CC BY
4Ежеквартальный
научно-практический
журнал
естник АПК
Ставрополья
УДК 616-093/-098
Деркачев Д. Ю., Оробец В. А., Заиченко И. В.
Derkachev D. Yu., Orobec V. A., Zaichenko I. V.
ОЦЕНКА ТОЧНОСТИ НОВОГО МЕТОДА ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ
EVALUATION OF A NEWMETHODIN THE HELMINTH DIAGNOSTICS
Проведена оценка нового современного методана-правленной флотационно-седиментационной технологии в диагностике гельминтозов.Метод имеет высокую диагностическую точность (20 яиц в грамме) и скорость (3-5 минут), практически не подвергая опасности лаборанта во время работыпри этом, а также относительно низкую стоимость (20 рублей за пробу). В методе используется специально разработанная пробирка для подготовки суспензии и камера для исследования суспензии.
Ключевые слова: новый метод, оценка, гельминтозы, точность, диагностика.
The evaluation of a new modern method directed Flotation and sedimentation technology in the diagnosis of helminthes. The method has a high diagnostic accuracy (20 eggs per gram) and speed (3-5 minutes), almost without endangering laboratory assistant while working at the same time, as well as a relatively low cost (20 rubles per sample). The method uses a specially designed tube for fluid and chamber for the study of the suspension.
Key words: new method, evaluation, helminthes, accuracy, diagnostics.
Деркачев Дмитрий Юрьевич -
аспирант кафедры терапии и фармакологии
Ставропольский государственный
агарный университет,
г. Ставрополь
Тел.: 8 (928) 348-37-31
E-mail: derkachev89@mail.ru
Оробец Владимир Александрович -
доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой терапии и фармакологии Ставропольский государственный аграрный университет, г. Ставрополь Тел.: 8(928)327-60-16 Е-mail: orobets@yandex.ru
Заиченко Игорь Владимирович -
кандидат ветеринарных наук г. Ставрополь Тел.: 8(961) 496-29-62 E-mail: igorzaichenko@mail.ru
Derkachev Dmitry Yur^evich -
Ph.D. student therapy and pharmacology Stavropol State Agrarian University, Stavropol
Tel.: 8 (928) 348-37-31 E-mail: derkachev89@mail.ru
Orobets Vladimir Alexandrovich -
Doctor of Veterinary Science, Professor
Head. Department of Therapy and Pharmacology
Stavropol State
Agrarian University,
Stavropol
Tel.: 8 (928) 327-60-16 E-mail: orobets@yandex.ru.
Zaichenko Igor Vladimirovich -
Ph.D in veterinary Stavropol State Agrarian University, Stavropol
Tel.: 8 (961) 496-29-62 E-mail: igorzaichenko@mail.ru
В настоящее время для диагностики гельминтозов продолжают использовать методы копроскопии, разработанные в середине ХХ века (метод МакМастера, метод Фюллеборна, метод Дарлинга, метод Котельникова-Хренова, метод Калантарян, метод Красильникова, и т. д.). В основе этих методов использован принцип флотации, при котором в зависимости от степени плотности используемой жидкости, яйца гельминтов всплывают на поверхность. Пробу фекалий подготавливали начиная с растирания через мелкое ситечко, добавления флотационной жидкости, центрифугирования или без него [1, 2, 3, 4]. После чего поверхностная пленка или определенный объем суспензии ис-
следовался под микроскопом. Но многие из них имеют ряд недостатков:
- Точность - различные результаты при параллельном исследовании одной пробы одним методом.
- Опасность - постоянный контакт лаборанта с фекалиями от зараженного животного в течениеисследования.
- Скорость - отсутствие возможности провести анализ в короткие сроки.
- Стоимость - наличие специального оборудования, для проведения анализа.
Целью нашей работы сталаоценка точности и чувствительности нового современного устройства для диагностики гельминтозов. Лаборант будет иметь высокую скорость проведения исследования и минимум
в
естник АПК
Ставрополья
: № 3(15), 2014
Ветеринария
109
контакта с фекалиями, имея при этом высокую диагностическую точность и минимум затрат.
Пробирка для подготовки суспензии (рис. 1) и счетная камера (рис. 2).
Рисунок 1 - Пробирка для подготовки суспензии:
1 - Крышка; 2 - Размельчающий аппарат; 3 - Ситечки для грубой и мелкой очистки пробы; 4 - корпус; 5 - Канюля для забора пробы; 6 - Колпачок
Рисунок 3 -Принцип работы стеклянной трубочки со шкалой
зия попадает внутрь стеклянной трубочки со шкалой, где яйца гельминтов всплывают по касательной, в один ряд, после чего происходит их идентификация и подсчет (рис. 3). Обнаруженные яйца считаются и умножаются на коэффициент 5. По окончании исследования шприцом выдувается исследованная суспензия и засасывается дезинфицирующий раствор, для промывания камеры.
Для оценки метода использовали искусственную закладку яицТохосагасатэ. Предварительно подсчитавточное количество яиц, добавляли их к незараженным фекалиям собак. Всего было подготовлено по 12 пробирок для каждой концентрации (20, 50, 100, 300 яиц в грамме). Для сравнения точности методов, мы рассчитали отношения образцов, которые позволяютобнаружить определенное количество яиц, относительно допустимого предела +-10%и+-20% соответственно. Результаты представлены в таблице 1. На рисунке 4 представлены данные по чувствительности данного метода в 4-х различных концентрациях.
