CC BY
12
76
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
Д.С. Третьякова, Е.Л. Водовозова ВЛИЯНИЕ СТРУКТУРЫ СТАБИЛИЗИРУЮЩИХ КОМПОНЕНТОВ НА УСТОЙЧИВОСТЬ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЛИПОСОМ, НЕСУЩИХ В БИСЛОЕ ЛИПОФИЛЬНОЕ ПРОЛЕКАРСТВО МЕЛФАЛАНА ФГБУНИнститут биоорганической химии им. акад. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия
Введение. Липосомы применяют для доставки лекарственных молекул к пораженным органам и тканям. Они наиболее био- и гемосовместимы среди других систем доставки, но, как и все наночастицы, при попадании в кровоток липосомы покрываются белковой короной. Ассоциированные белки могут привести к дестабилизации липосом, изменению их биораспределения, узнаванию иммунной системой и выведению из кровотока. Для защиты поверхности наночастицы покрывают высокогидратируемыми соединениями.
Цель исследования — установить влияние структуры стабилизирующих компонентов бислоя, призванных уменьшать связывание белков, на устойчивость липосом в сыворотке.
Материалы и методы. Методом экструзии через поры 100 нм готовили 2 серии липосом, несущих в бислое липо-фильное пролекарство мелфалана и защитные молекулы — фосфатидилинозит (PI) 10 %, ганглиозид GM12 и 10 %, COOH-пептидолипид 2 и 10 %, ПЭГ-липид 2 и 10 % — в матрице из яичного фосфатидилхолина. В 1-й серии во внутренний водный объем включали раствор кальцеина в самозатушенной концентрации 80 мМ (после экструзии освобождались от невключившегося кальцеина гель-фильтрацией на колонке с Sephadex G-50). Вторая серия содержала FRET-пару (fluorescence resonance energy transfer) флуоресцентных фосфолипидных зондов (TMB-BCHB) в бислое. Аликвоты липосом инкубировали в буфере PBS и 80 % сыворотке в течение суток. В различные промежутки времени регистрировали сигнал флуоресценции (кальцеин: Aex = 485 нм, Aem =517 нм; TMB-BCHB: Aex = 470 нм, Aem = 505 нм). Сигнал нормировали на максимум разгорания образца при добавлении детергента TritonX100.
Результаты. Липосомы с PI показали высокую стабильность (вытекание кальцеина < 5 % от максимального) в первые 5 ч инкубации, а липосомы с 2 % GM1 или 2 % COOH-пептидолипида — в течение всего времени инкубации. При повышении содержания GM1 или COOH-пептидоли-пида до 10 % после изначального резкого вытекания кальцеина (более 50 %) наблюдался выход на плато. Вероятная причина — дестабилизация бислоя за счет электростатических взаимодействий белков с жестким отрицательно заряженным каркасом на поверхности липосом и образование в бислое микроканалов в ходе перераспределения электронной плотности и латеральной диффузии липидов. Тем не менее, по данным FRET, включение именно 10 % пептидолипида приводило к наименьшему связыванию белков. Включение ПЭГ-липида уменьшало связывание белков, однако не увеличивало стабильности бислоя: последовательные всплески и затухания флуоресценции кальцеина могут свидетельствовать о выходе молекул ПЭГ-липида из жидкого бислоя липо-сом и формировании отдельных мицелл с компонентами бислоя.
Заключение. В случае включения в бислой из яичного фосфатидилхолина пролекарства мелфалана для стабилизации липосом можно использовать Р1, GM1 и СООН-пептидолипид, причем последний — наилучшая защита от опсонизации.
Работа поддержана грантом РФФИ № 16-04-01585.
