CC BY
51
УДК 615.322
Н.А. Чекина Я.Г. Разуваева 2, С.А. Чукаев 1
ОЦЕНКА СПЕКТРА ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НОВОГО КОМПЛЕКСНОГО СРЕДСТВА РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
1ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (Улан-Удэ) 2 ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН (Улан-Удэ)
В серии экспериментальных исследований установлено, что курсовое применение комплексного растительного средства, полученного из флоры. Байкальского региона (300 мг/кг ежедневно, 7 суток), способствует, подавлению альтеративной и экссудативной (но не пролиферативной) стадий воспалительной, реакции. В целом., выявляется фармакотерапевтическая эффективность фитосредства в условиях моделирования асептического воспаления.
Ключевые слова: альтерация, экссудации, противовоспалительная активность, фитотерапия
EVALUATION OF ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITY SPECTRUM PROPERTIES OF NEW COMPLEX PHYTOREMEDY
N.A. Chekina 1, Ya.G. Razuvayeva 2, S.A. Chukayev 1
1 Buryat State University, Ulan-Ude 2 Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude
It was shown in experiments on rats, that new complex phytoremedy, obtained, from plants of Baikal region (regimen of administration - 300 mg/kg daily, 1 week), demonstrate antialterative and antiexudative kinds of activity, as well as pharmacotherapeutical efficiency at conditions of aseptic inflammation.
Key words: alteration, exudation, anti-inflammatory activity, phytotherapy
Воспалительные заболевания занимают одно из ведущих мест в структуре заболеваемости, временной нетрудоспособности, инвалидности и смертности населения Российской Федерации. Известно, что на протяжении жизни они встречаются хотя бы один раз не менее чем у трети населения страны [4].
В этой связи актуальными являются продолжение поиска, изучение и внедрение новых противовоспалительных препаратов, отличающихся выраженной эффективностью, безвредностью при длительном применении и доступностью сырьевых ресурсов [6].
В Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН разработано комплексное растительное средство, представляющее собой сумму экстрактивных веществ из 7 видов растительного сырья: корневища и корни девясила высокого — Inula helenium L., побеги фасоли обыкновенной
— Phaseolus vulgaris L., побеги пятилистника кустарникового — Pentaphylloides fruticosa L. и др. [9].
Цель исследования: определение противовоспалительных свойств нового комплексного средства растительного происхождения, полученного из флоры Байкальского региона.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Исследование проведено на крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180 — 200 г. Все животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Из эксперимента животных выводили в соответствии с правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей.
Тестируемое фитосредство вводили животным внутрижелудочно в дозе 300 мг/кг в виде водной взвеси. В качестве препарата сравнения использовали бутадион в изоэффективной дозе 10 мг/кг массы тела. Животные контрольной группы получали дистиллированную воду в объеме, соответствующем аналогичным схемам введения лекарственных средств на всех этапах исследования.
Оценку влияния фитосредства на экссудативную стадию воспаления вызывали субплантарным введением в заднюю правую конечность крысы, вводили 0,1 мл 3% раствора формалина [8]. За 3 часа до субплантарного введения формалина и через 5 и 18 часов после инициации воспаления животным интрагастрально вводили раствор экстракта в дозе 300 мг/кг и бутадион. Животные контрольной группы в равном объеме и одинаковом режиме получали воду дистиллированную. Оценку антиэкссудативного эффекта экстракта проводили онкометрическим методом через 24 часа после введения формалина, вычисляя процент угнетения отека лапки по отношению к контролю.
Альтеративную фазу воспалительной реакции у белых крыс воспроизводили путем подкожного введения 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты в область спинки [3]. Одновременно вводили раствор декстрана — внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг. Тестируемое фитосредство и бутадион вводили за 1 час до введения раствора уксусной кислоты, а затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 21 дня. Антиальтеративное действие фитопрепарата оценивали используя планиметрический метод, по степени развития некроза и регенерации тканей на 7-е, 14-е и 21-е сутки эксперимента.
