CC BY
58
УДК 615:658.012.7(075)
Т. В. Дудник, С. Ю. Гармонов
ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ТАБЛЕТОК ВАЛЬПРОЕВОЙ КИСЛОТЫ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ
Ключевые слова: вальпроевая кислота, растворение, количественное определение.
Разработана методика определения показателей растворения и количественного определения вальпроевой кислоты в виде таблеток пролонгированного действия, покрытых оболочкой. Определения проведены методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Keywords: valproic acid, dissolving, assay.
Method of dissolving and assay of valproic acid as coated sustained-action tablets was created. Analysis were carried out by HPLC.
Эпилепсия является одним из наиболее распространенных заболеваний центральной нервной системы (ЦНС). Эпилепсия - это заболевание головного мозга, характеризующееся стойкой предрасположенностью к генерации эпилептических припадков, а также нейробиологическими, когнитивными,
психологическими и социальными последствиями этого состояния. Центральная концепция этого определения - наличие стойких изменений головного мозга, которые повышают вероятность развития эпилептических припадков [1].
Основным клиническим проявлением заболевания является эпилептический припадок -внезапное появление одного или нескольких симптомов вследствие патологически чрезмерной или синхронной нейрональной активности головного мозга. Клинически это выражается транзиторными патологическими феноменами, которые возникают внезапно в результате дисфункции отдельного участка и/или всего головного мозга. Патологическая симптоматика может проявляться изменением сознания, моторными, сенсорными, вегетативными изменениями [2].
Ежегодный рост заболеваемости эпилепсией составляет от 40 до 70 человек на 100 тыс. населения, при этом приблизительно у 1/3 пациентов заболевание является пожизненным. По данным ВОЗ, более 75% из 40 млн. больных эпилепсией в мире не получают адекватного лечения. Длительность фармакотерапии эпилепсии составляет в среднем от двух до пяти лет, однако около 40% больных вынуждены получать лечение пожизненно. В России 8,65% больных эпилепсией находятся в состоянии ремиссии, у 48,1% пациентов регистрируется более 12 приступов в год. Политерапию получают 41,18% пациентов; 18,05% не получают лекарственной терапии, остальным же проводится лечение одним препаратом.
Сплошные популяционные исследования по разным регионам России показывают, что доля пациентов без припадков от общего числа больных, получавших антиконвульсантную терапию, составляет 13-28%, в то время как при правильной тактике лечения она должна составлять 50-80%. Эпилепсия до сих пор приводит к значительному
повышению инвалидности и высокому риску смертности [3].
На протяжении последних лет наблюдается увеличение количества новых
противоэпилептических препаратов (ПЭП), из которых многие уже широко применяются на практике. ПЭП уделяется большое внимание со стороны компаний-производителей, учитывая их большой удельный вес среди других препаратов на фармацевтическом рынке. Этому есть несколько причин:
- широкая распространенность эпилепсии;
- необходимость длительного применения ПЭП при эпилепсии;
- расширение показаний для использования ПЭП — лечение других неэпилептических неврологических и психиатрических нарушений, то есть потребность в ПЭП на фармацевтическом рынке возрастает;
- старение населения во всем мире и рост заболеваемости эпилепсией после 65 лет (количество больных эпилепсией в этой возрастной группе постоянно увеличивается) [4].
Препараты вальпроевой кислоты (ПВК) в настоящее время во всем мире являются наиболее широко используемыми средствами для контроля над судорожными и бессудорожными припадками у детей и взрослых. Вальпроевая кислота используется в клинической практике для коррекции и парциальных, и генерализованных (эпилептических) приступов. Эффективность вальпроатов является 100% подтвержденной при контроле за абсансами, миоклоническими и тонико-клоническими судорогами при первично генерализованных формах эпилепсии, а также при парциальных приступах с вторичной генерализацией [5].
Вальпроевая кислота — лекарственное средство из группы производных жирных кислот. Оказывает противоэпилептическое,
миорелаксирующее, седативное действие [6].
