Оценка популяции тучных клеток децидуальной ткани и статуса витамина d у женщин с неразвивающейся беременностью в эмбриональном периоде Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 21-27

МАТЕРИАЛЫ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЙ КОНФЕРЕНЦИИ С МЕЖДУНАРОДНЫМ

УЧАСТИЕМ «ОБЩЕГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОВРЕМЕННОЙ МЕДИЦИНЫ», посвященная 100-летию ВГМУ им. Н.Н. Бурденко

УДК: 618.2-018+611-013.7/.8 DOI: 10.24411/1609-2163-2018-16141

ОЦЕНКА ПОПУЛЯЦИИ ТУЧНЫХ КЛЕТОК ДЕЦИДУАЛЬНОЙ ТКАНИ И СТАТУСА ВИТАМИНА D У ЖЕНЩИН С НЕРАЗВИВАЮЩЕЙСЯ БЕРЕМЕННОСТЬЮ В ЭМБРИОНАЛЬНОМ

ПЕРИОДЕ

Е.В. ЕНЬКОВА, Д.А. АТЯКШИН, О.В. ГАЙСКАЯ, О.В. ХОПЕРСКАЯ

ФГБОУВО «Воронежский государственный медицинский университет им. Н.Н. Бурденко» Минздрава России, ул. Студенческая, д. 10, г. Воронеж, 394036, Россия

Аннотация. Неразвивающаяся беременность является важной проблемой современного акушерства. Несмотря на развитие медицины и большое количество накопленных знаний в данной области, частота встречаемости замершей беременности остается высокой и не имеет тенденции к снижению, что диктует необходимость поиска новых патогенетических механизмов развития и мер профилактики заболевания. Целью исследования являлось выявить влияние гиповитаминоза D на риск возникновения неразвивающейся беременности, оценить состояние популяции тучных клеток при физиологической гестации и замершей беременности, показать взаимосвязь между степенью насыщенности организма витамином D и количеством тучных клеток, а также степенью экспрессии ими специфичных протеаз. В проведенном исследовании установлена высокая частота формирования гиповитаминоза D в основной группе, а также увеличение количества, секреторной активности тучных клеток и изменение экспрессии специфичных протеаз при неразвивающейся беременности. Показано возрастание удельного веса химаза-позитивных тучных клеток в структуре их популяции при патологическом течении беременности. Выявлена обратная зависимость между количеством и секреторной активностью тучных клеток и концентрацией витамина D в плазме. Полученные сведения позволяют разработать новые схемы профилактики неразвивающейся беременности, включая коррекцию витаминодефицита и возможное использование стабилизаторов мембран тучных клеток на предгравидарном этапе.

Ключевые слова: витамин D, тучные клетки, неразвивающаяся беременность.

Введение. Профилактика репродуктивных потерь является первостепенным вопросом современного акушерства. Несмотря на значимые доклинические потери, 20% диагностированных желанных беременностей заканчивается неблагополучно, из них 9% - в результате неразвивающейся беременности (НБ) [2]. В 80% случаев прерывание гестации происходит в первом триместре, когда доля несостоявшегося выкидыша варьирует в пределах 45-88,6% [3]. Частота встречаемости НБ не имеет тенденции к снижению, что диктует необходимость поиска новых патогенетических механизмов развития и мер профилактики заболевания. Под НБ понимают гибель эмбриона или плода в сочетании с ареактивностью и инертностью мио-метрия и нарушениями в системе гемостаза [2,9]. Заболевание является полиэтиологичным и многофакторным. Так к НБ могут приводить анатомические и функциональные изменения

миометрия и эндометрия, генетические и хромосомные аномалии эмбриона, нарушения работы системы гемостаза, эндокринные, инфекционные и аутоиммунные заболевания. К факторам риска возникновения заболевания относят старший и поздний репродуктивный возраст родителей, соматические заболевания, вредные привычки, стресс [4-6,8,10,17].

