Оценка лекарственной устойчивости пробиотических лактобацилл Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

Оценка лекарственной устойчивости пробиотических лактобацилл

Н. Л. БРУСЛИК', Д. Р. АХАТОВА', А. А. ТОЙМЕНЦЕВА', С. Р. АБДУЛХАКОВ'2, О. Н. ИЛЬИНСКАЯ', Д. Р. ЯРУЛЛИНА'

' Институт фундаментальной медицины и биологии (ИФМиБ), Казанский (Приволжский) федеральный университет, Казань 2 Казанский государственный медицинский университет, Казань

Estimation of Probiotic Lactobacilli Drug Resistance

N. L. BRUSLIK, D. R. AKHATOVA, A. A. TOIMENTSEVA, S. R. ABDULKHAKOV, O. N. ILYINSKAYA, D. R. YARULLINA

Institute of Fundamental Medicine and Biology, Kazan (Volga Side) Federal University, Kazan Kazan State Medical University, Kazan

Проведён анализ устойчивости пробиотических лактобацилл к антибиотикам и лекарственным препаратам, применяемым при заболеваниях желудочно-кишечного тракта. У 19 штаммов рода Lactobacillus (14 штаммов L.fermentum, 4 штаммов L.plantarum и 1 штамма L.rhamnosus), выделенных из коммерческих пробиотиков и кисломолочных продуктов, определены уровни устойчивости к 14 антибиотикам различной природы: в-лактамам, аминогликозидам, макролидам, клиндами-цину, ванкомицину, рифампицину, ципрофлоксацину, тетрациклину и хлорамфениколу. Практически все исследованные лактобациллы чувствительны к препаратам первой линии противохеликобактерной терапии — амоксициллину и кларит-ромицину, что делает нецелесообразным параллельный приём пробиотиков, содержащих изученные лактобациллы, при гастрите и язве желудка, несмотря на известную антагонистическую активность лактобацилл в отношении Helicobacter pylori. В то же время лактобациллы устойчивы к действию месалазина, поэтому могут применяться для коррекции дисби-оза при воспалительных заболеваниях кишечника.

Ключевые слова: пробиотические лактобациллы, лекарственная устойчивость, заболевания желудочно-кишечного тракта.

An actual problem of analysis of probiotic lactobacilli resistance to antibiotics and other drugs used in the treatment of gastro-intestinal disturbances has been for the first time solved. The levels of resistance of 19 strains of Lactobacillus (14 strains of L.fermentum, 4 strains of L.plantarum and 1 strain of L.rhamnosus) isolated from commercial probiotics and sour milk products to 14 antibiotics of various nature, i.e. в-lactams, aminoglycosides, macrolides, clindamycin, vancomycin, rifampicin, ciprofloxacin, tetracycline and chloramphenicol were determined. All the isolates were practically susceptible to the drugs of the first line antihelicobacterial therapy, i.e. amoxicillin and clarithromycin, that makes inexpedient the parallel use of the probiotics containing the above lactobacilli in the treatment of gastritis and gastric ulcer, despite the lactobacilli antagonism with respect to Helicobacterpylory. Lactobacilli are as well resistant to mesalazin and can be used for correction of dysbiosis in inflammatory affections of the intestine.

Key words: probiotic lactobacilli, drug resistance, gastro-intestinal diseases.

Введение

Бактерии рода Lactobacillus имеют большое практическое значение, они широко применяются в пищевой отрасли в качестве стартерных культур при производстве кисломолочныгх продуктов и в медицине как пробиотики. Лактобациллы обладают доказанной эффективностью в лечении и профилактике кишечныгх инфекций и антибиотикоас-социированныгх синдромов: острой инфекционной диареи, антибиотикоассоциированной диареи (ААД) [1] и диареи, обусловленной Clostridium difficile [2]. Обсуждается возможность применения пробиотиков, в том числе лактобацилл, в индукции и поддержании ремиссии у пациентов с язвенным

© Коллектив авторов, 2015

Адрес для корреспонденции: 420008, Казань, Кремлевская, 18. Институт фундаментальной медицины и биологии (ИФМиБ), Казанский (Приволжский) федеральный университет

колитом [3, 4], лечении синдрома раздражённого кишечника [5] и профилактике колоректального рака [6]. Обнаружено повышение эффективности противохеликобактерной терапии при включении в схемы эрадикации пробиотических препаратов, содержащих лактобациллы [7].

