CC BY
47
УДК:68.37.31.18.03
ОЦЕНКА ШТАММОВОГО РАЗНООБРАЗИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СОСУДИСТОГО БАКТЕРИОЗА КАПУСТЫ
Е.С. МАЗУРИН1, А.Н. ИГНАТОВ2, Е.В. МАТВЕЕВА3, Ф.С. ДЖАЛИЛОВ4
(1 Всероссийский центр карантина растений; 2 Центр «Биоинженерия» РАН;
3 ВНИИ фитопатологии РАСХН; 4 лаборатория защиты растений РГАУ - МСХА имени К.А. Тимиря зева)
Проведена оценка физиологического, генетического и серологического разнообразия штаммов ХаиЬкотоиав сатревЬтв ру.сатревЬНв, выделенных в Российской Федерации, и их сравнение со штаммами зарубежного происхождения. Показано существование устойчивых генетических групп штаммов, не свя -занных с патогенностью и биохимическими свойствами бактерий.
Ключевые слова: болезни капусты, бактериальные болезни растений, сосудистый бактериоз, иммунодиффузия, фингерпринтинг.
Сосудистый бактериоз, вызы-
ваемый ХаиЬкотоиаз сатрг$Ьг1§ рь. сатрг$Ьг1§ (Хсс), относится к числу наиболее распространенных и вредоносных заболеваний капустных культур в мире [10, 16]. Основным источником инфекции сосудистого бактериоза являются семена. Достаточно 3$5 зараженных семян на 10 тыс. шт., чтобы вызвать серьезные потери от болезни в поле [12]. Кроме того, штаммы возбудителя обладают высокой генетической изменчивостью. Поэтому особое значение при семенной диагностике должно уделяться не только чувствительности методов, но и использованию критериев (маркеров) различного таксономического уровн . Визуальный метод вы влени зараженных растений в фазе рассады неточен вследствие наличи латентной инфекции, и для диагностики патогена наиболее часто используют выделение возбудител на селективные питательные среды с последующей идентификацией по фенотипическим и физиологическим признакам,
а также подтверждением результата серологическими и молекул рно-генетическими методами. Дл оценки корректности использовани этих методов необходимы данные о внутривидовой изменчивости патогена по указанным выше признакам. Практически нет данных о сравнительной роли семенной инфекции, зараженных сорных растени х и растительных остатках в развитии эпифитотий в поле. Установление устойчивых физиологических, серологических или генетических групп возбудител позволило бы провести такие модельные исследования . В то же время оценка внутривидового разнообрази патогена по физиологическим, серологическим и генетическим признакам необходима дл вы влени наиболее пригодных дл практического приме-нени методов диагностики возбудителя, в частности в семенах.
Насто ща работа посв щена определению генетического, серологического и физиологического разнообразия Хсс для усовершенствования
методов диагностики возбудителя сосудистого бактериоза. Для достижения поставленной цели решали следующие задачи:
- определение внутривидовой изменчивости физиологических (биохимических) свойств штаммов бактерий в Российской популя ции Хсс и родственных ксантомонад;
- оценка генетического разнообразия методом ПЦР-анализа со случайным праймером и серологического разнообрази методом иммунодиффузии в агаре.
Материалы и методы
В работе использовали 64 штамма Хсс из коллекций лаборатории защиты растений РГАУ - МСХА имени К.А. Тимиря зева и ВНИИ фитопатологии РАСХН. Штаммы выделяли из растений с вными симптомами сосудистого бактериоза ранее описанными методами [2]. Из пораженных растений в Московской обл. было выделено 14 штаммов, в т.ч.: из Серпуховского района — 5, Дмитровского — 8, Коломенского — 1; из г. Москвы — 3. Из пораженных растений в Краснодарском крае были выделены 25 штаммов, в Тульской обл. — 1, Белоруссии — 5. Также были использованы 16 штаммов из Японии, Германии, США и Бразилии, полученные из коллекции ВНИИ фитопатологии РАСХН (табл. 1). В качестве отрицательного контрол в тестах использовали чистые культуры Pseudomonas syringae pv. syringae van Hall и Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Davis)Smith.