В последние годы широко обсуждают роль дефицита витамина Ю в генезе бесплодия и невынашивания. Основной функцией жирорастворимого витамина является поддержание го-меостаза кальция и стимуляция процессов минерализации костной ткани. Дефицит 25(ОН)Ю заслуженно считается фактором риска НБ: его концентрация в сыворотке беременной ниже 50 нмоль/л сопряжена с более чем двукратным увеличением частоты прерывания беременности. Витамин Ю участвует в гестационном процессе, регулируя активность генов, ответствен-

ных за инвазию трофобласта, модулирует иммунный ответ по Th2 типу, снижая выработку провоспалительных цитокинов, и стимулирует ангиогенез за счет активации синтеза сосуди-сто-эндотелиального фактора роста (СЭФР) [7,13,16]. Обсуждается его роль в формировании механизмов ареактивности миометрия.

В литературе накоплены данные, свидетельствующие об участии тучных клеток (ТК) в формировании и поддержании беременности. ТК - лейкоциты, содержащие в цитоплазме около 500000 гранул с широким набором биологически активных веществ [18]. В зависимости от вида пептидазы, выделяют триптаза-позитивные, химаза-позитивные и ТК с одновременной экспрессией химазы и триптазы. Помимо пептидаз в гранулах содержатся гис-тамин, гепарин, матриксные металлопротеи-назы и проангиогенные факторы, включая СЭФР, необходимые для децидуализации эндометрия и имплантации плодного яйца [15]. Недаром количество ТК возрастает в фазу секреции и в первом триместре беременности; они расположены преимущественно вблизи развивающегося эмбриона [14,19]. ТК способны как увеличивать, так и уменьшать сократительную активность миометрия. Известны данные об ингибирующем влиянии витамина D на дегрануляцию ТК [20].

Материалы и методы исследования. Методом случайной выборки в исследование были включены и обследованы 80 женщин со сроком до 8 недель беременности: 1-я группа (группа контроля) - беременные женщины (n=40), поступившие для прерывания беременности (аборт). 2-я группа - беременные с угрожающим выкидышем, чья беременность, несмотря на проводимое лечение, остановилась в развитии (n=40).

Критериями исключения из исследования стали заболевания внутренних органов в стадии декомпенсации, вспомогательные репродуктивные технологии, беременные с признаками эндометрита, подтвержденного иммуно-гистохимическим исследованием CD 138, хромосомная патология абортуса.

Для установления уровня витамина D в плазме крови беременных использовали имму-ноферментный тест для количественного определения 25-OH витамина D (25-OH Vitamin D ELISA).

Для морфологического анализа неинвазив-ным методом (медикаментозное прерывание беременности) была взята децидуальная ткань.

Для идентификации ТК проводили традиционное метахроматическое окрашивание то-луидиновым синим [1]. С целью анализа состояния популяции ТК в каждом поле зрения при использовании объектива *20 определяли число ТК и соотношение недегранулированных и дегранулированных форм. После окрашивания по Романовскому-Гимзе оценивали соотношение гранулоцитов в ткани [11]. Для идентификации триптазы и химазы ТК использовался иммуногистохимический анализ [12]. Идентификация триптазы осуществлялась с помощью маркирования кроличьими моно-клональными антителами к триптазе ТК (AntiMast Cell Tryptase antibody, AbCam, #ab151757, разведение 1:1000), химазу идентифицировали мышиными моноклональными антителами к химазе ТК (Anti-Mast Cell Chymase antibody, AbCam, #ab2377), разведение 1:500 согласно стандартному протоколу [12].

Для множественного иммуно-

маркирования использовали аналогичные первичные антитела для идентификации триптазы и химазы ТК. В качестве вторичных антител использовали антитела Goat Anti-Rabbit Ig H&L, конъюгированные с Alexa Fluor-488 (#ab150077) (разведение 1:500) для идентификации триптазы, и Goat-Anti-Mouse Ig H&L, конъюгированные с Cy3 (#ab97035) для визуализации химазы (разведение 1:500) с помощью соответствующих флуоресцентных фильтров. Ядра докрашивали неинтеркалирующим красителем DAPI (5 мкг/мл PBS, 15 сек), после чего срезы заключались в монтажную среду Vectashield (Vector Laboratories, Burlingame, США).

