ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЦИТОМУКОПРОТЕКТИВНОЙ ТЕРАПИИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

э

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЦИТОМУКОПРОТЕКТИВНОЙ ТЕРАПИИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Плоскирева А.А.1, Руженцова Т.А.1, Щербаков ИТ.2, Исаева Е.И.3, Чебышев Н.В.4, Бондарева А.В.1, Горелов А.В.1

1 ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора

2 ФБУН «МНИИЭМ имени ПН. Габричевского» Роспотребнадзора

3 РГБУ НИИ вирусологии имени Д.И. Ивановского Минздрава России

4 ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова

CYTOPROTECTIVE ASPECTS OF PATHOGENETIC THERAPY OF ACUTE INTESTINAL INFECTIONS

Ploskireva A.A.1, Ruzhentsova T.A.1, Shcherbakov I.T.2, Isaeva E.I.3, Chebyshev N.I.4, Bondarev A.V.1, Gorelov A.V.1

1 Central research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor RF

2 Federal STATE institution of science «MNIIEM named after G.N. Gabrichevskiy» of Rospotrebnadzor

3 FSBI «Research Institute of Virology D.I. Ivanovsky» Ministry of Health of Russia

4 First MSMU of I. M. Sechenov

Плоскирева А. А. — кандидат медицинских наук, доцент, старший научный сотрудник клинического отдела инфекционной патологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ, Москва.

Руженцова Т. А. — кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник клинического отдела инфекционной патологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ, Москва.

Щербаков И. Т. — доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник, ФБУН «МНИИЭМ имени Г. Н. Габричевского» Роспотребнадзора.

Исаева Е. И. — к.б.н., заведующий лабораторией иммунологии, ФГБУ «НИИ вирусологии им. Д. И. Ивановского» Минздрава России.

Чебышев Н. В. — доктор медицинских наук, профессор, академик РАО, заведующий кафедрой биологии и общей генетики, ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова.

Бондарева А. В. — кандидат медицинских наук, младший научный сотрудник клинического отдела инфекционной патологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ, Москва.

Горелов А. В. — доктор медицинских наук, профессор, заведующий клиническим отделом инфекционной патологии ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора РФ.

Ploskireva A. A. — candidate of medical Sciences, associate Professor, senior researcher, clinical Department of infectious pathology, the Central research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor RF, Moscow. Rozhentsova T. A. — candidate of medical Sciences, senior researcher, clinical Department of infectious pathology, the Central research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor RF, Moscow.

Shcherbakov I. T. — doctor of medical Sciences, Professor, leading researcher, Federal STATE institution of science «MNIIEM named after G. N. Gabrichevskiy» of Rospotrebnadzor.

Isaeva E. I. — doctor of biological Sciences, head of the laboratory of immunology of FSBI «Research Institute of Virology D. I. Ivanovsky» Ministry of Health of Russia.

Chebyshev N.V. — doctor of medical Sciences, Professor, RAE academician, head of chair of biology and General genetics, First MSMU of I. M. Sechenov.

Bondarev A. V. — candidate of medical Sciences, Junior researcher of clinical Department of infectious pathology, Federal STATE institution of science Central research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor RF, Moscow. Gorelov A. V. — doctor of medical Sciences, Professor, head of clinical Department of infectious pathology, the Central research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor RF.

Плоскирева

Антонина Александровна

Ploskireva Antonina A. antonina@ploskireva.com

Резюме

В статье представлены результаты экспериментального изучения патогенетических аспектов цитомукопротектив-ной терапии острых кишечных инфекций на примере биологической модели. Показаны эффекты терапии желатином таннатом и диоктаэдрическим смектитом, заключающиеся в оказание протективного действия на слизистую оболочку кишечника на фоне вирусной кишечной инфекции, проявляющегося в виде уменьшения степени выраженности острого энтерита. Результаты эксперимента убедительно продемонстрировали преимущества раннего назначения цитомукопротективных средств в терапии острых кишечных инфекций.

Ключевые слова: острые кишечные инфекции, терапия.

Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология 2016; 125 (1): 65-73

Summary

The article presents the results of an experimental study of pathogenetic therapy of acute intestinal infections on the example of the biological model. Gelatin Tanat and dioctahedral smectite have a protective effect on the mucosa of the colon with a viral intestinal infection. This is manifested by a reduction in the severity of acute enteritis. The results of the experiment convincingly demonstrated the benefits of early appointment cytoprotective medicine and sorbents in the treatment of acute intestinal infections.

Keywords: acute intestinal infections, therapy.

Eksperimental'naya i Klinicheskaya Gastroenterologiya 2016; 125 (1): 65-73

Эпидемиологическая ситуация в мире по заболеваемости острыми кишечными инфекциями (ОКИ) остается на стабильно неблагоприятном уровне. С января по июнь 2015 г. в Российской Федерации было зарегистрировано 16 491 случай сальмонел-лезной инфекции, из которых более половины приходилось на детей в возрасте до 14 лет (8161 пациентов). Показатель заболеваемости на 100 тыс. населения другими ОКИ, вызванными установленными бактериальными, вирусными возбудителями, а также пищевые токсикоинфекции установленной этиологии, составил в указанный период 98,3 человека, а для детского населения — 511,8. Для ОКИ неустановленной этиологии этот показатель за первые 6 месяцев 2015 г. равнялся 170,0, а для детей — 556,6 на 100 тыс. населения. Высокие показатели заболеваемости (от 13,06 до 44,98 на 100 тыс. населения) зарегистрированы в Ненецком, Ханты-Мансийском, Ямало-Ненецком автономных округах, в Томской, Тамбовской, Липецкой, Иркутской, Новосибирской, Амурской, Оренбургской, Кемеровской, Калининградской областях, республиках Коми, Мордовия, Саха [1].

Этиологическая структура ОКИ в настоящее время характеризуется преобладанием вирусных агентов над бактериальными. При этом доминирующими возбудителями являются рота- и норо-вирусные инфекции. Следует отметить, что норовирусная инфекция играет большую роль во вспышках ОКИ, а так же в случае развития инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи. Среди бактериальных инфекций лидирующие позиции в этиологической структуре занимают сальмонеллез и кампилобактериоз [2].

Среди патогенетических подходов к терапии ОКИ, помимо оральной регидратации, наиболее перспективным является использование средств, обладающих цитомукопротективным действием.

Ранее данные эффекты были описаны для некоторых сорбентов [3]. В настоящее время существуют препараты, позволяющие оказывать протективное действие на слизистую оболочку ЖКТ, уменьшая повреждающее действие возбудителей ОКИ и, как следствие снижая выраженность воспалительного процесса, синдрома дегидратации и способствуя более быстрому выздоровлению. Одним из таких средств является желатина таннат, представляющий собой комплексный препарат дубильной кислоты (танина) и желатина. Механизм терапевтического действия комплекса желатина и дубильные кислоты заключается в обеспечении цитомукопротективного действия в отношении слизистой оболочки кишечника, благодаря своей способности образовывать на поверхности слизистой оболочки пленку. Применительно к патогенетическим механизмам реализации повреждающего действия инфекционных агентов — возбудителей ОКИ — данных эффект желатина таннат позволяет уменьшить повреждающее действие на слизистую оболочку ЖКТ патогенов и, как следствие, уменьшить выраженность диарейно-го синдрома [4-6].

В зарубежных клинических исследованиях данная лекарственная композиция доказала свою эффективность в доклиничеких и клинических исследованиях, в том числе и в педиатрической практике [7-9]. Однако в поведенных за рубежом экспериментальных исследованиях дизайн работы демонстрировал профилактические свойства желатина таннат (добавление препарата к клеткам клеточной линии Caco-2, представляющих собой морфологические и биохимические аналоги эн-тероцитов в кишечнике и широко используемых для изучения функции желудочно-кишечного тракта, показал способность уменьшать адгезию E. coli и инвазию S. typhimurium в экспериментальных моделях бактериальных острых кишечных

инфекций [10]). Изучение в эксперименте лечебных свойств препарата — назначение действующего вещества после заражения подопытного животного — не проводилось.

Целью настоящего исследования было установление патогенетических аспектов цитомукопро-тективной терапии острых кишечных инфекций на примере биологической модели.