Морфологические, физиологиче-
ские и биохимические свойства выделенных бактериальных штаммов изучали общеприн тыми микробиологическими методами [11].
Окраску по Граму проводили с использованием стандартной процедуры окрашивани 48-часовой культуры, выросшей на РБА или YDC или методом Рая с использованием 3% KOH.
Тест О/Е проводили на среде с бром-тимоловым синим по методу Хью и Лайфсона. Оксидазу определ ли по методу Ковача, каталазу — по методу Дайджи, разжижение желатина — по Фризеру. Разжижение столбика желатина учитывали через
7, 14 и 21 день. Изменение цвета
лакмусового молока отмечали также через 7, 14 и 21 день.
Определ ли физиолого-биохими-ческие свойства, которые описаны для ксантомонад как наиболее вариабельные. Они включали: продукцию кислоты из Д-галактозы, манно-зы, раффинозы, Д-ксилозы, глицерина и альфа-метил-Д-глюкозида, использование Ь-аспарагина, рост на глицине, Ь-лейцине, лактате натрия, тартратенатрия, цитрате натрия, ма-лате натрия, сукцинате натрия, оксалате натри и поли-бета-оксибути-рате, синтез 2-кетоглуконата, синтез восстанавливающих веществ из сахарозы, пектолитическую активность на средах Логана и Патона.
Дл постановки сверхчувствительной реакции в листья табака и герани вводили шприцом суспензию бактериальных клеток плотностью 108 КОЕ/мл. Растения выдерживали при 28$30°С в климатической камере. При наличии патогенности у бактерий через 24-72 ч на месте инфицированной ткани по вл лось некротическое п тно.
Анализ генетического разнообразия бактерий. Для постановки ПЦР-анализа выдел ли ДНК из 2-3-суточной культуры бактерий, полученной на агаризованной среде УБС методом БОБ-СТАВ с модификация ми [15]. Для подтверждения видовой принадлежности штаммов проводили ПЦР с трем парами специфичных праймеров 804/1443, ИагеЕ1/Ш и Р450Е/И по рекомендованным протоколам [5, 15].
Дл проведени ДНК-фингер-
принтинга использовался праймер с-152 (5'-стаасааста-3’) в реко-
Происхождение штаммов Xcc, использованных в работе
№ Штамм Место сбора материала, источник, год ПЦР анализ*
1 3777 Великобритания, горчица, 1990 +++
2 В-19 США, капуста б/к, 1985 +++
3 2286 (5212) Великобритания, 1957, типовой штамм Xcc NCPPB528T +++
4 1279а Великобритания, брокколи, 1985 +++
5-9 Dasch 1, 2, 4, 5, 8 Серпуховской район МО, капуста б/к, 2006 +++
10-14 Bel 2, 3, 4, 5, 8 Респ. Беларусь, капуста б/к, 2006 +++
15-17 Hok 1, 2, 3 Краснодарский край, капуста б/к, 2006 +++
18-25 Bun 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9,10 Дмитровский район МО, капуста б/к, 2006 +++
26 Хсс 53-4 США, Калифорния, горчица, 2005 +++
27 ex 528 Великобритания, капуста б/к. Мутант по гену XC2109 штамма NCPPB528T +++
28 33436 США, Калифорния, капуста б/к, ATCC33436 +++
29 04-29-81 США, капуста б/к +++
30 11386 США, Мериленд, горчица, 2005 +++
31 11390 Бразилия, капуста б/к +++
32 11392 Бразилия, брокколи +++
33 Xn-13 Япония, Тойота, капуста б/к, 1997 +++
34 P 4110 Германия, капуста б/к, 1999 +++
35 Blu-K Германия, капуста б/к, 1998 +++
36 Л1 Московская обл., Коломенский р-н., капуста б/к +++
37 Хсс 402 США, Флорида, капуста б/к +++
38 Т5 Тульская обл., капуста б/к, 2001 +++
39 AF2 Москва, межвидовой гибрид капусты, 2001 +++
40 А5 Московская обл., капуста б/к, 2001 +++
41-62 1263-1282 (20 штаммов) Краснодарский край, капуста б/к, 2006 +++
63 Eruca США, Eruca sativa, 2005 +++
64 PHW 231 США, Калифорния, капуста б/к +++
65 S 57 Pseudomonas syringae pv. syringae —
66 1202 Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis —
* Результаты ПЦР-анализа с тремя парами праймеров, специфичных для Xcc — 804/1433, Rare F1/R1 и P450F/R. Плюс — положительная реакция, минус — отрицательная.