Окрашенные срезы изучали на аппаратно-программном комплексе для биологических исследований ZEISS Axio Imager.A2 (Carl Zeiss Microscopy, Германия). Изображения документировали с помощью камеры Camera Axiocam 506 color, либо монохромной камерой для флуоресцентной микроскопии Camera Axiocam 503 mono и подвергали анализу на программном обеспечении ZEN 2.3 (blue edition, Carl Zeiss, Germany). Количество ТК в эндометрии определяли в поле зрения размером 700*500 мкм при использовании объектива *20, при этом в каждом срезе для получения достаточного объема данных анализировали не менее 20 полей зрения. Протеазный профиль определяли в процентах по соотношению в поле зрения трипта-за-позитивных, химаза-позитивных ТК и ТК с одновременной экспрессией триптазы и хима-зы. Полученный информационный массив об-

рабатывали статистически с помощью программного обеспечения ZEN 2.3 (Carl Zeiss). Достоверность различий в случае нормального распределения данных определяли с помощью t-критерия Стьюдента.

Результаты и их обсуждение. Установленные нами результаты демонстрируют высокую частоту встречаемости гиповитаминоза D у беременных женщин. В 92% случаев D-гиповитаминоз был выявлен в группе женщин с НБ, в 37% - в группе контроля. У женщин 2-й группы уровень витамина D в плазме крови составил 17.17±1.30 нг/мл, у женщин группы контроля - 30.90±1.26 нг/мл (р<0.05). Полученные результаты свидетельствуют о необходимости исследования этого показателя, важности профилактики недостаточности и дефицита витамина D.

В ходе исследования установлена функциональная активность и количество ТК в де-цидуальной ткани при НБ и при физиологически протекающей беременности (табл. 1).

Таблица 1

Содержание тучных клеток в эндометрии (по результатам метахроматического окрашивания, в поле зрения)

Группа пациентов Количество ТК

1-я группа 0.80±0.20

2-я группа 3.40±0.30*

Примечание: * - р<0.05 по сравнению с контролем

Таблица 2

Содержание тучных клеток в эндометрии (по результатам иммуногистохимического окрашивания, в поле зрения)

Протеазный профиль тучных клеток в эндометрии (в поле зрения, %). Множественное иммуномаркирование на триптазу и химазу

Примечание: * - p<0.05 по сравнению с контролем

У женщин с НБ наблюдалось большее количество триптаза- и химаза-позитивных ТК в децидуальной ткани, а также их активная секреторная деятельность (табл. 2-4).

Таблица 4

Интенсивность секреции протеаз тучными клетками (по результатам иммуногистохимического окрашивания, в поле зрения)

Примечание: * - р<0.05 по сравнению с контролем

В нашем исследовании впервые удалось установить наличие триптаза-позитивных, хи-маза-позитивных и триптаза / химаза-позитивных ТК в децидуализированном эндометрии в эмбриональном периоде беременности. Установлено, что триптаза / химаза-позитивные ТК в группе женщин с НБ встречались в 3.7 раз чаще, по сравнению с контролем (р<0.05) (табл. 3).

В строме эндометрия определяется незначительное количество триптаза-позитивных ТК.

Очевидна лучшая выявляемость ТК при метахроматическом окрашивании, что, возможно, обусловлено большим количеством секрета в цитоплазме, содержание которого заметно возрастало, а также возрастанием уровня сульфатированности гликозаминогли-канов, входящих в состав секреторных гранул, в том числе, возможно, гепарина.

В децидуализированном эндометрии возрастало число эозинофилов, часть которых находилась вблизи сосудов микроциркуляторного русла эндометрия (рис. 4), что указывает на активизацию эозинофилов и их участие в патогенезе НБ, несмотря на неравномерность распределения в эндометрии.

Дегрануляция ТК приводит к высокому содержанию триптаза- и химаза-позитивных гранул в строме эндометрия, где реализуются все эффекты протеаз: провоспалительный, инициация миммунологических реакций, спо-