Очевидно, что важным требованием к пробио-тическим штаммам является антибиотикорезис-тентность (АР) — только устойчивые к антибактериальным препаратам бактерии можно совмещать с антимикробной терапией при лечении кишечных инфекций или применять для профилактики ААД. С другой стороны, АР пробиотического штамма может противоречить требованиям лекарственной безопасности. Показано, что у больных с выраженными иммунодефицитными состояниями пробиотические штаммы лактобацилл способны вызывать бактериемию и эндокардиты [8]. Так-

Таблица 1. Использованные в работе штаммы лактобацилл

Штамм Источник

Lactobacillus plantarum 8PA3 Lactobacillus plantarum B-578 Lactobacillus plantarum Ga Lactobacillus plantarum 1-3 Lactobacillus rhamnosus GG Lactobacillus fermentum Na Lactobacillus fermentum 1-1 Lactobacillus fermentum 1-2 Lactobacillus fermentum 1-5 Lactobacillus fermentum 3-1 Lactobacillus fermentum 3-2 Lactobacillus fermentum 3-3 Lactobacillus fermentum 3-4 Lactobacillus fermentum 4-1 Lactobacillus fermentum 5-1 Lactobacillus fermentum 5-2 Lactobacillus fermentum 5-3 Lactobacillus fermentum 6-1 Lactobacillus fermentum 7-1

Препарат «Лактобактерин сухой» (ФГУП НПО «Биомед»)

Всероссийская коллекция микроорганизмов

Лекарственный препарат «Гастрофарм» (АО «Биовет», Болгария)

Питьевой йогурт «Вамин» (ОАО Вамин Татарстан)

Питьевой йогурт «Bio Баланс» (ОАО Юнимилк)

БАД «Наринэ» (ОАО «Narex», Армения)

Питьевой йогурт «Нежный» (ООО Кампина)

Питьевой йогурт «Простоквашино» (ОАО Юнимилк)

Питьевой йогурт «Тема» (ОАО Юнимилк)

Кисломолочный напиток «Actimel» (фирма Danon)

Кисломолочный напиток «Айран» (ООО ФудМилк)

Кисломолочный напиток «Дар гор» (ООО ФудМилк)

Кисломолочный напиток «Тан» (ООО Продукт «Чистая линия»)

Катык «Васькино счастье» (ОАО ЗМК)

Ряженка 4% «Чистое поле» (ОАО Чистое поле)

Ряженка 2,5% «Наш продукт» (ООО Торговый Дом «Наш Продукт»)

Ряженка «Домик в деревне» (ОАО Вимм-Биль-Данн)

Кисломолочный напиток «Ацидофилин» (ОАО Вамин Татарстан)

Простокваша Мечниковская (ОАО Вамин Татарстан)

же существует риск распространения генов АР в микробиоме человека с помощью конъюгативных плазмид и транспозонов [9—12]. Поэтому определение безопасности лактобацилл — «GRAS-ста-тус» (generally regarded as safe) — сегодня дополнено целым рядом требований. У бактерий, используемых в пробиотиках и в пищевом производстве, недопустимо наличие «мобильных» генов устойчивости к антимикробным агентам и приобретённой АР [13, 14].

Данная работа выполнена с целью выявления устойчивости лактобацилл к антибиотикам и лекарственным препаратам, применяемым в лечении ряда заболеваний желудочно-кишечного тракта. Впервые изучено влияние на лактобацил-лы 14 антибиотиков девяти различных классов, в том числе амоксициллина и кларитромицина, используемых для эрадикации Helicobacter pylori, и 5-аминосалициловой кислоты (месалазина), применяющейся в лечении болезни Крона и язвенного колита.

Материал и методы

Штаммы и условия культивирования. В работе исследовали 19 штаммов бактерий рода Lactobacillus, выделенных нами из коммерческих кисломолочных продуктов и пробиотичес-ких препаратов. Бактерии выращивали в жидкой и агаризо-ванной среде MRS («Биокомпас-С», Россия) при 37±0,5°С в течение 24—48 ч. Выращивание бактерий на плотных питательных средах проводили в анаэростатах с использованием газогенерирующих анаэробных пакетов GasPak EZ (BD Diagnostics). Данные о динамике роста бактерий получены в 96-луночных полистироловых планшетах Cellstar (Grenier Bio-one) с помощью планшетного ридера Tecan Infinite F200 PRO (Швейцария).

Таксономическая идентификация бактерий. Принадлежность к роду Lactobacillus установлена по ГОСТ 10444.11-89 «Продукты пищевые. Методы обнаружения молочнокислых микроорганизмов», видовая идентификация проведена с помощью масс-спектрометрии MALDI-TOF. Изолированные колонии микроорганизмов, выросшие на поверх-

ности MRS-агара, наносили в двух повторностях на 96-лу-ночную мишень прибора Microflex Maldi BioTyper (Bruker Daltonics, Германия). На образец наслаивали 1 мкл раствора матрицы (10 мг/мл а-циано-4-гидроксикоричной кислоты, растворённой в 50% ацетонитриле, 2,5% трифторуксус-ной кислоте) и после высыхания проб регистрировали масс-спектры с помощью оснащённого азотным лазером (длина волны 337 нм, частота импульсов 60 Гц) масс-спектрометра Microflex в автоматическом режиме (MALDI Biotyper Realtime Classification).

