CC BY
88 (4722) 26-29-75. e-mail: veter@belnet.ru
Владимир Николаевич Скворцов, д. вет. н., зав. Белгородским отелом Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. Адрес: Россия, 308002 г. Белгород, ул. Курская, 4. Тел. 8-4722-26-29-75. e-mail: veter@ belnet.ru
Стопкевич Ольга Владимировна - соискатель Белгородского отдела ВИЭВ. Адрес: Россия, 308002 г. Белгород, ул. Курская, 4. Тел. 8 (4722) 26-29-75. e-mail: veter@belnet.ru
УДК 636.5:611.36:619:616.98
Громов И.Н., Селиханова М.К., Алиев А.С., Бурлаков М.В., Таймасуков А.А.
(Витебская государственная академия ветеринарной медицины, Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, компания «Кубаньптицепром»)
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ЦЫПЛЯТ ПРИ АССОЦИАТИВНОМ ТЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ И ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ
Ключевые слова: цыплята, патоморфологические изменения, инфекционная анемия, костный мозг, тимус, бурса Фабрициуса, селезенка, печень
Введение. В последнее время проблема смешанных инфекций в про-мышленном птицеводстве приобретает чрезвычайную актуальность в связи с возрастающей частотой выявления такой формы патологии. Смешанные вирусные и вирусно-бак-териальные инфекции не только затрудняют постановку диагноза, но и заметно снижают эффективность проводимых про-тивоэпизоотических мероприятий, нанося при этом существенный экономический ущерб птицеводческой индустрии [3, 8]. Выраженная полиэтиологичность, широко распространенная одновременная циркуляция возбудителей вирусной и бактериальной природы и их накопление во внешней среде, высокая концентрация птицы на ограниченной территории и конвейерная технология производства закономерно приводят к возникновению новых взаимоотношений между макро- и микроорганизмами, а также способствуют естественному пассированию микроорганизмов и усилению их патогенных свойств. Все вышеперечисленное создает весьма благоприятные условия для возникновения инфицирования организма птицы возбудителями нескольких инфекций [1, 2, 3, 5]. Однако взаимодействие различных возбудителей и вы-
зываемые ими в организме птиц патологические процессы при ассоциированном течении до сих пор не изучены. Существует ряд работ, как правило, зарубежных исследователей, посвященных изучению патогенеза, патоморфологических изменений во внутренних органах цыплят, отмеченных при инфекционной анемии (ИАЦ). Однако многие аспекты указанных проблем нуждаются в до-полнительных исследованиях. Так, например, имеющиеся одиночные со-об-щения зарубежных авторов о динамике патоморфологических изменений при инфекционной анемии цыплят охватывают незначительный срок наблюдения. Кроме того, в настоящее время имеются неполные и не систематизированные сведения по дифференциальной патоморфологиче-ской диагностике инфекционной анемии и других вирусных болезней.
Целью наших исследований явилось изучение особенностей патомор-фологиче-ского проявления инфекционной анемии цыплят при ассоциатив-ном течении с инфекционной бурсальной болезнью (ИББ).
Материал и методы исследований. В качестве материала для исследований использовали патологический материал (трупы цыплят 8-30-дневного возраста, ку-
сочки органов) отобранных в птицефабриках мясного направления. Согласно анамнестическим данным, в хозяйствах наблюдается повышение заболеваемости и падежа птиц различных возрастных групп. Клинически у заболевших птиц отмечалось отставание в росте и развитии, взъе-рошенность перьевого покрова, апатия, общая анемия. Данные патологоанатоми-ческого вскрытия: постовариальная гипотрофия, дистрофия печени и почек, острая венозная гиперемия легких, признаки анемии. В хозяйствах, откуда поступила павшая птица, проводилась плановая профилактическая иммунизация против болезней Марека и Ньюкасла, инфекционного бронхита и ИББ. Цыплята были получены от родителей, иммунизированных живой вакциной против ИАЦ.