Тип тучных клеток Секреторный статус 1-я группа 2-я группа

Триптаза-позитивные Недегранули-рованные 75.60±6.80 47.30±4.10*

Дегранулиро-ванные 24.40±3.20 52.70±4.20*

Химаза-позитивные Недегранули-рованные 83.40±7.70 63.60±5.10*

Дегранулиро-ванные 16.60±1.40 36.40±2.80*

Группа пациентов Триптаза-позитивные Химаза-позитивные

1-я группа 2.30±0.40 0.40±0.10

2-я группа 9.80±0.90* 3.80±0.40*

Примечание: * - p<0.05 по сравнению с контролем

Таблица 3

Группа пациентов Триптаза Химаза Триптаза + химаза

1-я группа 85.20±2.80 6.20±0.50 8.60±0.20

2-я группа 48.90±3.80* 18.60±1.50* 32.50± 2.80*

10иККЛЬ ОБ ОТШ МЕБТСЛЬ ТЕСЫШШСТЕ8 - 2018 - V. 25, № 3 - Р. 21-27

собность к ремоделированию архитектоники децидуальной ткани и спиральных артерий эндометрия. В результате массивной экструзии большое количество активных протеаз поступает в межклеточное пространство и оказывает клеточно-тканевые эффекты на структуры микроокружения.

Рис. 5. Децидуальная ткань женщины группы контроля. Определяется прилежание эозинофильного гранулоцита к стенке капилляра

О

Рис. 1. Высокое содержание триптаза-позитивных тучных клеток в децидуальной ткани у женщин 2-й группы. Секреция триптазы

Рис. 2. Децидуальная ткань женщины с замершей беременностью. В группе женщин с замершей беременностью содержание триптаза-позитивных тучных клеток в 4.2 раза превышает контроль (р<0.05), количество тучных клеток с признаками дегрануля-ции в 2.1 раз выше, по сравнению с контролем (р<0.05)

Рис. 6. Децидуальная ткань женщины с замершей беременностью. Множественное иммуномаркирова-ние триптазы и химазы тучных клеток. Наблюдаются экспрессия химазы и триптазы в тучных клетках

Рис. 3. Децидуальная ткань женщины группы контроля

Рис. 4. Децидуальная ткань женщины с замершей беременностью. Определяется большое количество эозинофильных гранулоцитов

Рис. 7. Децидуальная ткань женщины с замершей беременностью

При исследовании экспрессии протеаз -триптазы и химазы были обнаружены также существенные изменения состояния популя-

JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 21-27

ции ТК децидуализированного эндометрия. В группе женщин с замершей беременностью усиливалась экспрессия химазы в ТК эндометрия. При этом, несмотря на общее увеличение количества триптаза-содержащих ТК, результаты множественного иммуномаркирования свидетельствовали о снижении доли ТК с экспрессией триптазы. Установлено достоверное возрастание ТК с одновременной экспрессией триптазы и химазы, а также увеличивалась доля ТК, экспрессирующих исключительно хима-зу (табл. 3, рис. 7). Часто химаза-позитивные гранулы локализовались в строме эндометрия вне цитоплазмы ТК, представляя собой автономный запас фермента.

Полученные результаты подтверждают, что триптаза и химаза являются информативными диагностическими маркерами и перспективной мишенью для фармакотерапии,

поскольку они являются ключевыми объектами при исследовании роли ТК.

Заключение. При НБ установлено достоверное увеличение количества триптаза-позитивных (в 4.2 раза), химаза-позитивных (в 9.5 раза) и триптаза / химаза-позитивных ТК (в 3,7 раза) в децидуальной ткани, и степени их дегрануляции (в 2.1 раз), по сравнению с группой контроля, а также большая распространенность гиповитаминоза Ю. Показана обратная зависимость между концентрацией витамина Б плазмы и количеством и степенью дегрануля-ции ТК. Учитывая возрастание доли химаза-позитивных ТК в образцах децидуальной ткани пациенток основной группы, можно констатировать влияние гиповитаминоза Ю на экспрессию протеаз ТК, и важную роль химазы в патогенетических механизмах формирования НБ.

EVALUATION OF THE POPULATION OF THE MAST CELLS OF THE DECIDUAL TISSUE AND THE STATUS OF VITAMIN D IN WOMEN WITH UNDEVELOPED PREGNANCY IN THE EMBRYONIC

PERIOD

E.V. ENKOVA, D.A. ATIAKSHIN, O. V. GAISKAYA, O.V. HOPERSKAYA Voronezh State N.N. Burdenko Medical University, 10 Studencheskaya str., Voronezh, 394036, Russia

