CC BY
44
2015
ВЕСТНИК САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО УНИВЕРСИТЕТА
Сер. 11
Вып. 2
ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ АНАТОМИЯ
УДК 616.37+616.44 В. И. Утехин
ПАНКРЕАТИЧЕСКИЙ ЭПИТЕЛИЙ В УСЛОВИЯХ ГИПОТИРОЗА
Санкт-Петербургский государственный университет, Российская Федерация, 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., 7-9
Охарактеризованы различные отделы панкреатического эпителия крысы (околоостров-ковые и удаленные от островков ацинусы, вставочные отделы протоков и центроацинарные клетки, внутри- и междольковые протоки, панкреатические островки различных размерных классов) в условиях гипотироза. В качестве модели гипотироза использовали тироидэктомию. Тироидэктомия приводила к: задержке нарастания веса экспериментальных животных; угнетению синтеза ДНК в ядрах и снижению включения 35 S-метионина в цитоплазму клеток экзо-кринного эпителия как в околоостровковых, так и в отдаленных от островков концевых отделах; возрастанию общего объема островковой ткани (+61% через 30 суток после тироидэктомии); возрастанию В/А — клеточного объемного отношения в панкреатических островках средних размерных классов; угнетению синтеза ДНК в панкреатических островках малых размерных классов (наиболее молодые островки); снижению включения 35 S-метионина в цитоплазму клеток панкреатических островков всех размерных классов; заметному возрастанию количества «смешанных», экзоэндокринных, клеток в составе панкреатических островков, околоостровковых, удаленных от островков концевых отделов и в составе эпителия протоков. Островковые В-клетки на ранних сроках после тироидэктомии представлены, в подавляющем большинстве, «светлыми» слабо синтезирующими и секретирующими, с возрастающим количеством фигур гранулолизиса. Через 30 суток опыта В-клетки представлены популяцией «светлых» В-клеток, накапливающих секреторный материал. «Темные» активно синтезирующие В-клетки единичны. И А-, и В-клетки содержат в цитоплазме возрастающее (особенно к 30-м суткам после тироидэктомии) количество миелиновых фигур, кринофагических вакуолей и лизосом. Библиогр. 51 назв. Ил. 13. Табл. 6.
Ключевые слова: тироидэктомия, панкреатический эпителий, морфометрия, цитоспектро-фотометрия, ауторадиография, ультраструктура, «смешанные» клетки.
PANCREATIC EPITHELIUM UNDER THE HYPOTHYROID CONDITION
V J. Utekhin
St. Petersburg State University, 7-9, Universitetskaya nab., St. Petersburg, 199034, Russian Federation
Changes in different parts of pancreatic epithelium (acini surrounding the islets, common acini, intercalated ducts and centroacinar cells, intra- and interlobular ducts, small, medium and large pancreatic islets) have been studied under hypothyroid condition using thyroidectomy as a model of hypothyroidism. Thyroidectomy gave rise to the retardation in the growth of body weight in experimental animals, the suppression of DNA synthesis in nuclei and 35S — methionine incorporation into cytoplasm of exocrine cells (acini surrounding the islets and common acini), the increase in the total islet volume (+61% on 30th day after thyroidectomy) and B/A — cell volume ratio in pancreatic islets of middle classes. Simultaneously, the suppression of DNA synthesis in the nuclei of islet cells in small pancreatic islets and also the incorporation of 35S — methionine into cytoplasm of islet cells of all classes of pancreatic islets
was observed. At the same time, a marked increase was revealed in the number of "mixed" (exo — endocrine) cells in pancreatic islets, in acini surrounding the islets, in common acini and in duct epithelium. At early stages after thyroidectomy islet B — cells were "light" ones with weak signs of synthetic activity, with signs of secretion and with increased number of granulolysis figures. After 30 days of experiment islet B-cells were mainly "light" B-cells, accumulating secretory granules. "Dark" B-cells (cells with actively synthetic function) were seldom observed. Both A- and B-cells show the trend towards the growth of myelin figures, crinophagic vacuoles and lysosomes in their cytoplasm. Refs 51. Figs 13. Tables 6.
Keywords: thyroidectomy, pancreatic epithelium, morphometry, cytospectrophotometry, autoradi-ography, ultrastructure, "mixed cells".
Хорошо известно, что гипотироз как синдром распространен у «5-10% населения любых возрастов с тенденцией к учащению» [1]. Одна из важных особенностей измененного метаболизма гипотироидного больного — выраженная гиперхоле -стеринемия, обусловливающая (в сочетании с гиперкальциемией и гипокинезией желчных путей) развитие желчекаменной болезни и ее осложнений [1-4]. Другая важная особенность клиники гипотироза — нарушение толерантности к глюкозе по диабетическому типу у более чем половины пациентов [2]. Больные с опухолями поджелудочной железы имеют сниженные уровни свободного Т3 (FT3) [5], каждый десятый больной сахарным диабетом 2-го типа — дисфункцию щитовидной железы [6], а больные микседемой — повышенные уровни иммунореактивного инсулина (IRI) [7]. B свете этих данных изучение структурной организации панкреатического эпителия в условиях гипотироза представляется весьма существенным. Работы последних лет сосредоточены в основном на тонких механизмах взаимодействия ти-роидных гормонов и клеток-мишеней, и прежде всего панкреатических B-клеток. Так, показано, что митохондриальный Т3 рецептор р43, действующий как митохон-дриальный транскрипционный фактор генома органеллы, является важным регулятором функционирования панкреатических островковых B-клеток и гомеостаза глюкозы [8]. Bыявлена положительная связь между уровнями T3, FT3 и инсулино-вым ответом на аргинин (AIR — Acute Insulin Response — test) у больных сахарным диабетом 2 типа, имеющих нормальную функцию щитовидной железы [9]. Показано также, что рецептор к тироидному гормону (TRa) играет решающую роль в увеличении массы B-клеток в постнатальном периоде и необходим для репрограммирования образующих эластазу ацинарных клеток в инсулинпродуцирующие клетки [10]. Авторы склонны рассматривать тироидные гормоны как физиологический регулятор функционального созревания B-клеток, действующий через индукцию образования транскрипционного фактора MAF A [11]. Если гипотироз снижает, то Т3 вызывает эксперессию гена проинсулина [12, 13]. Опубликованные нами ранее данные об ультраструктуре островковых B-клеток в условиях гипотироза [14] не затрагивают иные характеристики различных отделов панкреатического эпителия в этих условиях и нуждаются в существенном дополнении.
Цель работы — характеристика основных морфологических параметров различных отделов эпителия поджелудочной железы (ПЖ) после тироидэктомии.
Материал и методы. Исследование проведено на крысах-самцах Bистар со средним начальным весом 166,0±2,2 г (55 шт.). Контролем служили ложнооперирован-ные животные (32 шт.). Bсем подопытным животным была произведена тироидэк-томия [15]. B различные сроки после начала опыта (1, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30 и 60 суток) крыс забивали декапитацией после суточного голодания в11ч утра.
