CC BY
5
DOI: 10.24412/2074-5036-2023-1-69-73 УДК 619:616-091:636.4
Ключевые слова: свиньи, патоморфологические изменения, дезоксиниваленол, Т-2 токсин
Key words: pigs, pathomorphological changes, deoxynivalenol, T-2 toxin
'Кудряшов А. А., 2Максимов Т. П., 'Балабанова В. И.
ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ СОЧЕТАННОМ ДЕЗОКСИНИАЛЕНОЛОВОМ И Т-2 МИКОТОКСИКОЗЕ У ПОРОСЯТ
PATHOMORPHOLOGICAL CHANGES IN COMBINED DEOXYNIALENOL AND T-2 MYCOTOXICOSIS IN PIGLETS
'ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет ветеринарной медицины» Адрес: 196084, Россия, Санкт-Петербург, Черниговская ул., 5
'St. Petersburg State University of Veterinary Medicine Address: 196084, Russia, Saint-Petersburg, Chernigovskaya Str., 5 2ООО Биомин. Адрес: 129226, Россия, Москва, Ул. Докукина, 16/1 2Biomin LLC. Address: Dokukina str., 16/1, 129226, Moscow, Russia
Кудряшов Анатолий Алексеевич, д. в. н., проф., зав. кафедрой патологической анатомии и судебной ветеринарной медицины. E-mail: patan2017@outlook.com
Kudriashov Anatoly Alekseevich, Doctor of Veterinary Science, Professor, Head of the Pathologic Anatomy
Department. E-mail: patan2017@outlook.com Балабанова Виктория Игоревна, д. в. н., профессор кафедры патологической анатомии и судебной ветеринарной медицины. E-mail: patan2017@outlook.com Balabanova Victoria Igorevna, Doctor of Veterinary Science, Professor of the Pathologic Anatomy
Department. E-mail: patan2017@outlook.com Максимов Тимофей Петрович, к. в. н., директор по развитию бизнеса в Восточной Европе.
E-mail: t.maksimov@mail.ru. Maksimov Timothy Petrovich, PhD of Veterinary Science, Head of Performance Solutions Eastern Europe.
E-mail: t.maksimov@mail.ru
Аннотация. Цель исследования - выявление патоморфологических изменений при сочетанном дезоксиниваленоловом и Т-2 токсикозе у поросят группы доращивания. Материалом исследования послужили 19 поросят-отъемышей в возрасте 52-63 дня, у которых при жизни заподозрили микотоксикоз. Материалом для исследования также послужили 10 проб полнорационного гранулированного комбикорма СК-4 для поросят в возрасте 1,5-2 месяцев, скармливаемого в группах исследованных животных. Провели патологоанатомическое исследование, применив метод «полной эвисцерации» по Г. В. Шору. При вскрытии у поросят при отобрали образцы печени и почек для гистологического исследования. Патологический материал фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина. Затем проводили заливку в парафин и на ротационном микротоме изготовили срезы толщиной 5-7 мкм. Срезы окрасили гематоксилином и эозином. Определили количественное содержание микотоксинов в пробах корма в лаборатории биохимического анализа Федерального научного центра «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства» с использованием метода высокоэффективной хроматографии в тандеме с масс-спектрометрией (ВЖХ-МС/МС). В результате исследования в образцах комбикорма установлено содержание токсина T-2 в концентрации от 0,03 до 0,89 мг/кг и наличие токсина дезоксиниваленола (ДОН) в концентрации от 0,5 мг/кг до 4,9 мг/кг, что значительно превышало предельно допустимые уровни этих микотоксинов в кормах для свиней. На вскрытии у поросят установили кровоизлияния, очаги некроза и эрозии в коже, анемию, очаги некроза, эрозии, кровоизлияния, катаральное воспаление в желудке, кровоизлияния и воспаление в кишечнике, отек легких и острый реактивный гепатит. При гистологическом исследовании в печени обнаружили зернистую и водяночную дистрофию, некроз гепатоцитов, лейкоцитарную инфильтрацию пространств Диссе. В почках - водяночную дистрофию и некроз клеток эпителия почечных каналец.