И.Л. Трещалин1, В.А. Голибродо1, М.И. Трещалин1, Н.В. Еремкин1, Е.В. Возняковская1, Т.Б. Переверзева1, С.А. Цуркан2, Э.Р. Переверзева1 ОЦЕНКА ТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА АИМПИЛА В ХРОНИЧЕСКОМ ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА КРЫСАХ
1ФГБНУ«НИИНА им. Г.Ф. Гаузе», Москва, Россия; 2ООО «ФНЦ «ФармАксесс», Москва, Россия
Введение. Высокая специфичность альфафетопротеина (АФП) по отношению к опухолевым клеткам, несущим рецепторы к АФП, послужила основой для его использования в качестве средства направленной доставки противоопухолевых лекарств. Препарат аимпила (А), разработанный в ООО «ФНЦ «ФармАксесс», представляет собой некова-лентный комплекс свиного АФП с атрактилозидом — гли-козидом, ингибирующим транслоказу адениновых нуклео-тидов и вызывающим тем самым апоптоз злокачественных клеток. В экспериментах на мышах с перевиваемыми опухолями показана высокая противоопухолевая активность данной фармакологической композиции. Для продвижения препарата необходимо изучение его токсических свойств на различных моделях.
Цель исследования — оценка общетоксических свойств препарата А при хроническом введении крысам.
Материалы и методы. В эксперименте использовали 60 беспородных крыс, самцов и самок. Препарат в лекарственной форме в виде взвеси капсульной массы в крахмальном геле вводили перорально ежедневно в течение 30 дней в разовых дозах, составляющих 1 (0,1 мг/кг) и 10 (1 мг/кг) терапевтических доз (ТД). ТД для крыс рассчитана исходя из эффективной ТД для мышей с использованием коэффициента поверхности тела. На 1-е и 30-е сутки по окончании курса введений животных подвергали эвтаназии. Клинические и патоморфологические исследования проводили в соответствии с Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств.
Результаты. При применении А в 1 ТД токсических свойств препарата не выявлено. При 10-кратном превышении ТД обнаружены обратимые изменения структуры миокарда. Гепатотоксичность А проявилась как клинически (повышение активности АСТ), так и морфологически только по окончании курса введений и была обратимой. При па-томорфологическом исследовании найдены повреждения канальцевой и клубочковой систем почек. При этом изменения структуры извитых канальцев были полностью обратимыми, тогда как повреждение отдельных клубочков завершалось рубцеванием. Признаки панкреатоксического действия А выразились в нарушении гемодинамики в островках Лангерганса. Повреждения в экзокринной части железы найдены только у одного животного через месяц после окончания курса введений препарата. Выявленные изменения не зависели от пола животных.
Спецвыпуск / том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
77
Заключение. Применение А в терапевтической дозе не оказывает влияния на структуру и функцию основных органов и систем организма крыс. При значительном превышении терапевтической дозы возможно проявление кар-дио-, гепато-, панкреа- и нефротоксичности. Дозозависи-мый и обратимый характер выявленных токсических эффектов позволяет заключить, что препарат является перспективным для его дальнейшего изучения.
И.Д. Трещалин, Н.В. Ерёмкин, М.И. Трещалин, Э.Р. Переверзева
ИЗУЧЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ КОМПОЗИЦИИ АНТРАФУРАНДИОНА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ПУТЯХ ВВЕДЕНИЯ
ФГБНУ«НИИНА им. Г.Ф. Гаузе», Москва, Россия
Введение. В настоящее время понимание молекуляр-но-биологических основ физиологии злокачественной клетки и механизмов развития множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) позволяет осуществлять направленный синтез противоопухолевых препаратов с определенными свойствами. В НИИНА им. Г.Ф. Гаузе разработан оригинальный мультитаргетный противоопухолевый препарат антрафурандион (гетероциклический аналог 5,12-на-фтаценхинона), активный в отношении опухолевых клеток с генетически детерминированными механизмами МЛУ и проявивший высокую противоопухолевую активность в экспериментах на мышах с перевиваемыми опухолями. Созданная на его основе фармацевтическая композиция антрафурандион (ФКА) хорошо растворима в физиологически приемлемых растворителях. Для выбора оптимального пути введения ФКА необходима оценка ее токсических свойств.
Цель исследования — сравнительный анализ параметров острой токсичности ФКА при различных путях введения.