Световая микроскопия. Кусочки ПЖ фиксировали в жидкостях Карнуа, Буэна, обезвоживали и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином Ясвоина и трехцветной смесью Гомори [16]. «Суммарные белки» выявляли сулемой-бромфе-ноловым синим (СБФ) в модификации П. В. Макарова [17]. Для выявления цитоти-пов в панкреатических островках (ПО) 4-микронные срезы окрашивали паральде-гидфуксином (РАБ) [18] после предварительного тиосульфирования [19] или хромовым гематоксилином [20] и докрашивали трехцветной смесью Гомори.
Морфометрические исследования включали: изучение веса животных, веса головки и тела ПЖ, общего островкового объема, В/А — клеточного объемного отношения, площади ядер и ядрышек клеток панкреатического эпителия.
Изучение веса животных. Все животные взвешивались после 24-часового голодания до начала опыта и в момент забоя. Сравнивали средние значения веса тела до начала опыта и через 30 суток. Вычисляли средний привес. Количество животных в подопытной и контрольной группах было 19 и 32 соответственно.
Изучение веса головки и тела ПЖ. Головку и тело ПЖ подопытных (19 шт.) и контрольных (32 шт.) животных тщательно иссекали и помещали в жидкость Буэна. Через несколько минут отделяли ткань железы от окружающих тканей и помещали в тот же фиксатор на 24 ч, после чего кусочки обсушивали и взвешивали на торзионных весах.
Определение общего объема островковой ткани проводили на материале, фиксированном в жидкости Буэна. Использовали метод Не11тап [21-23]: в каждом десятом из 200 серийных 4-микронных срезов, окрашенных РАБ и трехцветной смесью Гомори, подсчитывали число панкреатических островков VI и более VI классов (средние и крупные островки), что достоверно отражает объем островковой ткани. Классы островков определяли шаблоном, рекомендованным 8. Бе)шпд [24]. Количество животных в контроле составило 5, в опыте — 6.
Для определения площади ядер и ядрышек клеток различных отделов панкреатического эпителия использовали формулу эллипса, наибольший и перпендикулярный ему диаметры которого определяли винтовым окуляр-микрометром МОВ-15 X при общем увеличении 750Х — для ядер и 3375Х — для ядрышек. Количество животных в контроле было 3, в опыте — 3.
В/А — клеточное объемное отношение изучали в ПО «выборкой по точкам» [25] на срезах, на которых определяли общий объем островковой ткани. Количество животных в контроле было 5, в опыте — 4.
Изучение уровня синтеза ДНК. Для характеристики уровня синтеза ДНК использовали 3Н-тимидин («Изотоп», уд. акт. 9,8 мкКи/мл), который вводили вну-трибрюшинно за 1ч до забоя. Одновременно с подсчетом количества меченых 3Н-тимидином ядер в различных отделах панкреатического эпителия подсчитывали количество митозов и количество дегенерированных ядер, руководствуясь при этом рекомендациями Г. С. Катинаса [26]. За меченое считали ядро, над которым обнаруживалось не менее 5 зерен восстановленного серебра. Индекс мечения выражали в процентах.
Изучение обмена белков. Для изучения обмена белков животным за 2 ч до забоя (момент максимального включения изотопа в экзокринный эпителий) внутри-брюшинно вводили 358-метионин («Изотоп», уд. акт. 1,9 мкКи/мл). Индекс мечения определяли как среднее количество зерен серебра на 1 квадрат окулярной сетки
за вычетом фона (среднее количество зерен серебра на 1 квадрат окулярной сетки в эмульсии, не покрывающей срез ткани) при общем увеличении 2250Х. В каждом случае для экзокринной части железы обсчитывали не менее 10 околоостровковых и не менее 10 ацинусов, удаленных от панкреатических островков. В панкреатических островках подсчет треков проводили раздельно над А- и В-клетками не менее чем в 10 островках каждой размерной группы. Выбор островков был случайным. Все островки разбивали на три группы: мелкие (II-III классы ), средние (IV-IX классы) и крупные (X и >X классы) при помощи шаблона (Tejning, 1947). При анализе автографов границы классов островков были сознательно смещены влево, поскольку фиксатор Карнуа заметно сильнее сжимает материал в ходе фиксации, чем жидкость Буэна. Ошибку метода при подсчете треков 358-метионина вычисляли из двойных определений по формуле
S оп =±j£ d 2/2n,
где d — разность между дупликатами, а n — число дупликат [27]. В наших подсчетах ошибка не превышала 4,8%.
Во всех случаях анализа количественных данных для определения различий в контроле и опыте использовали ^-критерий [28].
Изучение количества цитоплазматической РНК. Количество цитоплазмати-ческой РНК изучали цитоспектрофотометрически на материале, фиксированном в жидкости Карнуа. Толщину срезов определяли на двойном микроскопе МИС-11. Срезы окрашивали свежеприготовленным красителем галлоцианин — хромовые квасцы по Эйнарсону [29]. Оптическую плотность (D) определяли сканированием на цитофотометре МУФ-5 при длине волны 560 нм. Количество цитоплазматиче-ской РНК определяли по формуле
Q = C х Sdot.,
где Q — количество РНК (усл. ед.), С — концентрация РНК (усл. ед.), Sdot. — средняя площадь цитоплазмы в мкм2. В свою очередь, С определяли по формуле
С = D/H,
где Н — толщина среза в мкм.
Среднюю площадь цитоплазмы находили, умножая площадь ядра ^ядра = п/ 4 (B х L), где В и L — малый и большой диаметры ядра) на цитоплазменно-ядерное отношение. Значения количества РНК (усл. ед), приводимые в таблицах, — среднее для трех животных.
Для электронно-микроскопического исследования кусочки ПЖ брали под тио-пенталовым наркозом, фиксировали в 2% глутаральдегиде на буфере Миллонига, постфиксировали в фиксаторе Колфилда, обезвоживали и заливали в смесь эпон-аралдит или в эпон 812 [30]. После предварительного просмотра полутонких срезов производили прицельную заточку блоков и делали ультратонкие срезы, которые окрашивали уранилацетатом и цитратом свинца и просматривали на электронном микроскопе JEM-7A при ускоряющем напряжении 80 кВ. Количество животных при ЭМ анализе в подопытной серии было: 5 суток — 4, 10 суток — 3, 30 суток — 4.
Результаты. Изучение веса животных. Средний начальный вес животных контрольной группы составил 161,8±2,8 г. Через 30 суток животные контрольной группы прибавили в среднем 18,0±0,9 г.
Средний начальный вес подопытных крыс был 166,0±2,2 г. Через 30 суток после тироидэктомии вес подопытных животных практически не изменился: 168,0 ±5,0 г.
Изучение веса головки и тела ПЖ. Средний вес головки итела ПЖ упо-допытных животных через 30 суток после тироидэктомии составил 322,0±30,1 мг, тогда как у животных контрольной группы средний вес головки и тела ПЖ был 370,0±14,1 мг (различия недостоверны).
Определение общего объема островковой ткани. При подсчете ПО VI и >У1 классов, составляющих основную массу островкового компонента, через 30 суток после тироидэктомии величина этого параметра была на 61% больше у подопытных животных, чем у животных контрольной группы (89,6±8,8 в контроле и 144,0±10,0 утироидэктомированных крыс (Р < 0,005)).