Материалы и методы

В качестве биологической модели использовались белые мышы Balb/C, чувствительных к сальмонеллам, вирусам Раушера, саркомы Молони, Френда, Коксаки, желтой лихорадки, гриппа, диареи инфантильных мышей. В исследование было включено 105 самцов линейных мышей BALB/с в возрасте

2 недель, массой тела 6-7 грамм, ветеринарное сви-детельсво 250 № 0405678 [11].

Лабораторные животные до начала исследования содержались в течение 7 дней для адаптации. В течение этого срока у животных каждый день контролировали клиническое состояние путем визуального осмотра. Животные с обнаруженными в ходе предварительного наблюдения отклонениями в экспериментальные группы включены не были.

Содержание, питание, уход за животными и выведение их из эксперимента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от 12.08.1977 г. № 755). Для кормления использовали корма для лабораторных животных по ГОСТу

3 502.58-92 производства ООО «МСТ». Основные правила по уходу за животными выполняли в соответствии с «Санитарными правилами по содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев), утвержденных приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г.

В первые сутки после рандомизации животных в исследуемых группах осуществлялось пероральное заражение вирусом подопытных животных.

В ходе эксперимента в опытную группу 1 (вирусный контроль) вошло 20 животных, которые были заражены перорально вирусом Коксаки А № 2046 из Государственной коллекции вирусов РГБУ НИИ вирусологии имени Д. И. Ивановского Минздрава России перорально в дозе LD70. Контрольную группу составили 1 условно здоровых особей. В опытную группу 2 (желатина таннат) вошло 20 животных, которые были заражены перорально тем же вирусом и в той же дозе, а спустя 3 часа получили per os препарат желатина таннат в дозе 50 мкл/мышь. В опытную группу 3 (диоктаэдрический смектит) вошло 20 животных, которые были заражены перорально тем же

вирусом и в той же дозе, а спустя 3 часа получили per os препарат диоктаэдрического смектита per os в дозе 0 мкл/мышь.

Длительность наблюдения за животными составила 21 день:

• В первые сутки после рандомизации животных на исследуемые группы случайным образом (по мере отлова в соответствии с рандомизаци-онной таблицей) осуществлялось пероральное заражение вирусом подопытных животных.

• На 3, 7, 14 (острый период заболевания) и 21 (период репарации) сутки проводился учет летальности, биохимический анализ крови (уровень общего белка в сыворотке крови, а-ГБДГ, АСТ) и клинический анализ крови. Осуществлялся забор органов для морфологического исследования (кишечник, сердце, поджелудочная железа). Морфологическое исследование осуществлялось совместно с проф. Щербаковым И. Т. (ФБУН «МНИИЭМ имени Г. Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Москва). Гистологически изучены 42 образца тощей кишки, полученные при выведении из опыта (забое) линейных мышей. Образцы тощей кишки фиксировали в спиртовом растворе формалина и заливали в парафин. Залитые в парафин образцы тощей кишки резали серийно на роторном микротоме с толщиной срезов 5 мкм. Гистологические срезы кишки депарафинировали и окрашивали альциановым синим, гематоксилином Эрлиха и эозином. В гистологических препаратах слизистой оболочки (СО) тощей кишки учитывали следующие морфометрические показатели (табл. 1).

Погибшие особи (15 животных) были исключены из исследования по техническим причинам (таблица 2).

Следует отметить, что в опытной группе 2 зарегистрированный уровень летальность 5% можно расценивать как уровень неспецифической летальности для исследований на таком типе биологических моделей [12].

Результаты анализа показателей обрабатывались статистически с расчетом t-критерия Стъюдента. Различия считались достоверными при р < 0,05, высоко достоверными — при p < 0,01 и p < 0,001, недостоверными при р > 0,05, при 0,1 > р > 0,05 — расценивалось как имеющее тенденцию.

Результаты и обсуждение

В ходе данного экспериментального исследования были изучены патогенетические аспекты цитому-копротективной терапии.