Лекарственные препараты. В работе использовали диски с антибиотиками (НИЦФ, Россия). Исходный 0,6 М раствор 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) (Sigma-Aldrich) готовили в диметилсульфоксиде (ДМСО) и добавляли в MRS перед инокуляцией не более 3% от объёма среды.

Чувствительность бактерий к антибактериальным препаратам определяли диско-диффузионным методом согласно методическим указаниям МУК 4.2.1890-04 [15]. В 20 мл стерильной агаризованной среды MRS, растопленной и остуженной до 45°С, вносили 1 мл суспензии лактобацилл с плотностью 1,5х108 КОЕ/мл, тщательно перемешивали, после чего наслаивали ровным слоем на чашки Петри. После застывания среды стерильным пинцетом раскладывали на поверхность агара диски с антибиотиками. Чашки инкубировали при 37°C в течение 48 ч. Чувствительность лактоба-цилл к антибиотикам оценивали по зонам задержки роста (мм) вокруг дисков. Анализ результатов проводили аналогично МУ 2.3.2.2789-10. 2.3.2.

Чувствительность лактобацилл к 5-АСК исследовали методом серийных разведений в 96-луночных планшетах и диско-диффузионным методом, в котором на застывшую поверхность агара раскладывали стерильные Whatman диски (Sigma-Aldrich) и наносили на них 5 мкл раствора 5-АСК в дистиллированной воде.

Результаты и обсуждение

В данной работе из кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов было выделено 19 штаммов лактобацилл и методом MALDI TOF масс-спектрометрии установлена их принадлежность к видам L.fermentum (14 штаммов), L.plan-tarum (4 штамма) и L.rhamnosus (1 штамм) (табл. 1). Бактерии L.delbrueckii subsp. bulgaricus не были обнаружены ни в одном из использованных ис-

Таблица 2. Использованные в работе антибактериальные препараты

Антибиотик Мишень действия в клетке Концентрация, мкг/диск

в-лактамы Клеточная стенка

Ампициллин 10

Амоксициллин 25

Аминогликозиды 1 поколения Биосинтез белка

Стрептомицин 30

Канамицин 30

Аминогликозиды 2 поколения Биосинтез белка

Гентамицин 10

Аминогликозиды 3 поколения Биосинтез белка

Амикацин 30

Макролиды Биосинтез белка

Эритромицин 15

Кларитромицин 15

Линкозамиды Биосинтез белка

Клиндамицин 2

Гликопептиды Клеточная стенка

Ванкомицин 30

Ансамицины Нуклеиновые кислоты

Рифампицин 5

Фторхинолоны 1 поколения Нуклеиновые кислоты

Ципрофлоксацин 5

Тетрациклины Биосинтез белка

Тетрациклин 30

Хлорамфениколы Биосинтез белка

Хлорамфеникол 30

Таблица 3. Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении чувствительности лактобацилл к антибактериальным препаратам диско-диффузионным методом

Антибиотик Диаметр зон для культур, мм

устойчивых промежуточных чувствительных

Ампициллин* <8-10 11-20 >21

Амикацин <8-10 11-20 >21

Амоксициллин <8-10 11-20 >21

Ванкомицин <8-10 11-20 >21

Гентамицин <12 13-14 >15

Канамицин <8-10 11-20 >21

Кларитромицин <8-10 11-20 >21

Клиндамицин <8-10 11-20 >21

Левомицетин <8-10 11-20 >21

Рифампицин <15 16-20 >21

Стрептомицин <8-10 11-20 >21

Тетрациклин <16 17-21 >22

Ципрофлоксацин <15 16-20 >21

Эритромицин <8-10 11-20 >21

Примечание. * — цветом выделено определение согласно МУ 2.3.2.2789-10. 2.3.2.

точников, хотя, согласно N 88-ФЗ «Технический регламент на молоко и молочную продукцию» (от 12.06.2008) и сопроводительной информации на упаковках продукции, должны были присутствовать в 10 из 19 источников. Также нам не удалось выделить представителей L.acidophilus (из «Нари-нэ» и ацидофилина) и L.casei (из «Лейте!). Несоответствия в видовых названиях исследуемых лактобацилл можно объяснить развитием современных молекулярных методов определения видовой принадлежности, позволяющих более точно установить таксономический статус микроорганизмов.