Данные, характеризующие полученные морфометрические параметры, свойственные различным отделам панкреатического эпителия, подопытных крыс и их отличия от контрольных животных представлены в таблицах 1, 2. Морфометрические параметры экзокринных панкреацитов достоверно не изменились ни на ранних (5 суток), ни на поздних (30 суток) сроках после тироидэктомии. Достоверные изменения были выявлены в морфометрических параметрах эндокриноцитов: через 5 суток после тироидэктомии площадь В-клеток была на 30% меньше, чем в контроле; площадь А-клеток через 30 суток после тироидэктомии была на 22% меньше, чем в контроле; меньше, чем в контроле, была и площадь ядра А-клеток (-18%). Мор-фометрические параметры, характеризующие относительные объемы островковых компонентов, в изученные сроки достоверно не различались со значениями, полученными для контролей (см. табл. 2), при этом данные, полученные для В/А — клеточных объемных отношений в ПО ^Х1 размерных классов, составляющих основную массу островковой ткани, были достоверно увеличены (+56%).
Таблица 1. Данные морфометрического изучения эпителиальных клеток поджелудочной железы тироидэктомированных крыс (среднее значение площади в мкм 2± стандартная ошибка)
Срок после тироидэктомии (сутки) Экзокринная часть
околоостровковые ацинусы удаленные от островков ацинусы
клетка ядро ядрышко клетка ядро ядрышко
5 116,32±4,65 22,24±0,66 4,03±0,11 90,08±3,60 21,50±0,75 3,55±0,04
30 109,82±3,20 20,80±0,73 3,92±0,19 85,41±2,50 19,77±0,69 3,31±0,05
Эндокринная часть
А В
клетка ядро клетка ядро
5 47,67±2,34 19,30±0,55 70,83±3,54* (-30%) 23,32±0,58
30 40,96±2,04* (-22%) 16,32±0,17* (-18%) 96,56±7,34 22,46±0,67
Примечания. Приведены данные для панкреатических островков ^Х1 классов, составляющих основную массу общего островкового объема (классы островков по: Те^ш^ (1947)). Значения, достоверно отличающиеся от контрольных на уровне Р < 0,050, отмечены звездочкой.
Таблица 2. Абсолютные значения площадей (мм2), относительные объемы островковых компонентов (%) и В/А — клеточные объемные отношения в панкреатических островках различных размеров в группе тироидэктомированных крыс (среднее значение ± стандартная ошибка)
Классы островков Размерность А В К А+В+К
11-1У мм2 14,64±0,84 76,16±1,68 9,80±0,36 100,60±1,28
%% 14,55±0,84 75,70±1,67 9,74±0,36 100,00±1,27
В/А 5,20±0,51
V XI 2 мм2 63,17±2,36 333,95±11,00 52,55±2,20 449,67±13,56
%% 14,04±0, 52 74,27±2,45 11,69±0,49 100,00±3,01
В/А 5,29±0,60* (+56%)
Примечания. Классы островков по: Тещ^ (1947). А — А-клетки; В — В-клетки; К — структуры иные, чем А- и В- клетки (капилляры и соединительная ткань). В/А — В/А-клеточные объемные отношения. * — значимое отличие на уровне Р < 0,025.
Таблица 3. Включение 3Н-тимидина в эпителиальные структуры поджелудочной железы тироидэктомированных крыс (среднее значение индекса мечения ядер ± стандартная ошибка)
Срок после тирои-дэктомии (сутки) Эндокринная часть Экзокринная часть
классы ПО эпителий ацинусов эпителий протоков
11-111 1У-1Х X и > X около-островковые удаленные от панкреатических островков вставочные отделы и центро-ацинарные клетки внутри-и междоль-ковые
1 0,06±0,04* (-87%) 0,07±0,06 — — — — —
3 0,02±0,01* (-96%) 0,14±0,06 — 0,066±0,055 0,025±0,014** (-77%) 0,31±0,13* (-70%) 0,30±0,15* (-65%)
7 0,04±0,02* (-92%) 0,12±0,04 — 0,108±0,041 0,008±0,001*** (-93%) 0,20±0,09* (-81%) 0,24±0,06*** (-72%)
10 0,05±0,03* (-89%) 0,12±0,06 — — — — —
15 0,11±0,07* (-89%) 0,17±0,05 0,14±0,06 0,074±0,009** (-56%) 0,028±0,003*** (-74%) 0,16±0,08* (-85%) 0,20±0,02** (-77%)
20 0,11±0,07* (-89%) 0,11±0,05 0,14±0,05 — — — —
30 0,21±0,06* (-44%) 0,15±0,05 — 0,028±0,009*** (-53%) 0,013±0,005*** (-88%) 0,19±0,06* (-82%) 0,16±0,02** (-81%)
60 0,16±0,05* (-67%) 0,11±0,07 0,14±0,06 0,206±0,030 0,021±0,005*** (-91%) 0,07±0,01* (-93%) 0,48±0,19
Примечания. Значения, достоверно отличающиеся от контрольных, обозначены: * — Р < 0,050; ** — Р <0,005; *** — Р <0,001.
Данные, полученные при изучении особенностей синтеза ДНК в различных отделах панкреатического эпителия контрольных и подопытных животных, представ-
лены в таблице 3. Общий характер изменений в синтезе ДНК клетками различных отделов панкреатического эпителия в условиях тироидэктомии представлен на рисунке 1. Через 3 суток после тироидэктомии уровень включения 3Н-тимидина в ядра клеток экзокринного эпителия значительно снижался: на 77% — в ядра клеток аци-нусов, удаленных от ПО, на 70% — в ядра клеток вставочных отделов протоков и в центроацинарных клеток и на 65% — в ядра клеток внутри- и междольковых протоков. Эти значения оставались сниженными до конца срока наблюдения для ацину-сов, удаленных от ПО, и для вставочных отделов протоков и центроацинарных клеток. Показатели включения 3Н-тимидина в ядра клеток эпителия околоостровковых ацинусов и эпителия внутри- и междольковых протоков возвращались к контрольным уровням к концу срока наблюдения (60 суток). Ядра клеток ПО малых размерных классов включали 3Н-тимидин достоверно менее активно, чем в контроле, на всех сроках наблюдения (от -96% на 3-и сутки до -44% — на 30-е сутки).
Рис. 1. Влияние тироидэктомии на включение 3Н-тимидина в ядра клеток эпителия различных отделов поджелудочной железы подопытных животных.
Значимые отклонения от контрольных уровней в процентах. Классы панкреатических островков по Те^ш^ (1947). ОА — околоостровковые ацинусы. УА — ацинусы, удаленные от островков. П1 — вставочные отделы протоков и центроацинарные клетки. П2 — внутри- и междольковые протоки.
