CC BY
32
Инфекционные болезни, иммунология
и иммунотерапия
УДК 616.36 - 002.12 : 578.891 : 577.125] - 085 О.В. Щепилова, Г.С. Томилка, О.А. Лебедько, Г.Г. Обухова, Г.П. Березина
ОЦЕНКА ОКСИДАНТНО-АНТИОКСИДАНТНОГО СТАТУСА У БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ А НА ФОНЕ ЛЕЧЕНИЯ ДАЛАРГИНОМ
Дальневосточный государственный медицинский университет; Институт охраны материнства и детства СО РАМН, г. Хабаровск
Актуальность проблемы связана с широким распространением вируса гепатита А (ГА) и высоким уровнем заболеваемости им во многих регионах Российской Федерации [9]. ГА сопровождается синдромом интоксикации и активацией процессов свободнорадикального окисления [2, 5, 11].Наличие тяжелых форм заболевания, летальность (0,5%) [11], случаи затяжной реконвалесцен-ции и обострения ГА свидетельствуют о недостаточной эффективности стандартной терапии.
Важную роль в регуляции функции желудочно-кишечного тракта, в том числе гепатобилиарной системы, играют эндогенные опиоидные пептиды. Доказано, что при острых повреждениях печени агонисты опиоидных 8- и ц-рецепторов, обильно представленных в тканевых структурах печени, оказывают гепатопротекторный эффект [13, 14].
Известно, что синтетический аналог эндогенного опи-оидного пептида лей-энкефалина — даларгин (Туг-Э-А1а-Gly-Phe-D-Leu-Arg), являющийся смешанным агонистом 8- и ц-опиоидных рецепторов, обладает мощным анти-оксидантным и антирадикальным действием, на основе которого реализуются мембранно- и цитопротективный эффекты этого препарата [6-8].
В доступной литературе мы не встретили сведений о применении даларгина у больных с ГА.В связи с этим целью исследования явилось изучение влияния далар-гина на оксидантно-антиоксидантный статус сыворотки крови больных ГА среднетяжелой формы.
Материалы и методы
В клинике инфекционных болезней Дальневосточного государственного медицинского университета на базе МУЗ «Городская клиническая больница №10» проведено исследование, в которое были включены 35 пациентов ГА
Резюме
Изучен окшдантно-антиокшдантный статус сыворотки крови больных гепатитом А (ГА) среднетяжелой формы. Установлено, что при ГА развивается дефицит компонентов антиоксидантной антирадикальной защиты. Установлен выраженный корригирующий эффект даларгина в отношении нарушений оксидантно-антиоксидантного статуса у больных ВГА среднетяжелой формы.
O.V. Shchepilova, G.S. Tomilka, O.A. Lebedko, G.G. Obukhova. G.P. Berezina
ESTIMATION OF THE OXIDANT-ANTIOXIDANT STATUS OF PATIENTS WITH VIRAL HEPATITIS A, TREATED WITH DALARGIN
FESMU, Khabarovsk Summary
A study of the oxidant-antioxidant status of blood serum of patients with semi-severe form of viral hepatitis A was conducted. It was determined that viral hepatitis A causes deficit of antioxidant antiradical defense components. A marked corrective effect of Dalargin on the oxidant-antioxidant status of blood serum of patients with semi-severe form of viral hepatitis A was established.
среднетяжелой формы. 1 группа — 19 пациентов с ГА, получавших базисную терапию по общим принципам, средний возраст 23,50±2,66 г., из которых 16 мужчин и 3 женщины; 2 группа — 16 больных, получавших даларгин на фоне базисной терапии, средний возраст 24,93±2,54 г., среди которых 13 мужчин и 3 женщины.
Диагноз вирусного гепатита А установлен на основании обнаружения специфических маркеров (анти-HAV IgM) в 100% случаев. Исследуемые группы были относительно однородными и сопоставимыми как по клиническим проявлениям, так и по биохимическим изменениям. В качестве контроля изучены показатели у 30 практически здоровых людей (доноров).
Базисная терапия заключалась в назначении диеты №5 по Певзнеру и во внутривенном капельном введении 5% раствора глюкозы 800-1200 мл в сут.
Даларгин назначался ежедневно, внутривенно капель-но в дозе 0,003 г 1 раз в день на 400 мл физиологического раствора в течение 7 дн.
Забор крови у пациентов 1 и 2 групп для исследования оксидантно-антиоксидантного статуса в рамках данной работы осуществлялся трижды: на 2 день госпитализации (период разгара), на 10 день госпитализации и на 21 день госпитализации (период ранней реконвалесценции).
Для интегральной оценки процессов свободноради-кального окисления (СРО) использовали метод хемилю-минесценции (ХМЛ). Регистрацию ХМЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS-50B фирмы "PERKIN ELMER" (Швейцария). Стандартизацию сигнала и математическую обработку кривых выполняли с помощью встроенной программы «Finlab».
