие, влажные, серые, блестящие в виде пленки серозные оболочки. Наполненные темной жидкой кровью полости сердца, вены и венозные синусы.
Головной мозг с выраженными извилинами и бороздами. Оболочки мозга тонкие, гладкие, блестящие, полнокровные. Четкие границы серого и белого вещества головного и спинного мозга.
Ткань мозга блестит на разрезах, очаговые изменения в ней отсутствуют. Желудочки мозга ще-левидные, с полнокровными, дряблыми, сосудистыми венозными сплетениями и небольшим количеством прозрачной жидкости.
Гипофиз округлый, инкапсулированный, бледно-серый.
Щитовидная железа - обе доли расположены симметрично, полнокровные, красноватые, мелкозернистые. Выделяют 4 мелкие белесовые паращи-товидные железки.
Слюнные железы инкапсулированы, плотные, серые, дольчатые.
Вилочковая железа серо-розового цвета, дольчатая.
В трахее и главных бронхах следы слизи, слизистая оболочка их гладкая, блестящая, синюшная.
Легкие воздушные, пушистые, покрыты тонкой плеврой сероватого цвета.
Сердце плотное, с полупрозрачными гладкими створками клапанов и тонким, гладким, блестящим эндокардом, серо-красным, сочным, без очаговых изменений миокардом, обычным рисунком расположения коронарных артерий и вен. Интима ствола легочной артерии и аорты гладкая, блестящая, тонкая.
Пищевод с гладкой, блестящей, полнокровной слизистой оболочкой.
Брюшина гладкая, тонкая, блестящая. Лимфатические узлы брюшины инкапсулированы, не увеличены, плотные, на разрезе сероватые.
Селезенка с гладкой капсулой, плотная, пульпа полнокровна, без соскоба, фолликулы не различимы.
Печень дольчатая, плотная, с гладкой капсулой, красно-коричневая, на разрезе полнокровная. Желчный пузырь заполнен густой желчью темно -оливкового цвета, слизистая оболочка его бархатистая, тонкая.
Поджелудочная железа в капсуле, плотная, дольчатая, розового цвета.
Надпочечники овальной формы, плотные, с четким делением паренхимы на мозговой и корковый слои.
Почки плотные, с гладкой поверхностью, легко снимающейся капсулой, четкой границей красноватой коры и бледно-серого мозгового слоя, слизистая оболочка лоханок и мочевого пузыря тонкая, гладкая, блестящая.
Желудок формы рога, с тонкими стенками, рельефными, серыми складками слизистой оболочки, без каких-либо очаговых изменений.
Кишечник содержит окрашенный желчью химус и кашецеобразные, коричневые каловые массы. Стенки его тонкие, слизистая оболочка тонкого кишечника бархатистая, серовато-розовая, толстого -серая, складчатая, очаговых изменений не обнаружено.
Органы репродукции без особенностей.
По данным макроскопического исследования эту группу составили здоровые животные.
2 группа - картулекс, 4,3 мкг/кг. В данной группе беспородные собаки-самцы с густой шерстью, умеренного питания. Слизистые оболочки влажные, блестящие. Неповрежденные кожные покровы и костный скелет. Обычное расположение внутренних органов. Серозные покровы тонкие, гладкие, блестящие, влажные, сероватые. Наполненные темной жидкой кровью полости сердца, вены и венозные синусы.
Головной мозг с тонкими, прозрачными, блестящими, полнокровными оболочками. Ткань мозга блестит на разрезе, очаговые изменения в ней отсутствуют. Четкие границы серого и белого вещества. Желудочки мозга щелевидные, с серыми, дряблыми, сосудистыми венозными сплетениями и небольшим количеством прозрачной жидкости.
Гипофиз округлый, бледно-серый.
Щитовидная железа с симметричным расположением долей. На разрезе полнокровная, зернистая. В капсуле видны 4 плотные белесоватые паращито-видные железки.
Слюнные железы инкапсулированы, плотные, серые, дольчатые.
Вилочковая железа серовато-розового цвета, дольчатая.
В трахее и главных бронхах следы слизи, слизистая оболочка их гладкая, блестящая, серовато-красноватого цвета.