Таблица 1. Результаты оценки нового метода
Рисунок 2 - Счетная камера: 1 - корпус; 2 - стеклянные счетные трубки; 3 - шкала; 4 - трубка для подачи суспензии; 5 - трубка для извлечения суспензии
Принцип работы устройства заключается в следующем: в пробирку закладывается проба фекалий весом 1 г, после чего заливается 9 мл флотационной жидкости (раствор соли и сахара плотностью 1300 г/см3). В процессе закручивания крышки размельчающий элемент размешивает пробу в однородную массу. После этого устройство с пробой центрифугируют 2 минуты при 2000 об/мин, вследствие чего, крупные частицы и детрит остаются в фильтрах, а яйца гельминтов проходят на дно устройства и концентрируются на поверхностной пленке флотационной жидкости.После центрифугирования пробирку нужно перевернуть несколько раз, чтобы распределить яйца равномерно по всему объему суспензии. Затем снимается колпачок с канюли, подсоединяется трубочка от счетной камеры и происходит забор суспензии для исследования шприцем, который присоединен с другого конца трубки счетной камеры. Суспен-
Действительное кол-во яиц в г. Пробы, в которых не обнаружены яйца, ( %) Допустимый предел
±10 % ±20 %
20 25 42 42
50 0 50 66
100 0 50 83
300 0 100 100
■ Среднее колколичество янп | | 25%-75% допустимый предел
Т Максимум обнаружено Минимум обнаружено
Рисунок 4 - Диагностическая точность метода
2
2
3
4
110
,,„ „„„„, Jj Ставрополья
научно-практическии журнал
Результаты исследования точности метода показали, что даже в низкой концентрации (20 я/г) только 25 % проб имели отрицательные результаты, а 42 % проб уложились в допустимые пределы _+10 и _+20 %. А при высокой концентрации все пробы попали под допустимый предел, доказывая 100 % точность методики.
Чувствительность метода так же имеет высокие результаты, что наглядно продемонстрировано на рис 4. Чувствительность метода возрастает с повышением концентрации, но даже при низкой концентрации (20 я/г) являет-
ся выше чем у других методов количественной диагностики гельминтозов [5] Выводы:
Новый метод для диагностики гельминтозов сочетает в себе следующие преимущества:
1. Высокая точность (обнаружение предельно-низкой ИИ - 20 я/г)
2. Быстрота исследования (3-5мин)
3. Безопасность лаборанта (контакты с пробой только при закладывании)
4. Дешевизна исследования (максимум 20 руб/проб)
Литература
1. Мигачева Л. Д., Котельников Г А. Методические рекомендации по использованию устройств для подсчета яиц гельминтов. 1987. Вып. 48. С. 81-83.
2. Хренов В. М. Усовершенствование копро-скопической диагностики гельминтозов жвачных и свиней : автореф. дис. ... канд. вет. наук. М., 1978. 24 с.
3. Levecke B. A., Behnke J. M., Ajjampur S. S., Albonico M., Ame S. M., Charlier J., Geiger S. M., Hoa N.T., Kamwa, Ngassam R. I., Kotze A. C., McCarthy J. S., Montresor A., Periago M. V., Roy S., TchuemTchuente L. A., Thach D. T., Vercruysse J. Comparison of the sensitivity and fecal egg counts of the McMaster egg counting and Kato-Katz thick smear methods for soil-transmitted helminthes // Journal. PLoSNegl Trop Dis. 2011. № 5(6). P. 12-20.
4. Zajicek D. Comparison of the efficiency of two quantitative ovoskopic methods (article in Czech) // Vet Med. 1978. № 23. P. 275280.
5. Vadlejch J., Petrty l. M., Zaichenko I., Cadkova Z., Jankovska I., Langrova I., Moravec M. Which McMaster egg counting technique is the most reliable? // Parasitology Research. 2011. V. 109. № 5. P. 1387-1394.
References
1. Migacheva L. D., Kotelnikov G. A. Methodical recommendations on the use of devices for counting helminth eggs. 1987. Edition 48. P. 81-83.
2. Hrenov V. M. Improvement scatological helminths diagnosis ruminants and pigs : Author. dis. ... Cand. vet. Science. M., 1978. 24 p.
3. Levecke B. A., Behnke J. M., Ajjampur S. S., Albonico M., Ame S. M., Charlier J., Geiger S. M., Hoa N. T., Kamwa, Ngassam R. I., Kotze A. C., McCarthy J. S., Montresor A., Periago M. V., Roy S., TchuemTchuente L. A., Thach D. T., Vercruysse J. Comparison of the sensitivity and fecal egg counts of the McMaster egg counting and Kato-Katz thick smear methods for soil-transmitted helminthes // Journal. PLoSNegl Trop Dis. 2011. № 5(6). P. 12-20.
4. Zajicek D. Comparison of the efficiency of two quantitative ovoskopic methods (article in Czech) // Vet Med. 1978. № 23. P. 275280.
5. Vadlejch J., Petrty l. M., Zaichenko I., Cadkova Z., Jankovska I., Langrova I., Moravec M. Which McMaster egg counting technique is the most reliable? // Parasitology Research. 2011. V. 109. № 5. P. 1387-1394.
