CC BY
32
ВЕТЕРИНАРНЫЕ НАУКИ
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ МАТЕРИАЛА, СОДЕРЖАЩЕГО ВИРУС РИНОПНЕВМОНИИ ЛОШАДЕЙ
Неустроев Михаил Петрович,
Доктор ветеринарных наук, заведующий лабораторией ветеринарной биотехнологии
Тарабукина Надежда Петровна,
Доктор ветеринарных наук, заведующая лабораторией разработки микробных препаратов
Петрова Саргылана Гурьевна,
Канд. вет. наук, старший научный сотрудник лаборатории ветеринарной биотехнологии ФГБНУ «Якутский научно-исследовательский институт
сельского хозяйства», г. Якутск
PATHOLOGICAL AND MORPHOLOGICAL CHANGES IN LABORATORY ANIMALS AFTER THE INTRODUCTION OF MATERIAL CONTAINING THE
VIRUS OF HORSES' RHINOPNEUMONIA
Neu&roev, M.P., Tarabukina, N.P.,
Petrova, S.G.
Federal State Budgetary Scientific InMitution "Yakut Scientific Research InMitute of Agriculture" , Yakutsk
АННОТАЦИЯ
В настоящем сообщении представлены результаты патоморфологических исследований у лабораторных мышей после инокуляции им суспензии из органов абортированных плодов, полученных от кобыл, зараженных вирусом РПЛ.
ABSTRACT
This report presents the results of pathological and morphological Sudies with laboratory mice after inoculation of suspension from aborted fetuses, obtained from mares infected with HR.
Ключевые слова: герпесвирус, пассаж, аборт, ринопневмония лошадей, лошади, белые мыши, патоморфологические и гистологические исследования, тельца-включения
Keywords:herpes virus, passage, abortion, horses' Rhinopneumonia, horses, white mice, pathological-morphological and hi&o-logical examinations, calf-inclusion.
Сокращения: ВГЛ-1 — вирус герпеса лошадей типа 1; РПЛ — ринопневмония лошадей; РС (Я) — Республика Саха (Якутия)
Abbreviations: HHV1 - horse herpes virus type 1; HR - horses' Rhinopneumonia; RS(Y) - Republic of Sakha (Yakutia).
Введение. Ринопневмония лошадей характеризуется разнообразными формами проявления: поражением органов дыхания, центральной нервной системы, гениталиев, а у жеребых кобыл - абортами во второй половине жеребости, которые часто проходят без заметных симптомов и предвестников родов [6, с. 64-68]. У абортированных плодов обнаруживают острый или хронический гепатит, отек легких, скопление серозно-геморрагической жидкости в грудной полости, точечные кровоизлияния в паренхиматозных органах [9, с. 31-32]. Гистологически обнаруживают некротические поражения в печени и селезенке, воспалительные процессы в легких и бронхах. Диагностическое значение имеет обнаружение в клетках органов внутриядерных включений типа А Каудри [8, с. 53-54].
При изучении антигенных, иммуногенных свойств гер-песвирусов в качестве доступной модели используются лабораторные животные [2, с. 120-121]. Впервые ВГЛ-1 к лабораторным животным адаптировали Kaschula et а1 (1957) [14, с. 137-143]. Схема адаптации заключалась в интрапе-ритонеальной инокуляции вируса к новорожденным сирийским хомякам, комбинированной интраперитонеальной и интрацеребральной инокуляции взрослым хомякам и затем интрацеребральной инокуляции мышам. В дальнейшем ряд авторов адаптировали ВГЛ-1 к беременным морским свинкам, крольчихам, сирийским хомячкам [12, с. 551-558].
К.П. Юров и др. (1983) предложили сирийских хомяков для оценки антигенной активности инактивированных образцов вируса РПЛ [7, с. 30-32]. К.П. Юров и М.А. Амирбе-ков (1985) использовали адаптированный вирус для оценки
иммунитета у вакцинированных хомяков путём контрольного заражения [10, с. 20-22]. Однако впоследствии было установлено, что ВГЛ-1 не является для хомяков эндотели-отропным, и по мнению большинства исследователей такая лабораторная модель имеет ограничение использования при выяснении ряда вопросов патогенеза и иммуногенеза инфекции ВГЛ-1 [1, с. 27].
С.В. Алексеенкова и др. (2006) сообщили об адаптации культурального штамма ВГЛ1 к взрослым лабораторным мышам [3, с. 361-363]. При экспериментальном заражении нейропатогенным адаптированным вирусом ринопневмо-нии штамма «ПП1/1» у лабораторных мышей наблюдали миелоэнцефалопатию, тромбозы сосудов и воспалительные процессы периваскулярных зон в головном мозге, скопление лимфоидных клеток под мягкой мозговой оболочкой [1, с. 23]. Использование актированного вируса в остром опыте на мышах для оценки иммунитета на прививку различного типа вакцин позволило проследить динамику иммунного ответа, приближенную к естественной инфекции у лошадей [5, с. 233].
