ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ РЕАМБЕРИНА В УСЛОВИЯХ ВВЕДЕНИЯ ВАЛЬПРОЕВОЙ КИСЛОТЫ Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

< GQ

äs 5t

S *

-а к

X (O

-Q *

г u

< 3-

ft 8 О i-

УДК 615. 213:615.015.44:615.015.5

Н.В. Симонова, В.А. Доровских,

Р.А. Анохина, М.А. Штарберг, А.Г. Майсак,

А.А. Чернышева, Ю.С. Лештаева

ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России г. Благовещенск

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ДОКЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ РЕАМБЕРИНА В УСЛОВИЯХ ВВЕДЕНИЯ ВАЛЬПРОЕВОЙ КИСЛОТЫ

Введение Результаты доклинических и

клинических исследований, проведенных в последние годы, свидетельствуют о наличии прооксидантного эффекта у некоторых противоэпилептических средств (ПЭС), включая базовые антиконвульсанты [1, 5]. Известно, что активация процессов липопероксидации в условиях длительного применения ПЭС способствует формированию окислительного стресса и, как следствие, развитию побочных эффектов и осложнений противоэпилептической терапии [7]. В связи с этим поиск эффективных фарма-кокорректоров нежелательных эффектов анти-конвульсантов остается актуальной проблемой современной эпилептологии, а разработка научно обоснованных подходов в лечении эпилепсии, позволяющих минимизировать риск развития осложнений противоэпилептической терапии, предопределяет расширение и углубление научных исследований в данном направлении, включая экспериментальную работу на доклиническом этапе.

Цель работы - оценка результатов доклинических исследований антиоксидантной активности реамберина в условиях введения вальпроевой кислоты.

Методы исследования

Опыты проводили в течение 11 дней на 30 белых беспородных крысах-самцах массой 180 - 200 г, полученных из питомника ЦНИЛ ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России, г. Благовещенск. Животных содержали в виварии при естественном освещении в условиях контролируемой температуры (22 ± 2) 0С и относительной влажности (65 ± 10) % воздуха при свободном доступе к воде и стандартному корму. Эксперименты проведены в соответствии с Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р 53434 - 2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики», приказом Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа 2010 г. № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики». Исследование одобрено Этическим комитетом ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России, соответствует нормативным требованиям проведения доклинических экспериментальных исследований.

Животные были разделены на 3 группы, в каждой по 10 животных: 1 группа - интактная, животных содержали в стандартных условиях вивария; 2 группа - контрольная, животным в течение 10 дней внутрижелудочно вводили вальпроевую кислоту (депакин) в эффективной экспериментальной противосудорожной дозе 150 мг/кг (согласно литературным данным [1]) на фоне внутрибрюшинного введения эквиобъемного вводимому препарату реамберин (3 группа) количества 0,9% раствора натрия хлорида (4 мл/200 г); 3 группа - опытная, животным в течение 10 дней внутрибрюшинно вводили реамберин в дозе 100 мг/кг по сукцинату (4 мл/200 г) за 90 минут до внутрижелудочного введения вальпроевой кислоты в дозе 150 мг/кг.

Крыс декапитировали на 11 день эксперимента. После декапитации животных: 1) кровь собирали в охлажденные пробирки с гепарином, центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 мин., полученную плазму крови хранили при температуре -18 0С до момента исследования; 2)

Резюме Проведено исследование антиоксидантной активности препарата реамберин при использовании противоэпилептического средства в эксперименте. Установлено, что введение вальпроевой кислоты внутрижелудочно в дозе 150 мг/кг один раз в день в течение 10 дней способствует повышению в крови и печени животных содержания гидроперекисей липидов (на 30 - 33%), диеновых конъюгатов (на 31 - 35%), малонового диальдегида (на 45 - 56%) на фоне снижения активности основных компонентов антиоксидантной системы (р<0,05). Введение крысам сукцинатсодержащего препарата реамберин (внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг по сукцинату - 20 мл/кг - за 90 минут до каждого внутрижелудочного введения противоэпилептического препарата в течение 10 дней) в условиях окислительного стресса способствует достоверному снижению в ткани печени гидроперекисей липидов на 20%, диеновых конъюгатов - на 18%, малонового диальдегида - на 31% по сравнению с контролем (без применения сукцинатсодержащего препарата) (р<0,05). При анализе влияния сукцинатсодержащего препарата на активность компонентов антиоксидантной системы было установлено, что содержание церулоплазмина в печени животных было достоверно выше аналогичного показателя у крыс контрольной группы на 42%, витамина Е - на 33% (р<0,05). Таким образом, использование синтетического антиоксиданта в условиях введения вальпроевой кислоты в организм экспериментальных животных приводит к стабилизации процессов пероксидации на фоне повышения активности основных компонентов антиоксидантной системы.

