CC BY
19
УДК 616-001.4-003.93 -092+617-089.168.1-089-4
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РЕГЕНЕРАЦИИ РАН ПРИ МЕСТНОМ ПРИМЕНЕНИИ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА а2р В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
1 Жмайлик Р.Р.
2Научный руководитель - д.м.н., профессор Богдан В.Г
1УЗ «Волковысская центральная районная больница», Беларусь 231900, г. Волковыск, ул. Социалистическая, 64 Ruslan15_92@mail.ru - Руслан Жмайлик
2 военно-медицинский факультет в УО «Белорусский государственный медицинский университет», Беларусь, 220116, г. Минск, пр-т Независимости,71
Резюме целью исследования было оценить морфологические изменения, происходящие при использовании рекомбинантного интерферона а2в при заживлении острой раны. В эксперименте на белых крысах проводилось моделирование кожного дефекта. В зависимости от характера лечения раны, подопытные животные были поделены на две группы: в контрольной группе края раны обкалывали 0,9% раствором NaCl, в опытной группе -рекомбинантным интерфероном а2в в дозе 1000МЕ, разведённым 0,9%раствором NaCl. Крыс выводили из эксперимента на 4, 8 и 20-е сутки исследования, затем забирали полнослойный кожный лоскут в области дефекта/рубца, который исследовался гистологически. При этом оценивали в балльной шкале интенсивность формирования грануляционной ткани, ее «созревание», а также в краях и дне раны в абсолютных значениях подсчитывались клеточные популяции, реализующие процесс воспаления. Полученные результаты свидетельствуют о морфологической обоснованности применения рекомбинантного лейкоцитарного интерферона а2в в качестве стимулятора фазы воспаления, т.к. на фоне использования данного вещества отмечена его способность усиливать фагоцитоз.
Ключевые слова: полнослойный кожный дефект, рекомбинантный интерферон а2$, острая рана.
PATHOMORPHOLOGICAL PECULIARITIES OF REGENERATION OF WOUNDS IN LOCAL USE OF RECOMBINANT INTERFERON a2p IN EXPERIMENT 1Zhmailik R.R.
Scientific adviser — professor Bogdan V.G., Doctor of Medicine
1UZ "Volkovysk Central Regional Hospital", Belarus 231900, Volkovysk, ul. Socialist, 64. 2Military-medical faculty in the Belarusian State Medical University, Belarus, 220116, Minsk, av. Nezavsimosti, 71.
Summary. The aim of the study was to evaluate the morphological changes that occur when recombinant interferon a2fi is used in the healing of an acute wound. In an experiment on white rats, a skin defect was modelled. Depending on the nature of the treatment of the wound, the experimental animals were divided into two groups: in the control group of animals, the edges of the wound were struck with 0.9% NaCl solution, in the experimental group, recombinant interferon a2fi - at a dose of 1000 IU diluted with 0.9% NaCl solution. Rats were excised from the experiment on days 4, 8 and 20, then a full-thickness skin flap was taken in the defect / scar area, which was examined histologically. At the same time, the intensity of formation of the granulation tissue, its "maturation", and also in the edges and bottom of the wound were estimated in absolute terms in the absolute values, the cellular populations realizing the process of inflammation were counted. The obtained results testify to the morphological validity of the use of recombinant leukocyte interferon a2fi as a stimulant of the inflammation phase. Against the background of the use of this substance, its ability to enhance phagocytosis is noted.
Key words: full-thickness skin defect, recombinant interferon a2fi, acute wound.
Введение. Комплексная теория заживления ран, сформированная в настоящее время на основании научной и технической баз современной медицинской науки, подразумевает многофакторное влияние на процесс заживления. Одной из наиболее бурно развивающейся области современной вульноологии является -использование иммунологических тканевых компонентов, как собственного организма, так и принесенного извне [1,2]. Продолжается широкий поиск
лекарственных средств и медицинских технологий, позволяющих оказывать позитивное влияние на динамику раневого процесса. Цитокины, и в частности интерфероны, являются ключевыми элементами локального (раневого) иммунного статуса, обладающими многофакторным действием на активность регенеративных процессов. Проведенные исследования позволили установить наличие антифиброгенного эффекта при локальном использовании интерферона а2р в фазу ремоделирования [5]. Вместе с тем результаты морфологических изменений в тканях в условиях применения интерферона а2р при заживлении острой раны в фазы воспаления и пролиферации в доступной нам литературе отсутствовали.
Цель: провести анализ влияния локального применения интерферона а2р на динамику морфологических изменений при заживлении острой раны в эксперименте.