Есть основание полагать, что существует гетерогенность эпизоотических штаммов ВГЛ-1 по их вирулентности для лабораторных животных, в том числе свойству вызывать миелоэнцефалопатию у мышей. В последние годы ряд авторов сообщили о нейропатогенности изолятов ВГЛ-1 для мышей. Несмотря на инфекцию нейронов и астроцитов инфицированных животных, гистологическим исследованием мозга обнаруживают различной степени нарушение сосудистой системы. Подобный фенотип нейроинвазии зависит от свойств используемого штамма и схемы опытов проводимых исследований (места инокуляции, дозы и др.), которые влияют на развитие и течение заболевания. Так, НасеЬе et а1 (2002) применили интрацеребральный, интраназальный и интраперитонеальный пути инокуляции вируссодержащего материала мышам, при которых у животных наблюдался ме-нингоэнцефалитический синдром. Для получения нейропа-тогенного штамма ВГЛ1 потребовалось провести не менее 15 прямых пассажей путем интрацеребральной инокуляции мышам в возрасте от 1 до 6 дней. При интраперитонеаль-ном введении вируса путь распространения этого адаптированного нейропатогенного варианта в организме мышей, оказался, также как у лошадей - гематогенным [13, с. 907912]. Анализ штаммов, выделенных на территории СССР и Российской Федерации по признаку нейровирулентности для мышей линии BALB/c, позволил установить, что около половины штаммов (9 из 16 исследованных) имеют выраженные нейровирулентные свойства [4, с. 21-23].
В последние годы в популяции лошадей разных стран (в США, Германии, Бельгии) нервную форму ринопневмо-нии (миелоэнцефалопатию) регистрируют в виде вспышек в отличие от спорадических случаев, встречавшихся ранее, несмотря на регулярную плановую вакцинацию лошадей. Ряд авторов полагают, что вакцинация способна усилить иммунореактивность организма и повысить шанс проявления миелоэнцефалопатии в результате нарушения функции кровеносных сосудов [11, с. 862-891].
Цель: Целью настоящего исследования являлось изучение возможной гетерологичности различных эпизоотических изолятов ВГЛ-1, полученных от абортированных плодов лошадей в регионе Крайнего Севера - Якутии путем оценки их вирулентности для белых мышей.
Материалы и методы. В качестве материала для исследования использовали замороженные абортированные плоды 9-10-месячного возраста от кобыл. Абортированные плоды доставлены из ОПХ «Покровское» Хангаласского района РС (Я). При заражении лабораторных животных использовали 10%-ную суспензию материала из печени, селезенки и легких абортированных плодов на физиологическом растворе. Использовали надосадочную жидкость после обработки антибиотиками (пенициллин, стрептомицин по 500 ЕД/мл). Мышат-сосунков заражали внутрибрюшинно, в зависимости от массы тела вводили по 0,1 и 0,2 мл исследуемого материала. Контрольной группе ввели внутрибрюшинно стерильный 0,9 %-ный физиологический раствор в той же дозе. Патологоанатомические и гистологические исследования проведены по общепринятым методикам.
Результаты. Предварительно для подтверждения диагноза было проведено вирусологическое исследование мазков-отпечатков из печени, легких, селезенки трех абортированных плодов от кобыл, окрашенных гематоксилин-эозином. При световой микроскопии выявлены единичные внутриядерные включения, характерные при ринопневмонии лошадей в двух исследуемых пробах. Третья проба оказалась отрицательной. Для выделения вируса проводили заражение лабораторных животных 10 %-ной суспензией материала из печени, селезенки и легких абортированных плодов на физиологическом растворе. Использовали 7-10 дневных мышат-сосунов. В каждой исследуемой пробе проведена биопроба на 6-ти белых мышатах-сосунках. За животными наблюдали в течение 12 дней. В 1-ом пассаже все мышата были клинически здоровы. Через 12 дней после заражения мышата были умерщвлены. Вскрытие позволило наблюдать следующие патологоанатомические изменения: у 4-х - обнаружены точечные кровоизлияния в печени, селезенке, легких, у 2-х - эмфизема легких. В мазках-отпечатках из паренхиматозных органов умерщвленных мышат при световой микроскопии в 4-х пробах обнаружены единичные включения.