Данные, полученные при изучении особенностей включения 35Б-метионина в цитоплазму клеток различных отделов панкреатического эпителия подопытных животных, и их отличия от контрольных представлены в таблице 4. Общий характер изменений во включении 35Б-метионина в цитоплазму клеток различных отделов панкреатического эпителия в условиях тироидэктомии иллюстрирует рисунок 2. После тироидэктомии 358-метионин на всех сроках наблюдения менее интенсивно, чем в контроле, включался в цитоплазму клеток и экзо-, и эндокринного эпителия. Так, снижение включения изотопа в цитоплазму клеток околоостровковых ацинусов было на 27-32% и удаленных от ПО — на 38-26%. При этом сохранялась описанная нами ранее для интактных крыс закономерность: более интенсивное включение 358-метионина в цитоплазму околоостровковых ацинусов по сравнению с включе-
нием изотопа в цитоплазму ацинусов, удаленных от ПО [31]. Менее интенсивно включался изотоп и в цитоплазму островковых клеток: и А, и В во всех размерных классах (на 17-58%).
Таблица 4. Включение 35 8-метионина в цитоплазму клеток панкреатического эпителия тироидэктомированных крыс (среднее значение индекса мечения ± стандартная ошибка)
(к _ ) Эндокринная часть Экзокринная часть
п а ок &1 н § ^ тс е ( классы островков по Те^ш^ (1947)
ли о а И ^ по II -III !У-!Х X и > X ацинусы около ПО ацинусы вдали ПО
к от ок &< ® О А В А В А В
3 2,06±0,17** (-33%) 0,89±0,10*** (-60%) 2,18±0,22** (-39%) 0,93±0,13*** (-58%) 2,21±0,21* (-21%) 0,86±0,17* (-46%) 5,55±0,23** (-29%) 4,43±0,24** (-26%)
5 2,29±0,54 0,93±0,18** (-58%) 2,53±0,23* (-30%) 0,89±0,19** (-60%) 2,45±0,42 0,54±0,16* (-66%) 5,32±0,1720** (-32%) 3,72±0,22** (-38%)
15 2,93±0,28 1,56±0,09** (-29%) 2,41±0,16*** (-33%) 0,40±0,11*** (-82%) — — 5,56±0,24** (-29%) 3,95±0,21*** (-34%)
30 2,58±0,14* (-17%) 1,24±0,11*** (-43%) 2,50±0,13*** (-30%) 0,78±0,06*** (-64%) 2,76±0,14 0,68±0,06** (-58%) 5,68±0,23** (-27%) 3,98±0,19*** (-34%)
Примечания. А — А-клетки, В значены: * — Р < 0,050; ** — Р < 0,005; **
— В-клетки. Уровни значимости полученных от контроля отличий обо* — Р <0,001.
Рис. 2. Влияние тироидэктомии на включение 358-метионина в цитоплазму клеток эпителия различных отделов поджелудочной железы подопытных животных.
Значимые отклонения от контрольных уровней в процентах. ОА — околоостров-ковые ацинусы. УА — ацинусы, удаленные от островков. А — А-клетки. В — В-клетки. Классы панкреатических островков по: Те)ш^ (1947).
Данные, полученные при изучении содержания цитоплазматической РНК в цитоплазме клеток различных отделов панкреатического эпителия контрольных и подопытных животных, представлены в таблицах 5 и 6. Количество цитоплазматиче-
ской РНК было достоверно снижено в ацинусах, удаленных от ПО, на ранних сроках наблюдения (5 суток) — на 25%.
Таблица 5. Содержание цитоплазматической РНК (условные единицы) в клетках панкреатического эпителия крыс контрольной группы (среднее значение ± стандартная ошибка)
Экзокринная часть Эндокринная часть (панкреатические островки ТУ-ТХ классов)
околоостровковые ацинусы удаленные от островков ацинусы А-клетки В-клетки
7,88±0,39 6,75±0,27 1,37±0,08 3,60±0,20
Примечание. Классы островков по: Те^тгщ (1947). А — А-клетки, В — В-клетки.
Таблица 6. Содержание цитоплазматической РНК (условные единицы) в клетках панкреатического эпителия крыс после тироидэктомии (среднее значение ± стандартная ошибка)
Срок после тироидэктомии (сутки) Экзокринная часть Эндокринная часть (панкреатические островки ТУ-ТХ классов)
околоостровковые ацинусы удаленные от островков ацинусы А-клетки В-клетки
5 9,54±0,45 5,08±0,53* (-25%) 1,35±0,10 3,21±0,28
30 7,47±0,35 6,29±0,13 1,40±0,08 3,84±0,11
Примечание. Классы островков по: Те^тгщ (1947). А — А-клетки, В — В-клетки.
Клетки экзокринного эпителия в условиях тироидэктомии в основном сохраняли свой вид и свои обычные параметры (рис. 3): экзокринные панкреациты в составе ацинусов представлены «светлыми» и «темными» клетками, содержащими гранулы зимогена (рис. 3, Б).
Особенностью морфологии эпителия поджелудочной железы тироидэктомиро-ванных крыс было видимое увеличение количества островковых клеток в составе эпителия протоков (рис. 3, Д), околоостровковых ацинусов (рис. 3, Б) и удаленных от островков концевых отделов. Изредка встречаются экзокринные клетки внутри островка (рис. 3, В). Эндокриноциты же в составе концевых отделов и эпителия протоков скорее обычны, чем редки.
Через 5 суток после тироидэктомии основная масса В-клеток панкреатических островков представлена «светлыми» В-клетками (рис. 4; 5; 6, а, б), чья цитоплазма характеризуется расширенными цистернами гранулярной цитоплазматической сети, компактным пластинчатым комплексом, небольшим количеством митохондрий со светлым матриксом, умеренным содержанием в цитоплазме типичных секреторных В-гранул и относительно увеличенной долей секреторных гранул со светлой сердцевиной («светлые» В-клетки I [32]). Эти клетки секретируют (рис. 6, б): секреторные гранулы можно видеть в перикапиллярных пространствах и в непосредственном контакте с плазматической мембраной. В этих случаях базальные мембраны остров-ковой клетки и капилляра разрыхлены, а плазматическая мембрана в месте выделения гранулы может вообще отсутствовать (микроапокриновый вариант секреции). Следует отметить, что миелиновые фигуры и кринофагические вакуоли в цитоплазме и А-, и В-клеток встречаются чаще, чем в контроле.
Рис. 3. Панкреатический эпителий крысы после тироидэктомии.
А — общий вид на клетки панкреатического островка. 5 сут. Об. 60х. Б — концевой отдел экзокринной части. Светлые и темные панкреациты в составе концевого отдела. Апикальные отделы клеток заполнены зимогеном. 10 сут. Об. 60х. В — ацинарные клетки, содержащие гранулы зимогена, в составе ПО. 10 сут. Об. 60х. Г — периферическая часть ПО и околоостровковые ацинусы. Эндокриноцит в составе околоостровкового ацинуса (стрелка). 10 сут. Об. 60х. Техника А, Б, В, Г: глутаральдегид, осмий; эпон 812-аралдит; полутонкий срез, толуидиновый синий. Д — В-клетка в составе эпителия внутридолькового протока. 20 сут. Об. 60х. Е — В-клетки и Б-клетка (стрелка) в составе концевого отдела. 20 сут. Об. 60х. Ж, З — В-клетки в составе концевых отделов. 30 сут. Об. 60х. Техника Д, Е, Ж, З: Буэн; парафин; тиосульфирование-альдегид-фуксин и трехцветная смесь Оотоп.
