CC BY
43
удк619615э Патоморфологическое исследование, проведенное при остром экспериментальном отравлении свиней триазоловым фунгицидом тритиконазолом
Р. Бинев, Р. Симеонов, Р. Тодоров, Ю. Николов, Тракийский университет, г. Стара Загора (Болгария)
Ключевые слова: свинья, токсичность, фунгициды Сокращения: ЛД^ - 50 %-я летальная доза; МТ - масса тела
Введение
Тритиконазол применяют для деконтаминации зерна от патогенных грибов. При скармливании корма, обработанного этим триазоловым фунгицидом, у животных может возникнуть интоксикация. Для белых крыс его ЛД50 при иероральном применении составляет 2000 мг/кг массы тела [15]. Описаны пато-морфологические изменения у мышей [8], крыс [12, 13], крупного рогатого скота [ 11 ] и кошек [9|, вызванные разными триа-золовыми фунгицидами — 3-амино-1,2,4-триазолом, тебукона-золом, триадименолом и тебуконазолом соответственно. В упомянутых публикациях отмечается, что триазоловые фунгициды в зависимости от дозы способны окалывать карциноген-ное, тератогенное и мутагенное воздействия на щитовидную железу 110, 12], половые железы [13|, вызывать дистрофические изменения в печени, легких [8, 9, 11 ] и почках [ 14], гиперемию и отек головного мозга и его оболочек [8, 13].
Упомянутые выше публикации и результаты клинических и лабораторных исследований, предварительно проведенных при остром отравлении птицы [ 1, 2, 3] и кроликов |4, 5, 6] триазоловыми фунгицидами диниконазолом и триадименолом, побудили нас провести патоморфологическое исследование при экспериментальном остром отравлении свиней тритиконазолом. При этом предполагалось изучить некоторые аспекты токсикодинамики и патогенеза данного токсикоза, имеющие важное значение для его диагностики, лечения и профилактики.
Материалы и методы
Экспериментальные животные. Опыт провели на 8 свиньях датской белой породы, обоего пола, в возрасте 3...4 мес, имевших МТ от 18 до 26 кг. За 30 дней до начала эксперимента животных разместили в индивидуальных боксах, в которых поддерживали стандартные условия содержания и гигиены. За 30 и 15 дней до начала опыта свиней дважды обработали против паразитов ивермектином (Альфамек, Вюрден, Голландия). Животным давали обычный рацион и не ограничивали доступ к воде в течение всего периода наблюдения.
Обработка. Острое отравление вызвали у свиней введением через зонд в желудок коммерческой суспензии Real 200 FS (Рон-Пуленк Агро, Лион, Франция), содержавшей 200 г/л тритиконазола.
Схема опыта. Свиней разделили на 4 равноценные группы (по общему количеству животных и числу свиней каждого пола): контрольную и 3 опытные (по 2 гол. в каждой). Животным 1-й, 2-й и 3-й групп ввели в желудок через зонд соответственно по 1 мл (эквивалентно 200 мг/кг тритиконазола или 0,1-й пероралыюй ЛД50 для крыс), 5 мл (эквивалентно 1000 мг/кг тритиконазола или 0,5 пероральных ЛД50 для крыс) и 10 мл (эквивалентно 2000 мг/кг тритиконазола или 1 пероральной ЛД50 для крыс) препарата Real 200 FS. Через 72 ч. всех свиней подвергли эвтаназии посредством внутривенного введения 10 мл смеси прокаина гидрохдлорида
(40 г), хлорида калия (5 г) и растворителя (Мсоуег, Болгария, до 100 мл). Провели полное вскрытие, при котором брали пробы внутренних органов для гистологического исследования. Их фиксировали 10 %-м нейтральным формалином, обезвоживали спиртом возрастающей концентрации, заливали парафином. Из заливок готовили тонкие (5 мкм) срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином.