Оценка чувствительности лактобацилл к антибиотикам. В работе оценили чувствительность лактобацилл к 14 антибиотикам диско-диффузионным методом (табл. 2). Оценку АР часто проводят при исследовании пробиотического потенциала того или иного штамма, тем не менее стандарты определения чувствительности лактобацилл к антибиотикам до сих пор не установлены. Лактобациллы плохо растут на агаре Мюл-лера-Хилтон [16, 17], рекомендованном для диско-диффузионной оценки АР клинически значимых бактерий [15, 18], поэтому для лакто-бацилл было предложено использовать среду

s S 5 8«

S О

is S оо лаг-

т -S в

ч „ нч

§ § 2 J? S во

mm pi pi pi pi mm m pi m pi

mm pi pi pi pi отм m pi pi pi m m

им pi pi pi pi отм m w m pi m m

S S S I R R S

R S R

pi pipi*+ mm mpimm

S S I R R R S I S S R S S S

mm pi pi pi pi mm m pi m m pi

mm pi pi pi pi

m pi m pi m

mm pi pi pi pi мот m pi m pi

mm pi pi pi pi отьч m pi m pi m m

mpi pi pi pi pi mm m pi m pi m m

I R R R

I R R

R

R

R

R

R R R R I R R R S R

I R R R S S S R S R S S

I R R R I S S R S R S S

R R R R I S

R S R S S

R I R R S I S R S R S S

R R R R

R

я и н е л

кол

о п 2

Is к

я

оои к т ми ипм ли е а гл р н

go ^

тр ри

ааие

ак

g

н и

4

коВ

и л

m pi m m

я и н е л

он о § п а к о и 1 кс

инл ы пи он ф

иаор

ц фа н п ииии

со

Ан Фт

ны ил ло ы к к н ик и ицн

ц е м л

тр о 2 й

> ее

о

CP а

<U

S I

3

<и §

S £

MRS. На этой среде зоны подавления роста бактерий антибактериальным препаратом превышают таковые на агаре Мюллера-Хилтон [17]. Следовательно, при использовании среды MRS необходимо разработать отличные от стандартных критерии оценки АР, на основании которых штаммы лактобацилл относят к чувствительным (S), умеренно чувствительным (промежуточным) (I) и устойчивым (R). К сожалению, многие авторы не приводят значений диаметров зон подавления роста, характерных для чувствительных и устойчивых штаммов [19—21]. Использовали критерии интерпретации результатов, аналогичные приведённым в МУ 2.3.2.2789-10. 2.3.2, дополнив их критериями для антибиотиков, не указанными в данном документе (табл. 3). Кроме того, нами модифицирована стандартная процедура посева [15] таким образом, что суспензию лактобацилл вносили в MRS-агар, поскольку ряд лак-тобацилл не способен расти при поверхностном посеве на MRS-агар [17].

У лактобацилл обнаружена высокая устойчивость к ципрофлоксацину и ванкоми-цину — у 84 и 68% штаммов, соответственно (табл. 4). Резистентность к этим антибиотикам среди лактобацилл встречается достаточно часто [16,20, 22, 23] и,вероятно,является природной [22]. Также исследованные лактобациллы демонстрировали высокую устойчивость к аминогликозид-ным антибиотикам, что ранее было показано в работах [16, 19, 20]. Пониженную чувствительность бактерий рода Lactobacillus к аминогликози-дам также считают природной и связывают с низкой проницаемостью антибактериальных препаратов этой группы через мембраны лактобацилл

[19, 20, 22]. Точная локализация генетических детерминант устойчивости к ципрофлоксацину и аминогликозидам, а следовательно, и их потенциальная мобильность у лактобацилл пока не установлены [24]. Для исследуемых видов лактобацилл (L.rhamnosus, L.plantarum, L.fermentum) показано, что резистентность к ванкомицину кодируется хромосомными генами, она неиндуци-бельна и не может передаваться [25, 26].

Согласно М. Danielsen и A. Wind [16], горизонтальному транспорту особенно подвержены гены устойчивости к хлорамфениколу, эритромицину и тетрациклину. Бактерии рода Lactobacillus, как правило, чувствительны к этим антибиотикам [16, 20, 23] и в целом к ингибиторам биосинтеза белка, кроме аминогликозидов [24]. В соответствии с этими фактами, у исследованных нами лактобацилл из пробиотиков и кисломолочных продуктов широко распространена чувствительность к хлорамфениколу, макролидам (эритромицину, кларитромицину), линкоза-мидам (клиндамицину) и тетрациклину (см. табл. 4). Большинство исследованных лактобацилл также демонстрировали чувствительность к ри-фампицину (84% штаммов) и в-лактамам (100% штаммов к ампициллину и 95% штаммов — к амоксициллину) (см. табл. 4).