мендованном протоколе: начальная
денатурация (95°C, 3 мин), 40 циклов, включая денатурацию (94°C, 30 с), отжиг (40°C, 30 с) и элонгацию (72°C, 1 мин). ПЦР-амплификацию проводили в термоциклере GeneAmp PCR System 9700, (Perkin-Elmer, США). ^андартная реакционная смесь содержала 75 мкМ Трис-HCl, pH 8,8; 20 мкМ (NH4)2SO4; 0,01% Твин 20; 200 мкМ каждого dNTP; 20 пМ праймера; 2 мкМ MgCl2; 1 единицу Taq ДНК полимеразы и 2 нг целевой ДНК. Окончательный объем смеси состав-л л 25 мкл.
После окончания реакций около 10 мкл амплифицированных продуктов разделя ли в 1,5%-м агарозном геле в буфере TBE с бромистым эти-дием и документировали при помощи системы UVP (Великобритания ). Каждую реакцию проводили дважды для подтверждения ее воспроизводимости. Сходство между штаммами определяли как процент совпадающих ДНК-фрагментов относительно общего числа фрагментов.
Получение антисывороток и серологический анализ. Иммунизацию кроликов проводили суспензи -
ми клеток трех штаммов Xœ: Bel-5, Dasch-2 и Bun-2, выделенных в 2006 г. соответственно в Белоруссии, Серпуховском и Дмитровском районах Mосковской обл. Полученные антисыворотки консервировали, добавляя тимерозал (0,2 мг/мл), и хранили при +4°С.
Иммуноглобулины выдел ли на хроматогрофической колонке, заполненной аффинным сорбентом — А-белком Staphylococcus aureus, иммобилизованным на сефарозе [З] на базе биотехнологического центра
BHИИ картофельного х озяйства имени А.Г. Лорха*.
Pеакцию двойной иммунодиффузии в агаре проводили общеприн тым методом [1]. H= 100 мл среды добав-л ли 0,В г агара дл иммунодиффузии («Serva») и 200 мкл 10% азида натри . После застывани среды в чашке Петри с помощью специального штампа в слое агара вырезали лунки диаметром 5 мм. В центральную лунку наносили иммуноглобулины, а по периферии антигены. Антиген извлекали путем добавлени капли насыщенного раствора фенола к 1 мл плотной бактериальной суспензии (1010 кл/мл) [7]. Через 24-48 ч инкубации при 28°С учитывали про-влени реакций полной идентич-
ности, частичной идентичности и неидентичности по сравнению с реакцией иммуноглобулинов с гомологичным штаммом [9]. В качестве отрицательного контрол использовали штаммы Ps^98 Pseudomonas syringae pv. syringae и Cmm1233 Clav^acter michiganensis s^sp. michiganensis. Xарактер взаимодейст-ви штаммов оценивали в баллах:
0 — отсутствие реакции; 1 — неиден-тичность реакции; 2 — частична идентичность; З — полна идентичность. Pасстояние между штаммами определяли методом Сити-блок, зарекомендовавшим себ дл данных
такого рода в предыдущих исследо-вани х [4].
Реакцию штаммов Xcc против трех видов иммуноглобуллинов и результаты ПЦР-анализа изучали методами кластерного [14] и факторного анализа [13] с помощью пакета STATISTI-CA 6.0 (StatSoft, США).