Summary. The aim of the study was to identify pathomorphological changes in combined deoxynivalenol and T-2 toxicosis in piglets of the rearing group. The material of the study was 19 weaned piglets aged 52-63 days, in which mycotoxicosis was suspected during their lifetime. The material for the study also served as 10 samples of full-grain granular compound feed SK-4 for piglets aged 1.5-2 months, fed in groups of the studied animals. We conducted a pathoanatomic study using the method of "complete evisceration" according to G. V. Shor. During the autopsy, liver and kidney samples were taken from piglets for histological examination. The pathological material was fixed in a 10 % solution of neutral formalin. Then the filling was carried out in paraffin and sections 5-7 microns thick were made on a rotary microtome. The sections were stained with hematoxylin and eosin. The quantitative content of mycotoxins in feed samples was determined in the laboratory of biochemical analysis of the Federal Scientific Center "All-Russian Scientific Research and Technological Institute of Poultry Farming" using the method of highperformance chromatography in tandem with mass spectrometry (HPLC-MS/MS). As a result of the study, the content of T-2 toxin
in the concentrationfrom 0.03 to 0.89 mg/kg and the presence ofdeoxynivalenol (DON) toxin in the concentrationfrom 0.5 mg/kg to 4.9 mg/kg were found in the feed samples, which significantly exceeded the maximum permissible levels ofthese mycotoxins in pig feed. At the autopsy, hemorrhages, foci of necrosis and erosion in the skin, anemia, foci of necrosis, erosion, hemorrhages, catarrhal inflammation in the stomach, hemorrhages and inflammation in the intestines, pulmonary edema and acute reactive hepatitis were found in piglets. Histological examination of the liver revealed granular and watery dystrophy, necrosis ofhepatocytes, leukocyte infiltration of Disse spaces. In the kidneys - watery dystrophy and necrosis of the epithelial cells of the renal tubules.
Введение
Наличие микотоксинов в кормах для продуктивных животных широко распространено на территории РФ, а влияние микотоксинов на здоровье животных и человека подтверждено многочисленными исследованиями [8]. Многообразие микотоксинов, высокий уровень их токсичности, способность проникать в организм животных, накапливаться в органах, тканях и биологических жидкостях, оказывая отрицательное влияние, вызывает большую озабоченность ветеринарных и зоотехнических специалистов хозяйств [4, 7]. Значительный экономический ущерб, причиняемый микотоксинами, возникает от затрат на ветеринарную обработку поголовья и от снижения производственных показателей предприятий.
Микотоксины отличаются высокой токсичностью, многие из них обладают мутагенными, тератогенными, канцерогенными и иммуносу-прессивными свойствами [1, 8]. Наиболее часто корма загрязняются микотоксинами грибов родов Fusarium и Aspergillus [5, 7].
На организм свиней оказывают негативное влияние большинство часто встречающихся микотоксинов: деоксиниваленол (ДОН, воми-токсин), Т-2, HT-2, охратоксины, афлатокси-ны, фумонизины и другие [2, 11]. При наличии многочисленных научных работ по этиологии микотоксикозов, их распространению, лечебно-профилактическим мероприятиям, в источниках литературы в малом объеме и фрагментарно представлена патоморфология этих болезней. Учитывая значимость и актуальность микотоксикологической тематики в настоящее время, целью нашего исследования стало выявление патоморфологических изменений при сочетанном дезоксиниваленоло-вом и Т-2 токсикозе у поросят группы дора-щивания.
Материалы и методы
Объектом и материалом исследования послужили 19 поросят группы доращивания в возрасте 52-63 дня, у которых при жизни заподозрили микотоксикоз. Материалом для исследования также послужили 10 проб полнорационного гранулированного комбикорма СК-4 для поросят в
возрасте 1,5-2 месяцев, находящихся на доращи-вании, скармливаемого в группах исследованных животных.
Провели патологоанатомическое исследование, применив метод «полной эвисцерации» по Г. В. Шору. У поросят при вскрытии отобрали образцы печени и почек для гистологического исследования. Гистологические срезы готовили по общепринятой методике. Патологический материал фиксировали в 10 %-ном растворе нейтрального формалина. Затем проводили заливку в парафин и на ротационном микротоме изготовили срезы толщиной 5-7 мкм. Срезы окрасили гематоксилином и эозином. Изучение гистологических препаратов провели при помощи свето-оптического микроскопа Микмед-5 ЛОМО при увеличении 400 и 600. Микрофотографирование проводили при помощи цифровой камеры Touptek Photonic FMA050.
Для количественного определения содержания микотоксинов в пробах корма, проведенного в лаборатории биохимического анализа Федерального научного центра «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства» использовали метод высокоэффективной хроматографии в тандеме с масс-спектрометрией (ВЖХ-МС/МС). Для этого применяли комплекс оборудования из жидкостного хроматографа Agilent Infinity LC Systems (Германия) и тройного квадрупольного масс-спектрометра AB SCIEX Triple Quad™ 5500 ГОСТ 34140-2017, оснащенного TurboV источником ионизации, электроспреем (ESI) и вакуумным насосом (США).