При вскрытии трупов цыплят учитывали характер и тяжесть патоморфологиче-ских изменений, оформляли патологоана-томический диагноз. Для гистологического исследования отбирали кусочки трубчатых костей, тимуса, фабрициевой бурсы, селезенки и печени. Полученный мате-ри-ал фиксировали в 10%-ном растворе формалина. Зафиксированный материал подвергали уплотнению путем заливки в парафин по общепринятой методике, а также замораживанием [6]. Обезвоживание и па-рафинирование материала проводили с помощью автомата для гистологической обработки тканей «MICROM STP 120». Для заливки кусочков и подготовки парафиновых блоков использовали автоматическую станцию «MICROM ЕС 350». Гистологические срезы кусочков органов, залитых в парафин, готовили на роторном микротоме «MICROM НМ 340 Е». Для изучения общих структурных изменений срезы окрашивали гематоксилин-эозином [4, 7].
Одновременно у цыплят разновозрастных групп отбирали сыворотки крови для определения уровня специфических антител к вирусам инфекционной анемии и болезни Гамборо. Сыворотки крови тестировали с помощью ИФА (ВюСЬек) согласно Наставлениям к наборам диагностикумов.
Выделение суммарной ДНК из гомоге-ната органов проводили методом фенол-хлороформной экстракции (рН=7,8) [9]. Количественное определение ДНК возбудителя ИАЦ проводили с помощью ПЦР в реальном времени на амплификтато-ре «АНК», используя "Набор для выявления вируса инфекционной анемии цыплят (количественный)" (ООО "Фрактал Био" г. Санкт-Петербург) в соответствии с ин-
струкцией к набору.
Результаты исследований и их обсуждение. Серологическое иссле-дование показало (таблицы 1, 2), что максимальные значения титров антител к вирусу ИАЦ (2656) регистрировались у 8-дневных цыплят (78,3% положительных проб). У 13-дневных цыплят содержание антител к вирусу ИАЦ уменьшалось до уровня 1352 (41,5% положительных проб), а в возрасте 20-30 суток - до уровня 217-255 (4,2% положительных проб). При изучении напряженности иммунитета к вирусу ИББ были установлены волнообразные изменения титров специфических антител.
Так, у 8-суточных цыплят данный показатель составлял 4071 (91,7% положительных проб), а в 14-дневном возрасте - лишь 1530 (100% положительных проб). Значительное повышение титров специфических антител к вирусу ИББ (до уровня 4387 - 3566) регистрировалось у 19- и 29-дневных цыплят (соответственно 37,5% и 91,6% положительных проб). При проведении ПЦР было установлено (таблица 1), что максимальная концентрация генома возбудителя ИАЦ отмечалась у 29-дневных цыплят, а минимальная - в 13-дневном возрасте.
При осмотре трупов и вынужденно убитых птиц в 100% случаев выявлялись атрофия и ожирение долек тимуса, атрофия и склероз Фабрициевой бурсы. Примерно у 30% птиц находили бурсальные кисты, заполненные слизеподобным чаще прозрачным и реже - красноватым содержимым.
При гистологическом исследовании органов и тканей больных цыплят разновозрастных групп выявляются существенные признаки, свидетельствующие о латентном течении инфекционной анемии с наслоением в 20-30-дневном возрасте инфекционной бурсальной болезни.
В костном мозге цыплят всех возрастных групп морфологических изменений установлено не было (рисунок 1). При изучении тимуса 9-дневных цыплят в 50% случаев регистрировались признаки акциден-тальной инволюции: резкое уменьшение размеров долек, выраженная делимфати-зация коркового вещества (граница между корковым и мозговым веществом нечеткая), увеличение числа телец Гассаля в корковом и мозговом веществе (рисунок 2). В бурсе Фабрициуса 60-70% птиц наблюдалось истончение складок слизистой оболочки, значительное уменьшение размеров лимфоидных узелков с резким утолщением межузелковых перегородок (рисунок 3), уменьшение плотности располо-
Таблица 3. Концентрация генома вируса ИАЦ в разных органах цыплят-бройлеров на грамм ткани).