Результаты и их обсуждение
Принадлежность всех вновь выделенных и коллекционных штаммов к Xcc была подтверждена при ино-кул ции проростков капусты сорта Амагер 611 методом опрыскивания и прищипывания листьев, с получением типичных симптомов сосудистого бактериоза через 10-14 дней, и ПЦР-анализом при использовании Х^-специфических праймеров 804F/1443R, RareF1/R1 и P450F/R.
Биохимические свойства. Штаммы Xcc, выделенные из пораженных растений, собранных в Российской Федерации, были изучены по р ду физиологических признаков и сопоставлены с 60 штаммами рода Xanthomonas, включая X. vesicatoria, X. euvesicatoria, X. gardneri, X. malva-cearum , X. phaseoli , X. vasculorum и X. arboricola. Все изученные штаммы Xcc не отличались по родовым морфологическим и физиологическим признакам ксантомонад, синтезировали кислоту из галактозы, манно-зы, раффинозы, ксилозы и показали отрицательную реакцию с метил-глюкозидом. Штаммы различались по реакции с глицерином — производство кислоты отмечалось в интервале от 3 до 18 дней. Все штаммы использовали натриевую соль лактата, тар-трата, цитрата, малата, сукцината и оксалата. Ни один штамм не показал способности расти на глицине или поли-бета-оксибутирате. Точечный
рост наблюдалс у р да штаммов на аспарагине и лейцине.
* Авторы выражают благодарность Ю.А. Варицеву — ведущему научному сотруднику ВНИИКХ имени А.Г. Лорха ------ за помощь в выделении иммуноглобулинов.
б9
Виды Xanthomonas различались по пектолитической активности и формированию редуцированных форм из сахарозы. Штаммы X. euvesica-toria, X. gardneri, X. malvacearum, X. phaseoli и X. vasculorum были не пектолитическими, тогда как X. vesicatoria , X. arboricola и Xcc обладали такой активностью. Ни один из штаммов не производил кетоглюконат. Таким образом, нами показано, что сходство физиологических свойств бактерий не позвол ет проводить диагностику до уровн вида по изученным признакам.
М о лекулярно-генетические свойств . В результате ПЦР-анализа со случайным праймером С-152 было получено 52 полиморфных фрагмента. С помощью кластерного анализа штаммы были разбиты на 3 группы и
4 подгруппы (1а, 1b, 2, 3а и 3b), не от-личавшихс по биохимическим свойствам и патогенности (рис. 1). Группа
1 включала подгруппу 1а — 18 штаммов из Московской обл. и штаммы 53-4 и Eruca из дикорастущих капустных, США, и подгруппу 1b — 8 штаммов из Краснодарского кра и Белоруссии. Группа 2 включала 14 штаммов из Краснодарского края . Группа 3 также состо ла из 2 подгрупп: 3а — штаммы из Краснодарского края, Белоруссии, Великобритании, США и Германии, относящиеся к серотипу 3 [6]. Типовой штамм NCPPB528T (#2286) и мутант расы 6, полученный из типового штамма (ex528) также были отнесены к этой подгруппе. В подгруппу 3b вошли штаммы из Краснодарского края, США, Японии и Германии, относившиес к серотипу 1. Интересно, что генетически близкий к Российской группе (кластер 1а) штамм 53-4, серологически был объединен со штаммами из культурных капустных, выделенных в США, Японии и Германии. Факторный анализ, проведенный по матрице коррел ции между штаммами, показал, что 60% изменчивости определ ют первые два
фактора (50% и 10% соответственно). Наиболее контрастными по нагрузкам первых двух факторов были штаммы из Краснодарской популяции патогена — 1282 (нагрузка 0,95) и 1263 (-0,02) по первому фактору, и 1268 (0,87) и 1266 (-0,12) — по второму фактору. Можно предположить, что в условия х, благоприятных для ежегодных эпифитотий сосудистого бактериоза в Краснодарском крае, происходит расширение генетического разнообрази патогена.