Материалы и методы. Действие рекомбинантного лейкоцитарного
интерферона а2Ь изучали в эксперименте т у1уо на 30 белых беспородных крысах (самки 6-месячного возраста с массой тела 275+55 г). Эксперимент выполнен в соответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Животные содержались в условиях вивария УО «Гродненский государственный медицинский университет» с соблюдением Кодекса гуманного обращения с животными и их утилизации. Для проведения наркоза использовали диэтиловый эфир, подача которого осуществлялась ингаляционным
способом по закрытому контуру. В межлопаточной области крысы после удаления шерсти и обработки кожи 70% спиртом производили рассечение скальпелем поверхностных тканей с последующей остановкой капиллярного кровотечения и подшиванием
предохранительной камеры,
препятствующей контракции раны. В соответствии с целью эксперимента животные были разделены на 2 группы. В группе контроля проводили однократное обкалывание краев раны физиологическим раствором в объеме до 1 мл. В опытной (основной) группе осуществляли инъекционное введение по периметру раны 1 мл/1000МЕ раствора рекомбинантного лейкоцитарного интерферона a2b, разведенного в 0,9% растворе хлорида натрия. Всем животным на поврежденный участок накладывали стерильную повязку. Перевязки проводили через день. Животных выводили из эксперимента путем декапитации под наркозом на 4, 8 и 20-е сутки после моделирования раны (по 5 крыс в каждой группе в период времени). Сроки выведения из эксперимента выбрани в соответствии со временем протекания фаз раневого процесса [1-4]. Полнослойный кожный лоскут в области раны/рубца с прилежащими тканями, полученный после вывода животных из эксперимента, фиксировали в 10% забуференном нейтральном формалине не менее 24 часов после стандартной проводки с окраской гематоксилином и по Ван-Гизону на микроскопе «Axiostarplus» (CarlZeiss, Germany), соединенным с видеокамерой «Progres C10 Plus» (JenoptikJena, Germany). Цифровые данные обрабатывались с помощью пакета прикладных программ Statistica 6.0. Оценку нормальности распределения выборок осуществляли с помощью критерия Shapiro-Wilk (для небольших выборок). Для описания количественных показателей использовали медиану значений и 25-й и 75-й процентили. Для описания сравнения двух независимых выборок был использован тест Манна-
Уитни (Mann - Whitney U test). Различия считали статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты и обсуждение.
Морфологическое исследование краев и дна раны, в группе животных, выведенных из эксперимента на 4-е сутки со дня моделирования острой раны, выявило отсутствие выраженной эпителизации у животных обеих групп. Однако начальные проявления эпителизации достоверно более выражены в группе «опыт», чем в группе «контроль» U = 46, при р = 0,012. В группе «опыт» Me 1,0 (1,0;2,0) отмечается достоверно, более выраженное развитие грануляционной ткани U = 1,0, при р=0,022, чем в группе контроль Me 0,0 (0,0;0,0). Для остальных морфологических изменений (некроз, отек, отложение коллагена и формирование просветов сосудов) значимых статистических различий выявлено не было. Статическое исследование выявило значимо большее количество моноцитов и макрофагов в дне раны в контрольной группе Me 16,5 (8,5;23,5) в этот период U=147,00, при р=0,019, по сравнению с «опытной» Ме 6,0 (3,0;16,0). Интересной особенностью стало обнаружение в дне раны опытной группы макрофагов, в то время как в контрольной группе определяются лишь их предшественники -моноциты. Все это говорит о положительном влиянии интерферона a2b на фагоциты и более раннюю активацию макрофагов. Это же косвенно подтверждается обнаружением единичных гигантских многоядерных клеток
(производных макрофагов) в краях раны опытной группы в эти сроки. Исследование материала на 8-е сутки от начала эксперимента выявило полное очищение ран от некроза в обеих группах. В контрольной группе отмечено начало «созревания» грануляционной ткани с редукцией новообразованных сосудов, в то время как в опытной группе этого не происходило. В опытной группе визуализировались морфологические
признаки кровотечения из раны в виде
скопления лизированных эритроцитов на поверхности дефекта, что отмечалось при перевязках, и связано с замедлением эпителизации и бурным развитием грануляционной ткани. Статистическое исследование выявило значимое различие между исследуемыми группами по количеству нейтрофильных гранулоцитов в краях раны U = 203,00, при р = 0,034, Опыт Ме 22,0 (14,0;28,0); Контроль Ме 8,0 (3,0;25,0)
При макроскопической оценке ран опытной группы было отмечено их заживление на 18-е сутки, по сравнению с группой контроля - 20-е сутки с момента создания кожного дефекта.
Микроскопическое исследование выявило отсутствие эпителизации в опытной группе, при этом у животных контрольной группы рана эпителизирована во всех случаях на всём протяжении. Также обращает на себя внимание отсутствие «созревания» грануляционной ткани в опытной группе с явлениями редукции сосудов и клеток фибробластного ряда и отложения коллагена (в контрольной группе в это время определяются сформированные
малоклеточные соединительнотканные
рубцы). Вероятно, избыточное развитие грануляционной ткани с отсутствием ее созревания не позволяет эпителию прочно фиксироваться на поверхности дефекта, с связи с чем он удаляется при перевязках, способствуя прогрессированию
воспалительного процесса в ране. Гранулемы на этом этапе чаще встречались в группе, получавшей интерферон а2К Статистически значимых различий при сравнении вышеописанных параметров выявлено не было.
Выводы
1. Местное применение
рекомбинантного лейкоцитарного
интерферона а2в при моделировании острой раны в эксперименте создает условия для возможной активации фагоцитоза путём активации макрофагального звена иммунитета.
2. Использование интерферона в фазу пролиферации характеризуется
торможением созревания грануляционной ткани и отложения коллагена, что может использоваться для профилактики у пациентов со склонностью к формированию гипертрофических рубцов.
Литература
1. Абаев Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция. - Ростов. Феникс, 2006. -427 с.
2. Ершов Ф.И., Наровлянский А.Н. Основные итоги изучения системы интерферона к 2011 году. - Интреферон, 2011. - М. 2011. - 14-34 с.
3. Ковальчук, Л.В., Ковальчук Л.В., Игнатьева Г.А., Ганковская Л.В. Иммунология. - М.: ГЭОТАР-медиа, 2012. - 640 с.
4. Кузин, М.И. Патогенез раневого процесса и общие принципы лечения ран /М.И. Кузин //Современные методы активного хирургического лечения гнойных ран и острых гнойных хирургических заболеваний. - Ярославль, 1990. - С. 1-6 с.
5. Arias JI, Aller MA, Arias J. Surgical inflammation: a pathophysiological rainbow. // J. Transl. Med. - 2009. - V.19, N7. - Р. 432-438.