Результаты
У свиней 1-й опытной группы выявили умеренный отек подкожной клетчатки на вентральной части брюшной стенки. 11ечень животных была рыхлой, бледно-желтой с темно-красными участками. На серозной поверхности поджелудочной железы обнаружили петехиальные кровоизлияния. Паховые и околопочечные лимфатические узлы оказались покрасневшими и почти вдвое увеличенными. Корковое вещество почек также было покрасневшим. Надпочечники и в меньшей степени щитовидную железу признали увеличенными. Сердце было бледно-серым и на поперечном разрезе сухим. Легкие имели тестообразную консистенцию и красно-вато-сипюю окраску. Отметили гиперемию кровеносных сосудов мягкой мозговой оболочки. В других органах патолого-анатомические изменения отсутствовали. При гистологическом исследовании в печени выявили гранулярную дистрофию гепатоцитов, активацию клеток Купффера и паренхиматозные кровоизлияния. Синусоидальные капилляры были расширены и в некоторых участках содержали пролифераты мононуклеарных клеток (рис. 1).
Рис. 1. Печень свиньи 1 -й опытной группы. Мононук-леарная пролиферация и гранулярная дистрофия гепатоцитов. Окраска гематоксилином и эозином. Шкала =30 мкм
В селезенке выявили подкапсульные кровоизлияния. Ме-зентериальные и околопочечные лимфатические узлы, почки (в большей степени корковое вещество), надпочечники, яичники (в них также имелся внутрифолликулярный отек), тес-тикулы (в области семявыносящих канальцев) и все доли гипофиза были гиперемированы. В легких обнаружили периб-ронхиальные очага пролиферации. В продолговатом мозге установили баллонирующую дистрофию глиальных клеток.
Патологоанатомические изменения у животных 2-й опытной группы включали петехиальные кровоизлияния в паренхиме печени, умеренное увеличение и покраснение ме-зентериальных, паховых, портальных и околопочечных лимфатических узлов, отек легких, гиперемию слизистой оболочки желудка. При гистологическом исследовании выяви-
ли гранулярную дистрофию печени, активирование клеток Купффера, сосудистую гиперемию, растяжение синусоидальных капилляров и пролиферацию мононуклеарных клеток в некоторых участках паренхимы. В селезенке обнаружили легкие подкапсульные кровоизлияния. В корковом слое паховых лимфатических узлов локализовались кровоизлияния и серозно-клеточный экссудат. В паренхиме почек отметили наличие очагов лимфоцитарной пролиферации, отек эндотелия околоканальцевых капилляров, пролиферацию клеток соединительной ткани и гранулярную дистрофию эпителиальных клеток проксимальных канальцев (рис. 2).
Рис. 2. Почка свиньи 2-й опытной группы. Моно-нуклеарная пролиферация в области почечных канальцев, отек околока-нальцевого эндотелия капилляров, пролиферация клеток соединительной ткани, гранулярная дистрофия проксимальных канальцев. Окраска гематоксилином и эозином. Шкала = 50 мкм
Легочные альвеолы были наполнены транссудатом, умеренно гиперемированы и содержали перибронхиальные лимфо-цитарные пролифераты. Гиперемию обнаружили также в гипофизе, яичниках и семенниках.
При вскрытии свиней 3-й опытной группы отметили умеренную желтушность фасций и апоневрозов. Печень была желтушной и рыхлой, портальные и мезентериальные лимфатические узлы увеличенными. Интенсивность желтушно-сти почек оценили как среднюю. Мягкая мозговая оболочка оказалась гиперемированной, а яичники атрофированными (мелкими и размягченными). При гистологическом исследовании установили гранулярную дистрофию печени. Мезентериальные лимфатические узлы имели признаки серозного воспаления. В паховых лимфатических узлах обнаружили
Рис. 3. Легкие свиньи 3-й опытной группы. Перибронхиальный мо-нонуклеарный пролифе-рат. Окраска гематоксилином и эозином. Шкала = 10 мкм
Рис. 4. Продолговатый мозг свиньи 3-й опытной группы. Баллониру-ющая дистрофия гли-альных клеток. Окраска гематоксилином и эозином. Шкала = 30 мкм
интенсивную гиперемию и петехиальные кровоизлияния. Кровеносные сосуды почек были гиперемированы. Констатировали наличие петехиальных кровоизлияний и дистрофических некробиотических изменений эпителиальных клеток почечных канальцев. В легких локализовались многочисленные очаги перибронхиальных лимфоцитарных пролифе-ратов (рис.3). 13 продолговатом мозге выявили баллонирующую дистрофию глиальных клеток (рис. 4).