Из паренхиматозных органов 4-х мышат приготовили суспензию и провели второй пассаж внутрибрюшинным способом на 5-ти белых мышатах по общепринятой методике. В период наблюдения животные не проявляли клинических признаков переболевания. На 12-й день после заражения у некоторых наблюдали вялость, слабость, после чего наступало выздоровление. Через месяц после заражения все животные были умерщвлены. При вскрытии трупов мышат обнаружили серозно-геморрагический выпот в грудной полости, сердце темно-красного цвета, кровенаполнено, увеличено в размере, расширено, стенки полостей истончены; ткань легких уплотнена, светлые участки паренхимы чередуются с участками кровоизлияния; селезенка увеличена в размере, набухшая, темно-красного цвета; печень и почки дряблой консистенции, неравномерно полнокровны. В мазках-отпечатках из паренхиматозных органов умерщвленных белых мышат при световой микроскопии обнаружены внутриядерные включения, гранулы включений разной формы, окруженные ореолом просветления.
Третий пассаж проведен на 5-ти белых мышах с массой тела 10-15 гр. За 10 дней наблюдения мыши клинических признаков заболевания не проявляли. На 10-й день все мыши были умерщвлены. В результате патологоанатомиче-ского вскрытия выявили умеренное набухание селезенки, эмфизему легких, гипертрофию сердца. В мазках-отпечат-
ках из легких, селезенки, печени, почек при световой микроскопии также обнаружены характерные при ринопневмонии лошадей мелкие внутриядерные эозинофильные включения в виде гранул.
Для подтверждения диагноза проведено гистологическое исследование паренхиматозных органов мышей, использованных во втором и третьем пассажах.
Результаты гистологического исследования (второй пассаж):
- Печень - центральные вены расширены, кровенаполне-ны, дегенеративно-дистрофические изменения гепатоцитов, периваскулярные полиморфно-клеточные пролиферации из лимфоцитов, пролимфоцитов, гистиоцитов, плазматических клеток. В паренхиме выявлены мелкогнездные клеточные пролифераты (рис. 1).
Рис. 1 - Печень (второй пассаж)
- Селезенка - гиперплазия лимфоидной ткани, пролиферация макрофагов, плазматических клеток строма разрыхлена. В лимфоцитах - внутриядерные включения в клетках эпителия.
- Легкие - в альвеолах скопление серозно-катарально-го экссудата с примесью лимфоидно-гистиоцитарных клеток и слущенного респираторного альвеолярного эпителия, местами наблюдаются периваскулярные клеточные муфты и образование в паренхиме очагов симпластов - крупных округлых клеток.
- Почка - отек и некроз эпителия канальцев, перива-скулярные клеточные муфты, дегенеративные изменения в сосудистых клубочках, участками в клетках эпителия обна-
ружены мелкие зернистые включения с ореолом просветления.
- Головной мозг - серозный отек вещества мозга, скопление полиморфных клеточных элементов с примесью нейтрофилов, в веществе головного мозга - незначительная инфильтрация лимфоцитов, гистиоцитов.
Результаты гистологического исследования (третий пассаж):
- Легкие - острый отек, венозная гиперемия, гнездные периваскулярные, перибронхиальные клеточные муфты, незначительная дисплазия клеток эпителия слизистой бронхиол, фибринозный отек адвентиции кровеносных сосудов, незначительное скопление клеточных элементов в альвеолярной отечной жидкости (рис. 2).
Рис. 2 - Легкое (третий пассаж)
- Селезенка - многоядерные клетки-симпласты с внутриядерными включениями с ореолом просветления в них(рис.
3).
Рис. 3 - Селезенка (третий пассаж)
- Сердце - некроз мышечных волокон, паренхиматозная дистрофия. Кровоизлияние в инстерстиции межмышечных волокон.
- Печень - центральные вены расширены, кровенаполне-ны; обнаружены периваскулярные гнездные пролиферации клеток, дисплазия клеток эпителия желчных протоков; де-
генеративно-дистрофические изменения ядер гепатоцитов; диффузная инфильтрация жировых капель в гепатоцитах.
- Почки - инфильтрация клеток между канальцами и вокруг извитых канальцев (рис. 4).
Рис. 4 - Почки (третий пассаж)
- Трахея - дисплазия клеток слизистой; очаговые разрастания эпителия слизистой в виде папилломатозных выростов.
- Головной мозг - отек нервных клеток (нейронов); ин-фильтация лимфоидно-гистиоцитарных клеток, нейтрофи-лов.
На основании результатов гистологических исследований в патматериалах от белых мышей установлены внутри-
ядерные эозинофильные тельца-включения и изменения, характерные при ринопневмонии лошадей.
