CC BY
26
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
Нуклеотидная последовательность вируса Кокса-ки В5 (КВ5) входит в кластер с изолятами из Китая, выделенными в 2009 г., идентичность составляет 95%. Филогенетический анализ позволяет предположить занос данного типа вируса из Китая.
Молекулярно-эпидемиологический мониторинг энтеровирусов, изолированных в 2011 г. в Иркутской области, позволил получить генетическую характеристику штаммов с их территориальной приуроченностью и повысить эффективность эпидемиологического анализа заболеваемости ЭВИ в регионе. Высокая частота выявления вирусов ECHO 6 показала значительную роль этого варианта в возникновении спорадической заболеваемости в 2011 г. среди населения Иркутской области.
Проведенный молекулярно-генетический анализ свидетельствует, что на территории Иркутской области циркулируют варианты энтеровирусов, как эндемичные для нашей территории (ECHO 6), так и те, происхождение которых связано с заносом из Европы и Азии в разные годы (КВ4, КВ5).
ОЦЕНКАУСТОЙЧИВОСТИ КЛЕТОЧНОЙ АССОЦИАЦИИ ESCHERICHIA COLI КХЛОРИДУ БЕНЗАЛКОНИЯ
П.В. Слукин12, В.Б. Родин1, В.А. Чугунов12, Е.В. Детушева1, Е.Н. Кобзев12
1ФБУН ГНЦприкладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора, п. Оболенск, Московская область 2Пущинский государственный естественно-научный институт, г. Пущино, Московская область
В настоящее время существует значительное количество методов оценки чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (АМП). Большинство из этих методов оценивают действие АМП на планктонные (свободно живущие) клетки. В естественных условиях микроорганизмы чаще всего существуют в форме клеточных ассоциаций (КА), в том числе биопленок (БП). Поэтому в практике необходимы методы оценки действия АМП на КА микроорганизмов различных типов.
В связи с этим целью данного исследования была разработка метода оценки действия АМП на КА, пригодного для практического применения.
Суть предлагаемого метода заключается в том, что КА формируется на плотной питательной среде (ППС) без АМП, при этом возможно получение КА с требуемыми параметрами: количество клеток, поверхностная плотность микроорганизмов, возраст и даже видовой состав. Далее часть выращенной КА переносится на ППС с АМП, путем аппликации бумажным купоном. Использование аппликатора позволяет стандартизовать посевную дозу КА и избежать нарушения пространственной структуры КА. По окончании культивирования проводят визуальную оценку наличия роста микроорганизмов вокруг аппликатора, в случае отсутствия роста делается высев из его смыва на ППС без АМП. Минимальная концентрация, при которой не отмечается видимый рост, считается минимальной подавляющей концентрацией АМП. Минимальная концентрация, при которой отсутствуют микроорганизмы на аппликаторе при смыве, считается минимальной бактерицидной концентрацией АМП.
Данный метод был апробирован при оценке чувствительности КА и планктонных клеток
Escherichia coli АТСС 25922 к широко используемому в практике АМП — бензалкония хлориду (БКХ). Оценка чувствительности планктонных клеток проводилась на ППС стандартным методом (МУК 4.2.1890-04), оценка чувствительности КА — методом, описанным выше. Были подобраны условия, при которых количество и поверхностная плотность микроорганизмов для КА и планктонной формы были равны. При этом устойчивость КА E. coli к БКХ оказалась в три раза выше, чем планктонных клеток.
Таким образом, предложенный нами метод позволил выявить более высокую устойчивость ассоциации клеток E. coli к БКХ.
РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ АНАЛИЗА РОЛИ ЗАМЕН В ПРИРОДНЫХ ВАРИАНТАХ ФАКТОРОВ ПАТОГЕННОСТИ И ВИРУЛЕНТНОСТИ L. MONOCYTOGENES
К.А. Собянин, Р.Р. Адгамов, С.А. Ермолаева
ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва
Факультативный внутриклеточный паразит Listeria monocytogenes вызывает листериоз — сапро-нозное инфекционное заболевание человека и животных. Критическим этапом развития инфекции является активная инвазия возбудителя в нормально нефагоцитирующие эукариотические клетки, прежде всего, эпителиальные клетки и гепатоциты. Активная инвазия осуществляется за счет взаимодействия факторов патогенности L. monocytogenes, белков InlA и InlB, с поверхностными эукариотиче-скими рецепторами Е-кадхерином и фактором роста гепатоцитов Met соответственно. Е-кадхерин и Met являются консервативными белками, присутствующими у всех видов млекопитающих, хотя для этих белков наблюдается определенная межвидовая дивергенция. Бактериальные белки InlA и InlB характеризуются природными вариантами, найденными у штаммов L. monocytogenes, выделенных из разных источников. Выявленные замены могут влиять на эффективность взаимодействия InlA и InlB с эу-кариотическими рецепторами.
До настоящего времени исследований по изучению влияния замен в последовательности InlA и InlB на взаимодействие L. monocytogenes с видовыми вариантами рецепторов и, соответственно, на эффективность инвазии возбудителя в клетки разных видов млекопитающих, не проводилось.
Целью данной работы являлась разработка системы, которая позволила бы оценить различия в эффективности инвазии L. monocytogenes в эука-риотические клетки различного происхождения в зависимости от замен в последовательностях ин-терналинов. Для объективной оценки эффективности влияния аминокислотных замен в природных последовательностях inlA и inlB необходимо было получить изогенные варианты L. monocytogenes для каждого варианта. Двенадцать аллельных вариантов интерналина В, и 4 аллельных варианта интер-налина А, отличающихся аминокислотными заменами, были получены в ПЦР на матрице различных штаммов L. monocytogenes. ПЦР-продукты были клонированы в шаттл-вектор вектор pTRKH2, уже содержащий промоторную область, что позволи ло устранить эффекты от различий в уровне экспрес-