Динамика общего уровня белка (рисунок 1) характеризовалась снижением во всех группах сравнения в остром периоде заболевания. Следует

отметить, что на 3-и сутки от момента заражения достоверно наиболее высокий показатель был зарегистрирован во второй группе (желатина таннат). Это свидетельствует о цитомукопротективном эффекте препарата, реализация которого начинается в более короткие сроки от начала назначения,

Таблица 1

Патогенетическое значение

морфометрических

показателей

Морфометрический показатель Единицы измерения Патогенетическое значение

Толщина СО мкм Отражает степень ее атрофии и гипертрофии

Высота кишечных ворсинок мкм Отражает степень атрофии и гипертрофии кишечных ворсинок

Отношение толщины СО к высоте кишечных ворсинок ЕД Свидетельствует о степени атрофии кишечных ворсинок и выраженности всасывательных процессов в слизистой оболочке тощей кишки

Глубина кишечных желез мкм Свидетельствует о степени атрофии и гипертрофии кишечных желез

Отношение толщины СО к глубине ЕД Свидетельствует о степени атрофии и гипертрофии

кишечных желез кишечных желез

Свидетельствует о степени трансформации стволовой

Мукоциты в эпителии кишечных % клетки в бокаловидную, степень выработки слизи

ворсинок в кишечной ворсинке и выраженности дисбиоза в пристеночной зоне кишечной ворсинки

Мукоциты в эпителии % Свидетельствует о скорости трансформации стволовой клетки в бокаловидную, выработке слизи в кишечной

кишечных желез железе и степени дисбиотических изменений в слизистой оболочке тощей кишки

Клетки Панета на кишечную железу % Свидетельствует о степени выработки лизоцима в кишечной железе и выраженности дисбиотических изменений в слизистой оболочке тощей кишки

Митозы на кишечную железу % Свидетельствуют о скорости работы клеточного конвеера

Плотность клеточного инфильтрата в собственной пластинке кишечных ворсинок клеток в 1 мм2 Свидетельствует о степени проницаемости стенок сосудов микроциркуляторного русла (МЦР) и проникновении через их стенку соединительно-

тканных клеток

Количество лимфоцитов в клеточном клеток Свидетельствует о проникновении этих клеток через

инфильтрате кишечных ворсинок в 1 мм2 стенку сосудов МЦР

Количество нейтрофилов в клеточном инфильтрате клеток в 1 мм2 Свидетельствует о степени стабильности базальной мембраны сосудов МЦР и выраженности воспаления слизистой оболочке тощей кишки

Количество плазмоцитов в клеточном инфильтрате собственной пластинке кишечных ворсинок клеток в 1 мм2 Свидетельствует о степени трансформации лимфоцитов в плазмоциты

Количество фиброцитов, фибробластов, макрофагов и свободных соединительнотканных клеток клеток в 1 мм2 Свидетельствует о коллагенобразующих фагоцитирующих процессах в собственной пластинке

Количество межэпителиальных лимфоцитов (МЭЛ) в эпителии % Свидетельствует о степени повреждения

кишечных ворсинок

Таблица 2

Учет летальности в группах сравнения

Опытные группы Абсолютное количество погибших особей животных, штук Доля погибших животных

Номер Характеристика 3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки в группе, %

1 Вирусный контроль (LD70) 7 7 0 0 70

2 Желатина таннат 0 0 1 0 5

3 Диокаэдрический смектит 0 0 0 0 0

чем препарата сравнения. В третьей группе (ди-октаэдрический смектит) при динамическом наблюдении отмечалось постепенное возрастание общего белка сыворотки крови с нормализацией показателя к 21 дню от момента заражения.

Динамика уровня АСТ в сыворотке крови показала, что наиболее выраженные изменения (достоверно выходящие за рамки референсных значений) были отмечены в первой группе (вирусный контроль) на 3, 7 и 14 сутки. Во второй группе опытных животных на протяжении всего периода наблюдения уровень АСТ достоверно не выходил

за границы референсных значений, подтверждая цитомукопротективные свойства препарата. При этом на 3 сутки он был достоверно ниже, чем животных других опытных групп (р < 0,01). В третьей группе (диоктаэдрический смектит) сопоставимый с референсными значения уровень АСТ наблюдался начиная с 7 суток наблюдения (рисунок 2).