Спонтанную и индуцированную Fe2+ ХМЛ исследовали по методу Ю.А. Владимирова [3]. Определяли свето-сумму за 1 мин спонтанной ХМЛ (S1), величина которой коррелирует с интенсивностью свободнорадикальных процессов; максимум «быстрой» вспышки (h) индуцированной ХМЛ, свидетельствующий о содержании гидроперекисей липидов, светосумму (S2) за 2 мин, после «быстрой» вспышки, отражающую скорость образования перекисных радикалов.
Кинетику ХМЛ, инициированную Н2О2 в присутствии люминола [1], анализировали по параметрам: све-тосумме люминол-зависимого свечения в течение 1 мин (S3), величина которой пропорциональна содержанию гидроксильных радикалов [3], максимуму свечения (Н), указывающему на потенциальную способность биологического объекта к перекисному окислению, и светосумме за 2 мин ХМЛ (S4), величина которой свидетельствует об активности антиоксидантной антирадикальной защиты
(АОРЗ). Интенсивность ХМЛ выражали в относительных единицах.
Активацию процессов перекисного окисления липидов на промежуточном этапе оценивали фотокалориметричес-ки по содержанию малонового диальдегида (МДА) методом В.Б. Гаврилова [4]. Неферментативное звено АОРЗ оценивалось флюориметрически по уровню содержания природного биоантиоксиданта a-токоферола по методу L.D. Hansen в сыворотке крови [12]. Достоверность различия оценивали при помощи t-критерия Стьюдента.
результаты и обсуждение
Результаты исследования свидетельствуют (таблица), что в сыворотке крови у пациентов 1 и 2 групп при поступлении в стационар (период разгара болезни) имело место достоверное повышение уровня продуктов сво-боднорадикального окисления относительно контроля. И в 1, и во 2 группах показатель интенсивности свободнорадикальных процессов (S1) превышал аналогичный в контроле в 2,02 и 2,05 раза соответственно. Возрастала скорость образования перекисных радикалов липидной природы (S2) в 2,34 и в 2,40 раза соответственно. В обеих группах отмечено повышенное содержание гидроксиль-ных радикалов (S3) в 1,81 и 1,84 раза соответственно. При этом активизировались первичный и промежуточный этапы перекисного окисления липидов: содержание гидроперекисей липидов (h) было повышено в 2,33 и в 2,30 раза и МДА — в 2,29 и 2,37 раза соответственно. Повышение показателей оксидативного статуса сочеталось с ослаблением антиоксидантной антирадикальной защиты (АОРЗ) (S4) в 1,91 и 2,03 раза, в том числе со снижением резистентности организма к перекисному окислению (Н) в 2,02 и 2,04 раза соответственно. При этом страдали как неферментативное (снижение a-токоферола в 1,6 и 1,7 раза), так и ферментативное звенья АОРЗ. В пользу последнего свидетельствовало угнетение активности ка-талазы в виде увеличения (Н) (величина, обратная ката-лазной активности, по данным М.П. Шерстнева) [10] в 2,02 и 2,04 раза соответственно.
Сравнительный анализ оксидантно-антиоксидантно-го статуса сыворотки крови больных ВгА 1 и 2 групп при поступлении в стационар достоверных различий не выявил.
показатели оксидантно-антиоксидантного статуса сыворотки крови больных среднетяжелой формой ТА
Показатель Контроль При поступлении 10 день 21 день
1 группа 2 группа 1 группа 2 группа 1 группа 2 группа
Sj (отн.ед.) 0,61±0,02 1,23±0,07* 1,25±0,09* 1,14±0,11* 0,93±0,07*,** 0,97±0,06*,*** 0,70±0,07 ***
S2 (отн.ед.) 1,39±0,04 3,25±0,18* 3,32±0,17* 3,04±0,15* 2,50±0,16*,** 2,21±0,16**** 1,68±0,16 ***
S3 (отн.ед.) 0,73±0,02 1,32±0,10* 1,35±0,09* 1,15±0,16* 0,99±0,09*** 1,02±0,09*,*** 0,75±0,06***
h (отн.ед.) 0,52±0,02 1,22±0,11* 1,21±0,11* 1,18±0,14* 0,88±0,09* 0,85±0,05*,*** 0,64±0,07 ***
Н (отн.ед.) 0,69±0,06 1,41±0,11* 1,42±0,13* 1,16±0,14* 1,04±0,11*,** 1,05±0,08*,*** 0,76±0,07***
S4 (отн.ед.) 1,42±0,03 2,72±0,16* 2,89±0,17* 2,36±0,22* 2,18±0,16*,** 2,13±0,18**** 1,65±0,12***
МДА (нмоль/мл) 17,56±0,87 40,24±2,02* 41,68±2,59* 35,98±1,12* 28,24±1,65*,** 24,95±1,32*,*** 19,79±0,67***
a-токоферол (мкмоль/л) 22,64±1,14 12,82±0,95* 12,26±1,69* 13,23±0,78* 14,84±0,94* 14,86±0,79* 17,26±0,42*,***
Примечания. Достоверность различий между показателями средних значений при сравнении: * — с контролем достоверны (р<0,05); ** — с исследованиями при поступлении и через 10 дн. (р<0,05); *** — с исследованиями при поступлении и через 21 дн. (р<0,05)
На фоне проводимой базисной терапии (1 группа) к 10 дн. не отмечено положительной динамики в отношении нарушений биогенеза активных кислородных метаболитов в сравнении с аналогичными при поступлении, при этом сохранялось ослабление АОРЗ. Только к 21 дн. госпитализации в этой группе больных выявлено достоверное, по сравнению с первым исследованием, снижение показателей оксидантного статуса S1, S2, S3, h и МДА — в 1,27-; 1,47-; 1,29-; 1,44- и 1,61 раза соответственно. Выявлено слабое усиление АОРЗ в 1,27 раза и повышение резистентности организма к перекисному окислению (н) в 1,35 раза. Однако все эти показатели по-прежнему достоверно отличались от контроля.