Таблица 1. Содержание специфических антител к вирусу ИАЦ в сыворотке крови цыплят-бройлеров._
№ Возраст Кол- Положи- % по- Средний Мин. Макс. Коэффициент
п/п (сут.) во проб тельные ложительных титр корреляции
1 8 23 18 78,3 2656 430 8840 96
2 13 24 10 41,5 1352 72 9023 142
3 19 24 1 4,2 255 21 1130 128
4 29 24 1 4,2 217 67 1116 103
Таблица 2. Содержание специфических антител к вирусу ИББ в сыворотке крови цыплят-бройлеров. _____
№ Воз- Кол-во проб % по- Сред- Мин. Макс. Коэффициент
п/ раст ложи- ний корреляции
п (сут.) Всего Полож. тельных титр
1 8 23 22 91,7 4071 184 10287 61
2 13 24 24 100,0 1530 513 5302 90
3 19 24 9 37,5 4387 45 14080 168
4 29 24 22 91,6 3566 45 8738 136
№ Возраст Кол-во Тимус Селезенка Фабрициевая Печень
п/п (сут.) птиц сумка
1 20 10 6,0±0,12 5,5±0,18 5,5±0,14 5,5±0,28
80,0% 60,0% 70,0% 50,0%
2 30 10 10,5±0,34 7,0±0,42 10,5±0,28 6,0±0,15
100% 80,0% 90,0% 40%
3 14 10 4,5±0,40 4,0±0,4 4,0±0,34 4,0±0,4
40,0% 10,0% 20,0% 10,0%
4 9 10 4,5±0,24 4,5±0,54 5,5±0,46 4,0±0,42
60,0% 30% 40% 30%
жения лимфоцитов в узелках, выраженная инфильтрация интерстициальной ткани лимфоцитами, гистиоцитами, в меньшей степени - эозинофилами. У многих цыплят к 9-дневному возрасту развивались выраженная делимфатизация белой пульпы селезенки, особенно в подкапсулярных пространствах, с обнажением ретикулярной ткани (рисунок 4). Нередко выявлялись признаки некроза, лизиса и петрификации лимфоидных узелков (рисунок 5). Указанные изменения характерны для латентного течения ИАЦ. В печени цыплят выявлялись выраженная зернистая и мелкокапельная жировая дистрофия с набуханием цитоплазмы и ядер гепатоцитов, венозная гиперемия, отек, умеренная лимфоцитар-ная инфильтрация, слабовыраженный ге-мосидероз, в отдельных гепатоцитах - внутриядерные базо - и оксифильные тельца-включения.
В тимусе цыплят 14-дневного возраста происходило расширение мозгового веще-
ства долек, истончение и деструкция коркового вещества. Нередко наблюдалась выраженная атрофия органа с явлениями организации и ожирения (рисунок 6). В красной пульпе селезенки отдельных птиц выявлялись ареактивные микронекрозы.
В печени цыплят отмечались тотальная зернистая и мелкокапельная жировая дистрофия с явлениями некробиоза и лизиса гепатоцитов, диффузная инфильтрация печеночных долек лимфоцитами, лимфо-идно - макрофагальные и эозинофильные гранулемы в строме и паренхиме (рисунки 7, 8). В этот и последующие сроки исследований в отдельных гепатоцитах выявлялись внутриядерные базо - и оксифильные тельца - включения.