Результаты и обсуждение
Результаты микотоксикологического исследования
На основании данных протоколов проведенных исследований в лаборатории биохимического анализа ФНЦ ВНИТИП в образцах комбикорма СК-4 установлено содержание токсина T-2 в концентрации от 0,03 до 0,89 мг/кг. Наряду с этим, в образцах выявлено наличие токсина дезоксиниваленола (ДОН). Концентрация данного микотоксина варьировалась от 0,5 мг/кг до 4,9 мг/кг. Таким образом, концентрация
Рис. 1. Поросенок, 52 дня. Сочетанный токсикоз. Очаги некроза кожи
Рис. 3. Поросенок, 52 дня. Сочетанный токсикоз. Анемия. Водянистая кровь
Рис. 5. Поросенок, 52 дня. Сочетанный токсикоз. Эрозии и кровоизлияния в слизистой оболочке желудка
Рис. 2. Поросенок, 54 дня. Сочетанный токсикоз. Многочисленные эрозии в коже
Рис. 4. Поросенок, 52 дня. Сочетанный токсикоз. Очаги некроза и эрозии в слизистой оболочке желудка
Рис. 6. Поросенок, 54 дня. Сочетанный токсикоз. Острый катаральный гастрит
Рис. 7. Поросенок, 55 дней. Сочетанный токсикоз. По-дострый катаральный гастрит
Рис. 8. Поросенок, 54 дня. Сочетанный токсикоз. Кровоизлияния в слизистой оболочке тонкой кишки
Рис. 9. Поросенок, 55 дней. Сочетанный токсикоз. Острый катаральный энтерит
Рис. 10. Поросенок, 55 дней. Сочетанный токсикоз. Отек легких
Рис. 11. Поросенок, 55 дней. Сочетанный токсикоз. Острый реактивный гепатит
токсинов Т-2 и дезоксиниваленола значительно превышала предельно допустимые уровни этих микотоксинов в кормах для свиней. Согласно ГОСТу 33867-2016 [3], «Максимально допустимым уровням микотоксинов в кормах для сельскохозяйственных животных» [6] и Техническому регламенту Таможенного союза [9], предельно допустимые уровни микотоксинов Т-2 (НТ-2) и дезоксиниваленола составляют соответственно 0,1 мг/кг и 1,0 мг/кг.
Клиническое проявление
У больных поросят наблюдали вялость, ано-рексию, задержку роста, диарею, рвоту, признаки анемии, у некоторых животных очаги некроза и эрозии в коже, а также мышечный тремор.
Результаты патологоанатомического исследования
При вскрытии поросят группы доращивания, получавших корм с концентрацией токсинов Т-2 и дезоксиниваленола, превышавшей предельно допустимые уровни, установлены следующие патологоанатомические изменения. При наружном осмотре у поросят обнаружены кровоизлияния, очаги некроза и эрозии в коже (рисунки 1, 2). Также наблюдали признаки анемии — белый цвет кожи и видимых слизистых оболочек, что сочеталось с обнаруженной при внутреннем осмотре водянистой кровью (рисунок 3). При исследовании желудка у всех животных обнаружили патологоанатомические изменения в желудке, и кишечнике. В желудке - очаги некроза, эрозии, кровоизлияния в слизистой оболочке, катаральное воспаление (рисунки 4-7); в кишечнике кровоизлияния и воспаление слизистой оболочки (рисунки 8, 9).
Подобные изменения считаются типичными для действия токсина Т-2 и его метаболитов
Рис. 12. Поросенок, 55 дней. Сочетанный токсикоз. Гистосрез печени. Острый реактивный гепатит. Ув. 600. Окраска гематоксилином и эозином
Рис. 13. Поросенок, 55 дней. Сочетанный токсикоз. Гистосрез почки. Водяночная дистрофия и лизис клеток эпителия каналец. Ув. 400. Окраска гематоксилином и эозином
[10]. В источнике литературы [10] констатируют, что токсин Т-2 обладает местно-раздража-ющим действием и вызывает серозно-геморра-гическое воспаление, некроз и изъязвление в пищеварительном тракте, дистрофию печени, почек, сердца, головного мозга и периферических ганглиев вегетативной нервной системы. Также «повреждает стенку кровеносных сосудов, провоцирует геморрагический диатез». Что касается непосредственно энтерита, то способность и ДОН изменять морфологию кишечника также известна. Этот микотоксин специфически воздействует на плотные соединения между энтероцитами, вызывая разрушение слизистой оболочки кишечника.