Abstract. An undeveloped pregnancy is an important problem of modern obstetrics. Despite the development of medicine and knowledge in this area, the incidence of undeveloped pregnancy remains high and does not decrease. It makes necessary to search a new pathogenetic mechanisms of development and prevention of this disease. The research purpose was to identify the effect of vitamin D hypovitaminosis on the risk of developing an undeveloped pregnancy and to assess the population composition and degree of activation of mast cells in physiological gestation, to show the relationship between vitamin D status and fat cell count and their expression of specific proteases. We have established a high incidence of hypovitaminosis 25(OH) D in the main group, as well as an increase in the number and degree of activation of mast cells in an undeveloped pregnancy. It is shown the increase in the specific weight of chymase - positive mast cells and changes in the expression of specific proteases in the pathological course of pregnancy. It was revealed the inverse relationship between the activity and the amount of mast cells and the concentration of vitamin D of plasma. The received information allow to develop new ways to prevent an undeveloped pregnancy, including correction of the deficiency D and the possible use of the stabilizers of membranes of mast cells at the pre-gravitational stage.

Key words: undeveloped pregnancy, mast cells, vitamin D.

Литература

1. Атякшин Д.А., Бухвалов И.Б., Тиманн М. Гистохимии ферментов. Воронеж: Научная книга, 2016. 120 с.

References

1. Atyakshin DA, Buhvalov IB, Timann M. Gistohi-mii fermentov [Enzyme histochemistry]. Voronezh: Nauchnaya kniga; 2016. Russian.

2. Беременность ранних сроков. От прегравидар-ной подготовки к здоровой гестации ; под. ред. В.Е. Радзинского, А.А. Оразмурадова. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Редакция журнала StatusPraesens, 2018. 800 с.

2. Beremennost' rannih srokov. Ot pregravidarnoj podgotovki k zdorovoj gestacii; pod. red. V.E. Rad-zinskogo, A.A. Orazmuradova. 3-e izd., pererab. i dop [Early pregnancy. From pregravid preparation for healthy gestation; under. ed. by V. E. Radzinsky, A. A.

JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2018 - V. 25, № 3 - P. 21-27

Orazmuradov. 3rd ed., re-developed and additional]. Moscow: Redakciya zhurnala StatusPraesens; 2018. Russian.

3. Бощанова Г.С., Зайдиева З.С., Магометхано-ва Д.М., Заякин В.А., Назарова Е.А. Невынашивание беременности: общий взгляд на проблему // Медицинский совет. 2012. № 3. С. 67-71.

3. Boshchanova GS, Zajdieva ZS, Magomethano-va DM, Zayakin VA, Nazarova EA. Nevynashivanie beremennosti: obshchij vzglyad na problemu [Miscarriage: a General view of the problem]. Medi-cinskij sovet. 2012; 3:67-71. Russian.

4. Гинекология: национальное руководство; под ред. Г.М. Савельевой, Г.Т. Сухих, В.Н. Серова, В.Е. Радзинского, И.Б. Манухина. 2-е изд., перераб. и доп. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2017. 1008 с.

4. Ginekologiya: nacional'noe rukovodstvo ; pod red. G.M. Savel'evoj, G.T. Suhih, V.N. Serova, V.E. Radzinskogo, I.B. Manuhina. 2-e izd., pererab. i dop. [Gynecology: national leadership ; ed. by G. M. Save-lieva, G. T. Sukhikh, V. N. Serov, V. E. Radzinsky, E.B. Manukhina. 2nd ed., re-developed and additional]. Moscow: GEHOTAR-Media; 2017. Russain.

5. Зинченко Ю.П., Хадарцев А.А., Филатова О.Е. Введение в биофизику гомеостатических систем (complexity) // Сложность. Разум. Постнеклассика. 2016. № 3. С. 6-15.

5. Zinchenko YuP, Khadartsev AA, Filatova OE. Vvedenie v biofiziku gomeostaticheskikh sistem (complexity) [Introduction to biophysics of homeos-tatic systems (complexity)]. Slozhnost'. Razum. Post-neklassika. 2016;3:6-15. DOI: 10.12737/22107. Russian.