Рис. 4. Общий вид на часть панкреатического островка среднего размерного класса. Основная масса островковых клеток — «светлые» В-клетки. А-клетка и «смешанная» клетка в составе ПО — справа вверху. Ув. 1100х.
Рис. 5. «Светлые» В-клетки в ПО через 5 суток после тироидэктомии.
Перинуклеарные пространства слегка расширены. Заметно расширены мембраны цитоплазма-тической сети, что и придает клеткам «светлый» вид. Заметно увеличена доля светлых гранул (Свг). Митохондрии немногочисленны, имеют светлый матрикс и разнообразно ориентированные кри-сты. Митохондрии с плотным матриксом единичны. Мембраны пластинчатого комплекса (ПК) обнаруживаются вблизи ядра, заметно расширены и содержат единичные секреторные гранулы. Участки прикапиллярных отделов цитоплазмы содержат и типичные, и светлые секреторные гранулы. Перикапиллярные пространства узкие, ба-зальные мембраны и капилляра, и клетки заметно разрыхлены. На некотором протяжении плазматическая мембрана клетки может не определяться, и тогда секреторные гранулы прикапиллярной цитоплазмы (и светлые, и типичные) располагаются непосредственно под разрыхленной базальной мембраной. Сг с двумя типичными сердцевинами В-клетки отмечена стрелкой. Ув. 7300х.
Рис. 6, а. «Светлые» В-клетки в ПО через 5 суток после тироидэктомии.
Мембраны цитоплазматической сети заметно расширены. Наряду с типичными в большом количестве представлены светлые В-гранулы (некоторые отмечены тонкими стрелками). Отмечены также митохондрии (М) и возросшее по сравнению с нормой число кринофагических вакуолей (толстые стрелки) и миелиновых фигур (МФ). Ув. 5000х.
Рис. 6, б. Деталь рис. 6, а. Участок прикапиллярной цитоплазмы «светлой» секретирующей В-клетки, пери-капиллярное пространство и стенка капилляра.
Микроапокриновый тип секреции. Секреторная гранула вместе со своей мембраной свободно лежит в перикапиллярном пространстве. Базальные мембраны и клетки, и капилляра разрыхлены и перикапиллярное пространство в месте расположения гранулы равномерно заполнено материалом разрыхленных базальных мембран. Две типичные В-гранулы прикапиллярной цитоплазмы отделяет от ПКП только плазматическая мембрана, третья СГ целиком располагается за ПМ клетки непосредственно под разрыхленной БМ. Фенестры капилляра закрыты. Ув. 67 000х.
«Темные» В-клетки единичны (рис. 7, а, б). На рисунке 7, а хорошо видна типичная «темная» В-клетка I [32] в окружении «светлых» В-клеток. Для типичной «темной» В-клетки I характерны признаки активного выделения секреторного материала (малое содержание секреторных гранул в цитоплазме и расположение имеющихся секреторных гранул вдоль плазматической мембраны клетки) и признаки активного синтеза секреторного материала: большое количество свободных рибосом, полисом, мембран БЦС, выраженный пластинчатый комплекс (ПК), достаточно большое количество активно функционирующих митохондрий (рис. 7, б). Среди митохондрий можно выделить митохондрии с более светлым матриксом, поперечными кристами и редкими включениями и митохондрии с плотным матриксом и разнообразно ориентированными кристами.
Рис. 7, а. 5 суток после тироидэктомии.
Единичная «темная» В-клетка в окружении «светлых» В-клеток. Количество секреторных гранул в цитоплазме резко снижено. Имеющиеся СГ располагаются вдоль ПМ клетки (отмечены стрелками). Хорошо видны многочисленные митохондрии. Ув. 12 400Х.
На вставке — контакты соседних «светлых» В-клеток: плотный контакт (zonula occludens = tight junction) — в центре и два десмосомальных контакта (таси1а adherens = desmosome) выше и ниже плотного контакта. Ув. 93 500х.
Рис. 7, б. Деталь рис. 7, а. «Темная» В-клетка I.
Расширения перинуклеарных пространств отсутствуют. В цитоплазме большое количество рибосом, полисом, мембран гранулярной цитоплазматической сети. Хорошо видны два типа митохондрий: митохондрии со светлым матриксом и поперечно ориентированными кристами (тонкие светлые стрелки), и митохондрии с плотным, почти черным, матриксом и разнообразно ориентированными кристами (короткие черные стрелки). Ув. 28 000х.
Ультраструктурные характеристики островковых А-клеток заметно не отличались от контрольных, за исключением обнаружения в цитоплазме большего, чем в контроле, количества кринофагических вакуолей (рис. 8).
Рис. 8. 5 суток после тироидэктомии.
А-клетки и «светлая» В-клетка I в гетероклеточной зоне на периферии ПО. В цитоплазме А-клеток типичные А-гранулы, мембраны ГЦС и митохондрии. Кринофагическая вакуоль в цитоплазме А-клетки отмечена стрелкой. Мембраны ЦС и ПК в типичной «светлой» В-клетке I заметно расширены. Среди секреторных В-гранул возросло количество светлых гранул. Мембранные мешочки В-гранул заметно растянуты. Митохондрии типичные с умеренно светлым матриксом и поперечно организованными кристами. Ув. 10 500х.
Элементы нервного контроля функционирования панкреатических островков (холинергические и адренергические нервные окончания) регулярно обнаруживаются в перикапиллярных пространствах гетероклеточных зон панкреатических островков (рис. 9).
Рис. 9. 5 суток после тироидэктомии. Участок гетеро-клеточной зоны ПО.
Нервные окончания (холинергическое — короткая стрелка, адренергическое — длинная стрелка) в перикапиллярном пространстве гетероклеточной зоны. Базальные мембраны хорошо выражены. Ув. 18 000х.
На периферии панкреатических островков часто располагаются «смешанные» клетки, содержащие в участках цитоплазмы, ультраструктурно организованных как цитоплазма экзокринных панкреацитов, гранулы зимогена, а в участках цитоплазмы, ультраструктурно организованных как цитоплазма эндокринных панкреаци-тов, эндокринные гранулы (рис. 10).
Рис. 10. 5 суток после тироидэктомии. «Смешанная» клетка на периферии ПО.
Вблизи ядра слева — эндокринные А- и В-секреторные гранулы, ниже слева — пластинчатый комплекс, характерный для эндокриноцита, а под ядром правее ПК — митохондрии, характерные для эндокриноцита. Над ядром — гранулы зимогена, пластинчатый комплекс, митохондрии и элементы гранулярной цито-плазматической сети, свойственные экзокринным панкреацитам. Ув. 16 350х. На вставке: А-, В- и светлые эндокринные гранулы. Ув. 101 200х.
Особенности ультраструктурной организации островковых клеток через 30 суток после тироидэктомии в определенной степени иллюстрируют рисунки 11, а, б; 12; 13 а, б, в.
Рис. 11, а. 30 суток после тироидэктомии. Участок гетереклеточной зоны.