Изменчивостъ серологических признаков. Антисыворотки, полученные против бактериальных клеток, представляют собой смесь антител, реагирующих с основными антигенами микроорганизма, т.е. я вля ются поликлональными. В таком случае реак-ци сыворотки зависит от двух переменных — состава главных антител и их концентрации, а реакция бактерии — от состава и содержания основных антигенов. Использование нескольких антисывороток против определенного набора штаммов бактерий позволяет, во-первых, классифицировать штаммы по их антигенным свойствам и, во-вторых, сделать выводы об общем числе и составе антител в сыворотках [4]. Реакцию 38 штаммов ксантомонад с трем антисыворотками оценивали по характеру дуг преципитации при диффузии (рис. 2). На рис. 2 показана реак-ци частичной идентичности штаммов Bel-4 и Bun-2 относительно штамма Dasch-2.
Перед проведением статистического анализа значение реакции было нормализовано относительно суммарной реакции штамма со всеми тремя антисыворотками. Таким образом, оценивали главным образом качественные антигенные различи между штаммами.
Кластерный анализ, проведенный методом Уарда (Ward’s) для расстоя -ний между реакцией штаммов, определенных методом Сити-блок, по-
1а
1b
2
3а
3b
Dasch1
Dasch4
Dasch8
Dasch9
Bun1
Bun2
Dasch5
Dasch2
Xcc53-4
Eruka
Hok2
----Hok3
Bel3 Bel4 Bel5 Bel6 Bel8 Bel9
1269
1270
1271
1272
1273
1279
1280 1281 1282
1274
1275
1276
1277
1278 ex528
1267
1268 04-29-B1
BluK
AF2
11386
11392
A5
Xcc402
Bel2
2286
33437
Xn13
P4110
T5
PHW231
1263 1265
1264
20
40
60
80
100
120
Рис. 1. Кластерный анализ методом Уарда (Ward's) генетических расстояний (% совпадения спектра фрагментов), полученных при RAPD-ПЦР-анализе с праймером C-152 для 52 штаммов Xcc. Описание кластеров приведено в тексте
казал наличие четырех групп штаммов (рис. 3). Первая группа включала штаммы из Московской обл. (Bun), Xok, Великобритании (1279а), Германии и США. Вторая группа включала ря д штаммов из Московской обл. (Bun), Белоруссии и США. В третью группу включено большинство штаммов из Белоруссии, а также отдельные из США, Японии и Австралии. Четвертая группа объединя ла в большинстве штаммы зарубежного происхождения из Германии, США, Японии и два штамма из Московской обл. (Bun-1 и Bun-3).
При изучении матрицы сходства штаммов по реакции трех антисывороток методом факторного анализа было выявлено действие двух главных факторов, определявших 47 и 34% общей изменчивости реакции штаммов (вместе 81%). Первый фактор достоверно положительно влиял на реакцию антисыворотки против штамма Вип-2 (коэффициент корреля ции 0,77) и отрицательно — на реакцию сыворотки против штамма ЬаБсЬ-2 (-0,87). Второй фактор достоверно коррелировал с реакцией антисыворотки против штамма Ве1-5 (0,96).
0
1 т*
ЧгШ
Bel-4
К. -.