Ключевые слова: реамберин, вальпроевая кислота, перекисное окисление липидов, антиокси-дантная система, крысы.

Таблица 1. Содержание продуктов ПОЛ (нмоль/мл) в плазме крови экспериментальных животных (М±m)

Группы Гидроперекиси животных липидов Диеновые конъюгаты Малоновый диальдегид

Интактные крысы (1) 24,6±0,85 33,2±2,05 4,0±0,18

Вальпроевая кислота - контроль (2) 32,7±1,15* 43,5±2,36* 5,8±0,26*

Реамберин + вальпроевая кислота (3) 27,0±1,54 36,6±2,10 4,8±0,21**

Примечание. Здесь и в табл. 2 - 4: достоверность различия показателей по сравнению: * с животными интактной группы (р < 0,05); ** с животными контрольной группы, которым вводили только вальпроевую кислоту (р < 0,05)

Таблица 2. Содержание продуктов ПОЛ (нмоль/г) в ткани печени экспериментальных животных (М±m> Группы животных Гидроперекиси липидов Диеновые конъюгаты Малоновый диальдегид

Интактные крысы (1) 69,8±4,5 130,5±6,4 9,6±1,1

Вальпроевая кислота - контроль (2) 90,5±5,0* 176,6±8,2* 15,0±1,2*

Реамберин + вальпроевая кислота (3) 72,3±4,2** 145,5±6,5** 10,4±1,1**

Таблица 3. Содержание компонентов АОС (мкг/мл) в плазме крови экспериментальных животных (М±m) Группы животных Церулоплазмин Витамин Е

Интактные крысы (1) 29,6±2,06 48,4±2,82

Вальпроевая кислота - контроль (2) 20,5±1,85* 38,5±2,86

Реамберин + вальпроевая кислота (3) 25,0±1,96 44,8±2,24

Таблица 4. Содержание компонентов АОС (мкг/г) в ткани печени экспериментальных животных (М±m) Группы животных Церулоплазмин Витамин Е

Интактные крысы (1) 25,6±1,8 53,0±4,2

Вальпроевая кислота - контроль (2) 15,8±1,5* 36,2±2,5*

Реамберин + вальпроевая кислота (3) 22,4±1,8** 48,0±3,2**

вскрывали брюшную полость, печень перфузи-ровали 0,15 М раствором KCl, содержащим 5 мМ трис-HCl, рН=7,4, печень выделяли, взвешивали, измельчали ножницами и гомогенизировали в гомогенизаторе Даунаса в течение 1 мин., приготовленный гомогенат использовали сразу для определения содержания продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Интенсивность процессов ПОЛ оценивали, исследуя содержание гидроперекисей липидов, диеновых конъюгатов, малонового диальдегида и основных компонентов антиоксидантной системы (АОС) - церулоплазмина, витамина Е в плазме крови и ткани печени крыс по методикам, изложенным в ранее опубликованных нами работах [3, 8, 9]. В работе использовали приборы: спектрофотометр КФК-2мп, спектрофотометр UNICO, фотоэлек-троколориметр Solar PV 1251 C. Статистическую

обработку результатов проводили с использованием критерия Стъюдента (^ с помощью программы Statistica v.6.0. Результаты считали достоверными при р < 0,05.

Результаты и их обсуждение

Результаты проведенного эксперимента позволили установить, что вальпроевая кислота вызывает активацию процессов ПОЛ и накопление продуктов липопероксидации в плазме крови и ткани печени контрольных животных (табл. 1, 2). Применение вальпроевой кислоты способствовало увеличению содержания гидроперекисей липидов на 33% в плазме крови и 30% в ткани печени относительно интактных крыс (р<0,05), диеновых конъюгатов - на 31% и 35%, соответственно (р<0,05), малонового диальдегида - на 45% и 56% (р<0,05), что свидетельствует о повышении

интенсивности процессов ПОЛ в условиях введения данного антиконвульсанта и согласуется с данными Л.В. Липатовой, Д.В. Алексеевой [7].