Материалы и методы. Изучение острой токсичности ФКА проводили на мышах BDF1 и крысах Wistar. ФКА растворяли в 5 % растворе глюкозы и вводили животным внутривенно (в/в), внутрибрюшинно (в/ б) или перораль-но (п/о) в различных дозах. Продолжительность наблюдения составляла 30 дней после последнего случая гибели животного. Ежедневно регистрировали количество павших животных, срок гибели, оценивали клиническую картину гибели. Дозы, характеризующие токсичность, рассчитывали по методу Литчфилда и Уилкоксона с применением компьютерной программы StatPlus 2006 professional.
Результаты. Показано, что для мышей при в/в введении ЛД50 составляет 5,9, МПД — 3,6 мг/кг, при в/ б — ЛД50—52,5, МПД-39,4 мг/кг, при п/о — ЛД50-306,7, МПД — 128,9 мг/кг. Для крыс при в/в введении ЛД50— 17,1, МПД — 15,2 мг/кг, при в/ б — ЛД50-64,6, МПД — 47,6 мг/кг и при п/о — ЛД50—353,6, МПД — 171,7 мг/кг. В/в введение ФКА в высоких дозах приводит к гибели животных в течение первых 3 мин, в/ б — в период от 1 ч до 1 сут. Характер гибели и результаты вскрытия павших животных позволяют считать, что причиной смерти в обоих случаях является сердечно-сосудистая недостаточность, вызванная нейротоксическим действием препарата.
При этом при в/в введении уровень переносимых доз настолько мал, что не позволяет достичь какого-либо противоопухолевого эффекта. В отличие от в/в и в/ б путей введения, при п/о применении ФКА гибель животных наступает, в основном, на 3-5-е сутки при явлениях кишечной токсичности и 7-10-е сутки на фоне гематологической токсичности. Многократное снижение параметров острой токсичности ФКА при п/о пути введения по сравнению с двумя другими позволяет применять препарат в широком диапазоне доз.
Заключение. В отличие от в/ б и в/в, п/о путь введения для ФКА предпочтителен, так как создает возможность для поиска оптимальных эффективных доз и режимов применения.
Е.В. Трифонова, А.К. Голенков, А.В. Кедров, Т.А. Митина, Е.В. Катаева, К.А. Белоусов
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИНТРАТЕКАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ЦИТОЗАРОМ ПО ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ IN VITRO У БОЛЬНЫХ С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ, ОСЛОЖНЕННОЙ ВНУТРИСПИНАЛЬНЫМ ОПУХОЛЕВЫМ РОСТОМ
ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, Россия
Введение. Неврологические осложнения при множественной миеломе (ММ), проявляющиеся интенсивными корешковым болями и нижними парезами или плегиями, относятся к закономерным признакам болезни и являются достаточно трудной и актуальной проблемой для клинической гематологии. Они в значительной степени ухудшают качество жизни больных ММ и утяжеляют прогноз заболевания.
Цель исследования — совершенствование противоопухолевой химиотерапии осложненных форм ММ на основе детерминированного принципа по результатам чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга in vitro к цитостатическим препаратам с использованием DISC-метода.
Материалы и методы. Для оценки клинической эффективности эндолюмбально вводимого цитозара у пациентов с ММ, осложненной опухолевой миелорадикулопатией, использовали когортное исследование, направленное на подтверждение гипотезы об эффективности интрате-кальных введений цитозара при данном варианте течения ММ. Исследованы 50 больных ММ, из них у 26 диагноз установлен впервые, 10 пациентов рефрактерны к проводимым противоопухолевым курсам полихимиотерапии, 14 больных находились в режиме индукционного лечения. У 19 из 50 пациентов ММ осложнилась внутриспинальным опухолевым ростом. Определение чувствительности опухолевых плазмоцитов костного мозга к противоопухолевым препаратам проводилось DISC-методом с использованием клинически эквивалентных скрининговых концентраций цитостатических препаратов.
Результаты. Анализ полученных данных показал, что 75,8 % больных ММ чувствительны к цитозару. 19 пациентов ММ, осложненной внутриспинальным опухолевым ростом, были разделены на 2 группы в зависимости от клинической картины поражения нервной системы:
Спецвыпуск/ том 16 / 2017
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