~ ь. Ж -*+■,,
Dasct^^^^k jg. Dasch-2
С. michiganen-sis subsp. mi chiganens i s
Ps. syringae' pv.syringae
Рис. 2. Реакция двойной иммунодиффузии в агаре. В центре антисыворотка, полученная против штамма Dasch 2. В периферических лунках — антигены штаммов Xcc: Dasch 2, Bel-4, Bun-2 и отрицательные контроли — штамм 1202 Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis и штамм S 57 Pseudomonas syringae pv. syringae
2 3
Расстояние Сити-блок
Рис. 3. Группировка штаммов Xcc методом Уарда (Ward's) по степени серологической близости (расстояние Сити-блок для нормализованной оценки) против трех поликлональных антисывороток
Как известно, липополисахарид (ЛПС) массой около 67-68 кДа является основным антигеном Хсс [4]. Основные серотипы 1 и 3 Хсс [4, 6] имеют контрастную структуру ЛПС, что выражается в отрицательной корреляции между реакция ми сывороток, полученных против этого антигена у разных серотипов. Но в данном случае наибольшее различие между типовыми штаммами, принадлежавшими к серотипу 1 (Хп-13) и серотипу 3 (МСРрВ528Т) и вошедшими соответственно в кластеры 3 и 4, наблюдалось по второму фактору — реакции антисыворотки Ве1-5 (рис. 4). Очевидно, что ряд штаммов различного происхождения (кластеры 1 и 2) оказываютс более удаленными от серотипов 1 и 3 и показывают еще большее серологическое разнообразие в популя ции патогена, чем было выя влено ранее [4, 6].
Поликлональные антитела дают совокупность количественно мен ю-щихс реакций многих антител с соответствующими антигенами бактерии. Поэтому реакци с отдельной сывороткой не может достоверно определить видовой статус бактерии, и для диагностических целей серологический анализ должен быть применен в виде сравнительной реакции типовых и исследуемых бактерий против набора нескольких (в нашем случае не менее трех) сывороток.
Интересно, что в целом не наблюдалось достоверной коррел ции между серологической и генетической группировкой штаммов, хотя некоторые из них показывали близкие генетические и серологические свойства: 04-29-В1 и МСРРВ528Т, АТСС33436 и Хп-13 и, видимо, принадлежали к одним и тем же клональным группам.
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0 0,5
0,4
0,3
0,2
Хп-13
Р4110
О
п=1
о
п=1 п=4
! о
Хсс53-4
п<=1 п=1 п=2 528Т
....°.......Оо.............
ех528п=2
п=5
о
п=1
п=4
о
п=1
...О...
п=2
п=3
0,3
0,4
0,5
0,6 РасЬэг 1
0,7
1279) п=2 Хсс402 п=2
Л.... о .
п=1
о
0,8
0,9
Рис. 4. Расположение штаммов Хсс в пространстве двух факторов, определяющих 81% изменчивости реакции трех антисывороток (п — число штаммов). Приведены названия типовых штаммов Хсс для серотипов 1 и 3, остальные штаммы представлены без названия
Выводы
1. При изучении внутривидовой изменчивости физиологических (биохимических) свойств штаммов бактерий в Российской популяции Хсс и родственных ксантомонад не было выявлено физиологических признаков, достоверно различающих штаммы Xcc от близких видов ксантомонад, способных выживать на поверхности капустных растений в эпифитном состоянии.
2. Оценка генетического разнообразия методом ПЦР-фингерпринтинга с праймером С-152 показала высокое генетическое разнообразие изученных штаммов, связанное с их географическим происхождением.
3. При проведении практической диагностики необходимо иметь в виду, что российские штаммы патогена принадлежат как к основным серотипам 1 и 3, так и к новым серологическим группам.
Работа выполнена при частичной поддержке проекта МНТЦ 3431.
Библиографический список
1. Воробьева Н.В. Иммунодиффузия и иммуноэлектрофорез. М.: Научный мир, 2006.
2. Джалилов Ф.С. Методы изучения бактериальных болезней растений / Методические указания для научно-исследовательской работы студентов). М.: МСХА, 1989.
3. Егоров А.М., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа. М.: Высшая школа, 1991.
4. Игнатов А.Н., Поляков К.Л., Самохвалов А.Н. Количественный анализ серологических признаков Xanthomonas campestris // Сельскохозяйственная биология, 1998. № 1. С. 106-115.
5. Пунина Н.В., Игнатов А.Н., Зотов В.С., Матвеева Е.В., Шаад Н. Генети-
ческое разнообразие фитопатогенных бактерий Xanthomonas campestris // Вычислительная филогенетика и геносистематика «ВФГС 2007». М.: МГУ, 16-19 ноя -бр . С. 260-266.