Повышение уровня а-ГБДГ в сыворотки крови в первой группе (вирусный контроль) достоверно значимо превышало границы референсных значений на протяжении всего периода наблюдений. Во второй группе (желатина таннат) было отмечено

60 -

50 -

40 -

3

vo О

46,1

38,1 39,1

■i"

41,8

44,9 49

НЕ *

47,1 £

39,8

-г-

57,5 -i-

Сутки

О Вирусный контроль LD70 □ Желатина танат □ Смектит ^^ Контроль (без заражения)

Рисунок 1

Динамика уровня общего белка в группах сравнения, в г/л

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

140,0 -120,0 -100,0 -80,0 -60,0 -40,0 -20,0

0,0

95,3

49,8

i

119,6

106,7

83,6

52,9

43,5

"Ь

т

71,3

60,3

65,5 59,6 -ЬпТ 50,7

i

Границы

референсных

значений

Сутки

□ Вирусный контроль LD70 □ Желатина танат □ Смектит

Рисунок 2

Динамика уровня АСТ в группах сравнения, в моль/л

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

**

я

30 -

20 -

10 -

0

3

7

14

21

3

7

14

21

388,0

291,3

219,0

374,3

266,3

299,0 248,5 r-i

207,7 "i

250,5

163,0

=Й

189,7 200,0

£

Границы

референсных

значений

7

14

21

Сутки

□ Вирусный контроль LD70 □ Желатина танат □ Смектит

Рисунок 3

Динамика уровня а-ГБДГ в группах сравнения, в моль/л

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

3

достоверно менее выраженное отклонение данного показателя от нормы на 3-и сутки с нормализацией к 21 дню от момента заражения.

В третьей группе (диоктаэдрический смектит) достоверноеснижение а-ГБДГ по сравнению с другими группами наблюдалось начиная с 7 суток с нормализацией данного показателя к 14 дню наблюдения (рисунок 3).

Так же были проанализированы показатели клинического анализа крови в сравниваемых группах.

Динамика уровня общего количества лейкоцитов в группе вирусного контроля характеризовалась максимальным подъемом на 7 сутки от момента заражения с постепенным снижением до границ референсных значений к 21 дню. В опытных группах 2 и 3 на 3, 7, а для группы 3 и на 14 и 21 сутки

значения общего количества лейкоцитов находились в границах норм. Во второй группе (желатина таннат) повышение данного показателя зарегистрировано на 14 сутки и было сопоставимо с уровнем, отмеченным в группе вирусного контроля (рисунок 4).

Достоверное повышение процентного содержания палочкоядерных нейтрофилов в первой группе (вирусный контроль) наблюдалось с 7-х суток и к 21 дню наблюдения не нормализовалось. В опытных группах 2 и 3 на 3 и 7 сутки уровень палочкоядерных нейтрофилов не выходил за границы референсных значений. Во второй опытной группе (желатина таннат) было отмечено повышение данного показателя на 14 сутки с нормализацией к 21 дню. В опытной группе 3 (диокта-эдрический смектит) на протяжении всего периода наблюдения уровень палочноядерных нейтрофи-лов находился в границах референсных значений (рисунок 5).

Динамика уровня сегментоядерных нейтрофилов характеризовалась снижением их процентного содержания относительно границ референсных значений начина с 7 суток наблюдения в группе вирусного контроля и 14 суток — в опытных группах (рисунок 6). Восстановление данного показателя

к 21 дню наблюдения было зафиксировано только в третьей группе (диоктаэдрический смектит).

Уровень лимфоцитов достоверно повышался только на 7 сутки наблюдения в группе вирусного контроля. Между опытными группами достоверных различий по данному параметру получено не было.

Превышение границ референсных значений по уровню моноцитов было отмечено на 3 сутки во второй группе (желатина таннат), начиная с 7 и до 21 суток в группе вирусного контроля, на 14 сутки в третьей группе (диоктаэдрический смектит) (рисунок 7). Данная динамика уровня моноцитов позволяет говорить о том, что назначение цитомукопротективной терапии желатина таннатом не препятствует презентации антигенов возбудителя и выработке иммунного ответа.

Не было зафиксировано отклонений от границ референсных значений по уровню эозинофилов на протяжении всего периода наблюдения в опытных группах говорит о хорошем профиле безопасности данных лекарственных средств.