Легкие воздушные, пушистые, покрыты тонкой, гладкой плеврой сероватого цвета.
Сердце плотное, с полупрозрачными гладкими створками клапанов и тонким, гладким, блестящим эндокардом, темно-красным, сочным, без очаговых изменений миокардом, обычным рисунком расположения коронарных артерий и вен. Интима ствола легочной артерии и аорты тонкая гладкая, блестящая.
Пищевод проходим, с гладкой, сероватой слизистой оболочкой.
Селезенка с гладкой капсулой, плотная, полнокровная. На разрезе пульпа без соскоба, фолликулы не различимы.
Печень дольчатая, с гладкой капсулой, красно-коричневая, на разрезе полнокровная. Желчный пузырь заполнен густой прозрачной желчью темно -оливкового цвета, слизистая оболочка его бархатистая, складчатая. Желчные пути проходимы, в просвете - небольшое количество желчи, слизистая оболочка их гладкая.
Поджелудочная железа в прозрачной капсуле, дольчатая, плотная, серовато-розоватого цвета на разрезе.
Надпочечники овальной формы, плотные, с четким делением паренхимы на мозговой и корковый слои.
Почки плотные, с гладкой поверхностью, легко снимающейся капсулой, четкой границей красной коры и бледно-серого мозгового слоя, гладкой, блистящей слизистой оболочкой лоханок и мочеточников. В мочевом пузыре небольшое количество прозрачной светлой мочи, слизистая оболочка его складчатая, блестящая.
Желудок формы рога, с тонкими стенками, рельефными, серыми складками слизистой оболочки, без каких-либо очаговых изменений.
Кишечник содержит окрашенный желчью химус и кашицеобразные, коричневые каловые массы. Стенки кишечника тонкие, слизистая оболочка тонкого кишечника бархатистая, розовая, толстого - серая, складчатая, очаговых изменений не обнаружено.
Органы репродуктивной системы обычного строения.
По данным макроскопического исследования токсического действия картулекса в испытанной дозе 4,3 мкг/кг на внутренние органы животных этой группы не выявлено.
Микроскопическое исследование.
1 группа - контроль. Светооптический анализ структур изученных органов у всех животных данной группы демонстрирует однотипные результаты.
В головном мозге нейроны больших полушарий имеют пирамидальную или полигональную форму, окружены бесструктурными глиальными клетками с четким ядром. В подкорковом слое пучки нейроволокон различной природы, скопления нейронов в виде отдельных ядер.
В гипофизе петли полнокровных капилляров в передней доле окружены секреторными клетками с преимущественно оксифильной цитоплазмой. Фолликулы в средней доле округлой формы, многочисленны, заполнены бесструктурным коллоидом. В задней доле - нейропиль, единичные фолликулы.
Слюнные железы выстланы призматическим эпителием, представленным базофильными железистыми клетками с пенистой цитоплазмой, слюно-выводящие протоки свободные, строма развита слабо.
В щитовидной железе строма развита слабо, крупные фолликулы выстланы кубическим эпителием, имеют овальную форму, заполнены бесструктурным коллоидом различной степени плотности, сосуды полнокровны.
Тимус имеет дольковое строение, лимфоциты расположены преимущественно в корковом отделе, мозговой слой представлен ретикулоэпителием. Междольковые перегородки тонкие.
Легкие с хорошо расправленными альвеолами, просветы их свободные, стенки альвеол тонкие, сосуды полнокровные. В просветах крупных бронхов незначительное количество бесструктурного экссудата. Бронхиолы и бронхи выстланы кубическим и призматическим эпителием.
Сердце - эпикард и эндокард представлены тонкими листками соединительной ткани с включением фибробластов. Крупные субэпикардиальные и интрамиокардиальные ветви коронарных артерий тонкостенные, выстланы упорядоченным эндотелием, с выраженной базальной мембраной, медией и адвентицией. Кардиомиоциты с тонкой сарколеммой, оксифильной саркоплазмой и периферически расположенными базофильными овальными ядрами. Поперечно-полосатая исчерченность определяется на всех участках.