К 20-дневному возрасту в тимусе большинства цыплят-бройлеров развивалась выраженная гиперплазия с резким расширением коркового вещества (рисунок 9). На наш взгляд, этот процесс имел компенсаторно-приспособительное значение. В
Рисунок 1. Участки эритроидного (1), лимфоидного (2) и миелоидного (3) кроветворения в костном мозге цыпленка 9-дневного возраста. Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
2
2
1
' Ш
Рисунок 3. Бурса Фабрициуса цыпленка 9-дневного возраста. Атрофия лимфоидных узелков (1), резкое утолщение межузелковых перегородок (2). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 120
* ч л'* д г* • : и ... 1 ^ »- * • ^
(Ь ? Г» - /^^ « ><
и 1 •
'¿¿Л * тЩГ. х' * »* X к
Рисунок 5. Некроз и петрификация лимфоидных узелков (1) в селезенке 9-дневного цыпленка. Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
3
1
3
' . 2
1
Рисунок 7. Печень цыпленка 14-дневного возраста. Жировая дистрофия гепатоцитов (1), некроз и лизис клеток (2), внутриядерные тельца-включения (3). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
бурсе Фабриция развивались изменения, характерные для подострого и хронического течения ИББ: выраженная делим-
Рисунок 2. Тимус 9-дневного цыпленка. Делимфати-
зация коркового вещества долек (1), увеличение числа телец Гассаля (2). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 120
2
2
1
Рисунок 4. Делимфатизация белой пульпы (1) с обнажением ретикулярной ткани (2) в селезенке 9-суточного цыпленка. Гематоксилин-эозин. Микро_фото. Ув.: х 480 _
Л - Ч г , ' '2
\ <
■¿г
Рисунок 6. Атрофия тимуса 14-суточного цыпленка с явлениями организации (1) и ожирения (2). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 120
1
1 .
Рисунок 8. Лимфоидные пролифераты (2) в печени цыпленка 14-дневного возраста. Мелко-и крупнокапельная жировая дистрофия гепатоцитов (1) Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
фатизация корковой, и, особенно, мозговой зон лимфоидных узелков с обнажением ретикулярной и эпителиальной основы
МЕНЯЯ
"МI
ш
ШММЯм
М
Рисунок 9. Гиперплазия коркового вещества долек тимуса 20-дневного цыпленка (1). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 120
Рисунок 13. Фабрициева бурса цыпленка 30-дневного возраста. Тотальный апоптоз лимфоцитов. Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
Рисунок 15. Микронекрозы (1) в лимфоидных узелках фабрициевой бурсы 30-дневного цыпленка. Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
Рисунок 10. Бурса Фабрициуса 20-дневного цыпленка. Появление структур типа «пчелиных сот» (1). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
з
2
7
? **** V .
• 4 V *• 'л
2
»5
3 ' 1
ЖИЖ " ■ ЯР . V ■л
Рисунок 11. Фабрициева бурса цыпленка 20-дневного возраста. Выражены процессы организации (1). Появление желез на месте лимфоидных узелков (2). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 120
Рисунок 12. Печень цыпленка 20-дневного возраста. Тромбоз синусоидных капилляров (1), некроз гепа-тоцитов (2), набухание Купферовских клеток (3). Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
Г
! Й.'' Л
ф:
с Лч
Э • -
•/А V-
Рисунок 14. Делимфатизация корковой (1) и мозговой зон (2) лимфоидных узелков в фабрициевой бурсе 30-дневного цыпленка. Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
* / Н I ' 2
• 2
• 1 .. Л
■1, '
■ - ^
':Т .V . '
л«
Рисунок 16. Делимфатизация (1), появление апоп-тозных телец (2) в селезенке 30-суточного цыпленка. Гематоксилин-эозин. Микрофото. Ув.: х 480
в виде «пчелиных сот» (рисунок 10). Также были выражены отек и лимфоцитарная инфильтрация стромы, явления кариорек-сиса, появление большого числа апоптоз-
ных телец в лимфоидных узелках. У 50% птиц были выражены процессы организации с расширеним межузелковых перегородок (рисунок 11). В подэпителиальных
пространствах на месте узелков появлялись множественные микрокисты и железистые структуры. В печени цыплят в этот срок исследований наблюдались тяжелые гистологические изменения (рисунок 12): тромбоз синусоидных ка-пилляров, некроз и лизис большинства гепатоцитов с явлениями кариорексиса, набухание Купферов-ских клеток, выраженный гемосидероз.