Полученные нами данные об антибиотикоре-зистентности широко известного пробиотичес-кого штамма L.plantarum 8PA3 в основном согласуются с данными литературы [27]. Однако наши исследования выявили резистентность этого штамма к гентамицину. Поскольку природная устойчивость лактобацилл к аминогликозидам зависит от условий выращивания и повышается в анаэробных условиях [28], расхождения с [27] в результатах тестирования устойчивости к гентамицину (аминогликозиду 2 поколения) можно объяснить разными условиями выращивания штамма. Ранее диско-диффузионным методом было показано, что бактерии L.plantarum 8РА3 устойчивы к тетрациклину, но гены устойчивости не удалось обнаружить [27]. В данной работе, напротив, представители этого штамма демонстрировали чувствительность к тетрациклину, что согласуется с их генетической программой.

Таким образом, большинство исследованных лактобацилл имеют профиль резистентности, типичный для данной группы микроорганизмов. Особую тревогу вызывает обнаружение резистентности к эритромицину у L.fermentum 5-1 и к тетрациклину у L.fermentum 3-4 и 5-2. Поскольку гены, кодирующие устойчивость к этим антибиотикам, часто оказываются мобильными [16], необходимы дальнейшие исследования по выяснению природы обнаруженной устойчивости у лактобацилл и способности к её распространению в микробиоме кишечника человека.

Рис. 1. Анализ чувствительности ¡.^вгтвМит 3-4 к ДМСО и различным концентрациям 5-АСК диско-диффузионным методом.

Отсутствие зон подавления роста бактерий вокруг дисков свидетельствует о том , что данные лактобациллы нечувствительны к 5-АСК.

Изучение целесообразности использования лактобацилл в противохеликобактерной терапии.

Основная рекомендованная схема эрадикации Н.ру1оп, так называемая первая линия тройной терапии, включает два антимикробных препарата (амоксициллин и кларитромицин) и один антисекреторный препарат - ингибитор протонной помпы [29]. По отношению к амоксициллину большинство бактерий проявляли чувствительность, кроме устойчивого штамма L.fermentum 1-5. К кларитромицину все штаммы были также в разной степени чувствительными за исключением L.fermentum № (см. табл. 4). Ни один штамм не был устойчив к обоим рассматриваемым антибиотикам. Таким образом, исследованные лактоба-циллы не будут вносить вклад в эффективность противохеликобактерной терапии. Известно, что содержащие лактобациллы пробиотики повышают степень эрадикации Н.ру1оп, если применяются в течение 3-4 недель до начала терапии [30, 31]. В. 8. 8Иеи с соавт. приводят шесть возможных механизмов, благодаря которым пробиотики повышают эффективность противохеликобактер-ной терапии, в том числе антагонистическая активность лактобацилл (конкуренция за питательный субстрат и сайты адгезии в кишечнике) [30]. Обнаруженная чувствительность лактобацилл к кларитромицину и амоксициллину практически исключает вклад указанных механизмов и выдвигает в качестве наиболее вероятной причины положительного действия лактоба-

Рис. 2. Влияние 5-АСК на рост культур ¡..р!ап1агит Са (а), ¡.^егтепит № (б), ¡.^егтепит 5-1 (в) и ¡.^егтеп-ит 1-2 (г).

По оси абсцисс — время (часы); по оси ординат — оптическая плотность при 600 нм (ОП 600).

цилл при лечении хеликобактерной инфекции их способность увеличивать барьерные функции организма за счёт стимуляции выработки муцина и иммуномодуляторного действия [32, 33].

Оценка устойчивости лактобацилл к месалази-ну. Месалазин (5-аминосалициловая кислота, 5-АСК) является препаратом первой линии терапии воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК), таких как болезнь Крона и неспецифический язвенный колит. В патогенезе хронического воспаления кишечника важную роль отводят дисбалансу кишечной микрофлоры (дисбиозу) [4], поэтому пробиотики привлекаются в качестве дополнительных средств терапии этих заболеваний [3]. В нашей работе впервые изучено влияние 5-АСК на жизнеспособность чистых культур лактобацилл. С помощью диско-диффузионного метода установлено, что 5-АСК в концентрациях до 12 мМ не оказывает влияния на рост исследуемых лактобацилл (рис. 1). Методом серийных разведений также показано, что все штаммы лактобацилл устойчивы к 5-АСК - в исследованном диапазоне концентраций 5-АСК (0,03-12 мМ)