Результаты исследования основных компонентов АОС в плазме крови и ткани печени животных, получающих вальпроевую кислоту, свидетельствуют о снижении антиоксидантной защиты теплокровного организма в условиях введения антиконвульсанта (табл. 3, 4). Использование вальпроевой кислоты в эксперименте сопровождалось достоверным снижением уровня церулоплазмина в плазме крови на 31% относительно интактных крыс (р<0,05), в ткани печени - на 38% (р<0,05), витамина Е - на 21% и 32% соответственно.

В свою очередь, введение препарата реамберин крысам, получавшим вальпроевую кислоту, позволило достоверно снизить на 17% содержание малонового диальдегида в плазме крови, в ткани печени - на 31% на фоне достоверного уменьшения уровня первичных продуктов пероксидации на 20% (гидроперекиси липидов) и 18% (диеновые конъюгаты) (табл. 1, 2). Оценка параметров антиоксидантной системы при использовании препарата, содержащего янтарную кислоту, в условиях применения антиконвульсанта свидетельствовала о достоверном увеличении уровня церулоплазмина на 42% и витамина Е на 33% в ткани печени крыс на фоне недостоверного повышения данных показателей в плазме крови (табл. 3, 4).

Таким образом экспериментально подтверждена антиоксидантная активность реамберина в условиях введения вальпроевой кислоты, повышающей интенсивность

процессов липопероксидации. Способность сукцинатсодержащего лекарственного средства предупреждать формирование оксидативного стресса связано, прежде всего, с наличием в

рецептуре комбинированного препарата янтарной кислоты, обладающей широким спектром фармакологических эффектов, включающих не только антиоксидантную и антигипоксантную активность, но и адаптогенное действие, подтверждаемое результатами исследований последних лет [4]. Известно, что амплитуда и направленность модификаций под действием адаптогенов зависят от функционального исходного состояния тканей, а ее конечный результат выражается в оптимизации параметров их функционирования [6]. Чем более глубоки метаболические сдвиги в организме, тем более высокую эффективность проявляют данные лекарственные средства [2]. Поскольку при введении вальпроевой кислоты наблюдаются достаточнозначительныеизменения в системе ПОЛ/АОС, особенно в плане накопления продуктов радикального характера, вполне теоретически и экспериментально обосновано стабилизирующее влияние сукцинатсодержащего препарата реамберин на интенсивность процессов липопероксидации, что подтверждает возможность сукцинатов проявлять нетипично высокий для адаптогенов терапевтический эффект при наличии патологических изменений [10]. В целом результаты проведенных доклинических исследований позволяют предполагать возможность использования реамберина в клинике с целью коррекции побочных эффектов противоэпилептических средств при условии расширения доказательной базы клинической эффективности сукцинатсодержащего препарата.

Выводы

1.Вальпроевая кислота, вводимая крысам внутрижелудочно в дозе 150 мг/кг, индуцирует процессы липопероксидации, способствуя накоплению продуктов ПОЛ и снижению активности компонентов АОС в плазме крови и ткани печени животных.

ESTIMATION OF THE RESULTS OF PRECLINICAL STUDIES OF THE ANTIOXIDANT ACTIVITY OF REAMBERIN UNDER THE CONDITIONS OF VALPROIC ACID ADMINISTRATION

N.V. Simonova, V.A. Dorovskikh, R.A. Anokhina, M.A. Shtarberg, A.G. Maysak, A.A. Chernysheva, Yu.S. Leshtaeva

FSBEI HE the Amur state medical Academy of the Ministry of Public Health of Russia, Blagoveshchensk

Abstract The antioxidant properties of reamberin (Polysan Co., St. Petersburg) were studied with the introduction of antiepileptic drug in the experiment. It was found that the introduction of valproic acid intragastrically at a dose of 150 mg/kg once a day for 10 days leads to an increase lipid hydroperoxides (by 30 - 33%), diene conjugates (by 31 - 35%), malonic dialdehyde (45 - 56%) in the blood and liver of the animals on the background of reduced activity of the main components of antioxidant system (p < 0.05). The introduction of the succinate-containing drug (reamberin) intraperitoneally at a dose of 100 mg/kg (with regard to succinate, 20 mL/kg) 90 min before each intragastric administration of antiepileptic drug for 10 days) under conditions of oxidative stress reliably contributes to decrease of lipid hydroperoxides by 20%, diene conjugates by 18%, and malonic dialdehyde by 31% in the liver as compared to values in the control (untreated) group of animals (p < 0.05). While analyzing the effect of succinate-containing drug on the activity of components of the antioxidant system, it was found that the level of ceruloplasmin in the liver of animals was reliably higher by 42% and the level of vitamin E by 33% in comparison with rats of the control group (p < 0.05). Thus, the use of synthetic antioxidant under the conditions of introduction of valproic acid in experimental animals leads to the stabilization of the processes of peroxidation against the increase of antioxidant system activity.