6. Леонов Б.И., Хадарцев А.А., Гонтарев С.Н., Борисова О.Н., Веневцева Ю.Л., Агасаров Л.Г., Истомина И.С., Каменев Л.И., Варфоломеев М.А., Егиа-зарова И.П., Лысый В.М., Федоров С.Ю., Хижняк Л.Н., Щербаков Д.В., Коржук Н.Л., Хадарцев В.А. Восстановительная медицина: Монография / Под ред. А.А. Хадарцева, С.Н. Гонтарева, Л.Г. Агасаро-ва. Тула: Изд-во ТулГУ - Белгород: ЗАО «Белгородская областная типография», 2011. Т. IV. 204 с.

7. Мальцева Л.И., Васильева Э.Н. Новые подходы к оценке роли витамина Д3 в репродуктивном здоровье женщины // Практическая медицина. 2013. № 7. С. 42-47.

6. Leonov BI, Hadarcev AA, Gontarev SN, Boriso-va ON, Venevceva YUL, Agasarov LG, Istomina IS, Kamenev LI, Varfolomeev MA, Egiazarova IP, Lysyj VM, Fedorov SYU, Hizhnyak LN, SHCHerbakov DV, Korzhuk NL, Hadarcev VA. Vosstanovitel'naya medicina: Monografiya. Pod red. A.A. Hadarceva, S.N. Gontareva, L.G. Agasarova [Restorative medicine: Monograph. Under the editorship of A. A. Khadartsev, S. N. Gontareva, L. G. Agasarov]. Tula: Izd-vo TulGU - Belgorod: ZAO «Belgorodskaya oblastnaya tipogra-fiya»; 2011. T. IV. Russian.

7. Mal'ceva LI, Vasil'eva EHN. Novye podhody k ocenke roli vitamina D3 v reproduktivnom zdorov'e zhenshchiny [New approaches to assessing the role of vitamin D3 in women's reproductive health]. Prakticheskaya medicina. 2013;7:42-7. Russian.

8. Медведев Б.И., Воропаева Е.Е., Казачков Е.Л., Казачкова Э.А. Экстрагенитальные заболевания и социальный статус женщин при самопроизвольном аборте // Акушерство и гинекология. 2012. № 4/2. С. 97-102.

9. Радзинский В.Е. Акушерская агрессия, v. 2.0. М.: Изд-во журнала StatusPraesens, 2017. 872 с.

10. Хадарцев А.А., Морозов В.Н., Волков В.Г., Хадарцева К.А., Карасева Ю.В., Хромушин В.А., Гра-натович Н.Н., Гусак Ю.К., Чуксеева Ю.В., Паньши-на М.В. Медико-биологические аспекты реабили-тационно-восстановительных технологий в аку-

8. Medvedev BI, Voropaeva EE, Kazachkov EL, Kazachkova EHA. EHkstragenital'nye zabolevaniya i social'nyj status zhenshchin pri samoproizvol'nom aborte [Extragenital diseases and social status of women in spontaneous abortion]. Akusherstvo i ginekologiya. 2012;4/2:97-102. Russian.

9. Radzinskij VE. Akusherskaya agressiya, v. 2.0. [Obstetric aggression, V. 2.0]. Moscow: Izd-vo zhurnala StatusPraesens; 2017. Russian.

10. KHadarcev AA, Morozov VN, Volkov VG, KHadar-ceva KA, Karaseva YUV, KHromushin VA, Granato-vich NN, Gusak YUK, CHukseeva YUV, Pan'shina MV. Mediko-biologicheskie aspekty reabilitacionno-vosstanovitel'nykh tekhnologij v akusherstve: mono-

шерстве: монография / Под ред. Хадарцевой К. А. Тула: ООО «Тульский полиграфист», 2013. 222 с.

grafiya [Medical and biological aspects of rehabilitation and rehabilitation technologies in obstetrics: monograph]. Pod red. KHadarcevoj K.A. Tula: OOO «Tul'skij poligrafist»; 2013. Russian.

11. Atiakshin D., Samoilova V., Buchwalow I., Boeck-er W., Tiemann M. Characterization of mast cell populations using different methods for their identification // Histochemistry and Cell Biology. 2017. N 6. P. 683-694.

11. Atiakshin D, Samoilova V, Buchwalow I, Boecker W, Tiemann M. Characterization of mast cell populations using different methods for their identification. Histochemistry and Cell Biology. 2017;6:683-94.