МПК не обнаружена. У некоторых лактобацилл (L.plantarum Ga, L.fermentum Na и 1-2) 5-АСК в наивысших из исследованных концентраций 6 и 12 мМ увеличивает продолжительность лаг- и лог-фазы, хотя не влияет на выход биомассы (рис. 2, а, б, в). У L.fermentum 5-1, помимо вышеуказанного эффекта, выявлено снижение урожая культуры (рис. 2, в). Известно, что токсичность 5-АСК отличается для разных представителей кишечной микрофлоры: 5-АСК не влияет на рост E.coli, Streptococcus faecalis [34] и Salmonella enterica серовар Typhimurium [35], но снижает рост Bacteroides и Clostridium [34], а также Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis, возможного этиологического агента ВЗК [36]. Приём месалазина изменяет соотношение различных групп микроорганизмов в кишечной микрофлоре [37—39], в основном представителей Firmicutes и Bacteroidetes [38, 39]. Вероятно, лактобациллы, как члены филы Firmicutes, не чувствительные к действию месалазина, оказывают благоприятное влияние на данное соотношение при приёме месалазина. Более того, безвредность этого вещест-

ва для лактобацилл аргументирует концепцию использования пробиотиков параллельно с меса-лазином при лечении ВЗК. Для обоснования данной терапевтической схемы необходимы исследования in vivo и клинические наблюдения, а также тестирование токсичности для бактерий более высоких концентраций 5-АСК. Концентрации 5-АСК до 12 мM использованы нами как биологически релевантные, согласно J. Kaufman с соавт. [35], хотя известно, что в фекалиях содержание месалазина составляет 10—100 мМ [40], поскольку для достижения терапевтического эффекта необходима постоянная высокая концентрация препарата.

Заключение

Таким образом, впервые получены данные об устойчивости лактобацилл, выделенных нами из кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов, к клинически распространённым антибиотикам, в том числе применяемым для эра-

ЛИТЕРАТУРА

1. Sazawal S, Hiremath G, Dhingra U, Malik P., Deb S, Black R.E. Efficacy of probiotics in prevention of acute diarrhea: a meta-analysis of masked, randomised, placebo-controlled trials. Lancet Infect Dis 2006; 6: 374—382.

2. Pillai A., Nelson R. Probiotics for treatment of Clostridium dificile-associ-ated colitis in adults. Cochrane Database Syst Rev 2008; 23: 1: CD004611.

3. Ghouri Y.A., Richards D.M., Rahimi E.F., Krill J.T., Jelinek K.A., DuPont A.W. Systematic review of randomized controlled trials of probiotics, pre-biotics, and synbiotics in inflammatory bowel disease. Clin Exp Gastroenterol 2014; 7: 473—487.

4. Matsuoka K, Kanai T.The gut microbiota and inflammatory bowel disease. Semin Immunopathol 2015; 37: 1: 47—55.

5. Camilleri M. Probiotics and irritable bowel syndrome: rationale, putative mechanisms, and evidence of clinical efficacy. J. Clin. Gastroenterol. 2006; 40: 264—269.

6. Rafter J., Bennett M, Caderni G, Clune Y, Hughes R, Karlsson P.C., Klinder A., O'Riordan M, O'Sullivan G.C., Pool-Zobel B, Rechkemmer G, Roller M, Rowland I., Salvadori M, Thijs H, Van Loo J., Watzl B, Collins J.K. Dietary synbiotics reduce cancer risk factors in polypec-tomized and colon cancer patients. Am J Clin Nutr 2007; 85: 488—496.

7. de Bortoli N, Leonardi G, Ciancia E, Merlo A., Bellini M, Costa F, Mumolo M.G., Ricchiuti A., Cristiani F, Santi S, Rossi M, Marchi S. Helicobacter pylori eradication: a randomized prospective study of triple therapy versus triple therapy plus lactoferrin and probiotics. Am J Gastroenterol 2007; 102: 5: 951-956.

8. Cannon J.P., Lee T.A., Bolanos J.T., Danziger L.H. Pathogenic relevance of Lactobacillus: a retrospective review of over 200 cases. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2005; 24: 1: 31—40.

9. Mathur S., Singh R. Antibiotic resistance in food lactic acid bacteria — a review. Int J Food Microbiol 2005; 105: 3: 281-295.

10. Devirgiliis C, Zinno P., Perozzi G. Update on antibiotic resistance in food-borne Lactobacillus and Lactococcusspecies. Front Microbiol 2013; 8; 4: 301.

11. Виноградова К.А., Булгакова B.F., Полин A.H, Кожевин П.А. Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам: резистома, её объём, разнообразие и развитие. Антибиотики и химиотер 2013; 58: 5—6: 38—48.

12. van Reenen C.A., Dicks L.M. Horizontal gene transfer amongst probiotic lactic acid bacteria and other intestinal microbiota: what are the possibilities? A review. Arch Microbiol 2011; 193: 3: 157—168.