В то же время при проведении базисной терапии в сочетании с даларгином, в сравнении с аналогичными показателями при поступлении, уже на 10 день отмечено достоверное снижение величин S1, S2, S3, h и МДА — в 1,35-, 1,33-, 1,37-, 1,37- и 1,47 раза соответственно. Улучшились показатели антиоксидативного статуса в виде повышения резистентности организма к перекисному окислению (Н) в 1,33 раза и усиления АОРЗ ^4) в 1,32 раза. При этом уровень а-токоферола повысился в 1,21 раза.
На 21 дн. госпитализации исследуемые показатели сыворотки крови пациентов 2 группы достигли контрольного уровня и достоверно не отличались от такового, за исключением а-токоферола, уровень которого оставался сниженным относительно контроля. Была установлена сильная отрицательная связь между терапией с даларгином, с одной стороны, и показателями свободнорадикального окисления — с другой: S1 (г= -0,98), S2 (г= -0,97), S3 (г= -0,98), h (г= -0,96).
Таким образом, положительная динамика исследуемых ХМЛ-показателей сыворотки крови позволяет судить об эффективности применения даларгина в качестве корректора нарушений оксидантно-антиоксидантного статуса у больных вирусным гепатитом А.
Выводы
1. У больных ВГА среднетяжелой формы в периоде разгара болезни выявляется нарушение оксидантно-анти-оксидантного статуса сыворотки крови.
2. Даларгин, корректируя нарушения оксидантно-ан-тиоксидантного статуса, усиливает эффективность базисной терапии и может быть предложен в качестве средства патогенетической терапии.
Литература
1. Арутюнян А.В. Методы оценки свободнорадикаль-ного окисления и антиоксидантной системы организма: Мет. рек. СПб.: Наука, 2000. С. 198.
2. Буеверов А.О. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепа-тол., колопроктол. 2002. №4. С. 21-24.
3. Владимиров Ю.А. // ВИНИТИ АН СССР: Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М., 1991. Т. 29. 147 с.
4. Гаврилов В.Б., Гаврилова А.Р., Мажуль Л.М. // Вопросы мед. химии. 1987. №1. С. 118-121.
5. Дудник Л.Б., Виксна Л.М., Майоре А.Я. // Вопросы мед. химии. 2000. №6. С. 597-609.
6. Львова С.П., Абаева Е.М., Гасангаджиева А.Г. и др. // Вопросы мед. химии. 2002. Т. 48. С. 189-195.
7. Лишманов Ю.Б., Травков Ю.А., Федотов Т.В. и др. // Бюл. эксперимент. биологии и медицины. 1991. №6. С. 619-621.
8. Миху И.Я., Изачик Ю.А., Ружицкая Е.А. // Клин. лаб. диагностика. 1994. №1. С. 9-10.
9. Онищенко Г.Г. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002. №6. С. 4-13.
10. Шерстнев М.П. Разработка хемилюминесцентных методик исследования плазмы и клеток крови для оценки состояния больных: Автореф. дис. ... д-ра мед. наук. М., 1997. 43 с.
11. Ющук Н.Д., Венгеров Ю.Я. Лекции по инфекционным болезням. Т. 2. М.:ВУНМЦ, 1999. 431 с.
12. Hansen L.D., Wanonc W.T. // Amer. J. Clin. Pathol. 1966. Vol. 46, P. 117.
13. Wittert G., Hope P., Pyle D. // Biochem. Biophys. Re Commun. 1996. Vol. 218, №3. P. 877-881.
14. Yamanouchi K., Yanaga K., Okudaira S. et. Al. // J. Sur. Res. 2003. Vol. 114, №1. P. 72-77.
□□□