6. Alvarez A.M., Benedict A.A., Mizumoto C.Y., Hunter J. E., and Gabriel D.W. Serological, pathological, and genetic diversity among strains of Xanthomonas campestris infecting crucifers // Phytopathology, 1994. V. 84. P. 1449-1457.
7. De Boer S.N., Coperman R.I., Vruggink H. Serogroups of Erwinia carotovo-ra potato strains determined with diffusible somatic antigens // Phytopathology,
1979. V. 69. № 4. P. 316-319.
8. Ignatov A., Sechler A., Schuenzel E.L., Agarkova I., Oliver B., Vidaver A.K., Schaad N.W. Genetic Diversity in Populations of Xanthomonas campestris pv. campestris in Cruciferous Weeds in Central Coastal California // Phytopathology, 2007. V. 97. P. 803-812.
Молекуля рно-генетический анализ (ПЦР-фингерпринтинг) отличается
большей информативностью и позво-л ет дифференцировать как различные виды ксантомонад, так и группы внутри одного вида [6, 8, 15]. Набор фрагментов ДНК, получаемых при ПЦР-фингерпринтинге, я вля ется качественной характеристикой исследуемых бактерий и состоит из видо-, группоспецифичных и уникальных для каждого штамма фрагментов, которые могут быть переведены в специфичные молекул рные маркеры соответствующего таксономического уровн .
Очевидно, что при высоком внутривидовом генетическом и серологическом разнообразии попул ции возбудител сосудистого бактерио-
за, впервые выя вленном для России, диагностика патогена должна основы-ватьс на всех доступных методах исследований.
9. Kleihempel H., Naumann K., Spaar D. Bakterrielle Erkrankungen der Kulturpflanzen. Jena: Gustav Fischer Verl, 1989.
10. Kohl J. , Wolf J. Alternaria brassicicola and Xanthomonas campestris pv. campestris in organic seed production of Brassicae: Epidemiology and seed infection. Plant Research International. Wageningen, September 2005.
11. Laboratory guide for identification of plant-pathogenic bacteria / Schaad N.W., Jones J.B., Chun W. eds. 3rd ed. American Phytopathological Society Press. St. Paul. Mn., 2001.
12. Schaad N.W., Sitterly W.R., Humaydan H. Relationship of incidence of seed-borne Xanthomonas campestris to black rot of crucifers // Plant Disease, 1980. V. 64. № 1. P. 91-92.
13. Thurstone L.L. Multiple factor analysis // Psychological Review, 1931. V.38. P. 406-427.
14. Tryon R.C. Cluster Analysis. Ann Arbor, MI: Edwards Brothers, 1939.
15. Tsygankova S.V., Ignatov A.N , Boulygina E.S., Kuznetsov B.B., Korotkov E.V. Genetic intraspecies relationshi ps in Xanthomonas campestris pv. campestris revealed by novel rep-PCR primers // European J. Plant Pathol., 2004. V. 110. № 8. P. 845-853.
16. Williams P.H. Black rot: a continuing threat to world crucifers // Plant Disease,
1980. V. 64. № 8. P. 736-742.
Рецензент — д. б. н. A.A. Соловьев
SUMMARY
Physiologic, genetic, and serologic diversity in russian population of Xanthomonas campestris pv.campestris was compared with reference strains isolated world-wide. Genetic and serologic properties of the pathogen were not linked to pathogenicity or biochemical properties.
Key words: cabbage diseases, bacterial diseases of crops, black rot, immune diffusion.
Мазурин Евгений Сергеевич — к. б. н. Тел. (499) 271-38-24.
Эл. почта: zarauh@mai1.ru
Игнатов Александр Николаевич — д. б. н. Тел. (499) 135-73-19. Эл. почта: a1exandre77@hotmai1.com
Матвеева Евгения Владимировна — к. б. н. Тел. (498) 684-09-04. Джалилов Февзи Сеид-Умерович — д. б. н. Тел. 976-12-79.
Эл. почта: 1abzara@mai1.ru