Key words: reamberin, valproic acid, lipid peroxidation, antioxidant system, rats.

2.Внутрибрюшинное введение лабораторным животным сукцинатсодержащего препарата реамберин в дозе 100 мг/кг по сукцинату препятствует накоплению продуктов

пероксидации на фоне достоверного увеличения активности церулоплазмина и витамина Е в ткани печени крыс.

Литература

1.Громов Л.А., Беленичев И.Ф., Гончар-Чердакли Л.Г., Жерновая Г.А. Действие антиконвульсантов на систему оксида азота // Украинский биохимический журнал. 2013. №1 (85). С. 79-83.

2.Доровских В.А., Бородин Е.А., Штарберг М.А., Штарберг С.А., Егоров К.Е. Фосфолипиды как антиатеросклеротические лекарственные средства // Липопротеиды и атеросклероз: тезисы докладов симпозиума, посвященного 110-летию со дня рождения академика Н.Н. Аничкова. Москва, 1995. С.41-46.

3.Доровских В.А., Симонова Н.В., Симонова И.В., Штарберг М.А. Адаптогены растительного происхождения в профилактике заболеваний органов дыхания у детей ясельного возраста // Дальневосточный медицинский журнал. 2011. №1. С.41-44.

4.Доровских В.А., Симонова Н.В., Коршунова Н.В. Адаптогены в регуляции холодового стресса. Saabrucken, 2013. 266 с.

5.Коротков А.Г., Музалевская Д.С., Колоколов О.В. Роль антиоксидантов в комплексном лечении эпилепсии // Журнал неврологии и психиатрии имени С.С. Корсакова. 2016. №2. С. 44-48.

6.Ландышев Ю.С., Доровских В.А., Авдеева Н.В., Маркина О.И. Руководство для практических врачей по современным методам диагностики, лечения и профилактики бронхиальной астмы. Благовещенск, 2001. 89 с.

7.Липатова Л.В., Алексеева Д.В. Применение антиоксидантов в комплексной терапии больных фармакорезистентной эпилепсией: методические рекомендации. СПб, 2018. 66 с.

8.Переверзев Д.И., Доровских В.А., Симонова Н.В., Штарберг М.А. Эффективность цитофлавина в коррекции процессов перекисного окисления липидов в плазме крови больных с острым инфарктом миокарда // Кардиология и сердечнососудистая хирургия. 2016. Т.9. №5. С. 42-45.

9.Симонова Н.В., Доровских В.А., Бондаренко Д.А., Носаль Л.А., Штарберг М.А. Сравнительная эффективность ремаксола и реамберина при поражении печени четыреххлористым углеродом в эксперименте // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2018. Т. 81. №7. С. 29-33.

10.Швец О.М. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности иммуномодуляторов и их клиническая эффективность: дис. ... д-ра вет. наук. Курск, 2015.

References

1.Gromov L.A., Belenichev I.F., Gonchar-Cherdakli L.G., Zhernovaya G.A. The action of anticonvulsants on the nitric oxide system // Ukrainian Biochemical Journal. 2013;1(85):79-83 (in Russian).

2.Dorovskikh V.A., Borodin E.A., Shtarberg M.A., Shtarberg S.A., Egorov K.E. Tezisy dokladov simpozi-uma, posvjashchennogo 110-letiju so dnja rozhdenija akademika N.N. Anichkova «Lipoproteidy i aterosk-leroz» (Abstracts of the Symposium devoted to the 110 anniversary from the birthday of academician N.N. Anichkov «Lipoproteins and atherosclerosis»). Moscow; 1995: 41-46 (in Russian).

3.Dorovskikh V.A., Simonova N.V., Simonova I.V., Shtarberg M.A. Plant adaptogens in prevention of respiratory diseases in toddlers // Dal'nevostochnyy meditsinskiy zhurnal 2011; 1:41-44 (in Russian).

4.Dorovskikh V.A., Simonova N.V., Korshunova N.V. Adaptogens in the regulation of cold stress. Saabrucken; 2013 (in Russian).

5.Korotkov A.G., Muzalevskaia D.S., Kolokolov O.V. A role of antioxidants in the complex treatment of epilepsy. S.S. Korsakov Journal of Neurology and Psychiatry. 2016;2:44-48(in Russian).