13. Bernardeau M., Vernoux J.P., Henri-Dubernet S., Gueguen M. Safety assessment of dairy microorganisms: the Lactobacillus genus. Int J Food Microbiol 2008; 126: 3: 278—285.

дикации H.pylori, а также к месалазину — препарату для лечения болезни Крона и язвенного колита. Значимость полученных результатов для составления обоснованных тактических схем применения пробиотических лактобацилл при этиотропной антибактериальной терапии, а также для лечебной коррекции и профилактики дис-биотических состояний, не вызывает сомнений.

Работа выполнена в рамках Программы повышения конкурентоспособности Казанского (Приволжского) федерального университета с использованием оборудования Междисциплинарного центра коллективного пользования КФУ (ID RFME-FI59414X0003) и частичным финансированием за счёт средств субсидии Минобрнауки России в целях реализации федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» (Соглашение № 14.575.21.0076, ID RFMEFI575I4X0076).

14. EFSA Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed (FEEDAP), 2008. Technical guidance on the update of the criteria used in the assessment of bacterial resistance to antibiotics of human or veterinary importance. The EFSA Journal 2008; 732: 1—15.

15. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (МУК 4.2.1890-04). Клин Микробиол Антимикроб Химиотер 2004; 6: 4: 306—359.

16. Danielsen M, Wind A. Susceptibility of Lactobacillus spp. to antimicrobial agents. Int J Food Microbiol 2003; 82: 1: 1—11.

17. Ocaña V., Silva C, Nader-Macías M.E. Antibiotic susceptibility of potentially probiotic vaginal lactobacilli. Infect Dis Obstet Gynecol. 2006; 2006: 18182.

18. National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. Approved standard M2-A6. Wayne, Pa: National Committee for Clinical Laboratory Standards; 1997.

19. Charteris W.P., Kelly P.M., Morelli L, Collins J.K. Antibiotic susceptibility ofpotentially probiotic Lactobacillus species. J Food Prot 1998; 61: 12: 1636—1643.

20. KirtzalidouE, PramateftakiP., KotsouM, Kyriacou A. Screening for lactobacilli with probiotic properties in the infant gut microbiota. Anaerobe 2011; 17: 6: 440—443.

21. Wang C.Y., Lin P.R., Ng C.C, Shyu Y.T. Probiotic properties of Lactobacillus strains isolated from the feces of breast-fed infants and Taiwanese pickled cabbage. Anaerobe 2010; 16: 6: 578—585.

22. Katla A.K., Kruse H, Johnsen G, HerikstadH. Antimicrobial susceptibility of starter culture bacteria used in Norwegian dairy products. Int J Food Microbiol 2001; 67: 1—2: 147—152.

23. Rojo-Bezares B, Saenz Y, Poeta P., Zarazaga M, Ruiz-Larrea F, Torres C. Assessment of antibiotic susceptibility within lactic acid bacteria strains isolated from wine. Int J Food Microbiol 2006; 111: 3: 234—240.

24. Gueimonde M, Sánchez B, G de Los Reyes-Gavilán C, Margolles A. Antibiotic resistance in probiotic bacteria. Front Microbiol 2013; 4: 202.

25. Klein G, Hallman C, Casas I.A., Abad J., Lowers J., Reuter G. Exclusion of vanA, vanB and vanC type glycopeptide resistance in strains of Lactobacillus reuteri and Lactobacillus rhamnosus used as probiotics by polymerase chain reaction and hybridization methods. J Appl Microbiol 2000; 89: 815—824.

26. Saarela M, Matto J, Mattila-Sandholm T. Safety aspects of Lactobacillus and Bifidobacterium species originating from human oro-gastrointestinal tract or from probiotic products. Microb Ecol Health Dis 2002; 14: 233—240.

27. Ботина С.Г., Полуэктова Е.У., Глазова A.A., Захаревич Н.В, Коробан Н.В, Зинченко В В., Бабыкин М.М., Жиленкова О.Г., АмерхановаA.M., Даниленко В Н. Характеристика устойчивости к антибиотикам по-

тенциальных пробиотических бактерий рода Lactobacillus из гастроин-тестинальной микробиомы человека. Микробиология 2011; 80: 2: 1—9.

28. Davis BD. Mechanism of bactericidal action of aminoglycosides. Microbiol Rev 1987; 51: 3: 341—350.

29. Malfertheiner P., Megraud F., O'Morain C.A., Atherton /., Axon A.T., Bazzoli F., Gensini G.F., Gisbert J.P., Graham D.Y., Rokkas T, El-Omar E.M., Kuipers E.J., European Helicobacter Study Group. Management of Helicobacter pylori infection — the Maastricht IV/ Florence Consensus Report. Gut 2012; 61: 5: 646—664.