В 30-дневном возрасте, как и в предыдущий срок исследований, в ти-мусе цыплят наблюдалась выраженная гиперплазия лимфоцитов с расширением коркового вещества долек. Мозговое вещество порой не визуализировалось. В бурсе Фабрициуса регистрировался тотальный апоптоз лимфоцитов, лизис клеток с обнажением ретикулоэпителиальной основы лимфо-идных узелков, появление структур типа «пчелиных сот» (рисунок 13, 14). Нередко в узелках локализовались очаги коагуляци-онного некроза (рисунок 15). У отдельных птиц наблюдалась выраженная организация собственной пластинки слизистой оболочки. Гистологические изменения в селезенке птиц характеризовались различной степенью тяжести. У одних птиц выявлялся кариорексис ядер отдельных лимфоцитов, появление апоптозных телец в белой пульпе (рисунок 16). В других случаях отмечались признаки делимфатизации с на-
личаем единичных арективные микронекрозы в красной пульпе.
Заключение. Проведенные исследования свидетельствуют, что спон-танное заражение вакцинированных цыплят цир-ко- и бирнавирусами приводит к развитию тяжелого комбинированного приобретенного иммунодефицита, на фоне которого доминируют морфологические признаки инфекционнной бурсальной болезни. В случае такой ассоциации инфекционная анемия протекает латентно или с явлениями патоморфоза, без развития характерных гистологических изменений в костном мозге, а вакцинопрофилактика реовирус-ной инфекции и болезни Гамборо оказывается малоэффективной.
Развитие в 20-30-дневном возрасте лим-фоидной гиперплазии в тимусе, выраженной лимфоидно-макрофагальной инфильтрации неиммунных органов является, на наш взгляд, компенсаторно-приспособительным процессом, направленным на становление специфического иммунитета к вирусу ИАЦ.
Таким образом, морфологическое исследование является очень важ-ным и необходимым приемом диагностики ИАЦ, протекающей как в виде моноинфекции, так и в виде ассоциации с другими вирусными болезнями.
Резюме: В статье рассмотрены патоморфологические изменения в органах иммунной и других систем организма цыплят при латентном течении инфекционной анемии. Описаны особенности патологоанатомического проявления инфекционной анемии при ассоциативном течении с инфекционной бурсальной болезнью. Показана роль морфологических методов исследования для диагностики моно- и ассоциативного течения инфекционной анемии цыплят.
SUMMARY
In article pathomorphologic changes in organs of immune and other systems of chickens by spontaneous flow of infectious anaemia are surveyed. Features pathoanatomical exhibiting of infectious anaemia are described at associated flow with infectious bursal disease. The role of histological researches for diagnosis mono- and associated flows of infectious anaemia of chickens is shown.
Keywords: chickens, pathomorphological changes, infectious anaemia, bone marrow, thymus, bursa of fabricius, spleen, liver.
Литература
1. Алиев А.С., Бурлаков М.В., Зимин К.В., Серова Н.Ю. Цирковирусная инфекция птиц // Ветеринария.
- 2011. - № 9. - С. 27-32.
2. 1усева Е.В., Сатина Т. А., Фомина Т.А. Инфекционная анемия цыплят: Обзор литературы. — Владимир: ВНИИЗЖ, 1997. — 72 с.
3. Джавадов Э.Д., Дмитриева М.Е., Занько М.А., Людькова Е.С. Ассоциированное течение инфекционной бурсальной болезни и инфекционной анемии цыплят. Проблема и пути ее решения // Био. — 2010.
— № 9. — С. 22-23.
4. Лилли, Р Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р Лилли ; под ред. В.В. Порту-галова ; пер. с англ. И.Б. Краснов [и др.]. - М.: Мир, 1969. - 645 с.