А-клетки содержат немногочисленные типичные секреторные гранулы и митохондрии со светлым матриксом. Цитоплазма «светлых» В-клеток заполнена секреторными гранулами с малой сердцевиной и растянутым мембранным мешочком. Некоторые секреторные гранулы имеют кристаллоидную форму (стрелка). Митохондрии группируются в прикапиллярных отделах цитоплазмы. Отмечены отдельные из многочисленных миелиновые фигуры («пустой» треугольник) и кринофагические вакуоли («заполненный» треугольник). Ув. 7800х.
Рис. 11, б. Деталь рис. 11, а. Прикапиллярная часть «светлой» В-клетки, ПКП и эндотелиоциты.
В цитоплазме В-клетки хорошо видны рибосомы, полисомы и элементы БЦС. Митохондрии имеют уплотненный матрикс и разно ориентированные кристы. Секреторные гранулы с небольшой сердцевиной и большим мембранным мешочком. Отдельные гранулы вплотную примыкают к плазматической мембране. Базальные мембраны и клетки, и капилляра заметно разрыхлены и образуют почти гомогенное по плотности пространство. Эндотелиоциты прочно скреплены, а их цитоплазма заполнена множеством везикул. Ув. 38 800х.
Рис. 12. 30 суток после тироидэктомии. Область пластинчатого комплекса «светлой» В-клетки.
ПК стандартно представлен стопками цистерн, вакуолями и пузырьками (малочисленны). Цистерны пусты, отдельные вакуоли содержат электронно-плотный материал. Центральное место занимает миелиновая фигура в области ПК («заполненный» треугольник). Секреторные гранулы соседних В-клеток располагаются вдоль изогнутых плазматических мембран. Хорошо видны рибосомы, полисомы и мембраны БЦС. Ув. 41 800х.
Рис. 13, а. 30 суток после тироидэктомии. А- и В-клетки в гетероклеточной зоне ПО. Первое, что обращает на себя внимание, — необычно большое количество миелиновых фигур (стрелки) и лизосом (л) в цитоплазме иА- , и В-клеток. Ув. 6700х.
Рис. 13, б. Деталь рис. 13, а. Участок околоядерной цитоплазмы А-клетки. Миелиновые фигуры. Ув. 49 100х.
Рис. 13, в. Деталь рис. 13, а. Нервные окончания в ПКП на периферии ПО. Ув. 81 000х.
В это время среди островковых В-клеток, помимо «светлых» В-клеток I, выявляются В-клетки, содержащие в цитоплазме большое количество секреторных гранул с небольшой сердцевиной и сильно растянутым мембранным мешочком. Митохондрии в этих В-клетках располагаются преимущественно вблизи ядра или в околокапиллярных отделах цитоплазмы, имеют слегка уплотненный матрикс и неправильно ориентированные кристы; в цитоплазме заметно увеличено количество мембран гранулярной цитоплазматической сети. Цистерны пластинчатого комплекса расширены и в большинстве В-клеток пусты. Признаки выделения секрета отсутствуют. Эти характеристики свойственны тому этапу секреторного цикла, на котором имеет место синтез секреторных гранул и их накопление в цитоплазме.
А-клетки содержат значительное количество типичных А-гранул, выраженные элементы гранулярной цитоплазматической сети и митохондрии с матриксом умеренной плотности. Наиболее заметной особенностью ультраструктурной картины островковых клеток через 30 суток после тироидэктомии является необычайно большое количество лизосом, кринофагических вакуолей и миелиновых фигур.
Суммируя полученные результаты, следует отметить, что тироидэктомия приводит к:
• задержке нарастания веса экспериментальных животных: вес подопытных животных через 30 суток после тироидэктомии не изменился, тогда как контрольные крысы прибавили 11% к исходному весу. При этом вес головки и тела ПЖ у подопытных и контрольных животных достоверно не различался;
• угнетению синтеза ДНК в ядрах клеток экзокринного эпителия, выраженного в разной степени в различных отделах;
• снижению включения 358-метионина в клетки экзокринного эпителия как в околоостровковых, так и в отдаленных от островков концевых отделах;
• возрастанию общего объема островковой ткани (+61% через 30 суток после тироидэктомии);
• возрастанию В/А — клеточного объемного отношения в ПО средних размерных классов;
• угнетению синтеза ДНК в панкреатических островках малых размерных классов (наиболее молодые островки);
• снижению включения 358-метионина в клетки панкреатических островков всех размерных классов;
• заметному возрастанию количества «смешанных», экзоэндокринных, клеток в составе ПО, околоостровковых, удаленных от островков концевых отделов и в составе эпителия протоков;
• изменениям ультраструктурно выявляемых характеристик островковых клеток. В-клеточный компонент ПО представлен, в подавляющем большинстве, «светлыми» слабосинтезирующими, на ранних сроках — секретирующими, с возрастающим количеством фигур гранулолизиса, а к 30-м суткам — «светлыми» накапливающими секреторный материал клетками, тогда как «темные» активно синтезирующие В-клетки единичны. И А-, и В-клетки содержат в цитоплазме возрастающее (особенно к 30-м суткам после тироидэктомии) количество миелиновых фигур, кринофагических вакуолей и лизосом.
Обсуждая полученные результаты прежде всего следует остановиться на феномене возрастания массы островковой ткани в условиях гипотироза, описанно-
го впервые еще A. Lorand в 1904 г. [33] и неоднократно подтвержденного [34, 35]. Однако до сих пор механизмы этого явления активно обсуждаются [36, 37], и понимание их не только не становится окончательно определенным, но еще более усложняется в свете данных о пермиссивном действии тироидных гормонов по отношению к гормону роста, опосредованном тироидным рецептором: гипотиро-идное состояние сопровождается снижением уровней гормона роста [38-42]. В то же время общее направление изменений в метаболизме при гипотирозе можно охарактеризовать как состояние снижения кислородпотребляющих реакций и — как компенсация недостатка этих реакций — возрастание доли реакций, не требующих кислорода (гликолиз, пентозный шунт). Последние для своей реализации требуют глюкозу в качестве субстрата. И для эффективного переноса глюкозы в миоциты и адипоциты (переносчик глюкозы GluT 4), и для активации поступившей в клетку глюкозы (гексокиназа) нужен инсулин. Это, по нашему мнению, и создает фон повышенной потребности в инсулине, формирующийся при гипотирозе ("insulin resistance" в терминологии G. Brenta [37]), механизмы становления которого в настоящее время уточняются.
Увеличение массы островковой ткани в условиях гипотироза происходит прежде всего за счет возрастания В-клеточного компонента, о чем свидетельствует сдвиг В/A — клеточного объемного отношения в сторону увеличения в основной массе панкреатических островков — панкреатических островках средних размерных классов. Следует заметить, что эти наши заключения не противоречат известным данным A. A. Фейгиной [34] и I. Scharf et al. [43] о гиперплазии A-клеточного компонента ПО в условиях гипотироза, поскольку термин «относительный суммарный объем» свидетельствует об относительном изменении массы компонента, тогда как понятие гиперплазии относится к составляющим эту массу клеткам. В наших опытах через 30 суток после тироидэктомии имело место возрастание общего островкового объема на 61%; в островках средних размерных классов объем A-клеточного компонента уменьшился на 13%. Это означает, что при тироидэктомии произошло увеличение и В-, и A-клеточных компонентов. Если учесть, что средняя площадь A-клетки в островках средних размерных классов через 30 суток опыта была уменьшена на 22,5%, то факт реального увеличения количества A-клеток становится очевидным. Общеизвестно, что тироидные гормоны — пермиссивные агенты для выявления эффектов глюкагона, а глюкагон, в свою очередь, стимулирует функцию щитовидной железы [44]. Если предположить существование отрицательной обратной связи между уровнями глюкагона и пролиферативной активностью A-клеток, то в условиях гипотироза пролиферативная активность A-клеток должна возрастать, что и имело место.