Обсуждение
Патоморфологические изменения, обнаруженные у свиней после введения в желудок через зонд повышающихся доз тритиконазола (эквивалентных 0,1; 0,5 и 1,ОЛД50 для белых крыс), показали, что данный триазоловый фунгицид оказывает токсическое действие почти на все внутренние органы. Изменения печени (гранулярная и начальная стадии токсической дистрофии) соответствовали повреждению этого органа средней тяжести. Аналогичные изменения описаны у крупного рогатого скота [11] и крыс [7] после интоксикации, вызванной триадименолом. У птицы и кроликов, обработанных диниконазолом [5, 6] и триадименолом |3], дистрофия печени и желтушность подкожной клетчатки сочетались с биохимическими изменениями крови (би-лирубинемией, гипергликемией, повышением концентрации пируватов, аспартат и аланин аминотрансфераз, лак-татдегидрогеназы и др.). Изменения головного мозга (сосудистая гиперемия и баллонирующая дистрофия глиальных клеток), по всей видимости, служили причиной неврологических нарушений (судорог, некоординированных движений, атаксии, пареза, паралича и т.д.) у крыс |8, 13], птицы [ 11 и кроликов [4].
Гистологическое исследование паренхимы почек показало, что тритиконазол в низкой дозе (0,1 ЛД50) вызывает только гиперемию. В высоких дозах (0,5 и 1,0 ЛД50) этот токсический препарат индуцирует более тяжелую гиперемию, а также пролиферацию лимфоцитов, петехиальные кровоизлияния и дистрофические изменения эпителиальных клеток почечных канальцев. Выявленные изменения были сходны с поражениями, вызываемыми препаратом у японских перепелок [14]. У этого [14] и других видов птицы [2], а также кроликов [5] повреждение паренхимы печени, вероятно, стало следствием функциональных нарушений (повышения в крови концентрации мочевины, креатинина и мочевой кислоты).
Изменения паренхимы легких (гиперемия, отек, кровоизлияния, перибронхиальная лимфоцитарная пролиферация и др.), безусловно, были вызваны токсическим действием тестированного препарата. Клинически они проявлялись у крупного рогатого скота 111|, птицы [1], кроликов [4], мышей, крыс и людей 110| одышкой и учащенным дыханием.
Гиперемия слизистой оболочки желудка, предположительно, была вызвана раздражающим действием препарата, о чем свидетельствуют сопутствующие лейкоцитоз и нейтрофилия [4], а также гиперплазия лимфатических узлов.
Токсическое действие тритиконазола у крыс проявляется выраженными морфологическими изменениями (гиперемией, кровоизлияниями, пролиферацией лимфоцитов и отеком) щитовидной железы, гипофиза, надпочечников и половых желез [8|. В наших экспериментах кровоизлияния находили в большинстве внутренних органов (сердце, селезенке, лимфатических узлах и т.д.), что, вероятно, послужило причиной олигохромемии, эритропении, пониженных гематок-рита и СОЭ у птицы [1], крупного рогатого скота [11], крыс [8] п кроликов [4].
Анализ патоморфологических изменений у свиней, обработанных разными дозами тритиконазола (эквивалент-
ных 0,1; 0,5 и 1,0 ЛД50 для белых крыс) показал, что их тяжесть не находилась в абсолютной зависимости от дозы. С патогенетической и патологоанатомической точек зрения токсическое действие препарата в основном проявлялось поражениями печени, легких, почек, лимфатических узлов, щитовидной железы, гипофиза, надпочечников и половых желез. Изменения печени, почек, лимфатических узлов и головного мозга служат основными признаками интоксикации.
БИБЛИОГРАФИЯ
1. Binev R. Clinical and experimental studies on acute intoxication with the triazole fungicide dlniconazole in birds. I. Clinical and paraclinical studies. Vet Med, 2000, 1, 44-48.
2. Binev R. Clinical and experimental studies on acute intoxication with the triazole fungicide diniconazole in birds. II. Biochemical studies. Vet Med, 2000, 1, 49-52.