5. Лобанов В.А., Волкова М.А., Дрыгин В.В.,
Ерошина Т.И., Борисов В.В. Серологический мониторинг инфекционной анемии цыплят и молекуляр-но-биологическая характеристика изолятов вируса // Вестник РАСХН. - 2003. - № 2. - С. 66-69.
6. Меркулов, ГА. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов. - Л., 1969. - 432 с.
7. Микроскопическая техника: Руководство / Д.С. Саркисов [и др.]; под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Петрова. - М.: Медицина, 1996. - 544 с.
8. Стоквис Б. Смешанные инфекции кур-несушек / Материалы VI Межд. ветер. конгресса по птицеводству. - Москва, 2010. - С. 82-84.
9. Chomczynski, P, Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction / P. Chomczynski, N. Sacchi // Anal. Biochem. - 1987. - Vol.162, № 1. - P.156-159.
Контактная информации об авторах для переписки Громов И.Н., кандидат ветеринарных наук, доцент
Селиханова М.К., аспирант, УО «Витебская ордена «Знак Почета» государственная академия ветеринарной медицины», Республика Беларусь Алиев А.С., доктор ветеринарных наук, профессор
Бурлаков М.В., аспирант, ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», Российская Федерация
Таймасуков А.А., кандидат ветеринарных наук, Генеральный директор ОАО «Компания Кубаньптицепром»
УДК 619:639.3
Дубинин А.В., Шинкаренко А.Н.
(Волгоградский ГАУ)
БАКТЕРИАЛЬНАЯ ОБСЕМЕНЕННОСТЬ ПРОМЫСЛОВЫХ РЫБ ПРИ ДИПЛОСТОМОЗЕ И ПОСТОДИПЛОСТОМОЗЕ
Ключевые слова: Болезни рыб, диплостомоз, постодиплостомоз, бактериологическая обсемененность промысловых рыб.
Введение.
Постодиплостомоз и диплостомоз довольно широко распространенные заболевания среди рыб разных видов, как в естественных водоемах, так и в нерестово-вы-ростных хозяйствах Волгоградской области [1,3].
Микробная обсемененность рыбы находится в прямой зависимости от количества и качества микрофлоры водоема, а так же таких факторов как паразитарные болезни. Из литературных данных следует, что рыба обсеменена преимущественно мезофильными микроорганизмами, которые и составляют группу условнопато-генных и патогенных бактерий. Причем известно, что в воду могут попасть кишечные палочки, энтерококки, сальмонеллы, шигеллы, клостридии [2].
Так как мясо рыбы по химическому составу близко к мясу млекопитающих, то при высоком уровне бактериальной об-семененности рыбы мезофильной микрофлорой, уменьшаются сроки хранения свежей и замороженной рыбы, а так же при употреблении таких рыбных продуктов в пищу возможно возникновение токсико-инфекций.
Цимлянское водохранилище является одним из крупнейших водохранилищ Волгоградской области, где ведется рыбный
промысел. В связи с этим наиболее актуальным вопросом является изучение бактериальной обсемененности рыбы в условиях данного водохранилища.
Материалы и методы исследований.
Исследования рыбы проводили в условиях Цимлянского водохранилища Волгоградской области, за период 2009-2011 года. Причем исследованию подвергнуто 5860 экземпляров рыб разных видов, которые имеют основное промысловое значение для Волгоградской области - лещ, густера, судак, берш, плотва, карась, синец, сазан, толстолобик.
Диагностику диплостомоза и посто-диплостомоза проводили с использованием метода полного гельминтологического вскрытия рыб по методу В.А. Догеля (1970).
Отбор проб для бактериологического исследования проводили по общепринятой методике с последующими посевами материала (образцы кожи и жабр) на общеупотребительные и специальные питательные среды. Для установления систематической принадлежности микроорганизмов были использованы определители (Краткий определитель Берги, 1980; Определитель бактерий Берджи, 1997).
Результаты исследований.
По результатам наших исследований