В коре надпочечников мелкие железистые клетки расположены послойно. В мозговом слое -полигональные хромаффинные клетки, свободные синусы.
В почках почечные клубочки в тонкой капсуле, субкапсулярная полость свободна, структура капиллярных петель сохранена. Эпителий проксимальных и дистальных канальцев без изменений.
Лоханки выстланы переходным эпителием. Сосуды полнокровны, с сохранным эндотелием.
В печени строма развита слабо, полнокровна. Дольковое и балочное строение сохранено. Печеночные дольки призматической и овальной формы, центральные вены свободные, гепатоциты с четкой структурой, синусоидные капилляры полнокровные. Портальные тракты имеют обычный рисунок строения.
В поджелудочной железе равномерно база-фильные экскреторные железистые клетки ацину-сов, эпителиальная выстилка выводящих протоков не повреждена. Островковый аппарат в тонкой капсуле, содержит светлые полиморфные клетки обычной структуры.
Слизистая оболочка желудка представлена трубчатыми железами, выстланными цилиндрическим эпителием, в котором различимы шеечные, париетальные и обкладочные клетки, подслизи-стый слой представлен рыхлой соединительной тканью с неповрежденными сосудами, мышечная оболочка с разнонаправленными пучками гладких мышечных клеток, серозная оболочка покрыта ме-зотелием.
Тонкая и толстая кишки имеют обычный рисунок строения.
Капсула и трабекулы селезенки не утолщены. Паренхима состоит из обширных синусов, содержащих эритроциты, лимфоциты и ретикулярные клетки, лимфоидные фолликулы обычных размеров.
В лимфатических узлах полиморфные фолликулы из мелких лимфоидных клеток, слабо развитая строма.
Предстательная железа состоит из грубо- и тонковолокнистой стромы с множеством альвео-лярно-тубулярных желез, выстланных неповрежденным цилиндрическим эпителием и содержащих гомогенную ацидофильную слизь.
Семенники с нежноволокнистым интерсти-цием оболочек и стромы, содержат единичные клетки Лейдига и полигональные клетки Сертоли. Выносящие канальцы переплетены, содержат ацидофильный секрет с множеством пристеночно ориентированных сперматогониев и сперматоцитов, находящихся на различных стадиях сперматогенеза. Выносящие канальцы выстланы кубическим эпителием. В придатках эти канальцы в сопровождении артерии, вены и концевых нервных стволов постепенно сливаются в семенной канатик.
Микроскопические данные в совокупности с результатами макроскопического анализа свидетельствуют о том, что контрольную группу составили практически здоровые животные.
2 группа - картулекс, 4,3 мкг/кг. В головном мозге нейроны больших полушарий имеют пирамидальную или полигональную форму, окружены бесструктурными глиальными клетками с четким ядром. Незначительный перицеллюлярный отек. Сосудистая сеть развита умеренно.
В передней доле гипофиза многочисленные синусоидные капилляры, окруженные секреторными клетками с преимущественно оксифильной
цитоплазмой. В средней доле многочисленные фолликулы с бесструктурным коллоидом. В задней доле - нейропиль, единичные фолликулы.
Щитовидная железа представлена крупными фолликулами, выстлаными кубическим эпителием и заполненые бесструктурным коллоидом различной степени плотности, строма развита слабо.
Железистые клетки слюнных желез со светлой пенистой цитоплазмой, структурным ядром выстилают свободно проходимые секреторные пути. Строма развита слабо, полнокровна.
Тимус имеет четко дольковое строение. Строма представлена ретикулоэпителием. В дольках различимо мозговое и корковое вещество. В коре - обширные скопления лимфоидных клеток. В мозговом веществе - немногочисленные клетки лимфоидного ряда.
В легких основное поле зрения занимают округлые, хорошо расправленные альвеолы с тонкими стенками и свободным просветом. Бронхиолы и бронхи выстланы кубическим и призматическим эпителием. Строма полнокровна.