Ингибируя ГАМК-трансферазу, повышает содержание в ЦНС гамма-аминомасляной кислоты, что и обусловливает снижение порога возбудимости и уровня судорожной готовности моторных зон головного мозга. При приеме внутрь диссоциирует до вальпроат-иона, который всасывается в плазму
крови. Пища снижает скорость абсорбции. Cmax в плазме определяется через 1-4 ч. Терапевтическая концентрация в крови составляет 50-100 мкг/мл (может быть значительно выше или ниже, в зависимости от проницаемости ГЭБ у данного пациента). Связывание с белками плазмы крови — около 90%. Метаболизируется в печени: большая часть глюкуронидируется, меньшая — окисляется с участием либо микросомальных ферментов, либо в митохондриях гепатоцитов (бета-окисление). T1/2 колеблется от 6 до 16 ч и зависит в основном от активности микросомальных ферментов печени. Метаболиты и конъюгаты выводятся почками. Небольшое количество вальпроевой кислоты выделяется с молоком [7].
Препараты вальпроевой кислоты показаны к применению при различных формах генерализованных припадков: малые (абсансы), большие (судорожные) и полиморфные; используется при фокальных припадках, детском тике [8].
Целью данной работы является разработка методики определения показателей растворения и количественного определения дженерикового лекарственного средства «Вальпроевая кислота, таблетки пролонгированного действия, покрытые оболочкой, 150 мг».
Для изготовления опытной серии таблеток из лекарственных субстанций натрия вальпроата (100 мг на 1 таблетку) и вальпроевой кислоты (43.50 мг на 1 таблетку) готовили таблетную массу. В качестве вспомогательных веществ использовали гипромеллозу, этицеллюлозу, сукралозу, аэросил и магния стеарат: 43.00, 3.50; 11.50, 7.00 и 1.50 мг на 1 таблетку соответственно. Из полученной смеси прессовали таблетки. Для изготовления внутренней оболочки использовали гипромеллозу (4.20 мг на 1 таблетку), а для внешней - Opadry white 85F18422 (6.00 мг на 1 таблетку) и воду очищенную. В результате были получены таблетки, покрытые оболочкой почти белого цвета со средним весом 220.20 мг.
Растворение препарата проводили, используя прибор с лопастью. В качестве среды растворения использовали фосфатный буферный раствор с рН 6.8; объем среды растворения - 900 мл, скорость вращения лопасти - 50 об/мин, время растворения - 1 ч, 3 ч, 6 ч, температура среды растворения - (37.0 ± 0.5) °С.
Для приготовления фосфатно-буферного раствора с рН 6,8 в мерную колбу вместимостью 1000 мл помещали 250,0 мл 0,2М раствора калия дигидрофосфата, прибавляли 112,0 мл 0,2М раствора натрия гидроксида и доводили объем раствора водой до метки и перемешивали.
Для приготовления подвижной фазы 3,2 г калия дигидрофосфата помещали в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяли в воде, доводили объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивали. Устанавливали значение рН раствора до 3,0 при помощи кислоты фосфорной.
Полученный раствор смешивали с ацетонитрилом в соотношении (45 : 55).
Для испытания в сосуд для растворения, с использованием альтернативного приспособления для погружения, помещали 1 таблетку.
В установленном временном интервале (1 ч, 3 ч, 6 ч) отбирали 10 мл раствора из центра сосуда для растворения и фильтровали через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм (GHP), отбрасывая первые 5 мл фильтрата (испытуемый раствор).
Раствор сравнения приготавливали следующим образом: 84.0 мг натрия вальпроата (СО ЕФ) помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли метанол до 2/3 объема колбы, обрабатывали на ультразвуковой бане в течение 5 мин и охлаждали. Доводили объем раствора метанолом до метки и перемешивали.
5.0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем раствора средой растворении до метки, перемешивали и фильтровали через мембранный фильтр с размером нор 0.45 мкм (GHP).
Определение проводили методом жидкостной хроматографии при помощи жидкостного хроматографа модели Waters 2695 с детектором 2487 [9].