Результаты гистологического исследования паренхиматозных органов контрольных мышей:
- Печень, белковая дистрофия. Разрушение балочного строения печеночных клеток, клетки набухшие, кровеносные сосуды расширены (рис. 5).
Рис. 5 - Печень (контрольная группа)
-Почки, белковая дистрофия. Почечные тельца без видимых изменений, почечные канальцы набухшие (рис. 6).
Рис. 6 - Почки (контрольная группа)
- Селезенка без видимых изменений. В красной пульпе видны крупные клетки, похожие на моноциты и форменные элементы крови (рис. 7).
Рис. 7 - Селезенка (контрольная группа)
4 - Легкие, кровоизлияние, кровеносные сосуды расширены, полные. Бронхи расширены (рис. 8).
Рис. 8 - Легкое (контрольная группа)
Вывод. Прямыми пассажами на белых мышах, исключая стадию выделения вируса в клеточных культурах, воспроизведена экспериментальная инфекция ВГЛ, прослежены патоморфологические изменения. Полученные результаты позволяют предложить метод заражения белых мышей для диагностики ринопневмонии, изучения патогенеза инфекции.
Список литературы:
1. Алексеенкова С.В. Лабораторная модель для изучения иммуногенных свойств вакцин против ринопневмонии лошадей // Автореф. дисс... канд. биол. наук / С.В. Алексеенкова // Москва, 2007. - 27 с.
2. Алексеенкова С.В., Ткачев И.Ю., Юров Г.К. Лабораторная модель для изучения иммуногенных свойств вакцинных препаратов против ринопневмонии лошадей // Ветеринарная патология. - 2003. -№ 1. - С. 120-121.
3. Алексеенкова С.В., Юров Г.К., Ткачев И.Ю., Юров К.П. Эффективность иммунизации мышей линии Ва1Ь/с при интрацеребральном заражении герпесвирусом лошадей 1-го типа // Иммунология. - 2006. -№ 6. - С. 361-363.
4. Татаурова А.В., Юров К.П., Алексеенкова С.В. Ней-ропатогенные штаммы возбудителя ринопневмонии - вирусного аборта лошадей // Ветеринария. -2006. - № 3. - С. 21-23.
5. Ткачев И.Ю. Получение генетических конструкций, несущих полные гены поверхностных гликопротеи-нов вируса герпеса лошадей 1 для создания ДНК-вакцины / Ткачев И.Ю., Юров Г.К., Шмаров М.М., Народицкий Б.С., Алексеенкова С.В., Юров К.П. // В книге: Биотехнология: состояние и перспективы развития"Пик Максима" - Москва, 2003. - 233 с.
6. Юров К.П. Биологические свойства штаммов вируса ринопневмонии лошадей и особенности течения этой инфекции. // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. -1979. - Т. 49. -С. 64-68.
7. Юров К.П., Амирбеков М.А. Иммуногенные свойства вирусвакцины против ринопневмонии лошадей на лабораторных животных // Бюллетень Всесоюзного Ордена Ленина научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко. - 1985. - № 55. - С. 30-32.
8. Юров К.П., Крюков Н.Н. Выявление вируса риноп-невмонии лошадей методом иммунолюминесценции // Ветеринария. - 1972. - № 11. - С. 53-54.
9. Юров К.П., Крюков Н.Н. Ринопневмония лошадей // Коневодство и конный спорт. - 1969. -№ 12. - С. 31-32.
10. Юров К.П., Полоз Д.Д., Сансызбаев А.Р. Иммуно-генность инактивированного вируса ринопневмонии лошадей // Труды Всероссийского НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко. -1983. - Т. 57. - С. 20-22.
11. Allen G. P., Kydd J. H., Slater J. D. Equid herpesvirus-1 (EHV-1) and equid herpesvirus-4 (EHV-4) infections // In: Coetzer JAW, Thomson GR, Tu&in, eds. Infectious diseases of live^ock. Capetown: Oxford University Press. - 2002. - P. 862891.
12. Doll E. R., Richards M. G., Wallace M. E. Adaptation of the equine abortion virus to sukling hampers // Cornell. Vet. - 1953. - № 43 - P. 551-558.
13. Hasebe R., Kimura T., Nakamura K., Okazaki K., Ochiai K., Wada R., Umemura T. Passage of equine herpesvirus-1 in suckling mouse brain enhances extraneural virus growth and subsequent hematogenous neuroinvasion // J. Vet. Med. Sci.. -2002. - № 64 (10) - P. 907-912.
14. Kaschula V R., Beaudette F. R and Byrne R. J. The adaptation of equine influenza virus to infant mice by the intracerebral route // Cornell Vet. - 1957. - № 47. - P. 137-143.