Сердце - эпикард и эндокард представлены тонкими листками соединительной ткани с включением фибробластов. Крупные субэпикардиальные и интрамиокардиальные ветви коронарных артерий тонкостенные, выстланы упорядоченным эндотелием, с выраженной базальной мембраной, медией и адвентицией. Миокард состоит из кардиомиоци-тов с тонкой сарколеммой, оксифильной саркоплазмой и периферически расположенными базофиль-ными овальными ядрами. Поперечно-полосатая ис-черченность хорошо различима. Строма полнокровна.
Поджелудочная железа - капсула не утолщена, тонкие трабекулы разделяют ее на доли, дольки и ацинусы. Железистая экзокринная часть представлена пирамидальными и центроацинозными клетками с гранулами в цитоплазме. Островковый аппарат в тонкой капсуле, содержит крупные светлые а-клетки с эозинофильными гранулами в цитоплазме, Р-клетки с мелкими гранулами, так же встречаются единичные дельта-клетки с ацидофильной цитоплазмой. Строма равномерного кровенаполнения.
Надпочечники имеют обычное строение: в корковом слое железистые клетки, в мозговом - полигональные хромаффинные клетки, свободные синусы.
В почках почечные клубочки в тонкой капсуле, субкапсулярная полость свободна, структура капиллярных петель сохранена. Эпителий проксимальных и дистальных канальцев, петель Генле имеет обычный рисунок строения. Лоханки выстланы переходным эпителием. Сосуды полнокровны, с сохранным эндотелием.
В печени центральные вены свободны, стенки их тонкие. Дольковое и балочное строение сохранено на всех участках. Гепатоциты нормального строения. Портальные тракты имеют обычный рисунок строения. Строма развита слабо, полнокровна.
Основную долю стенки желудка занимает слизистая оболочка, выстланная неповрежденным железистым эпителием, имеющая в своем составе собственные трубчатые железы. В подслизистой -рыхлая неоформленная соединительная ткань, многочисленные скопления железистых, лимфоидных клеток, густая сеть микроциркуляторного русла. Пучки гладкомышечных клеток ориентированы послойно, покрыты снаружи мезотелием.
Стенка тонкого кишечника выстлана со стороны просвета каемчатым эпителием.
Капсула и трабекулы селезенки не утолщены. Паренхима состоит из обширных синусов, содержащих эритроциты, лимфоидные фолликулы обычных размеров.
Лимфатические узлы - пролиферация рети-куло-эндотелиальных элементов, полнокровны, краевые синусы умеренно расширены.
Предстательная железа состоит из грубо- и тонковолокнистой стромы с множеством альвео-лярно-тубулярных желез, выстланных неповрежденным цилиндрическим эпителием и содержащих гомогенную ацидофильную слизь.
Семенники с нежноволокнистым интерсти-цием оболочек и стромы, содержат единичные клетки Лейдига и полигональные клетки Сертоли. Выносящие канальцы переплетены, содержат ацидофильный секрет с множеством пристеночно ориентированных сперматогониев и сперматоцитов, находящихся на различных стадиях сперматогенеза. Выносящие канальцы выстланы кубическим
эпителием. В придатках эти канальцы в сопровождении артерии, вены и концевых нервных стволов постепенно сливаются в семенной канатик.
По данным гистологического исследования токсического действия картулекса при внутриже-лудочном введении в течение двух месяцев в испытанной дозе 4,3 мкг/кг на внутренние органы собак не выявлено.
Заключение
После окончания хронического эксперимента на собаках в течение двух месяцев было проведено патоморфологическое исследование следующих внутренних органов и тканей животных: головной мозг, щитовидную железу, слюнные железы, тимус, легкие, сердце, пищевод, брюшину, селезенку, печень, поджелудочную железу, надпочечники, почки, желудок, кишечник, предстательную железу и яички.
Таким образом, проведенные патоморфологи-ческие исследования собак, получавших внутриже-лудочно картулекс в испытанной дозе 4,3 мкг/кг в течение двух месяцев, не выявили патологических изменений внутренних органов у животных.
Литература
1. Friedman, N.D. The negative impact of antibiotic resistance / N.D. Friedman, E. Temkin, Y. Carmeli // Clin. Microbiol. Infect. - 2016. - Vol. 22, № 5. - P. 416-422.