По 100 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения попеременно
хроматографировали на жидкостном хроматографе Waters HPLC- с УФ- детектором, в следующих условиях:
- колонка GL Sciences Inertsil ODS - 3 размером 250 мм х 4.6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- температура колонки - 25 °С;
- температура автосамплера - 25 °С;
- подвижная фаза, дегазированная любым удобным способом;
- скорость подвижной фазы - 1.5 мл/мин;
-детектирование при длине волны 220 нм.
Количественное определение проводили так
же методом жидкостной хроматографии при помощи жидкостного хроматографа модели Waters 2695 с детектором 2487 [10].
220 мг порошка растертых таблеток, помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 50 мл метанола, обрабатывали в течение 30 мин на ультразвуковой бане. К полученному раствору прибавляли 25 мл фосфатного буферного раствора с рН 6,8, обрабатывали в течение 15 мин на ультразвуковой бане, охлаждали, доводили объем раствора фосфатным буферным раствором с рН 6,8 до метки и перемешивали.
Полученный раствор центрифугировали в течение 10 мин при скорости 4000 об/мин.
5.0 мл надосадочной жидкости помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем раствора фосфатным буферным раствором с рН 6,8 до метки, перемешивали и фильтровали через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм (GHP) (испытуемый раствор).
Для приготовления раствора сравнения 75,0 мг натрия вальпроата (СО ЕФ) помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляли 25 мл
метанола и обрабатывали на ультразвуковой бане в течение 5 мин, охлаждали, доводили объем раствора фосфатным буферным раствором с рН 6.8 до метки и перемешивали.
5.0 мл полученного раствора помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем раствора фосфатным буферным раствором с рН 6,8 до метки, перемешивали и фильтровали через мембранный фильтр с размером пор 0.45 мкм (GHP).
По 100 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения попеременно
хроматографировали на жидкостном хроматографе Waters HPLC с УФ-детектором, в условиях, описанных в разделе «Растворение».
Для хроматографирования использовали стандартный образец натрия вальпроата Европейской фармакопеи. Содержание
действующего вещества в стандарте 99,9%.
В результате проведения анализа «Растворение» было установлено, что количество натрия вальпроата и вальпроевой кислоты (суммарно, в пересчете на натрия вальпроат), перешедшее в раствор из одной таблетки за 1 ч составило 22%, за 3 ч - 54%, за 6 ч - 98%. Полученные результаты соответствует требованиям, заявленным в нормативном документе: количество натрия вальпроата и вальпроевой кислоты (суммарно, в пересчете на натрия вальпроат, перешедшее в раствор из одной таблетки за 1 ч должно быть от 15 до 40%, за 3 ч - от 40 до 65%, за 6 ч - от 65 до 85%.
В результате проведения анализа «Количественное определение» было установлено, что содержание натрия вальпроата и вальпроевой кислоты (суммарно, в пересчете на натрия вальпроат) в 1 таблетке составляет 151,8 мг, что соответствует требованиям, заявленным в данной методике и должно быть от 142,5 мг до 157,5 мг в одной таблетке. Хроматограммы раствора сравнения и испытуемого раствора представлены на рисунке 1 и 2 соответственно.
Рис. 1 - Хроматограмма раствора сравнения, полученная в результате проведения анализа «Количественное определение»
Проверка пригодности хроматографической системы показателей «Растворение» и «Количественное определение» приведены в таблице 1.
Рис. 2 - Хроматограмма испытуемого раствора, полученная в результате проведения анализа «Количественное определение»
Таблица 1 - Проверка пригодности хроматографической системы показателей «Растворение» и «Количественное определение»
Параметры проверки пригодности хроматографи- ческой системы Нормы Фактические результаты
Растворе-ние Коли-чест-венное определение
Эффективность хроматографи-ческой колонки, рассчитанная по пику натрия вальпроата на хроматограмме раствора сравнения не менее 3500 теоретических тарелок 12863 13508
Коэффициент симметрии пика, рассчитанный по пику натрия вальпроата на хроматограмме раствора сравнения не более 1,5 1,2 1,2
Относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика натрия вальпроата на хроматограмме раствора сравнения не более 2,0% 0,9 % 1,1%
Результаты проверки хроматографической системы, полученные в результате проведения анализов «Растворение» и «Количественное определение», как видно из таблицы 1, соответствуют требованиям данной методики. Следовательно, полученные результаты являются достоверными.