Aнализ уровня включения 3Н-тимидина в различные отделы панкреатического эпителия (вставочные отделы протоков и центроацинарные клетки, внутри- и меж-дольковые протоки, околоостровковые и удаленные от островков концевые отделы, мелкие, средние и крупные панкреатические островки) позволил подтвердить наше исходное предположение о дифференцированном ответе эпителиальных структур поджелудочной железы на тироидэктомию. Уровень синтеза ДНК, отражающий в определенной степени способность клеточной популяции к пролиферации, был заметно снижен и держался на этом уровне до конца срока наблюдения в самых про-лиферативно активных в норме клеточных популяциях: вставочные отделы прото-
ков и центроацинарные клетки и в панкреатических островках малых размерных классов (наиболее молодые ПО).
Синтез белков, характеризуемый по включению в серусодержащие белки ^S-метионина, был безвариантно снижен во всех отделах панкреатического эпителия на всех сроках наблюдения.
Одна из особенностей, отличающих ультраструктуру островковых клеток тиро-идэктомированных крыс, — заметное возрастание в цитоплазме количества лизо-сом, кринофагических вакуолей и миелиновых фигур. Эти образования отражают динамику изменения вторичных лизосом [45] и фосфолипидов, богатых холестерином [46]. Общеизвестно, что холестерин — одна из существенных составляющих большинства биологических мембран, а также предшественник желчных кислот, стероидных гормонов и некоторых витаминов, а тироидные гормоны — важные регуляторы метаболизма холестерина. Т3 влияет на метаболизм холестерина, воздействуя в печени в нескольких критических (для метаболизма холестерина) точках: через рецептор липопротеинов низкой плотности, определяющий поступление холестерина из кровотока в печень; через 2,3-гидрокси-3-метилглутарил-коэнзим A-редуктазу, контролирующую биосинтез холестерина; через 3-холестерол-7а-гидроксилазу — лимитирующий фермент в синтезе желчных кислот [47]. Ультра-структурно выявляемое возрастание количества лизосом, кринофагических вакуолей и миелиновых фигур в цитоплазме островковых панкреацитов отражает, по нашему мнению, неспособность клеток в условиях тироидэктомии своевременно элиминировать продукты редукции мембранных структур.
Полученные результаты, говорящие о заметном возрастании частоты встречаемости эндокриноцитов в составе концевых отделов и эпителия протоков, позволяют сделать некоторые предположения о механизмах компенсации возникающей в условиях гипотироза потребности в инсулине. Создается впечатление, что в условиях возрастания потребности в функции панкреатических островков при интактном островковом аппарате компенсация (в основном и прежде всего) происходит за счет гиперплазии и гипертрофии клеточных элементов ПО и в меньшей степени за счет ацино-инсулярной трансформации [48, 49], а в условиях, когда функция В-клеток нарушена или островковые В-клетки отсутствуют, большую роль начинает играть процесс ацино-инсулярной и протоково-инсулярной трансформации. В работах последних лет показана роль различных транскрипционных факторов в реализации подобного рода процессов [50, 51].
Литература
1. Строев Ю. И., Чурилов Л. П. Эндокринология подростков. СПб.: Элби-СПб, 2004. С. 160-226.
2. Строев Ю. И., Чурилов Л. П. Aутоиммунный тироидит и желчнокаменная болезнь (к 100-летию открытия болезни Хасимото). Здоровье — основа человеческого потенциала. Проблемы и пути их решения // Труды VII Всеросс. научн.-практ. конф. с междунар. участием, 22-24 ноября 2012 г., Санкт-Петербург. Т. 7, ч. 2. СПб.: Изд-во СПбГПУ 2012. С. 493-500.
3. Строев Ю. И. О нарушениях внешнесекреторной функции поджелудочной железы после хо-лецистэктомии // Казанский медицинский журнал. 1965. №5. C. 16-18.
4. Дрягин К. А., Сильченко К. Я., Строев Ю. И. Состояние лиц, перенесших холецистэктомию // Казанский медицинский журнал. 1969. № 2. C. 55-58.
5. Wojciechowska-Durczynska K., Zygmunt A., Durczynski A. et al. The influence of liver and pancreas surgery on the thyroid function // Thyroid Research. 2012. Vol. 5. P. 21-26.
6. Tagoe E. A., Azasu H., Annan D. A. et al. Evaluation of thyroid profile in Ghanian patients with type 2 diabetes // International Journal of Advanced Research. 2014. Vol. 2, N 4. P. 602-609.
7. Andreani D., Menzinger G., Falluga F. et al. Insulin levels in thyrotoxicosis and primary myxoedema: response to intravenous glucose and glucagon // Diabetologia. 1970. Vol. 6, N 1. P. 1-7.
8. Blancher E. et al. Mitochondrial T3 receptor p43 regulates insulin secretion and glucose homeostasis // The FASEB Journal. 2012. Vol. 25. P. 40-50.
9. Wang Y. M., Ling Y. Effects of thyroid hormone on islet p cell function among type 2 diabetics with normal thyroid function // Gao X., Zhonghua Yi, Xue Za Zhi. 2013. Apr. 9.Vol. 93, N 14. P. 1084-1088.
10. Furuya F., Shimura H., Asami K. et al. Ligand-bound thyroid hormone receptor contributes to reprogramming of pancreatic acinar cells into insulin-producing cells // J. Biol. Chem. 2013. May 31. Vol. 288, N22. P. 16155-16166.
11. Aguayo-Mazzucato C., Zavacki A. M., Marinelarena A. et al. Thyroid hormone promotes postnatal rat pancreatic p-cell development and glucose-responsive insulin secretion through MAFA // Diabetes. 2013. Vol. 62, N5. P. 1569-1580.
12. Goulart-Silva F., Serranj-Nascimento C., Nunes M. Hypothyroidism decreases proinsulin gene expression and the attachment of its mRNA and eEF1A protein to the actin cytoskeleton of INS-1E cells // Brazilian Journal of Medical and Biological Research. 2011. Vol. 44. P. 1050-1057.
13. Goulart-Silva F., Serrano-Nascimento C., Texeira S. S., Nunes M. T. Triiodothyronine (T3) induces proinsulin gene expression by activating PI3K: possible roles for GSK-3p and the transcriptional factor PDX-1 // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 2013 Jan. Vol. 121, N 1. P. 14-19.
14. Утехин В. И., Герловин E. Ш. Ультраструктурный анализ В-клеток панкреатических островков крыс при тиреоидэктомии // Архив АГЭ. 1978. Т. LXXV, № 10. С. 102-106.