3. Binev R Clinical and haematological studies on the acute poisoning with the triazole fungicide Baytan (triadimenol) in hens. In: Proceedings of the Sci Confer -Ecology and Health, 2000», House of Sci & Techn, Agricult Univ, Plovdiv, 2000, 1, 131-134.
4. Binev R. Clinical and experimental studies on acute poisoning with the triazole fungicide diniconazole (Sumi 8 2WP) in rabbits. I. Clinical and haematological studies. Bulg J Vet Med, 2001, 4. 2, 103-114.
5. Binev R. Clinical and experimental studies on acute poisoning with the triazole fungicide diniconazole (Sumi 8 2WP) in rabbits. II. Biochemical studies. Bulg J Vet Med, 2002, 5, 3, 179-188.
6. Binev R. Clinical and experimental studies on acute poisoning with the triazole fungicide diniconazole (Sumi 8 2WP) in rabbits. III. Studies upon the activity of some enzymes. Bulg J Vet Med, 2002, 5, 4, 253-259.
7. Chabra R., Maronpot R„ Bucher J. et al. Toxicology and carcinogenesis studies of pentachloro-phenol in rats. Toxicol Sci, 1999, 48, 14-20.
8. Filipov N., Lawrence D. Developmental toxicity of a triazole fungicide: Consideration of interorgan communication. Toxicol Sci, 2001, 62, 2, 339-352.
9. KurumbaevY.K., Kulyakova S.O., Sanotskaya N.V., Aleynikov S.O. Patho-morphological study of lungs in feline pneumonia model. Bull Exper Biol & Med, 1996. 1, 103-104.
10. Machera K. The studies on the effects of triazole fungicides: Cyproconazole, flusilazole, 1,2,4-triazole and propiconazole. Bull Envir Contamin Toxicol, 1995, 54, 3613-369.
11. MarkelovM.Y. Shormanov V.K. Distribution of the pesticide Baytan and its primary metabolite (DTChB) in warmblooded animals. Pharmacia, 1994, 6, 16-19.
12. MayberryW.E. Antithyroid effects of 3-amino-1,2,4-triazole. Exper Biol & Med, 1968,129,551-556.
13. Moser V., Barone S., Smialowicz R.et al. The effects of perinatal tebuconazole exposure on adult neurological, immunological and reproductive function in rats. Toxicol Sci, 2001, 62, N» 2, 339-352.
14. Ronis N.J., Celander M., Badger T.M. Cytochrome P450 enzymes in the kidney of Bobwhite quail (Colinus virginianus): Induction and inhibition by ergosterol biosynthesis inhibiting fungicides. Compar Biochem & Physiol C - Pharm, Toxicol & Endocrinol, 1998, 121, 1-3, 221-229.
15. Sengalevich G., TonevT., NikolovA. Manual for Application of Chemicals in Plant Protection. Higher Agricultural Institute, Plovdiv, 1998.
SUMMARY
R. Binev, R. Simeonov, R. Todorov, Y. Nikolov. Patho-morphological studies following experimental acute intoxication with the triazole fungicide triticonazole in pigs. Bulg J Vet Med, 2005, 8, 3, 193-198.
The gross and microscopic pathomorphologies changes in internal organs were investigated for evaluation of the toxic effect of the triazole fungicide triticonazole. One control and three experimental groups of pigs, treated orally via a gastic tube at doses of 0.2 g/kg (group I), 1 g/kg (group II) and 2 g/kg (group III) (0.11Dso, O.5LD50 and LD50 respectively) were used. The pigs were euthanized 72h after the treatment, a complete necropsy was performed and material for histological study was obtained. It was found out that the toxic effect of the triazole fungicide resulted in morphological changes in the liver (mononuclear proliferation, granular and initial toxic dystrophy), in lungs (peribronchial mononuclear proliferates), in lymph nodes (haemorrhages and lymphatic follicle activation), in pituitary gland (hyperaemia), in medulla oblongata (ballooned dystrophy of glial cells), in stomach (hyperaemia of gastric mucosa) and in kidneys (mononuclear proliferations among tubules and among nephrons).