При внутреннем осмотре также диагностировали отек легких (рисунок 10) и острый реактивный гепатит (рисунок 11). Гепатит, равно как и энтерит, отмечают и при дезоксиниваленоловом токсикозе [12].
Результаты патогистологического исследования
В гистологических препаратах печени у поросят обнаружены изменения, свойственные острому реактивному гепатиту. Это зернистая, водяночная дистрофия и некроз гепатоцитов, а также лейкоцитарная инфильтрация пространств Диссе (рисунок 12). В почках (рисунок 13) выявлены водяночная дистрофия и некроз (лизис) клеток эпителия почечных каналец.
В целом можно заключить, что патоморфоло-гические изменения при сочетанном дезоксини-валеноловом и Т-2 токсикозе у поросят группы доращивания согласуются с патоморфологиче-скими изменениями, упомянутыми в источниках литературы при каждом из двух микотоксикозов.
Выводы
1. При вскрытии поросят группы доращи-вания, получавших корм с концентрацией токсинов Т-2 и дезоксиниваленола, превышавшей предельно допустимые уровни, обнаружены патологоанатомические изменения: кровоизлияния, очаги некроза и эрозии в коже, анемия, очаги некроза, эрозии, кровоизлияния, катаральное воспаление в желудке, кровоизлияния и воспаление в кишечнике, отек легких и острый реактивный гепатит.
2. При патогистологическом исследовании в печени установили зернистую, водяночную дистрофию и некроз гепатоцитов, а также лейкоцитарную инфильтрацию пространств Диссе; в почках - водяночную дистрофию и некроз (лизис) клеток эпителия почечных каналец.
Список литературы
1. Ахметов Ф. Г. Профилактика микотоксикозов животных / Ф. Г. Ахметов // Труды второго съезда ветеринарных врачей Республики Татарстан. Казань. 2001. С. 235-239.
2. Безбородова Н. А. Мониторинг микотоксинов в кормах и кормовом сырье и клинико-им-мунологические особенности микотоксикозов животных в Уральском регионе: дис. ...канд. вет. наук: 16.00.03 / Н. А. Безбородова. Екатеринбург, 2009. 155 с.
3. ГОСТ 33867-2016 Требования при выращивании и откорме свиней на мясо для выработки продуктов детского питания. Типовой технологический процесс. Применяется с 01.01.2018 docs.cntd.ru>document/1200141722
4. Иванов А. В. Микотоксикозы (биологические и ветеринарные аспекты) / А. В. Иванов,
B. И. Фисинин, М. Я. Тремасов, К. Х. Папуниди. М.: Колос. 2010. 392 с.
5. Кононенко Г. П. Видовой состав и токсикологическая характеристика грибов рода Aspergillus, выделенных из грубых кормов / Г. П. Кононен-ко, Е. А. Пирязева, Е. В. Зотова, А. А. Буркин // Сельскохозяйственная биология. 2017. Т. 52. № 6.
C. 1279-1286.
6. Максимально допустимые уровни (МДУ) микотоксинов в кормах для сельскохозяйственных животных, утвержденные ГУВ Минсельхоза СССР от 01.02.1989 N 434-17 // https://forum.tks. ru/printthread.php?t=493792
7. Монастырский О. А. Микотоксины - глобальная проблема безопасности продуктов питания и кормов / О. А. Монастырский // Агрохимия.
2016. № 6. С. 67-71.
8. Папуниди К. Х. Микотоксины (в пищевой цепочке): монография / К. Х. Папуниди, М. Я. Тре-масов, В. И. Фисинин. 2-е изд., доп. Казань: ФГБНУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». 2017. 158 с.
9. ТР ТС 0152011 Технический регламент Таможенного союза «О безопасности зерна» (с изменениями на 2020 г.) // https://docs.cntd.ru/ document/902320395
10. Adhikari M. T-2 mycotoxin: toxicological effects and decontamination strategies / M. Adhikari, B. Negi, N. Kaushik, A. Adhikari // Oncotarget.
2017. V. 8(20). P. 33933-33952. doi: 10.18632/ oncotarget.15422.
11. Paula K. Co-Occurrence of Regulated, Masked and Emerging Mycotoxins and Secondary Metabolites in Finished Feed and Maize / K. Paula, K. Gregor, N. Karin et al. // An Extensive Survey. Toxins. 2016. V. 8. P. 363.
12. Pierron A. Impact of two mycotoxins deoxynivalenol and fumonisin on pig intestinal health / A. Pierron, I. Alassane-Kpembi, I. P. Oswald // Porc Health. 2016. V. 2(21). https:// doi.org/10.1186/s40813-016-0041-2