15. Зайчик А. Ш. О роли щитовидной железы в реакциях системы передняя доля гипофиза — кора надпочечников: дис. ... канд. мед. наук. Л., 1965. 268 с.
16. Gomori G. One-step trichrome stain // Am. J. Clin. Pathol. 1950. Vol. 20, N 7. P. 661-664.
17. Макаров П. В. Цитохимия нуклеиновых кислот. Л., 1959. 350 с.
18. Gomori G. Aldehyde-fuchsun: a new stain for elastic tissue // Am. J. Clin. Pathol. 1950. Vol. 20, N 7. P. 665.
19. Bussolati G., Basssa T. Thiosulphation aldehyde fuchsin (TAF) procedure for the staining of pancreatic В cells // Stain technology. 1974. Vol. 49, N 5. P. 313.
20. Gomori G. Observations with differential stains on human islets of Langerhans // Am. J. Path. 1941. Vol. 17. P. 395.
21. Hellman B. The total volume of the pancreatic islet tissue at different ages of the rat // Acta Pathol. Et Microbiol. Scand. 1959. Vol. 47, N 1. P. 35-50.
22. Hellman B. The volumetric distribution of the pancreatic islet tissue in young and old rats // Acta Endocrinol. (Kbh.) 1959. Vol. 31. P. 91-106.
23. Hellman B. A method for rapid estimation of the islet volume in the rat pancreas based on counting instead of measuring the islet section surfaces // Acta Pathol. Et Microbiol. Scand. 1959. Vol. 47, N 1. P. 21-33.
24. Tejning S. Dietary factors and quantitative morphology of the islets of Langerhans // Acta Med. Scand. 1947. Vol. 128, suppl. 198.
25. Chalkley H. Method for Quantitative Morphologic Analysis of Tissues // J. Nat. Cancer Inst. 1943. Vol. 4. P. 47-53.
26. Катинас Г. С. Определение стандартной ошибки среднего при пуассоновском типе распределения признака в пределах организма и нормальном — в популяции // Архив анат. 1972. Т. 62, № 4. С. 101-105.
27. Eranko Q. Quantitative Methods in Histology and Microscopic Histochemistry. Basel: S. Karger, 1955.
28. Снедекор Д. У. Статистические методы в применении к исследованиям в сельском хозяйстве и биологии. М.: Сельхозиздат, 1961. 503 с.
29. Зандриттер В., Кифер Г., Рик К. Галлоцианин — хромовые квасцы // Введение в количественную цитохимию. М.: Мир, 1969. С. 240-264.
30. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. 325 с.
31. Утехин В. И. Особенности синтеза белков в клетках различных отделов экзокринного эпителия поджелудочной железы крыс // Бюл. экспер. биол. 1974. Т. 77, № 3. С. 63-65.
32. Утехин В. И. Ультраструктурная характеристика «светлых» и «темных» В-клеток в панкреатических островках крыс // Цитология. 1979. Т. 21, № 1. С. 21-24.
33. Lorand A. 1904. Цит. по: Каневская E. И. К вопросу о взаимоотношении щитовидной и поджелудочной желез // Pусский физиологический журнал. 1924. Т. 7, № 1/6. P. 5-15.
34. Фейгина А. А. Влияние условий среды на строение и взаимоотношение секреторных элементов поджелудочной железы: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Aлма-Aта, 1953. 20 с.
35. Бреславский А. С. Клеточный состав и структурные особенности островкового аппарата поджелудочной железы в условиях различного снабжения организма тиреоидными гормонами // Aрхив анат. 1961. Т. 60. № 12. С. 19-23.
36. Brenta G. Diabetes and thyroid disorders // British Journal of Diabetes & Vascular Disease. 2010. Vol. 10, N4. P. 172-177.
37. Brenta G. Why can insulin resistance be a natural consequence of thyroid dysfunction? // Journal of Thyroid Research. 2011. Vol. 2011. Article ID 152850, 9 pages.
38. Hoogerbrugge N. Lipoprotein metabolism in hypothyroidism: the contribution of growth hormone. 1992. Proefschift Rotterdam. P. 1-144.
39. Chernausek S., Turner R. Attenuation of spontaneous, nocturnal growth hormone secretion in children with hypothyroidism and its correlation with plasma insulin-like growth factor I concentrations //J. Pediatr. 1989. Vol. 114. P. 968-972.
40. Root J., Duckett G., Sweetland M. et al. Hypothyroidism blunts the growth hormone (GH) releasing effects of human pancreatic GH releasing factor in the adult male rat in vivo and in vitro // Endocrinology. 1985. Vol. 116. P. 1703-1706.
41. Wood D., Franklyn J., Ramsden D. The effect of thyroid hormones on growth hormone gene expression in vivo in rats // J. Endocrinol. 1987. Vol. 112. P. 459-463.
42. Ye Z. N., Forman B., Aranda A. Rat growth hormone gene expression //J. Biol. Chem. 1988. Vol. 263. P. 7821-7829.
43. Scharf I., Hammer R., Leuteritz W. et al. Verteilung der A- und B-zellen sowie des inselquotienten nach contrainsularer, antithyreoidarer und antiadenohypophysarer behandlung in insel organ der weissen ratte // Z. Zellforsch. 1966. Vol. 69. P. 659.
44. Burke G. Glucagon Stimulates Thyroid Function // Endocrinology. 1970. Vol. 87, N 4. P. 701-709.
45. Хэм А., Кормак Д. Гистология в пяти томах. Т. 1. М.: Мир, 1982. 272 с.
46. Поликар А. Элементы физиологии клетки. Л.: Наука, 1976. 389 с.
47. Coria J., Carmona V., Oliveras B., Gimenez M. Hypothyroidism on Lipid Metabolism // Hypothyroidism — Influences and Treatments / ed. by Dr. Dragomira Springer. 2012. P. 3-34.
48. Утехин В. И. Цитохимический и цитологический анализ реактивных изменений островкового аппарата поджелудочной железы у новорожденных крысят при нарушении функции поджелудочной железы матери // Демонстрации на IX Международной эмбриологической конференции. Москва, 25-29 августа 1969 г. М.: Наука, 1969. С. 81.
49. Пузырев А. А. Влияние мужских половых гормонов на регенерацию поджелудочной железы: автореф. дис. ... канд. мед. наук. Л., 1969. 21 с.
50. Acinci E., Banga A., Greider L. et al. Reprogramming of pancreatic exocrine cells towards a beta-cell character using Pdx1, Ngn3 and MafA // Biochem. J. 2013. Vol. 442. P. 539-550.
51. Li W., Nakanishi M., Zumsteg A. et al. In vivo reprogramming of pancreatic acinar cells to three islet endocrine subtypes // eLIFE. 2014. Vol. 4, N 3: e01846, 20 c.
Статья поступила в редакцию 6 мая 2015 г.
Контактная информация
Утехин Владимир Иосифович — кандидат медицинских наук, доцент; utekhin44@mail.ru
Utekhin Vladimir J. — Candidate of Medicine, Associate Professor; utekhin44@mail.ru