Результаты анализа морфометрических показателей так же демонстрировали преимущества раннего назначения цитомукопротективной терапии. У животных контрольной группы (без заражения) отклонений в морфологическом строении

Рисунок 4

Динамика уровня общего количества лейкоцитов в группах сравнения, в 1х109/л

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки

Вирусный контроль Желатина танат + Вирус Диоктаэдрический смектит + Вирус

Рисунок 5

Динамика уровня палочкоядерных нейтрофилов в группах сравнения, в %

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

3,04

й

2 2 ^TÎ-

8,04

1,08 1,13

"Ъ 7,4

6,03 й

** Границы 2 референсных

значении

3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки

□ Вирусный контроль □ Желатина танат + Вирус □ Диоктаэдрический смектит + Вирус

30

25

15

28,39 28 27,8

27,24

28,19

8,2

15,79

30,5 Границы

референсных

значении

3 сутки 7 сутки 14 сутки 21 сутки

□ Вирусный контроль О Желатина танат + Вирус О Диоктаэдрический смектит + Вирус

Рисунок 6

Динамика уровня сегментоядерных нейтрофилов в группах сравнения, в %

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

20

10

5 -

0

5 -4,5

4 -3,5

3 -2,5 2 -1,5 -1

0,5 -0

-0,5 -

1,98

Ï

1,06 -Ь-

4,04

4,06

i

1,6

0,59

3 сутки G Вирусный контроль

3,15

Т Границы

референсных

значении

7 сутки 14 сутки 21 сутки

О Желатина танат + Вирус G Диоктаэдрический смектит + Вирус

Рисунок 7

Динамика уровня моноцитов в группах сравнения, в %

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

3

2

2

слизистой оболочки кишечника зафиксировано не было (рисунок 81).

У всех животных опытных групп выявляли картину острого катарального энтерита на 3, 7 и 14 сутки, а на 21 сутки — острый катаральный энтерит с обратным развитием патологического процесса.

Для острого периода энтерита в гистологической картине было характерно наличие эпителиальных клеток в состоянии слизистой дистрофии (увеличение количества бокаловидных клеток), выраженного клеточного (лимфоцитарного) инфильтрата в соединительнотканной основе ворсинок и всей толще слизистой оболочки. Кровеносные и лимфатические сосуды собственной пластинки кишечных ворсинок были расширены.

У животных первой опытной группы (вирусный контроль) отмечались наиболее выраженные изменения СО тощей кишки (рисунок 9).

Гистологические проявления острого энтерита в опытных группах два (желатина таннат) и три (диоктаэдрический смектит) в аналогичные сроки развития инфекции были менее выраженными, чем в опытной первой группе. При этом

морфологические проявления острого вирусного энтерита во второй группе (рисунок 10) несколько уступали по выраженности воспалительной реакции СО тощей кишки таковым для животных третьей группы (рисунок 11).

Для объективизации гистологических данных была проведена оценка морфометрических показателей в группах сравнения в динамике на 3, 7, 14 и 21 сутки от момента заражения. У животных контрольной группы, не подвергшихся заражению, биологический материал забирался в те же сроки.

Толщина СО тощей кишки при заражении перорально вирусом Коксаки А № 2046 между опытной группой 1 и нормальными значения достоверно не различалась. По сравнению с вирусным контролем и группой 3 (диоктаэдрический смектит) в группе 2 (желатина таннат) на 7 сутки было достоверное снижение данного показателя.

Высота ворсинок в группах 2 и 3 по сравнению с вирусным контролем была достоверно выше (рисунок 12).

Глубина кишечных желез была достоверно меньше в группе 3 (диоктаэдрический смектит)

1 Иллюстрации к статье — на цветной вклейке в журнал.

Рисунок 12

Высота ворсинок в мкм в группах сравнения при динамическом наблюдении

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

450,00 -|

400,00

S х Ж

о 350,00 -

я 300,00 -

250,00

200,00

320 330,00 315

240,00

3 сутки ЛД70 7 сутки ЛД70 14 сутки ЛД70 21 сутки ЛД70

Вирусный контроль Желатина танат Диоктаэдрический смектит

Рисунок 13

Индекс СО/ВВ в относительных ЕД в группах сравнения при динамическом наблюдении

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

2,50

2,00

ш

m 1,50 -

CQ

О и

и

® 1,00 ч

ч

0,50 -

0,00

3 сутки ЛД70 7 сутки ЛД70 14 сутки ЛД70 21 сутки ЛД70

Норма Вирусный контроль Желатина танат Диоктаэдрический смектит

Рисунок 14

Нейтрофилы инфильтрата (1 мм2) в группах сравнения при динамическом наблюдении

Примечание:

* р < 0,05, ** р < 0,01.