12. Buchwalow I.B., Boecker W. Immunohistochemi-stry: basics and methods. Springer, 2010.

13. Grundmann M., Haidar M., Placzko S., Niendorf R., Darashchonak N., Hubel C.A., von Versen-Höynck F. Vitamin D improves the angiogenic properties of endothelial progenitor cells // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2012. Vol. 303. P. 954-962.

14. Jensen F., Woudwyk M., Teles A., Woidacki K., Taran F., Costa S., Malfertheiner S.F., Zenclussen A.C. Estradiol and progesterone regulate the migration of mast cells from the periphery to the uterus and induce their maturation and degranulation // PloS one. 2010. № 5. P. 14409.

15. Liu Z., Kilburn B.A., Leach R.E., Romero R., Paria B.C., Armant D.R. Histamine enhances cytotro-phoblast invasion by inducing intracellular calcium transients through the histamine type-1 receptor // Mol.Reprod. Dev. 2004. Vol. 68, № 3. P. 345-353.

16. Ota K., Dambaeva S., Kim M.W., Han A.R., Fu-kui A., Gilman-Sachs A., Beaman K., Kwak-Kim J. 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 regulates NK-cell cytotoxicity, cytokine secretion, and degranulation in women with recurrent pregnancy losses // Europ. J. of immunology. 2015. Vol. 45, № 11. P. 3188-3199.

17. Sauer M.V. Reproduction at an advanced maternal age and maternal health // Fertil. Steril. 2015. Vol. 103, №5. P. 1136-1143.

18. Wernersson S., Pejler G. Mast cell secretory granules: armed for battle // Nat. Rev. Immunol. 2014. Vol. 14. P. 478-494.

19. Woidacki K., Popovic M., Metz M., Schumacher A., Linzke N., Teles A., Poirier F., Fest S., Jensen F., Rabi-novich G.A., Maurer M., Zenclussen A.C. Mast cells rescue implantation defects caused by c-kit deficiency // Cell death & disease. 2013. № 4. P. 462.

20. Zheng X.H., Zhang G.D., Zhang G.H., Mai R.O., Shen L. Effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3 on mast cells tryptase in asthmatic guinea pigs // Asian Pacific J. of Tropical Medicine. 2015. Vol. 8, Iss. 6. P. 494497.

12. Buchwalow IB, Boecker W. Immunohistochemi-stry: basics and methods. Springer; 2010.

13. Grundmann M, Haidar M, Placzko S, Niendorf R, Darashchonak N, Hubel CA, von Versen-Höynck F. Vitamin D improves the angiogenic properties of en-dothelial progenitor cells. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 2012;303:954-62.

14. Jensen F, Woudwyk M, Teles A, Woidacki K, Taran F, Costa S, Malfertheiner SF, Zenclussen AC. Es-tradiol and progesterone regulate the migration of mast cells from the periphery to the uterus and induce their maturation and degranulation. PloS one. 2010;5:14409.

15. Liu Z, Kilburn BA, Leach RE, Romero R, Paria BC, Armant DR. Histamine enhances cytotrophoblast invasion by inducing intracellular calcium transients through the histamine type-1 receptor. Mol.Reprod. Dev. 2004;68(3):345-53.

16. Ota K, Dambaeva S, Kim MW, Han AR, Fukui A, Gilman-Sachs A, Beaman K, Kwak-Kim J. 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 regulates NK-cell cytotoxicity, cytokine secretion, and degranulation in women with recurrent pregnancy losses. Europ. J. of immunology. 2015;45(11):3188-99.

17. Sauer MV. Reproduction at an advanced maternal age and maternal health. Fertil. Steril. 2015;103(5):1136-43.

18. Wernersson S, Pejler G. Mast cell secretory granules: armed for battle. Nat. Rev. Immunol. 2014;14:478-94.

19. Woidacki K, Popovic M, Metz M, Schumacher A, Linzke N, Teles A, Poirier F, Fest S, Jensen F, Rabino-vich GA, Maurer M, Zenclussen AC. Mast cells rescue implantation defects caused by c-kit deficiency. Cell death & disease. 2013;4:462.

20. Zheng XH, Zhang GD, Zhang GH, Mai RO, Shen L. Effect of 1,25-dihydroxyvitamin D3 on mast cells tryptase in asthmatic guinea pigs. Asian Pacific J. of Tropical Medicine. 2015;8(6):494-7.