Калейдоскоп
• В лаборатории технологий репродукции (Кремона, Италия) клонировано 14 поросят. У клонированных животных изучают механизмы дифференциации стволовых клеток.
• Осенью прошлого года в Китае и в январе 2006 г. в Конго зарегистрировали вспышки неизвестной болезни, унесшей жизни нескольких десятков людей и большого количества свиней (по данным American Association of Swine Veterinarians).
• В последние годы в свиноводческих хозяйствах США участились случаи колита, вызванного Clostridium difficile. Болезнь развивается у поросят в первые 5 дней жизни и проявляется одышкой, растяжением брюшной стенки, отеком мошонки И диареей [G. Songer. The emergence of Clostridium difficile as a pathogen of food animals. Anirn Health Res Rev. 2004. 5, 2, 321-326].
• В Корнуэльском университете (США) разработана ген-ноннженерная технология аттенуации серовара Choleraesuis Salmonella enterica для приготовления вакцин |KuY.w„ McDonough S.P., Palaniappan R.U. et al. Novel attenuated Salmonella cnterica serovar Choleraesuis strains as live vaccine candidates generated by signature-tagged mutagenesis. Infect Immun, 2005, 73, 12, 194-203|.
• Добавление нового полимера CHEMYDE в корм или воду, предназначенные для поросят, предотвращают распространение на свинофермах (З-гемолитических штаммов кишечной паЛОЧКИ [D.J. Hampson, J.R. Buddie, G.J.H. MELROSE. Evaluation of a novel antimicrobial polymer for the control of porcine postweaning colibacillosis. Aust Vet J, 2000, 78, 117-120].
• Специалистами компании Интервет (Нидерланды) разработана новая вакцина против колибактериозной диареи новорожденных поросят. Препарат готовят из очищенных фимбриальных антигенов (F4ab, F4ac, F5 и F6) и инактиви-рованного термолабильного токсина LT кишечной палочки
[RiisingH.J., Murmans М„ Witvliet М. Protection against neonatal Escherichia coli diarrhoea in pigs by vaccination of sows with a new vaccine that contains purified enterotoxic E. coli virulence factors F4ac, E4ab, F5 and F6 fimbrial antigens and heat-labile E. coli enterotoxin (LT) toxoid. J Vet Med В Infect Dis Vet Public Health, 2005, 52, 6, 296-300].
• Спорынья (Claviccps africana) вызывает у свиней ано-рексию и снижение молочной продуктивности. Многие поросята погибают [ Blaney B.J., McKenzie R.A., WaltersJ.R. et al. Sorghum ergot (Claviceps africana) associated with agalactia and feed refusal in pigs and dairy cattle. Aust Vet J, 2000, 78, 102-107].
• В лаборатории Пирбрайт (Великобритания) завершена расшифровка генома вируса африканской чумы свиней.
• В корпорации Синбиотикс (США) начато промышленное производство набора диагностикумов для обнаружения антител к цирковирусу поросят типа 2 в иммуноферментном анализе |L.C. Ming, Tlhara, Т. Nunova, S. Ueda. Development of an ELISA based on the baculovirus-expressed capsid protein of porcine circovirus type 2 as antigen. J Vet Med Sci, 2004, 66, 3, 237-242].
• Обнаружение в ПЦР гена гликопротеина В (gB) вируса болезни Ауески в нервной ткани свиней позволяет изучать локализацию возбудителя и диагностировать латентные формы инфекции [Yoon Н.А., Ео S.K., Aleyas A.G. et al. Molecular survey of latent pseudorabies virus infection in nervous tissues of slaughtered pigs by nested and real-time PCR. J Microbiol, 2005, 43, 5, 430-436].
• Специалисты Лейпцигского университета (Германия) установили, что широта распространения Т. gondii среди животных 4-х обследованных свиноферм варьирует от 0 до 15,2%, составляя В среднем 5,6%. ISchulzigH.S., Fehlhaber К.
Longitudinal study on the seroprevalence of Toxoplasma gondii infection in four German pig breeding and raising farms. Berl Munch Tierarztl Woch, 2005, 118, 9— 10, 399-403].