Пролиферативную стадию воспалительного процесса изучали на модели «ватной гранулемы» [8]. Крысам, находящимся под эфирным наркозом, имплантировали стерильный ватный тампон весом 15 мг в область спины, после чего рану послойно ушивали. Фитоэкстракт и бутадион вводили внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение 7 дней. Забор и исследование биологических проб проводили через 1 неделю после начала эксперимента. Гранулемы извлекали, проводили их взвешивания в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания (70 °С, в течение 24 часов) до постоянной массы. О пролиферативной активности фитосредства судили по разности сухих гранулем животных опытной и контрольной групп.
Влияние экстракта на дегрануляцию тучных клеток исследовали на модели острого перитонита, развивающегося при внутрибрюшинном введении 1 мл / 100 г массы крысы 0,2% раствора серебра нитрата [1].
В данной серии экспериментов фитоэкстракт и бутадион вводили животным 1 раз в сутки в течение 5 дней; последний раз — за 30 минут до введения серебра нитрата.
Брыжейку белых крыс фиксировали смесью Карнуа, окрашивали 0,05% раствором толуидиново-го синего. Критерием развития и выраженности перитонита являлись количество жидкости в брюшной полости лабораторных животных и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке.
Полученные результаты обрабатывали с использованием стандартных методов вариативной статистики. При оценке уровня статистической значимости полученных результатов использовали непараметрический и-критерий Вилкоксона — Манна — Уитни. Различия между экспериментальными группами по исследуемым параметрам считали значимыми при стандартном для медико-биологических экспериментов уровне
- р < 0,05 [5].
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
На экспериментальной модели экссудативной стадии воспаления установлено, что введение лабораторным животным тестируемого средства в дозе 300 мг/кг существенно угнетает отек лапки по сравнению с контрольным уровнем (в среднем
— на 39,2 %) (табл. 1).
Таблица 1
Влияние фитосредства на степень экссудации при «формалиновом» отеке у белых крыс
Группы животных А V, мл % угнетения отека
Позитивный контроль 0,51 ± 0,10 -
Фитосредство 0,31 ± 0,01* 39,2
Бутадион 0,40 ± 0,02* 21,6
Примечание: ДV - разность между объемами отечной и неотечной лапок белых крыс; * - здесь и далее статистически значимые отличия по исследуемым показателям между группой позитивного контроля и опытными группами (р < 0,05).
Как следует из полученных данных, представленных на рисунке 1, фитосредство оказывает противовоспалительное действие на альтера-тивной стадии воспалительного процесса, о чем свидетельствует уменьшение степени альтерации тканей и усиление регенераторных процессов в очаге воспаления. Так, у животных, получавших фитосредство в дозе 300 мг/кг, площадь деструкции на 7-е, 14-е и 21-е сутки наблюдения была ниже такового показателя у крыс контрольной группы на 23,2 %, 40,4 % и 45,5 %, у животных, получавших бутадион, — 18,9 %, 30,0 % и 21,1 % соответственно.
Рис. 1. Влияние фитосредства и бутадиона на процессы альтерации у белых крыс.
При моделировании пролиферативной стадии воспалительного процесса было установлено, что введение белым крысам фитоэкстракта в дозе 300 мг/кг не оказывает существенного влияния на процессы пролиферации (табл. 2).
Таблица 2
Влияние фитосредства и бутадиона на процессы пролиферации при асептическом воспалении у белых крыс
Группы животных А V, мл % угнетения отека
Позитивный контроль 0,51 ± 0,10 -
Фитосредство 0,31 ± 0,01* 39,2
Бутадион 0,40 ± 0,02* 21,6
При проведении острого перитонита установлено, что внутрибрюшинная инъекция раствора серебра нитрата сопровождается развитием острого асептического воспаления, о чем свидетельствует увеличение количества внутрибрюшинной жидкости и тотальная дегрануляция тучных клеток по сравнению с данными у животных интактной группы (табл. 3). На фоне введения экстракта у животных опытных групп объем внутрибрюшинной жидкости существенно снижался, количество дегранулирующих тучных клеток — в 1,9 раза по сравнению с показателями у контрольных животных.