6.Landyshev Yu.S., Dorovskikh V.A., Avdeeva N.V., Markina O. I. Guide for practitioners on modern methods of diagnosis, treatment and prevention of bronchial asthma. Blagoveshchensk; 2001 (in Russian).

7.Lipatova LV., Alekseeva DV. The use of antioxidants in the treatment of patients with pharmacoresistant epilepsy. SPb; 2018. (in Russian).

8.Pereverzev D.I., Dorovskikh V.A., Simonova N.V., Shtarberg M.A. Effectiveness of Cytoflavin in the correction of lipid peroxidation processes in the blood of patients with acute myocardial infarction. Cardiology and Cardiovascular Surgery. 2016;9(5):42-45 (in Russian).

9.Simonova I.V., Dorovskikh V.A., Simonova N.V. Phy-topreparations in the prevention of respiratory diseases in children // Bulletin physiology and pathology of respiration. 2015;55:54-58 (in Russian).

10.Shvets O.M. Theoretical and experimental substantiation of the use of succinic acid for potentiation of the biological activity of immunomodulators and their clinical effectiveness: thesis...doctor of vet. sciences. Kursk; 2015 (in Russian).

Статья поступила в редакцию 08.02.2020

Координаты для связи

Симонова Наталья Владимировна, д.б.н., профессор кафедры госпитальной терапии с курсом фармакологии ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России. E-mail: [email protected]

Доровских Владимир Анатольевич, заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., профессор кафедры

госпитальной терапии с курсом фармакологии ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России.

Анохина Раиса Афанасьевна, к.м.н., старший преподаватель кафедры госпитальной терапии с курсом фармакологии ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России.

Штарберг Михаил Анатольевич, к.м.н., старший лаборант кафедры химии ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России.

Майсак Александра Глебовна, студентка 5 курса лечебного факультета ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России.

Чернышева Анастасия Андреевна, студентка 5 курса лечебного факультета ФГБОУ ВО Амурская государственная медицинская академия.

Лештаева Юлия Сергеевна, студентка 5 курса лечебного факультета ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России.

Почтовый адрес ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России: 675000, Амурская область, г. Благовещенск, ул. Горького, 95. E-mail: AmurSMA@ AmurSMA.su, [email protected]

J

УДК 76.03.35

С-С- Целуйко

ФГБОУ ВО Амурская ГМА Минздрава России г. Благовещенск

РЕГЕНЕРАТИВНАЯ БИОМЕДИЦИНА: СТРАТЕГИЯ ОТ ЭКСПЕРИМЕНТА К КЛИНИЧЕСКИМ ИССЛЕДОВАНИЯМ

В настоящий момент медицинская наука вступила в период, когда наибольшие успехи достигнуты в лечении тех заболеваний, которые раньше были неизлечимыми. В условиях бурного технического прогресса основная дилемма будущего - будет ли достигнуто физическое бессмертие людей или произойдёт глобальная катастрофа. Выбор между этими путями придется сделать уже в этом веке.

Люди умирают от болезней, а не от старости, причем очень часто в молодом, продуктивном возрасте. Если рано выявлять не болезнь, а факторы риска, которые приводят к заболеваниям, то, занимаясь профилактикой и устраняя факторы риска, можно продлить людям жизнь, делая ее активной и продуктивной. Это и есть технологии молодости, которые работают крайне эффективно. Регенеративная биомедицина формируется на стыке биологии, медицины и инженерии. Считают, что она способна коренным образом изменить способы улучшения здоровья путем восстановления, поддержания и улучшения функций органов и тканей. Регенеративная медицина - одна из наиболее высокотехнологичных и бурно развивающихся отраслей биомедицинской индустрии.

Новые достижения регенеративной биомедицины позволят оказать реальную помощь больным, страдающим инсулинзависимым диабетом, нейродегенеративными

заболеваниями, мышечными дистрофиями, либо разработать принципиально новые подходы к лечению ряда патологий, таких, как инфаркт миокарда, гепатиты и другие заболевания. Современные клеточные технологии внесут

Резюме Успешное развитие регенеративной биомедицины как наукоемкой области, призванной стать новой технологической платформой медицины будущего, требует комплексного подхода, скоординированных междисциплинарных усилий, а также создания и совершенствования законодательной и нормативной базы для обеспечения разработки, исследований, научной экспертизы, регистрации, производства, контроля качества и медицинского применения биомедицинских клеточных продуктов.

Ключевые слова: регенерация, механизмы регенераторных процессов, методы клеточной терапии, тканевая инженерия.