Вальпроевая кислота является препаратом номер один среди противоэпилептических препаратов, применяемых у пациентов детского
возраста. Его эффективность и переносимость хорошо продемонстрированы и в клинической практике, и в литературе. Как результат ее широкого спектра эффективности при лечении большого диапазона различных типов приступов и эпилептических синдромов, вальпроевая кислота является препаратом выбора для лечения детей с впервые выявленной эпилепсией и детей с идиопатической генерализованной эпилепсией. Небольшая возможность парадоксальной аггравации и долгосрочная эффективность -дополнительные факторы, которые улучшают профиль препарата, и делают его подходящим для лечения комплексных приступоподобных расстройств. Дети всех возрастных групп, страдающие эпилепсией, извлекают пользу в результате лечения вальпроатами, за исключением детей грудного возраста, у которых возможная польза тщательно взвешивается с риском интоксикации печени [11].
Целесообразность применения вальпроата натрия в качестве препарата первой линии для лечения генерализованных эпилептических припадков общепризнанна.
Литература
[1] Петрухин А.С. Справочник по эпилепсии: классификация, диагностика, антиэпилептические препараты, лечение эпилепсии, особые ситуации / А.С. Петрухин, К.Ю. Мухин, М.И. Медведев, Н.Н. Заваденко. М., 1999; 42 с.
[2] Мухин К.Ю., Петрухин А.С. Эпилептические синдромы у детей: диагностика и лечение // методические рекомендации. Москва, 2000.- С 29-30.
[3] Зенков Л.Р. Лечение эпилепсии (Справочное руководство для врачей). Под ред. Н.Н. Яхно. М., 2001; 229 с.
[4] Мухин К.Ю., Петрухин А.С. Идиопатические формы эпилепсии: систематика, диагностика, терапия. М.: Арт-Бизнес-Центр 2000; 319 с.
[5] Berg A. Identification of epilepsy syndromes at diagnosis and modification with time // Jallon P. Prognosis of epilepsies. London: John Libbey, 2003. - P. 185-196.
[6] www.rlsnet.ru - Официальный сайт Группы компаний РЛС ®. Главная энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента российского интернета.
[7] Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание: в 2 т.- M.: Медицинский совет, 2009. - Т. 1, ч. 1- 648 с.
[8] Fisher A., Patsalos P.N. Pharmacology of antiepileptic drugs // Wallace S.J., Farrell K. et al. Epilepsy in children. 2nd ed. London: Arnold, 2004. - P. 358-383.
[9] Гармонов С.Ю. Фармацевтический анализ 4-аминофенола в парацетамоле методом ВЭЖХ / С.Ю. Гармонов, И.А. Салахов, Г.Р. Нурисламова, Р.Н. Исмаилова, В.Ф. Сопин // Вестник Казанского технол. университета. - 2010. - № 10. -С. 46-51.
[10] Салахов И.А. Контроль качества лекарственного препарата антигриппина методом градиентной высокоэффективной жидкостной хроматографии / И.А. Салахов, С.Ю. Гармонов, Р.Н. Исмаилова, Н.Г. Николаева, С.М. Горюнова // Вестник Казанского технологического университета. - 2009. - № 4. - С. 50-57.
[11] Аникин А.В., Харламов Д.А., Маслова О.И., Смирнов И.Е. Вальпроевая кислота: лекарственный мониторинг в контроле за терапией судорог у детей//Мат. VIII-го Всероссийского съезда неврологов.- Казань.2001.-С. 375-376.
© Т. В. Дудник - магистрант каф. аналитической химии, сертификации и менеджмента качества КВИТУ,: tanja_dudnik@mail.ru; С. Ю. Гармонов - д.х.н., проф. той же кафедры, serggar@mail.ru.
© T. V. Dudnik - Magistracy student of Analytical Chemistry, Certification and Quality Management Department of KNRTU, tanja_dudnik@mail.ru; S. Yu. Garmonov - doctor of technical Sciences,Professor of Analytical Chemistry, Certification and Quality Management Department of KNRTU, serggar@mail.ru.