3 сутки ЛД70 7 сутки ЛД70 14 сутки ЛД70 21 сутки ЛД70

• Норма Вирусный контроль Желатина танат Диоктаэдрический смектит

1400

1200

1000

800

600

400

200

посравнению с группой 2 (желатина таннат) на 7 и 14 сутки, и по сравнению с группой вирусного контроля на 21 сутки.

Индекс СО/ВВ в опытной группе 1 (вирусный контроль) был достоверно выше нормы и показателей групп 2 и 3 на 7 и 14 сутки (рисунок 13). Индекс ВВ/крипта на 7 сутки был достоверно ниже в группах 1 и 2 по сравнению с нормой и опытной

группой 3. А на 14 сутки достоверно минимальные значения данного показателя получены в группы вирусного контроля. В группе 2 в этот период данный показатель был достоверно меньше значения, полученного для группы 3.

Плотность клеточного инфильтрата (1 мм2) в группах сравнения при динамическом наблюдении была достоверно выше во все периоды наблюдения

в группе вирусного контроля. На 7,14 и 21 сутки данный показатель в опытных группах демонстрировал однонаправленность — был достоверно меньше по сравнению с группой вирусного контроля.

Количество плазмоцитов инфильтрата в группах сравнения при динамическом наблюдении была достоверно выше во все периоды наблюдения в группе 3. На 7, 14 и 21 сутки данный показатель был достоверно выше в группе 2 по сравнению с группой 1.

Количество лимфоцитов инфильтрата в группах сравнения на 7, 14 и 21 сутки было достоверно выше нормы. А на 7 сутки в группе 3 данный показатель был достоверно выше, чем в группе 2.

Количество нейтрофилов инфильтрата в группе вирусного контроля на 7, 14 и 21 сутки было достоверно выше, чем в других группах (рисунок 14). При этом между группами 2 и 3 были получены достоверные различия по данному параметру на 21 сутки (выше в группе 2 — желатина таннат).

Мукоциты ворсинок (в% на кишечную ворсинку) в группе вирусного контроля по сравнению с нормой были достоверно выше на 14 и 21 сутки. В группах 2 и 3 в остром периоде инфекции

данный показатель носил однонаправленный характер и был достоверно выше, чем в группе вирусного контроля. Мукоциты желез (в % на кишечную железу) в группах сравнения были достоверно выше нормы на 14 и 21 сутки. Между опытными группами достоверных различий получено не было.

Таким образом, основные патогенетические аспекты терапии желатина таннатом и диоктаэ-дрическим смектитом заключаются в оказание протективного действия на слизистую оболочку тощей кишки на фоне вирусной острой кишечной инфекции, проявляющегося в виде уменьшения степени выраженности острого энтерита (более выраженная высота кишечных ворсинок, менее выраженная плотность клеточного инфильтрата и более оптимальный его клеточный состав) в сравнении с отсутствием терапии. Данное исследование позволяет рекомендовать раннее назначение цитомукопротективной терапии при острых кишечных инфекциях, как демонстрирующее свою эффективность и хороший профиль безопасности в экспериментальном исследовании на примере биологической модели.

Литература

1. Сведения об инфекционных и паразитарных заболеваниях (Форма 1) за январь-июнь 2015. www. rospotrebnadzor.ru (http://www.rospotrebnadzor.ru/ activities/statistical-material s/statictic_details. php?ELEMENT_ID=3919). Вход 10.08.2015.

2. Малеев В. В., Горелов А. В., Усенко Д. В., Кулешов К. И. Актуальные проблемы, итоги и перспективы изучения острых кишечных инфекций // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2014. № 1. С. 4.