30. Sheu B.S., Cheng H.C., Kao A.W, Wang S.T., Yang YJ, Yang H.B, Wu /./.Pretreatment with Lactobacillus- and Bifidobacterium-containing yogurt can improve the efficacy of quadruple therapy in eradicating residual Helicobacter pylori infection after failed triple therapy. Am J Clin Nutr 2006; 83: 4: 864—869.

31. Deguchi R, Nakaminami H, Rimbara E, Noguchi N, Sasatsu M, Suzuki T., Matsushima M, Koike /., Igarashi M, Ozawa H, Fukuda R, Takagi A. Effect of pretreatment with Lactobacillusgasseri OLL2716 on first-line Helicobacter pylori eradication therapy. J Gastroenterol Hepatol 2012; 27: 5: 888—892.

32. Pacifico L, Osborn /.F., Bonci E, Romaggioli S., Baldini R, Chiesa C. Probiotics for the treatment of Helicobacter pylori infection in children. World J Gastroenterol 2014; 20: 3: 673—683.

33. Lesbros-Pantoflickova D, Corthésy-Theulaz I, Blum A.L. Helicobacter pylori and probiotics // J Nutr. 2007; 137: 3: 812S—818S.

СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ:

Яруллина Дина Рашидовна — к.м.н., кандидат биологических наук, доцент кафедры микробиологии Института фундаментальной медицины и биологии (ИФМиБ) Казанского (Приволжского) федерального университета (КФУ), старший научный сотрудник OpenLab «Маркеры патогенеза» ИФМиБ КФУ, E-mail: kasfes@gmail.com

Бруслик Наталия Леонидовна — аспирант кафедры микробиологии Института фундаментальной медицины и биологии (ИФМиБ) Казанского (Приволжского) федерального университета (КФУ).

Ахатова Диана Раузидовна — студентка 5 курса кафедры микробиологии Института фундаментальной медицины и биологии (ИФМиБ) Казанского (Приволжского) федерального университета (КФУ).

34. Sandberg-Gertzen H, Kjellander J., Sundberg-Gilla B, Jarnerot G. In vitro effects of sulphasalazine, azodisal sodium, and their metabolites on Clostridium difficile and some other faecal bacteria. Scand J Gastroenterol 1985; 20: 5: 607—612.

35. Kaufman J., Griffiths T.A., Surette M.G., Ness S, Rioux K.P. Effects of mesalamine (5-aminosalicylic acid) on bacterial gene expression. Inflamm Bowel Dis 2009; 15: 7: 985—996.

36. Greenstein R.J., Su L, Shahidi A., Brown S.T. On the action of 5-amino-salicylic acid and sulfapyridine on M.avium including subspecies paratu-berculosis. PLoS One 2007; 2: 6: e516.

37. Swidsinski A., Loening-Baucke V., Bengmark S,. Lochs H, Dorffel Y. Azathioprine and mesalazine-induced effects on the mucosal flora in patients with IBD colitis. Inflamm Bowel Dis 2007; 13: 1: 51—56.

38. Rioux K.P., Bibiloni R, Tannock G.W., Dieleman L.A., Fedorak R.N. Aminosalicylates alter the dominant phylogenetic profile of fecal bacteria in mice. Gastroenterology 2005; 128: A663.

39. Andrews C.N., Griffiths T.A., Kaufman J., Vergnolle N, Surette M.G., Rioux K.P. Mesalazine (5-aminosalicylic acid) alters faecal bacterial profiles, but not mucosal proteolytic activity in diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome. Aliment Pharmacol Ther 2011; 34: 3: 374—383.

40. Williams C, Panaccione R, Ghosh S, Rioux K. Optimizing clinical use of mesalazine (5-aminosalicylic acid) in inflammatory bowel disease. Therap Adv Gastroenterol 2011; 4: 4: 237—248.

Тойменцева Анна Александровна — к.м.н., научный сотрудник ИФМиБ КФУ, главный инженер проекта Масс-спек-трометрической лаборатории МЦКП КФУ для обеспечения клеточных, геномных и постгеномных исследований в Приволжском регионе.

Абдулхаков Сайяр Рустамович — к.м.н., старший научный сотрудник OpenLab «Генные и клеточные технологии» Института фундаментальной медицины и биологии (ИФ-МиБ) Казанского (Приволжского) федерального университета (КФУ), доцент кафедры нормальной анатомии, кафедры общей врачебной практики Казанского государственного медицинского университета. Ильинская Ольга Николаевна — д.б.н., профессор, академик Академии наук Республики Татарстан, заведующий кафедрой микробиологии Казанского (Приволжского) федерального университета.