Таблица 3
Влияние фитосредства на асептический перитонит у белых крыс
Группы животных Объем внутрибрюшинной жидкости, мл Количество дегранулирующих тучных клеток, %
Интактный контроль 0,21 ± 0,01 5,4 ± 0,20
Позитивный контроль 2,40 ± 0,35' 71,0 ± 5,01'
Фитосредство 0,65 ± 0,40* 36,8 ± 3,36*
примечание: • - статистически значимые отличия по ис-
следуемым показателям между группами интактного контроля и позитивного контроля (р < 0,05).
Полученные результаты свидетельствуют о том, что тестируемое фитосредство оказывает противовоспалительное действие при асептическом перитоните, вызванном введением серебра нитрата. По-видимому, фитоэкстракт при курсовом применении стабилизирует клеточные мембраны, снижает проницаемость сосудов и степень высвобождения медиаторов воспаления из тучных клеток [2].
Выявленное нами комплексное воздействие фитопрепарата на различные патогенетические звенья воспаления, по всей видимости, обусловлено присутствием в составе его композиции биологически активных веществ: полифенолов, флавоноидов, каротиноидов, полисахаридов и др. [7], которые оказывают антиальтеративное и антиэкссудативное действие, а также способствуют ускорению процессов репарации поврежденной ткани. Полученные результаты аргументируют целесообразность использования изученного фитосредства в комплексной терапии заболеваний, сопровождающихся развитием воспалительных процессов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Александров П.Н. и др. Влияние рутина и эскуламина на некоторые модели асептического
воспаления // Фармакология и токсикология. — 1986. — № 1. — С. 84 — 86.
2. Дашинамжилов Ж.Б., Лубсандоржие-ва П.Б., Николаев С.М. Противовоспалительная активность растительного средства «Вентрофит» // Сибирский медицинский журнал. — 2008. — № 4. — С. 77 — 80.
3. Ойвин И.А., Шетель С.Л. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости // Вестник хирургии. — 1988. — № 11. — С. 58 — 59.
4. Сапожникова С.К. Исследование противовоспалительной и анальгетической активности и изучение безвредности сабельника болотного: ав-тореф. дис. ... канд. мед. наук. — Томск, 2005. — 22 с.
5. Сергиенко В.И., Бондаренко И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2006. — 256 с.
6. Смагулова Т.Б., Тэн Н.В., Николаев С.М. Адаптогенное действие комплексного растительного средства «Фитотон» в условиях эксперимента // Сибирский медицинский журнал. — 2008. — № 4. — С. 80 — 83.
7. Способ получения средства, обладающего антиязвенной активностью: пат. 2302253 Рос. Федерация: МПК А61 К36/734, 36/68, 36/484, 36/28, 36/23, 36/185, А61Р1/04 / Лубсандоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Николаев С.М. и др.; заявитель и патентообладатель Институт общей и эксперимена-тальной биологии СО РАН. — № 2005130125/033756; заявл. 27.09.05; опубл. 10.07.2007, Бюл. 19.
8. Тринус Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства. — Киев, 1975. — 239 с.
9. Чекина Н.А. и др. Разработка нового комплексного растительного средства из флоры Байкальского региона // Биотехнология в интересах экологии и экономики Сибири и Дальнего Востока: матер. I Всерос. конф. — Улан-Удэ, 2011. — С. 66 — 68.
Сведения об авторах
Чекина Наталия Алексеевна - аспирант ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (670000, г Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а; тел: (3012) 44-82-55; e-mail: [email protected])
Разуваева Янина Геннадьевна - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ФГБУН «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: (3012)433713; e-mail: [email protected]) Чукаев Сергей Александрович - кандидат медицинских наук, доцент, заведующий кафедрой фармакологии и традиционной медицины ФГбОу ВПО «Бурятский государственный университет», (670000, г. Улан-Удэ, ул. Смолина, 24а; тел: (3012) 44-82-55; e-mail: [email protected])