3. Горелов А. В. Терапия острых кишечных инфекций у детей в современных условиях // Вопросы современной педиатрии. № 4/том 3/2004. С. 72-78.

4. Haslam E. Natural polyphenols (vegetable tannins) as drugs: possible modes of action. J Nat Prod 1996. 59: 205-215.

5. Miguel Angel, Alonso Cohen, Marco Di Fulvio. Патент EP 2526939 A1. Gelatine tannate and associations thereof for use in the treatment of inflammatory gastrointestinal diseases.

6. Frasca G, Cardile V, Puglia C, Bonina C, Bonina F. Gelatin tannate reduces the proinflammatory effects of lipopolysaccharide in human intestinal epithelial cells. Clin Exp Gastroenterol. 2012;5:61-7.

7. Esteban Carretero J, Durbán Reguera F, López-Argüeta Alvarez S, López Montes J. A comparative analysis

of response to vs. ORS + gelatin tannate pediatric patients with acute diarrhea. Rev Esp Enferm Dig 2009; 101:41-48.

8. Marek Ruszczynski, Magdalena Urbanska, and Hania Szajewska. Gelatin tannate for treating acute gastroenteritis: a systematic review. Ann Gastroenterol. 2014; 27 (2): 121-124.

9. Allegrini A, Costantini M. Gelatine Tannate for the Treatment of Acute Diarrhoea in Adults. J Gastrointest Digest Sys 2012. 2:110.

10. Meloni M et al., New insights into the mechanism of action of Gelatine Tanate for Acute diarrhoea, protection against bacterial infection. Presented at the GFHGHP Congress, March 2012. Nantes, France.

11. Бландова З. К., Душкин В. А. и др. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований. — М. Наука, 1983 г., с172.

12. Руководство по лабораторным животным и альтернативным моделям в биомедицинских технологиях под редакцией: Н. Н. Каркищенко и С. В. Грачева. Москва — 2010. 344 с.

13. Michael S. D. Agus, Tom Jaksic. Nutritional support of the critically ill child // Current Opinion in Pediatrics. 2002; 14: 470-481.

К статье

Патогенетические аспекты цитомукопротективной терапии острых кишечных инфекций (стр. 65-73)

Рисунок 8 (слева)

Эпителий тощей кишки у мышей контрольной группы (норма) (1 — выраженная альцианопозитивная слизь, 2 — кишечные ворсинки правильной пальцевидной формы, 3 — умеренное количество клеточного инфильтрата). Окраска альциановым синим, гематоксилином Эрлиха и эозином. Ув. Х 320

Рисунок 9 (справа)

Эпителий тощей кишки у мышей опытной группы 1 (вирусный контроль) на 14 сутки от момента заражения (1 — сла-бовыраженный альцианопо-зитивный слизистый секрет, 2 — кишечные ворсинки правильной пальцевидной формы, 3 — выраженный воспалительный клеточный инфильтрат в собственной пластинке кишечных ворсин, 4 — минимальное содержание клеток Панета в дне кишечных желез ). Окраска альциановым синим, гематоксилином Эрлиха и эозином. Ув. Х 200

V

щ

IV '1

, я»»

•Ж

а-

Щ X

^ Л

I

✓

I

Рисунок 10 (слева)

Эпителий тощей кишки у мышей опытной группы 2 (желатина таннат) на 14 сутки от момента заражения (1 — слабовыраженный альцианопозитивный слизистый секрет, 2 — кишечные ворсинки седловидной формы, 3 — выраженный воспалительный клеточный инфильтрат в собственной пластинке кишечных ворсин, 4 — большое количество клеток Панета в дне кишечных желез). Окраска альциановым синим, гематоксилином Эрлиха и эозином. Ув. Х400

Рисунок 11 (справа)

Эпителий тощей кишки у мышей опытной группы 3 (диоктаэдрический смектит) на 14 сутки от момента заражения (1 — слабовыраженный альцианопозитивный слизистый секрет, 2 — кишечные ворсинки пальцевидной формы, 3 — умеренный воспалительный клеточный инфильтрат в собственной пластинке кишечных ворсин, 4 — большое количество клеток Панета в дне кишечных желез). Окраска альциановым синим, гематоксилином Эрлиха и эозином. Ув. Х400